榕樹葉總黃酮超聲提取工藝條件的研究(一)

1、榕樹葉總黃酮超聲提取工藝條件的研究(一)    作者：陳洪濤，蔡丹昭，林立波【摘要】 目的為充分利用榕樹葉資源，研究超聲提取榕樹葉總黃酮的工藝條件。方法以總黃酮含量為考察指標(biāo)，采用正交設(shè)計(jì)的方法研究超聲波輔助提取榕樹葉總黃酮的工藝條件。結(jié)果影響榕樹葉總黃酮超聲提取效果的主次因素為：乙醇濃度>溶劑量>提取次數(shù)>超聲時(shí)間，榕樹葉總黃酮最佳提取工藝為16倍量70%乙醇超聲提取3次，40 min/次。 結(jié)論優(yōu)化的提取方法效率高，穩(wěn)定性好，提取總黃酮含量可達(dá)2.42%。 【關(guān)鍵詞】 榕樹葉 總黃酮 正交設(shè)計(jì) 超聲波Abstract：Objecti

2、veTo study an extraction technology for total flavone from leaves of Ficus microearpa L.MethodsThe extraction conditions of total flavone by ultrasonic wave were studied through measuring the content of the total flavone extract. ResultsThe factors which influenced the extraction rate were sorted as

3、 follows: A>C>D>B, where A , B, C, D stands for the concentration of ethanol, the dosage of ethanol, extraction times and times with ultrasonic wave.The optimum process of the extraction technology which obtained through one-factor experiment and orthogonal design was: 70% ethanol, sixteen-

4、fold solvent, three times extraction and forty minutes each time.ConclusionThe optimized method is stable and efficient, the rate of total flavone extracted is up to 2.42%.Key words： Banyan leaves; Total flavone; Orthogonal design; Ultrasonic wave榕樹（Banyan）葉為?？崎艑僦参镩艠銯icus microcarpa L.f.的葉，為廣西壯族民間常用

5、藥，有清熱、解表、化濕、活血散瘀的功效，常用于治療流行性感冒、瘧疾、急性腸炎、跌打損傷等疾病。榕樹葉中主要含黃酮苷、香豆精等化學(xué)成分1。近年來對黃酮類化合物的藥理作用有較多研究，發(fā)現(xiàn)其具有抗心腦血管病、抗氧化、鎮(zhèn)痛、抗病毒、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)等作用2,3。研究表明可用超聲波提取榕樹葉總黃酮4，但未見對其提取條件優(yōu)化的研究。為進(jìn)一步研究榕樹葉總黃酮的功效，充分利用榕樹葉資源，本實(shí)驗(yàn)以總黃酮含量為考察指標(biāo),采用正交實(shí)驗(yàn)的方法對超聲波輔助提取榕樹葉總黃酮的工藝條件進(jìn)行了研究。1 儀器與材料1.1 儀器SG3300H超聲波清洗器(上海冠特超聲儀器有限公司)；UV-2500分光光度計(jì)(日本島津)；SHB循

6、環(huán)水式多用真空泵(鄭州長城科工貿(mào)有限公司)；ZFQ85A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海醫(yī)械專機(jī)廠)。1.2 試劑蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(中國藥品生物制品檢定所)；榕樹葉（采自廣西藥用植物園）；95%乙醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉等皆為分析純。2 方法與結(jié)果2.1 榕樹葉總黃酮的提取取新鮮榕樹葉，烘干，粉碎，準(zhǔn)確稱取榕樹葉粉5 g，置于250 ml錐形瓶中，按要求加入一定量的提取劑，超聲波提取一定時(shí)間，抽濾，減壓回收溶劑，定容于50 ml容量瓶中, 作為待測液。2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制精密稱取干燥蘆丁對照品20 mg，置100 ml容量瓶中，60%乙醇溶解，定容，得標(biāo)準(zhǔn)對照液（含無水蘆丁0.200 0 g/L）。分別精密移

7、取蘆丁對照液0，1.5，2.5，3.5，4.5，5.5 ml置25 ml容量瓶中, 分別加入50g/L亞硝酸鈉溶液0.75 ml，搖勻，靜置6 min；再加100 g/L硝酸鋁溶液0.75 ml，搖勻，靜置6 min；再加40 g/L氫氧化鈉溶液10 ml，60%乙醇稀釋至刻度，搖勻，靜置15 min，以第1瓶溶液為空白調(diào)零，取第3瓶溶液進(jìn)行全波長掃描，測得510 nm處有最大吸收，因此于510nm測各瓶溶液吸光度；以濃度（C）與吸光度（A）進(jìn)行線性回歸，得方程為：A = 9.975 4C - 0.003 5，r = 0.998 9。2.3 樣品含量測定取“2.1”項(xiàng)中待測液1 ml于25 m

8、l容量瓶中，從分別加入50 g/L亞硝酸鈉溶液起同“2.2”項(xiàng)下操作，510 nm處測定吸光度，根據(jù)回歸方程計(jì)算各樣品榕樹葉總黃酮含量?？傸S酮含量（%）=總黃酮量/干藥材量×100%2.4 單因素實(shí)驗(yàn)由于乙醇作為提取溶劑具有選擇性好,滲透性強(qiáng),浸出率較高的優(yōu)點(diǎn)，因此本實(shí)驗(yàn)選擇一定濃度的乙醇溶液作為提取劑，并分別考察了溶劑濃度、溶劑用量、浸泡時(shí)間、超聲波萃取時(shí)間及萃取次數(shù)等因素對提取率的影響。2.4.1 溶劑浸泡時(shí)間對提取率的影響各取5 g樣品，分別加入60%乙醇50 ml，浸泡0.5，1，1.5，2，2.5，3，3.5 h，超聲波提取30 min，抽濾，定容至50 ml，按“2.3”

9、項(xiàng)下方法制備樣品，測510 nm吸光度值，由回歸方程計(jì)算得各樣品總黃酮含量。結(jié)果見表1，圖1。從結(jié)果可見，樣品浸泡1 h以上已達(dá)到浸泡完全，提取所得總黃酮含量基本一致。表1 溶劑浸泡時(shí)間與總黃酮含量的關(guān)系（略）2.4.2 乙醇濃度對提取率的影響各取5 g樣品，分別加入50 ml不同體積分?jǐn)?shù)的乙醇(30%，40%，50%，60%，70%，80%，95%)，浸泡1 h，超聲波提取30 min，抽濾，定容至50 ml，測510 nm吸光度值，計(jì)算總黃酮含量。結(jié)果見表2及圖2。從結(jié)果可見，60%80%體積分?jǐn)?shù)的乙醇對榕樹葉總黃酮提取率均較高，其中以70%乙醇最佳。表2 乙醇濃度與總黃酮含量的關(guān)系（略）

10、2.4.3 溶劑用量對提取率的影響各取5 g樣品，分別加入70%乙醇10，12，14，16，18倍體積，浸泡1 h后，超聲波輔助提取30 min，抽濾，減壓回收溶劑，定容至50 ml，測510 nm吸光度值，計(jì)算總黃酮量。結(jié)果見表3，圖3。從結(jié)果可見，從1014倍體積溶劑提取率呈上升趨勢，14倍以上各體積溶劑提取所得總黃酮量相差不大，從節(jié)約溶劑考慮，可用14倍體積溶劑提取。表3 溶劑用量與總黃酮含量的關(guān)系（略）2.4.4 超聲波提取時(shí)間對提取率的影響各取5 g樣品，分別加入70%乙醇70 ml，浸泡1 h后，超聲波提取10，20，30，40，50 min，抽濾，減壓回收溶劑，定容至50 ml，

11、測510 nm吸光度值，計(jì)算總黃酮量。結(jié)果見表4及圖4。從結(jié)果可見，30 min為最佳提取時(shí)間。表4 超聲時(shí)間與總黃酮含量的關(guān)系（略）2.4.5 超聲波提取次數(shù)對提取率的影響各取5 g樣品，加入70%乙醇70 ml，浸泡1 h后，超聲波輔助提取30 min，分別提取2，3，4，5，6次，抽濾，合并同一樣品提取液，減壓回收溶劑，定容至50ml，測510 nm吸光度值，計(jì)算總黃酮含量。結(jié)果見表5及圖5。從結(jié)果可見，3次提取已達(dá)到最佳。表5 超聲次數(shù)與總黃酮含量的關(guān)系（略）2.5 正交設(shè)計(jì)根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選擇溶劑濃度、溶劑用量、超聲波輔助提取時(shí)間、提取次數(shù)4個(gè)因素進(jìn)行正交設(shè)計(jì)，選用L9(34)正

12、交表，因素水平見表6。表6 正交設(shè)計(jì)因素水平表（略）按表7所列各工藝制備樣品，加乙醇后均浸泡1 h后超聲提取，提取液定容至50 ml，測510 nm吸光度值，計(jì)算總黃酮量。結(jié)果見表7，方差分析見表8。由分析結(jié)果可知影響總黃酮提取的主次因素依次為乙醇濃度>溶劑量>提取次數(shù)>超聲時(shí)間；其中乙醇濃度對提取率的影響有顯著性差異；提取的最佳方案為A2B3C3D2，即16倍量70%乙醇超聲提取3次，40 min/次。表7 正交實(shí)驗(yàn)方案及結(jié)果分析（略）按照此最佳方案進(jìn)行了3批原料的提取，所得總黃酮含量分別為2.37%，2.49%，2.40%；平均為2.42%，優(yōu)于正交實(shí)驗(yàn)中提取率最高的A2B2C3D1（2.19%）。表8 方差分析（略）3 結(jié)論榕樹葉為廣西壯族民間常用藥，總黃酮是其主要有效成分。經(jīng)單因素實(shí)驗(yàn)及正交設(shè)計(jì)的直觀分析和方差分析發(fā)現(xiàn)，影響榕樹葉總黃酮超聲提取的主次因素依次為乙醇濃度>溶劑量>提取次數(shù)>超聲時(shí)間；最佳提取方案為A2B3C3D2，即16倍量70%乙醇超聲提取3次，40 min/次。在最佳提取條件下進(jìn)行了3批原料的提取，所得總黃酮含量平均為2.42%。說明本方法提取效率高，穩(wěn)定性好?！?/p>