高效液相色譜法測(cè)定注射用黃芩莖葉總黃酮中野黃芩苷的含量

1、高效液相色譜法測(cè)定注射用黃芩莖葉總黃酮中野黃芩苷的含量                      作者：李國(guó)軍，毛曉霞，蘇占輝，劉玉翠，陳四平【摘要】  目的測(cè)定注射用黃芩莖葉總黃酮中野黃芩苷的含量。方法高效液相色譜法。結(jié)果野黃芩苷進(jìn)樣量在0.914.55 g范圍內(nèi)，峰面積積分值與進(jìn)樣量有良好的線性關(guān)系，r=0.999 9，平均加樣回收率為99.23%，RSD=2.21%。結(jié)論該法可以用

2、于該藥的質(zhì)量控制。 【關(guān)鍵詞】  注射用黃芩莖葉總黃酮 野黃芩苷 高效液相色譜法    黃芩莖葉為唇形科植物黃芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥地上部分,其有效部位為黃芩莖葉總黃酮（total flavonoids from stems and leaves of Scutellaria baicalensis Georgi, SSF），其化學(xué)成分主要包括野黃芩苷、黃芩苷、芹菜素苷、白楊素-7-O-D-葡萄糖醛酸苷等黃酮類化合物。其中野黃芩苷具有清熱解毒、擴(kuò)張血管、改善體內(nèi)微循環(huán)等明顯藥理活性1。藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)黃芩莖葉總

3、黃酮具有較強(qiáng)的抗病毒、抗炎、抗氧化、降血脂和較強(qiáng)的記憶改善作用24。為了有效地發(fā)揮黃芩莖葉的藥用價(jià)值，方便急診及不能口服藥物的病人，我們將黃芩莖葉有效成分精制純化，研制了注射用黃芩莖葉總黃酮。本實(shí)驗(yàn)通過建立HPLC法測(cè)定注射用黃芩莖葉總黃酮中野黃芩苷含量的方法來控制制劑的內(nèi)在質(zhì)量。1  儀器與試藥 1.1  儀器Shimadzu10ATvp高效液相色譜儀，CLASSvp5.0色譜數(shù)據(jù)工作站，瑞士產(chǎn)梅特AG-245型電子分析天平，惠普HP-8453紫外可見分光光度計(jì)，KQ-100E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。1.2  試藥野黃芩苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制

4、品檢定所，批號(hào)110842-200504），注射用黃芩莖葉總黃酮（承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所研制）。2   方法與結(jié)果2.1   色譜條件色譜柱為Discovery C18(4.6 mm×250 mm, 5 m)；流動(dòng)相為以甲醇-0.1%甲酸溶液進(jìn)行梯度洗脫，030 min由40%的甲醇的0.1%甲酸溶液增加到70%甲醇的0.1%甲酸溶液；流速0.8 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)335 nm；柱溫26；進(jìn)樣量10 l。2.2   檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇將野黃芩苷對(duì)照品溶液進(jìn)行光譜掃描，結(jié)果最大吸收波長(zhǎng)為335 nm，故選擇335 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)

5、。2.3   對(duì)照品溶液的制備精密稱取五氧化二磷減壓干燥器中干燥24 h的野黃芩苷對(duì)照品22.75 mg至50 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液(0.455 mg/ml)，備用。精密吸取上述溶液5 ml至10 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻；作為對(duì)照品溶液(0.227 5 mg/ml)。2.4   供試品溶液的制備 取黃芩莖葉總黃酮凍干粉10 mg,精密稱定，置10 ml量瓶中，加甲醇適量，超聲處理20 min使溶解，放冷，補(bǔ)加甲醇至刻度，搖勻，放置，取上清液用微孔濾膜（0.45 m）濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。2.5&

6、#160;  空白試驗(yàn)按照樣品制備工藝，制成不含黃芩莖葉總黃酮成分的空白凍干粉針，作為陰性對(duì)照，同法測(cè)定。結(jié)果空白凍干粉在與野黃芩苷對(duì)照品相同保留時(shí)間處無色譜峰，故認(rèn)為無干擾。2.6   線性關(guān)系考察精密吸取濃度為0.455 mg/ml的野黃芩苷對(duì)照品儲(chǔ)備液2，4，6，8，10 l依次注入色譜儀中，在前述色譜條件下，測(cè)定野黃芩苷的峰面積，結(jié)果見表1。以進(jìn)樣量X（g）為橫坐標(biāo)，峰面積Y為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，見圖1?；貧w處理得直線方程為Y=5×106X-351 032，r=0.999 9。表1  線性關(guān)系測(cè)定結(jié)果（略）x【摘要】 

7、目的測(cè)定注射用黃芩莖葉總黃酮中野黃芩苷的含量。方法高效液相色譜法。結(jié)果野黃芩苷進(jìn)樣量在0.914.55 g范圍內(nèi)，峰面積積分值與進(jìn)樣量有良好的線性關(guān)系，r=0.999 9，平均加樣回收率為99.23%，RSD=2.21%。結(jié)論該法可以用于該藥的質(zhì)量控制。     【關(guān)鍵詞】  注射用黃芩莖葉總黃酮 野黃芩苷 高效液相色譜法    黃芩莖葉為唇形科植物黃芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥地上部分,其有效部位為黃芩莖葉總黃酮（total flavonoids from stems an

8、d leaves of Scutellaria baicalensis Georgi, SSF），其化學(xué)成分主要包括野黃芩苷、黃芩苷、芹菜素苷、白楊素-7-O-D-葡萄糖醛酸苷等黃酮類化合物。其中野黃芩苷具有清熱解毒、擴(kuò)張血管、改善體內(nèi)微循環(huán)等明顯藥理活性1。藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)黃芩莖葉總黃酮具有較強(qiáng)的抗病毒、抗炎、抗氧化、降血脂和較強(qiáng)的記憶改善作用24。為了有效地發(fā)揮黃芩莖葉的藥用價(jià)值，方便急診及不能口服藥物的病人，我們將黃芩莖葉有效成分精制純化，研制了注射用黃芩莖葉總黃酮。本實(shí)驗(yàn)通過建立HPLC法測(cè)定注射用黃芩莖葉總黃酮中野黃芩苷含量的方法來控制制劑的內(nèi)在質(zhì)量。1  儀器與試藥 1.1

9、  儀器Shimadzu10ATvp高效液相色譜儀，CLASSvp5.0色譜數(shù)據(jù)工作站，瑞士產(chǎn)梅特AG-245型電子分析天平，惠普HP-8453紫外可見分光光度計(jì)，KQ-100E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。1.2  試藥野黃芩苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)110842-200504），注射用黃芩莖葉總黃酮（承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所研制）。2   方法與結(jié)果2.1   色譜條件色譜柱為Discovery C18(4.6 mm×250 mm, 5 m)；流動(dòng)相為以甲醇-0.1%甲酸溶液進(jìn)行梯度洗脫，030 mi

10、n由40%的甲醇的0.1%甲酸溶液增加到70%甲醇的0.1%甲酸溶液；流速0.8 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)335 nm；柱溫26；進(jìn)樣量10 l。2.2   檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇將野黃芩苷對(duì)照品溶液進(jìn)行光譜掃描，結(jié)果最大吸收波長(zhǎng)為335 nm，故選擇335 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。2.3   對(duì)照品溶液的制備精密稱取五氧化二磷減壓干燥器中干燥24 h的野黃芩苷對(duì)照品22.75 mg至50 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液(0.455 mg/ml)，備用。精密吸取上述溶液5 ml至10 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻；作為對(duì)照品溶液(0.22

11、7 5 mg/ml)。2.4   供試品溶液的制備 取黃芩莖葉總黃酮凍干粉10 mg,精密稱定，置10 ml量瓶中，加甲醇適量，超聲處理20 min使溶解，放冷，補(bǔ)加甲醇至刻度，搖勻，放置，取上清液用微孔濾膜（0.45 m）濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。2.5   空白試驗(yàn)按照樣品制備工藝，制成不含黃芩莖葉總黃酮成分的空白凍干粉針，作為陰性對(duì)照，同法測(cè)定。結(jié)果空白凍干粉在與野黃芩苷對(duì)照品相同保留時(shí)間處無色譜峰，故認(rèn)為無干擾。2.6   線性關(guān)系考察精密吸取濃度為0.455 mg/ml的野黃芩苷對(duì)照品儲(chǔ)備液2，4，6，8，10 l依次

12、注入色譜儀中，在前述色譜條件下，測(cè)定野黃芩苷的峰面積，結(jié)果見表1。以進(jìn)樣量X（g）為橫坐標(biāo)，峰面積Y為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，見圖1?；貧w處理得直線方程為Y=5×106X-351 032，r=0.999 9。表1  線性關(guān)系測(cè)定結(jié)果（略）結(jié)果表明野黃芩苷進(jìn)樣量在0.914.55 g范圍內(nèi)，峰面積積分值與進(jìn)樣量有良好的線性關(guān)系。2.7   精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取野黃芩苷對(duì)照品溶液（0.227 5 mg/ml）10l，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄對(duì)照品峰面積依次為10 527 733，10 519 059，10 419 713，10 553 602，10 523 716，10