黃芪中總黃酮的含量測定方法_圖文

1、黃芩中總黃酮的含量測定 To determine the content of total flavonoids in Radix Scutellariae班級 08級 2班專業(yè) 藥學姓名 崔立靖同組人 陸曉婭 關(guān)雪 李娟 張棟材摘要 目的:黃芩中總黃酮含量的測定。方法:采用紫外分光光度法測定黃芩 中總黃酮的含量。結(jié)果:黃芩中總黃酮含量是 0.034mg/ml。Abstract Objective :To determine the content of total flavonoids in Radix Scutellariae.Methods :Ultraviolet spectropho

2、tometry was used to To determine the content of total flavonoids content.Results :Total flavonoids content of Radix Scutellariae reached 0.034mg/ml。關(guān)鍵詞 黃芩;總黃酮;紫外分光光度法Key WorldRadix Scutellariae; Total flavonoids ; uv-spectrophotometry目錄摘要 . 1 Abstract . 1關(guān)鍵詞 . 1 Key World . 1目錄 . 21 緒論 . . 32 黃芩中總黃酮

3、含量測 . . 6 2.1儀器與試劑 . . 6 2.1.1實驗儀器 . . 6 2.1.2實驗藥品 . . 6 2.2試驗方法 . . 6 2.2.1總黃酮成分提取 . . 6 2.2.2定量實驗總黃酮的含量測定 . . 6 2.2.2.1線性關(guān)系考察 . . 6 2.2.2.2提取物含量的測定 . . 7 2.3方法學檢驗 . . 7 2.3.1精密度實驗 . . 7 2.3.2穩(wěn)定性考察 . . 7 2.4黃芩根及粉末的顯微圖像 . . 7 2.4.1黃芩根的顯微圖像 . . 72.4.2黃芩粉末的纖維圖像 . . 73 參考文獻 . . 81 緒論【英文名】 Radix Scutell

4、ariae【別名】 山茶根、黃芩茶、土金茶根【來源】 本品為唇形科植物黃芩 Scutellaria baicalensis Georgi 的干燥根。春、秋二季采挖,除去須根及泥沙,曬后撞去粗皮,曬干。產(chǎn) 于河北、遼寧、陜西、山東、內(nèi)蒙古、黑龍江等地?！局参锾卣鳌?多年生草本,高 3070厘米。主根粗壯,略呈圓錐形, 棕褐色。莖四棱形,基部多分枝。單葉對生;具短柄;葉片披針形,全線。 總狀花序項生,花偏生于花序一邊;花唇形,藍紫色。小堅果近球形,黑 褐色,包圍于宿萼中?；ㄆ?710月,果期 810月?！局品ā奎S芩片 除去雜質(zhì),置沸水中煮 10分鐘,取出,悶透,切薄片,干燥; 或蒸半小時,取出,切

5、薄片,干燥(注意避免曝曬。本品為類圓形或不 規(guī)則形薄片,外表皮黃棕色至棕褐色,切面黃棕色或黃綠色,具放射狀紋 理。酒黃芩 取黃芩片,照酒炙法炒干。本品為類圓形或不規(guī)則形薄片,外 表皮棕褐色,切面黃棕色,呈放射狀紋理,略帶焦斑,中心部分有的呈棕 色?！拘誀睢?本品呈圓錐形,扭曲,長 825cm ,直徑 13cm 。表面棕黃 色或深黃色,有稀疏的疣狀細根痕,上部較粗糙,有扭曲的縱皺或不規(guī)則 的網(wǎng)紋,下部有順紋和細皺。質(zhì)硬而脆,易折斷,斷面黃色,中間紅棕色; 老根中心枯朽狀或中空,呈暗棕色或棕黑色。氣微,味苦。【顯微特征】 橫切面 木栓層為數(shù)層至 20余層扁平細胞組成,其中散 在嗜細胞。木栓組織外緣

6、多破裂。皮層狹窄,散在纖維及石細胞。韌皮部 較寬廣,有多數(shù)纖維與石細胞,石細胞多分布于外側(cè),纖維單個散在或數(shù) 個成群,多分布于內(nèi)側(cè);形成層環(huán)狀明顯;木質(zhì)部導管單個散在或數(shù)個成 群,周圍有木纖維束;木射線較寬。老根中央有一至多個同心狀的木栓組 織環(huán)。薄壁細胞中還淀粉粒?！痉勰┨卣鳌?粉末深黃色。韌皮纖維微黃色,梭形,兩端尖或斜尖, 長 51200(271 um, 直徑 933um,壁木化,孔溝明顯。石細胞淡黃色, 類方形、類圓形、橢圓形或紡錘形,直徑 2448um,長約 85(160 um , 壁厚至 24um 。網(wǎng)紋及具緣紋孔導管多見。木纖維細長,壁稍厚,具斜 紋孔或具緣紋孔。另可見淀粉粒、木

7、栓細胞?！?黃芩根橫切】 【化學成分】 含多種黃酮類化合物 , 主要為黃芩甙(baicalin , 黃 芩素(baicalein , 漢黃芩甙(wogonoside , 漢黃芩素(wogonin , 7-甲氧基黃芩素 , 7-甲氧基去甲基漢黃芩素 , 黃芩黃酮, 黃芩黃酮。 【鑒別】 取粉末 1g ,加甲醇 20ml ,超聲處理 20分鐘,濾過,濾液 蒸干,殘渣加甲醇 1ml 使溶解,作為供試品溶液。另取黃芩對照藥材 1g , 同法制成對照藥材溶液。再取黃芩苷對照品,加甲醇制成每 1ml 含 1mg 的 溶液,作為對照品溶液。照薄層色譜法(附錄 B試驗,吸取上述三種 溶液各 5l ,分別點于同

8、一以含 4%醋酸鈉的羧甲基纖維素鈉溶液為黏合劑 的硅膠 G 薄層板上,以醋酸乙酯 -丁酮 -甲酸 -水(5:3:1:1為展開劑,預 平衡 30分鐘,展開,取出,晾干,噴以 1%三氯化鐵乙醇溶液。供試品色譜 中,在與對照藥材色譜相應的位置上,顯相同顏色的斑點;在與對照品色 譜相應的位置上,顯一相同的暗綠色斑點?！竞繙y定】照高效液相色譜法(附錄 D測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 用 十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;甲醇-水-磷酸(47:53:0。 2 為流動 相;檢測波長為 280nm 。理論板數(shù)按黃芩苷峰計算應不低于 2500。對照品溶液的制備 精密稱取在 60減壓干燥 4 小時的黃芩苷對 照品

9、適量,加甲醇制成每 1ml 含 60g 的溶液,即得。供試品溶液的制備 取本品中粉約 0。 3g同時另取本品粉末測定水 分(附錄 H第一法 ,精密稱定,加 70%乙醇 40ml ,加熱回流 3 小時, 放冷,濾過,濾液置 100ml 量瓶中,用少量 70%乙醇分次洗滌容器和殘渣,洗液濾入同一量瓶中，加 70%乙醇至刻度，搖勻。精密量取 1ml，置 10ml 量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。 測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各 10 l，注入液 相色譜儀，測定，即得。 本品按干燥品計算，含黃芩苷（C21H18O11） 不得少于 9。0% 。 【理化鑒別】 1. 取粉末 1 g, 加乙

10、醇 10 ml, 溫浸 15 分鐘, 濾過, 取濾液 1 ml, 加醋酸鉛試液 23 滴, 生成桔黃色沉淀；另取濾液 1 ml, 加鎂粉少量與鹽 酸 34 滴, 顯紅色 2. 薄層層析 樣 品 液:取粉末 1 g, 加乙醚 40 ml 于索氏提取器中回流至無色, 濃縮至 25 ml, 供試對照品液:取黃芩素和漢黃芩素配成溶液作為對照 溶液 展 開:0.5 N 草酸硅膠 G 板（硅膠 G+0.5 N 草酸溶液鋪板）, 以氯 仿-甲醇（101）展開 17 cm 顯 色:于 365 nm 紫外燈下觀察, 供試品在與標準品的相同位置有 相同的暗灰棕色熒光斑點成分分析研究進展:略 【藥理作用】 1. 抗

11、菌、抗病毒、抗真菌:煎劑對多種球菌、桿菌、耐藥的金黃 色葡萄球菌、流感病毒、皮膚真菌有抑制作用 2. 解熱:煎劑及黃芩甙對實驗性發(fā)熱的家兔有解熱作用 3. 降壓、利尿作用:黃芩甙給麻醉狗注射, 有明顯的降壓和利尿 作用 4. 抗炎、抗過敏:黃芩甙與黃芩素動物試驗能抑制過敏性炎癥滲出, 降低毛細血管通透性, 有抗組織胺與抗乙酰膽堿作用。 【類藥比較】 1） 枯芩子芩 黃芩分枯芩與子芩。 枯芩為生長年久的宿根，中空而枯，體輕主浮，善清上焦肺火， 主治肺熱咳嗽痰黃。 子芩為生長年少的子根，體實而堅，質(zhì)重主降，善瀉大腸濕熱， 主治濕熱瀉痢腹痛。 2） 黃芩續(xù)斷 黃芩與續(xù)斷均有安胎之功，用治胎動不安。

12、5 黃芩藥性寒涼，清熱瀉火，安胎，用治胎熱所致的胎動不安。 續(xù)斷藥性微溫，補肝腎，安胎，用治肝腎不足所致的胎動不安。 2 2.1 儀器與試劑 2.1.1 實驗儀器 黃芩中總黃酮含量測 超聲波清洗器、 紫外可見分光光度計、 分析天平、 100ml 容量瓶、 25ml 容量瓶、5ml 移液管、1ml 移液管、6 支試管、1 個試管架、洗耳球 2.1.2 實驗藥品 70%乙醇、5%亞硝酸鈉、10%硝酸鋁、4%氫氧化鈉、蘆丁標準品、黃芩 2.2 試驗方法 2.2.1 總黃酮成分提取 取黃芩，粉碎。精密稱取黃芩粉末約 1 g，放置 100 ml 容量瓶中，加 90ml 70%乙醇，超聲波提取約 50mi

13、n，用 70%乙醇稀釋至刻度，得樣品液。 2.2.2 定量實驗總黃酮的含量測定 2.2.2.1 線性關(guān)系考察 分別精密吸取蘆丁對照液（0.1 mg/ml）0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、 5.00 ml 于試管中， 70%乙醇稀釋至 5ml， 用 再分別加入 5%亞硝酸鈉溶液 0.3 ml，搖勻，靜置 6 min；再加 10%硝酸鋁溶液 0.3 ml，搖勻，靜置 6 min； 再加 4%氫氧化鈉溶液 4.00 ml，最后加 70%乙醇 0.4ml，搖勻，靜置 12 min， 以試劑作空白，于 510 nm 處測吸光度。以吸光度值 A 為縱坐標，蘆丁濃度 C（mg/ml）為橫坐

14、標，進行線性回歸，得回歸方程 A=0.0832C+0.0004,r=0.9999。標準曲線見下圖 對照品標準曲線 0.06 C(mg/ml 0.04 0.02 0 0 0.2 0.4 0.6 y = 0.0832x + 0.0004 A 0.8 6 2.2.2.2 提取物含量的測定 精密吸取樣品液 2.00 ml 于試管中，按標準曲線的制備操作測定吸光 度，根據(jù)回歸方程計算樣品中總黃酮的含量。 2.3 方法學檢驗 2.3.1 精密度實驗 取黃芩樣品液，重復測定吸光度 6 次，計算其相對標準偏差，結(jié)果 RSD 為 0.19%，本實驗精密度良好。 2.3.2 穩(wěn)定性考察 精密吸取黃芩對照品溶液，與 0，10，20，30，40，50，60min 測定吸 光度值，RSD 為 0.92%（n=6），表明對照品溶液在 60min 內(nèi)基本穩(wěn)定