畢業(yè)論文提取黃酮

1、楚 雄 師 范 學(xué) 院本 科 生 畢 業(yè) 論 文題 目:盈江縣羊奶果葉和莖中黃酮含量的測(cè)定及對(duì)羥 自由基的消除作用研究專(zhuān) 業(yè):科學(xué)教育姓 名:楊萍學(xué) 號(hào): 20101053111 指導(dǎo)教師:楊紅衛(wèi) 職稱(chēng):講師論文字?jǐn)?shù): 8032字完成日期 : 2014 年 5 月目錄摘要 . I 關(guān)鍵詞 . I Abstract . 錯(cuò)誤!未定義書(shū)簽。 Key words. II 前言 . 1 1實(shí)驗(yàn)部分 . . 2 1.1儀器、試劑和實(shí)驗(yàn)材料 . 2 1.1.1儀器 . . 2 1.1.2試劑 . . 2 1.1.3實(shí)驗(yàn)材料 . . 2 1.2實(shí)驗(yàn)方法 . . 2 1.2.1 原料處理 . 2 1.2.2總

2、黃酮的提取 . . 2 1.2.3總黃酮的定性檢驗(yàn) . . 2 1.2.4總黃酮的定量分析 . . 2 1.2.4.1蘆丁預(yù)處理 . . 2 1.2.4.2蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液的配制 . . 2 1.2.4.3測(cè)定波長(zhǎng)的選擇 . . 3 1.2.4.4測(cè)定方法依據(jù) . . 3 1.2.4.5蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 . 3 1.2.4.6提取液中總黃酮的測(cè)定及提取計(jì)算 . 3 1.2.5提取條件的單因素實(shí)驗(yàn) . 5 1.2.5.1乙醇濃度對(duì)提取效果的影響 . 7 1.2.5.2料液比對(duì)提取效果的影響 . 3 1.2.5.3回流溫度對(duì)提取效果的影響 . 4 1.2.5.4回流時(shí)間對(duì)提取效果的影響 . 4 1.2

3、.6正交試驗(yàn) . . 41.2.7提取液對(duì)羥自由基(·OH 的消除作用 . 42結(jié)果與討論 . . 5 2.1定性檢驗(yàn)結(jié)果 . . 5 2.2定量分析結(jié)果 . . 5 2.2.1測(cè)定波長(zhǎng)的確定 . . 5 2.2.2蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 . . 62.3提取條件的單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果 . 6 2.3.1乙醇濃度對(duì)提取效果的影響結(jié)果 . 6 2.3.2料液比對(duì)提取效果的影響結(jié)果 . 7 2.3.3回流溫度對(duì)提取效果的影響結(jié)果 . 7 2.3.4回流時(shí)間對(duì)提取效果的影響結(jié)果 . 8 2.4正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析 . . 82.5提取液對(duì)羥自由基(·OH 的消除作用結(jié)果 . 113結(jié)論 .

4、. 11 參考文獻(xiàn) . 12 致謝 . 13盈江縣羊奶果葉和莖中黃酮含量測(cè)定及對(duì)羥自由基的消 除作用研究摘要 :以盈江縣羊奶果葉和莖為原材料,用乙醇回流法提取其中的總黃酮并研究?jī)煞N 提取液對(duì)羥自由基(·OH 的消除情況。實(shí)驗(yàn)是通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)的方法探究最佳 提取條件,所要研究的最佳提取條件包括:提取的溫度、時(shí)間、料液比、提取劑的濃度。實(shí) 驗(yàn)結(jié)果表明:對(duì)于羊奶果葉:在乙醇濃度為 85%、料液比為 1:9、回流時(shí)間為 1.5h 、提取溫 度在 60的條件下提取效果最好, 總黃酮得率為 1.000%; 對(duì)于羊奶果莖:在乙醇濃度為 75%、 料液比為 1:9、回流時(shí)間為 2.5h 、

5、提取溫度在 70的條件下提取效果最好,總黃酮得率為 0.998%;而羊奶果葉、莖的提取液對(duì)羥自由基(·OH 的消除作用相比較,葉的提取液消除 效果相對(duì)于莖的要好。關(guān)鍵詞 :羊奶果葉和莖;總黃酮;羥自由基;消除。Determination of the content of flavonoids in leaves and stems of fruit in Yingjiang County goats'milk and eliminate the effect on hydroxyl free radicalAbstract : Taking Yingjiang County

6、 goats'milk fruit, leaf and stem as raw material, the total flavonoids was extracted and studies two kinds of extraction on hydroxyl free radical by using ethanol reflux (OH and the elimination of. Experiment by single factor experiment and orthogonal experiment the optimum extraction conditions

7、, including the optimum extraction conditions to study: temperature, time, solid-liquid extraction ratio, extraction agent concentration. The experimental results show that: for goats'milk fruit leaf: ethanol concentration 85%, ratio of solid to liquid was 1:9, extraction time 1.5h, extraction t

8、emperature 60 the best extraction, the extraction rate of total flavone was 1.000%; for goats' milk fruit stem: ethanol concentration 75%, ratio of solid to liquid was 1:9, the extraction time was 2.5h, extraction temperature 70 the best extraction, the extraction rate of total flavone was 0.998

9、%; and the extract goats'milk fruit and leaf, stem on hydroxyl free radical (OH to eliminate the effect of phase comparison,extract leaf removing effect is better than the stem.Keywords : Goats'milk fruit stems and leaves; total flavonoids; hydroxyl radical; eliminate.盈江縣羊奶果葉和莖中黃酮含量測(cè)定及對(duì)羥自由基的

10、消除 作用研究前言羊奶果又名密花胡頹子、南胡頹子和大果胡頹子。為胡頹子科、胡頹子屬的多年生常 綠攀緣灌木,它屬于我國(guó)云南省德宏州的特產(chǎn),在亞洲熱帶,越南、馬來(lái)西亞、印度以及廣 西南部都有其分布 1。羊奶果初生的枝條比較柔軟而且呈披散狀,主干不是很明顯,它主要 是靠枝條之間相互支撐,呈現(xiàn)出一個(gè)棚狀 , 他有很強(qiáng)的抗逆力,根系比較發(fā)達(dá),每個(gè)小枝除 了頂端的幾片葉外, 其它的葉腋都育有數(shù)量不等的小花, 它的花期主要是在 10-11月, 果期 在次年的 3-4月,果實(shí)的營(yíng)養(yǎng)成分比較豐富,可食率可以達(dá)到 73.3-91%,而成熟果實(shí)一般 是呈鮮紅色或紫紅色 2。奶果葉呈橢圓形,長(zhǎng) 6cm 左右,頂端驟尖

11、,基部呈圓形,葉面幼時(shí) 具銀色鱗片, 脫落后呈深綠色, 上面銀白色, 幼枝比較密且常常被銹色鱗片, 芽呈現(xiàn)綠色 2。 葉、莖都可以入藥,功效有:止咳平喘,收斂止瀉而且在治療哮喘,虛咳,慢性支氣管炎, 腸炎,腹瀉,跌打腫痛,風(fēng)濕疼痛,黃疸等方面療效也比較可觀 3。黃酮類(lèi)化合物(flavonoids 又叫黃堿素、黃酮體、類(lèi)黃酮,是普遍存在于大自然中 的一類(lèi)化合物。 它主要的功效有:抗衰老、 抗疲勞、 抗癌、 抗腫瘤、 降血脂、 降血清膽固醇、 增加機(jī)體免疫等作用 4。本課題采用的是用乙醇回流法提取葉和莖中的總黃酮的含量及其對(duì)羥自由基的消除作 用研究, 旨在為更好地開(kāi)發(fā)羊奶果葉、 莖資源提供科學(xué)依據(jù)

12、, 對(duì)羊奶果的藥用及經(jīng)濟(jì)價(jià)值有 著重要意義。1實(shí)驗(yàn)部分1.1儀器、試劑和實(shí)驗(yàn)材料1.1.1儀器搖擺式植物粉碎機(jī); HH-S2S 恒溫水浴鍋(國(guó)華電器有限公司 ; 722型光柵分光光度計(jì) (山東高密分析儀器廠 ; CP214C 電子天平(奧豪斯儀器有限公司制造 ; 202-00型電熱恒 溫干燥箱(上海市崇明實(shí)驗(yàn)儀器廠 。1.1.2試劑鋅粉,氫氧化鈉,氯化鐵,硝酸鋁,鹽酸,無(wú)水乙醇,過(guò)氧化氫,亞硝酸鈉,水楊酸, 蘆丁,硫酸亞鐵,上述試劑均為分析純(AR 。1.1.3實(shí)驗(yàn)材料新鮮羊奶果葉和莖(采集于盈江縣1.2 實(shí)驗(yàn)方法1.2.1 原料處理羊奶果葉和莖洗凈曬干烘干粉碎備用1.2.2 總黃酮的提取流程

13、分別稱(chēng)取一定質(zhì)量的羊奶果葉、 莖的細(xì)粉于圓底燒瓶中, 用一定濃度的乙醇溶液作提取 劑, 放入恒溫水浴鍋中回流一定的時(shí)間, 過(guò)濾, 并用相應(yīng)的乙醇濃度定容到 50ml 容量瓶中, 備用。1.2.3 總黃酮的定性檢驗(yàn) 5-7鐵離子反應(yīng):取提取液 2.0ml 于試管中,加入 1滴 5%三氯化鐵溶液,振蕩。提取液顯 墨綠色,表明有黃酮存在。鹽酸鋅粉反應(yīng):取提取液 2.0ml 于試管中,先加入少量的鋅粉,再加入幾滴濃鹽酸, 振蕩。提取液顯亮黃色,表明有黃酮存在。氫氧化鈉反應(yīng):取提取液 2.0ml 于試管中,加入幾滴 4%氫氧化鈉溶液,振蕩。提取液 顯橙紅色,表明有黃酮存在。硝酸鋁反應(yīng):取提取液 2.0m

14、l 于試管中,加入幾滴 1%硝酸鋁溶液,振蕩。提取液顯黃 色,表明有黃酮存在。1.2.4 總黃酮的定量分析1.2.4.1 蘆丁預(yù)處理稱(chēng)取一定量的蘆丁于潔凈、干燥的燒杯中,在 120的恒溫干燥箱中干燥 1.0h ,備用。 1.2.4.2 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液的配制稱(chēng)取蘆丁 10mg , 加入 70%乙醇溶液溶解后, 用相應(yīng)的乙醇溶液定容到 50ml 的容量瓶中, 搖勻,所得的溶液就是 0.2mg/ml的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液。1.2.4.3 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇吸取 1.0ml 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液、羊奶果葉、莖提取液于 25ml 的比色管中,加入 5%亞硝酸鈉溶 液 0.30ml ,搖勻,放置 6min ;然后加入 10%硝酸鋁溶

15、液 0.30ml ,搖勻,放置 6min ;再加入 4%氫氧化鈉溶液 4.00 ml,最后加入 70%的乙醇,將其定容到 10ml 刻度線處,搖勻,放置 10min 。 以試劑空白作參比, 在 460nm 530nm 之間測(cè)定絡(luò)合物的吸光度, 確定最大吸收波長(zhǎng) (此后的吸光度均在最最大波長(zhǎng)下測(cè)定 。1. 2. 4. 4 測(cè)定方法依據(jù)以蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液作為對(duì)照品,測(cè)定羊奶果葉、莖提取液中總黃酮得率,加入 5%亞硝酸鈉 溶液、 10%硝酸鋁溶液、 4%氫氧化鈉溶液,在堿性條件下總黃酮與鋁鹽形成絡(luò)合物,在可見(jiàn) 光區(qū)可以獲得較穩(wěn)定的特征吸收峰,吸光度與總黃酮濃度服從朗伯比爾定律。1.2.4.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪

16、制 8吸取 0.2mg/ml的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液 0.00ml 、 0.50ml 、 1.00ml 、 1.50ml 、 2.00 ml、 2.50ml 、 3.00ml 分別置于 25ml 比色管中, 各加入 5%亞硝酸鈉溶液 0.30ml, 搖勻, 放置 6min ; 然后加 入 10%硝酸鋁溶液 0.30ml ,搖勻,放置 6min ;再加入 4%氫氧化鈉溶液 4.00 ml,最后加入 70%的乙醇,將其定容到 10ml 刻度線處,搖勻,放置 10min 。在一定波長(zhǎng)處,以試劑空白為 參比測(cè)吸光度,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程。1.2.4.6 提取液中總黃酮的測(cè)定及得率的計(jì)算吸取提取液 1.00ml

17、 于 25ml 比色管中,首先加入 5%亞硝酸鈉溶液 0.30ml, 搖勻,放置 6min ; 然后加入 10%硝酸鋁溶液 0.30ml , 搖勻, 放置 6min ; 再加入 4%氫氧化鈉溶液 4.00 ml , 最后加入 70%的乙醇,將其定容到 10ml 刻度線處,搖勻,放置 10min 。在一定波長(zhǎng)處,以試 劑空白為參比測(cè)吸光度,平行實(shí)驗(yàn)三次。將所測(cè)得的吸光度值帶到回歸方程中求出提取液中總黃酮濃度, 按下式計(jì)算提取液中總 黃酮得率 9:提取液中總黃酮得率(% = (CV 1/MV2×50×10-3×100% (1-1 式中:V 1為第二次定容后提取液的體積

18、 10ml ; V 2為從母液中量取的提取液體積 1.00ml ; C 為提取液中總黃酮濃度 ( /ml; M 為羊奶果葉、莖的質(zhì)量(g 。1.2.5 提取條件的單因素試驗(yàn)1.2.5.1乙醇濃度對(duì)提取效果的影響在料液比為 1:9(g ml 、溫度為 60的條件下,分別用 55%、 65%、 75%、 85%、 95%的 乙醇溶液作為提取劑,回流 2.0h ,過(guò)濾,然后將提取液用相應(yīng)的溶液定容到 50ml 的容量瓶 中,按 1.2.4.6操作方法后,在一定波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度,平行實(shí)驗(yàn)三次,根據(jù)回歸方程, 計(jì)算提取液中總黃酮得率,取其平均值,選擇較適宜的乙醇濃度。1.2.5.2 料液比對(duì)提取液的影

19、響選用 1.2.5.1實(shí)驗(yàn)中得出的較適宜的乙醇溶液作為提取劑,溫度為 60的條件下,分別用料液比(g ml 為:1:5、 1:7、 1:9、 1:11、 1:13,回流 2.0h ,過(guò)濾,然后將提取 液用相應(yīng)的溶液定容到 50ml 的容量瓶中,按 1.2.4.6操作方法后,在一定波長(zhǎng)處測(cè)定其吸 光度,平行實(shí)驗(yàn)三次,根據(jù)回歸方程,計(jì)算提取液中總黃酮得率,取其平均值,選擇較適宜 的料液比。1.2.5.3 回流溫度對(duì)提取液的影響選取 1.2.5.1實(shí)驗(yàn)中得到較適宜的乙醇溶液為提取劑, 1.2.5.2實(shí)驗(yàn)中得到的較適宜的 料液比,分別在溫度為 50、 60、 70、 80、 90,水浴鍋中回流 2.0

20、h ,過(guò)濾,然后 將提取液用相應(yīng)的溶液定容到 50ml 的容量瓶中,按 1.2.4.6操作方法后,在一定波長(zhǎng)處測(cè) 定其吸光度,平行實(shí)驗(yàn)三次,根據(jù)回歸方程,計(jì)算提取液中總黃酮得率,取其平均值,選擇 較適宜的回流溫度。1.2.5.4回流時(shí)間對(duì)提取效果的影響選取 1.2.5.1實(shí)驗(yàn)中得到的較適宜的乙醇溶液為提取劑, 1.2.5.2實(shí)驗(yàn)中得到的較適宜 的料液比, 1.2.5.3實(shí)驗(yàn)中得到的較適宜的溫度, 分別回流 1.0h 、 1.5h 、 2.0h 、 2.5h 、 3.0h , 過(guò)濾,然后將提取液用相應(yīng)的溶液定容于 50ml 的容量瓶中,按 1.2.4.6操作方法后,在一 定波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度,

21、平行實(shí)驗(yàn)三次, 根據(jù)回歸方程, 計(jì)算提取液中總黃酮得率,取其平 均值,選擇較適宜的回流時(shí)間。1.2.6 正交實(shí)驗(yàn)根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn), 設(shè)計(jì)正交實(shí)驗(yàn), 選取出從羊奶果葉、 莖中提取總黃酮的最佳提取條件。 1.2.7 黃酮提取液對(duì)羥自由基(·OH 的消除作用 9參照 Fenton 反應(yīng)的方法建立反應(yīng)體系模型,利用 H 2O 2與 Fe 2+混合后產(chǎn)生存活時(shí)間短, 具有很高反應(yīng)活性的·OH 這一性質(zhì),在反應(yīng)體系中加入水楊酸后,就能有效的捕捉·OH , 并產(chǎn)生有色產(chǎn)物, 該產(chǎn)物在 510nm 波長(zhǎng)處有較強(qiáng)吸收。 若加入具有消除能力的黃酮類(lèi)化合物, 黃酮類(lèi)化合物就會(huì)與水楊酸競(jìng)爭(zhēng)

22、·OH ,從而使有色產(chǎn)物生成量減少。采用固定反應(yīng)時(shí)間法, 在 510nm 波長(zhǎng)處測(cè)量含被測(cè)物反應(yīng)液的吸收度,并與空白液比較,便能測(cè)定被測(cè)物對(duì)·OH 的消除作用。反應(yīng)體系為:在 10ml 比色管中首先加入 9mmol/L水楊酸 -乙醇溶液 2.00 ml ,再加入不 同體積的羊奶果葉、莖的總黃酮提取液,最后加入 8.8mmol/L H2O 22.00 ml并啟動(dòng)反應(yīng),加 蒸餾水定容到 10 ml 處, 將比色管放入 37的水浴鍋中, 讓其反應(yīng) 30min , 以蒸餾水做參比, 以試劑空白做比較,在 510nm 波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度?？紤]到提取液本身的吸光度,在 10 ml比色管中

23、加入 9mmol/LFeSO4溶液 2.00ml , 9mmol/L水楊酸 -乙醇溶液 2.00 ml , , 不同體積的 羊奶果葉、莖的總黃酮提取液,加蒸餾水定容,將比色管放入 37的水浴鍋中,讓其反應(yīng) 30min ,做為提取液的本底吸收。按下式計(jì)算樣品液對(duì)羥自由基的消除率:·OH 消除率(% =A0-(AX -A X0/A0×100%此式中:A 0為空白對(duì)照溶液吸光度; A X 為提取液的吸光度; A X0為不加 H 2O 2提取液的本底吸光度。2結(jié)果與討論2.1 定性檢驗(yàn)結(jié)果按照 1.2.3操作,對(duì)羊奶果葉、莖提取液中黃酮類(lèi)化合物進(jìn)行鑒定,結(jié)果見(jiàn)表 2-1和 表 2-

24、2.表 2-1羊奶果葉提取液中黃酮類(lèi)化合物的顯色鑒定試劑 Fe3+HCl-Zn NaOH Al(NO3 3 顯色現(xiàn)象墨綠色 亮黃色橙紅色黃色表 2-2羊奶果莖提取液中黃酮類(lèi)化合物的顯色鑒定試劑 Fe3+HCl-Zn NaOH Al(NO3 3 顯色現(xiàn)象墨綠色亮黃色橙紅色黃色由表 2-1和 2-2說(shuō)明, 通過(guò)顯色反應(yīng)鑒定, 羊奶果葉、 莖的提取液顯色與黃酮顯色一致, 表明提取液中含有黃酮類(lèi)化合物。2.2 定量分析結(jié)果2.2.1 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇按 1.2.4.3操作,得到圖 2-1所示的吸收曲線 圖 2-1蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液和提取液的吸光度與波長(zhǎng)關(guān)系圖從圖 2-1可知,蘆丁溶液和羊奶果葉、莖黃酮提取液在

25、波長(zhǎng) 460nm 510nm 之間,吸光 度隨著波長(zhǎng)的增大而增大, 在波長(zhǎng)為 510nm 處吸光度值最大, 當(dāng)吸收波長(zhǎng)大于 510nm 時(shí), 吸 光度隨著波長(zhǎng)的增大而減小。 故本實(shí)驗(yàn)選擇 510nm 為最大吸收波長(zhǎng), 此后吸光度均在該波長(zhǎng) 下測(cè)定。吸 光 度 值波長(zhǎng) /nm2.2.2 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制按 1.2.4.4操作,在 510nm 波長(zhǎng)處以試劑空白為參比測(cè)定吸光度,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得 到回歸方程為 A=11.136C-0.0004, R=0.9998。所得標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖 2-2. 圖 2-2蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線2.3 提取條件的單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.3.1 乙醇濃度對(duì)提取液效果的影響結(jié)果按 1.2.

26、5.1操作,采用不同濃度乙醇溶液回流羊奶果莖、葉中的總黃酮。在 510nm 波 長(zhǎng)處測(cè)定吸光度,計(jì)算提取液中總黃酮得率,結(jié)果見(jiàn)表 2-3和表 2-4。表 2-3乙醇濃度對(duì)羊奶果莖提取效果的影響結(jié)果乙醇濃度 55% 65% 75% 85% 95% 吸光度 0.526 0.564 0.625 0.605 0.548 總 黃 酮 得 率 (%0.7880.8450.9360.9060.821由表 2-3可知,乙醇濃度在 75%時(shí)測(cè)定的吸光度最大,所得的總黃酮得率最大,說(shuō)明從 羊奶果莖中提取總黃酮時(shí),采用 75%的乙醇溶液為提取劑可以獲得比較好的效果。表 2-4乙醇濃度對(duì)羊奶果葉提取效果的影響結(jié)果乙醇

27、濃度 55% 65% 75% 85% 95% 吸光度 0.564 0.644 0.667 0.645 0.568 總 黃 酮 得 率 (%0.8450.9640.9990.9660.851由表 2-4可知,乙醇濃度在 75%時(shí)測(cè)定的吸光度最大,所得的總黃酮得率最大,說(shuō)明從0.00.10.20.30.40.50.60.7吸 光 度蘆丁濃度 c( /ml羊奶果葉中提取總黃酮時(shí),采用 75%的乙醇溶液為提取劑可以獲得比較好的效果。2.3.2 料液比對(duì)提取液的影響效果采用 75%的乙醇溶液為羊奶果莖、葉的提取劑,按 1.2.5.2操作,采用不同料液比回流 羊奶果莖、 葉中的總黃酮,在 510nm 波長(zhǎng)

28、處測(cè)定吸光度, 計(jì)算提取液中總黃酮得率,結(jié)果見(jiàn) 表 2-5和 2-6。表 2-5乙醇濃度對(duì)羊奶果莖提取效果的影響結(jié)果料液比(g ml 1:5 1:7 1:9 1:11 1:13 吸光度 0.358 0.422 0.546 0.584 0.497 提 取 液 中 總 黃酮得率(% 0.536 0.632 0.818 0.875 0.744 由表 2-5可知, 料液比為 1:11(g ml 時(shí)測(cè)定的吸光度最大, 所得的總黃酮得率最大, 說(shuō)明從羊奶果莖中提取總黃酮時(shí), 采用料液比為 1:11(g ml 時(shí)總黃酮的提取效果比較好。 表 2-6乙醇濃度對(duì)羊奶果葉提取效果的影響結(jié)果料液比(g ml 1:5

29、 1:7 1:9 1:11 1:13 吸光度 0.516 0.635 0.665 0.654 0.592 提 取 液 中 總 黃酮得率(% 0.773 0.951 0.996 0.979 0.887 由表 2-6可知,料液比為 1:9(g ml 時(shí)測(cè)定的吸光度最大,所得的總黃酮得率最大, 說(shuō)明從羊奶果葉中提取總黃酮時(shí),采用料液比為 1:9(g ml 時(shí)總黃酮的提取效果比較好。 2.3.3 回流溫度對(duì)提取效果的影響結(jié)果采用 75%的乙醇溶液為羊奶果莖的提取劑,按料液比為 1:11(g ml ,采用 75%的乙醇 溶液為羊奶果葉的提取劑,按料液比為 1:9(g ml ,按 1.2.5.3操作,改變

30、提取的溫度回 流羊奶果莖、葉中的總黃酮。在 510nm 波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度,計(jì)算提取液中總黃酮得率, 結(jié)果 見(jiàn)表 2-7和 2-8。表 2-7回流溫度對(duì)羊奶果莖提取效果的影響結(jié)果回流溫度 ( 50 60 70 80 90 吸光度 0.526 0.659 0.552 0.508 0.462 提取液中總黃酮得率(% 0.787 0.987 0.827 0.761 0.692 由表 2-7可知,在 60時(shí)吸光度最大,所得的總黃酮的得率最大,說(shuō)明從羊奶果莖中 提取總黃酮時(shí),采用 60溫度可以獲得比較好的效果。表 2-8回流溫度對(duì)羊奶果葉提取效果的影響結(jié)果回流溫度 ( 50 60 70 80 90 吸光度

31、 0.439 0.520 0.649 0.457 0.358 提取液中總黃酮得率(% 0.658 0.779 0.972 0.685 0.536 由表 2-8可知,在 70時(shí)測(cè)定的吸光度最大,所得的總黃酮得率最大,說(shuō)明從羊奶果 莖中提取總黃酮時(shí),采用 70溫度可以獲得比較好的效果。2.3.4 回流時(shí)間對(duì)提取效果的影響結(jié)果采用 75%的乙醇溶液為羊奶果莖的提取劑,按料液比 1:11(g ml ,在 60的溫度; 采用 75%的乙醇溶液為羊奶果葉的提取劑, 按料液比 1:9(g ml , 在 70的溫度, 按 1.2.5.4操作,改變提取的時(shí)間,回流羊奶果莖、葉中的總黃酮,在 510nm 波長(zhǎng)處測(cè)

32、定吸光度,計(jì)算 提取液中總黃酮得率,結(jié)果見(jiàn)表 2-9和 2-10。表 2-9回流時(shí)間對(duì)羊奶果莖提取效果的影響結(jié)果回流時(shí)間(h 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 吸光度 0.417 0.474 0.528 0.493 0.468 提取液中總黃酮得率(% 0.625 0.710 0.789 0.737 0.701 由表 2-9可知,在 2.0 h 時(shí)吸光度最大,所得的總黃酮得率最大,說(shuō)明從羊奶果莖中提 取總黃酮時(shí),采用 2.0 h的時(shí)間可以獲得比較好的效果。表 2-10回流時(shí)間對(duì)羊奶果葉提取效果的影響結(jié)果回流時(shí)間(h 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 吸光度 0.597 0.649 0

33、.616 0.588 0.435 提取液中總黃酮得率(% 0.894 0.972 0.923 0.881 0.652 由表 2-10,在 1.5h 時(shí)吸光度最大,所得的總黃酮得率最大,說(shuō)明從羊奶果葉中提取總 黃酮時(shí),采用 1.5h 的時(shí)間可以獲得比較好的效果。2.4 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析根據(jù) 2.3單因素的實(shí)驗(yàn)結(jié)果, 以提取液中總黃酮得率為考察指標(biāo), 選定四因素三水平進(jìn) 行正交實(shí)驗(yàn) 10-12。因素水平見(jiàn)表 2-11和 2-12。正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表 2-13和 2-15。表 2-11羊奶果莖的因素水平表水平A 乙醇濃度(%B料液比(g ml C回流溫度( D回流時(shí)間(h 1 65 1:9 50 1

34、.5 2 75 1:11 60 2.0 3 851:13702.5表 2-12奶果葉的因素水平表水平A 乙醇濃度(%B料液比(g ml C回流溫度( D回流時(shí)間(h 1 65 1:7 60 1.0 2 75 1:9 70 1.5 3851:11802.0表 2-13 羊奶果莖的正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)序號(hào) A乙醇濃度 (% B料液比(g ml C回流溫度( D回流時(shí)間 (h 總 黃 酮 得率(% 1 1 1 1 1 0.902 2 1 2 2 2 0.858 3 1 3 3 3 0.913 4 2 1 2 3 1.001 5 2 2 3 1 0.925 6 2 3 1 2 0.997 7 3 1 3

35、2 0.610 8 3 2 1 3 0.835 9 3 3 2 1 0.776 K1 0.891 0.822 0.868 0.878 較優(yōu)組合 A 2B 3C 3D 3K2 0.958 0.873 0.862 0.823 K3 0.740 0.895 0.871 0.900 R0.2180.0730.0090.077根據(jù)表 2-13可以看出,本實(shí)驗(yàn)中 A 、 B 、 C 、 D 、四個(gè)因素的主次關(guān)系是 A >D >B > C, 即 A (乙醇濃度為最重要,之后是 D (回流時(shí)間 ,之后是 B (料液比 ,影響最小的是 C (回流溫度 ?？梢詮恼粚?shí)驗(yàn)中看出,用乙醇回流法從羊奶

36、果莖中提取總黃酮最優(yōu)的條件 組合為 A 2B 3C 2D 3, 即從羊奶果莖中提取總黃酮的最佳條件為, 提取劑濃度 75%, 料液比為 1:13,回流溫度為 70,回流時(shí)間為 2.5h.按照正交實(shí)驗(yàn)所確定的最佳提取條件,平行做三次驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表 2-14表 2-14 最佳組合驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)結(jié)果吸光度 總黃酮得率(%總黃酮平均得率(% 0.668 1.0010.665 0.996 0.9980.6670.999從表 2-14中可以看出,在最佳提取條件下實(shí)驗(yàn)重現(xiàn)性好。表 2-15羊奶果葉正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)序號(hào) A乙醇濃度 (% B料液比(g ml C回流溫度 ( D回流時(shí)間(h 總 黃 酮 得

37、率(%1 1 1 1 1 0.920 2 1 2 2 2 1.010 3 1 3 3 3 0.813 4 2 1 2 3 0.820 5 2 2 3 1 0.876 6 2 3 1 2 0.838 7 3 1 3 2 0.973 8 3 2 1 3 0.951 9 3 3 2 1 0.893 K1 0.908 0.904 0.903 0.896較優(yōu)組 合 A 3B 2C 1D 2K2 0.845 0.939 0.901 0.934 K3 0.939 0.848 0.887 0.861 R0.0940.0910.0160.073根據(jù)表 2-15可以看出,本實(shí)驗(yàn)中 A 、 B 、 C 、 D 、四

38、個(gè)因素的主次關(guān)系是 A >B >D >C ,即 A (乙醇濃度為最重要,之后是 B (料液比 ,之后是 D (回流時(shí)間 ,影響最小的是 C (回 流溫度 ?？梢詮恼粚?shí)驗(yàn)中看出,用乙醇回流法從羊奶果葉中提取總黃酮最優(yōu)的條件組合 為 A 3B 2C 2D 2,即從羊奶果莖中提取總黃酮的最佳條件為,提取劑濃度 85%,料液比為 1:9,回 流溫度為 70,回流時(shí)間為 1.5h.按照正交實(shí)驗(yàn)所確定的最佳提取條件,平行做三次驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表 2-16楚雄師范學(xué)院本科畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） 表 2-16 最佳組合驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)結(jié)果 吸光度 0.669 0.668 0.667 總黃酮得率（%） 1.002 1.001 0.996 1.000 總黃酮平均得率（%） 從表 2-16 中可以看出，在最佳提取條件下實(shí)驗(yàn)重現(xiàn)性好。 2.5 黃酮提取液對(duì)羥自由基（·OH）的消除作用結(jié)果 按 1.2.7 操作，羊奶果莖、葉的總黃酮提取液對(duì)自由基（·OH）的消除作用結(jié)果見(jiàn)圖 2-3 1羊奶果葉提取液 2羊奶果莖提取液 18 1 16 羥自由基消除率% 2 14 12 10 8 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 消除劑體積nm 圖 2-3 羊