金銀花水提取液抗氧化作用研究

1、金銀花水提取液抗氧化作用研究    If you run after two heares, you will ca.     【摘要】  目的研究金銀花提取液在體外對H2O2、·OH、O2-·的清除作用。方法用超聲波處理和直接水煮制備金銀花水提液，采用碘量法、番紅褪色光度法和NBT法分別測定兩種水提液對H2O2、·OH和O2-·的清除作用。結(jié)果兩種提取液均對H2O2的清除作用較弱，但具有濃度-效應(yīng)關(guān)系;超聲波處理的提取液對·OH的清除

2、作用隨提取液濃度的增加而增強(qiáng)，水煮處理的提取液中以150的濃度對·OH的清除作用最強(qiáng);二者對O2-·有較強(qiáng)的清除作用，且作用的趨勢和能力一致，在加入量不超過250 l時，其清除率隨加入量的增加呈線性上升，以后基本不再增加。結(jié)論金銀花水提液對·OH和O2-·具有較強(qiáng)的清除作用，可作為抗氧化劑進(jìn)一步開發(fā)()。 Silence in times of suffering is the best.  【關(guān)鍵詞】  金銀花; 水提液; 超聲波; 抗氧化God sends fortune

3、 to fools.  體內(nèi)最重要的一類自由基是氧自由基，包括O2-·、·OH、H2O2、H O-2、1O2、ROO·、RO·等。1，在正常生理狀態(tài)下，機(jī)體內(nèi)自由基的產(chǎn)生與清除處于動態(tài)平衡。如果自由基產(chǎn)生過多或清除過慢時，它將通過攻擊生命大分子物質(zhì)及各種細(xì)胞器，造成機(jī)體在分子水平、細(xì)胞水平及組織器官水平的損傷2。因此探求天然的自由基清除劑對于保護(hù)人體健康極為有益。金銀花是藥食兩用植物，主要含有綠原酸、類黃酮等生理活性成分，中醫(yī)認(rèn)為金銀花具有清熱解毒等諸多功效，它的化學(xué)成分、藥理作用及其安全性等均被廣泛關(guān)注，研究結(jié)果時有報(bào)道3，但對其抗

4、氧化作用的研究不多，而且目前主要針對的是金銀花對油脂氧化的抑制作用46 。本文以傳統(tǒng)的水煮水提液和現(xiàn)代化的超聲波處理金銀花所得水提液作為樣本，考察它們對O2-·，·OH，H2O2的清除作用，從而評價(jià)金銀花的抗氧化能力，對金銀花的開發(fā)利用具有積極意義。1 材料1.1 材料、試劑與儀器供試材料金銀花購于重慶普通超市(醫(yī)藥學(xué)/藥學(xué)論文 )。A thing is bigger for being shared.  番紅花紅T，上?；瘜W(xué)試劑采購供應(yīng)站;氯化硝基四氮唑蘭(NBT)，前進(jìn)試劑廠;核黃素(VB2)，上?；瘜W(xué)試劑站分裝廠;L-甲硫氨酸(

5、Met)，上海康達(dá)氨基酸廠;硫代巴比妥酸(TBA):上海試劑二廠;其余試劑均為分析純。KQ5200型超聲波提取儀，昆山市超聲儀器有限公司;ZFQ-S旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，天津玻璃儀器廠;UV-2405紫外可見分光光度計(jì)，日本島津。1.2 金銀花提取液的制備1.2.1 超聲波處理金銀花提取液的制備取一定量的金銀花用去離子水泡24 h后，在20 kHz的超聲儀中處理40 min，控制溫度為40。過濾，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸發(fā)濃縮，定容到每毫升提取液相當(dāng)于0.2 g(15)金銀花干品。1.2.2 金銀花水煮提取液的制備取一定量的金銀花用水煮提3次，

6、第1次60 min，過濾，又加水煮提40 min，過濾，再加水煮提30 min，過濾。合并濾液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸發(fā)濃縮，定容到每毫升提取液相當(dāng)于0.2 g(15)金銀花干品。論文包括學(xué)年論文、畢業(yè)論文、學(xué)位論文、科技論文、成果論文等.  2 方法2.1 對H2O2的作用采用碘量法7測定。每個樣品做3次平行樣，取其平均值。計(jì)算：H2O2清除率E(%)= V1-V2V1-V0×100%式中：V0陰性對照消耗Na2S2O3的體積(ml);V1陽性對照消耗Na2S2O3的體積(ml);V2樣品消耗Na2S2O3的體

7、積(ml)。2.2 對·OH的作用主要根據(jù)文獻(xiàn)8進(jìn)行。羥自由基由EDTA Na2-Fe(II)-H2O2體系產(chǎn)生。由于·OH可特異性地使番紅花紅T褪色，可根據(jù)褪色程度衡量·OH的生成量。每個樣品做3次平行樣，取其平均值。計(jì)算·OH的清除率E(%)=(A2 - A11)/(A1 -A11)×100%式中：A2樣品的吸光度;A11溶劑的吸光度;A1對照組的吸光度。2.3 對O2-·的清除作用利用核黃素(VB2)在光激發(fā)下產(chǎn)生O2-·，O2-·可使氮藍(lán)四唑(NB

8、T)還原生成藍(lán)色的甲基臜9。當(dāng)O2-·被清除，可抑制NBT的還原，其吸光度值降低。清除能力越強(qiáng)，吸光度就減少得越多。每個樣品做3次平行樣，取其平均值。計(jì)算：O2-·清除率E(%)= (A1-A11)-(A2-A21)A1-A11×100%式中：A1對照組的吸光度;A2樣品組的吸光度;A11空白1的吸光度(空白1不加樣品);A21空白2的吸光度(空白2加樣品但不加pH 7.8的PBS)。A useful trade is a mine of gold.  2.4 綠原酸含量的測定用分光光度法10進(jìn)行測定。所得標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程

9、是：Y= 0.128 3 + 0.022 7X，r2 = 0.996 7He who would search for pearls must dive below(or deep).  2.5 總黃酮含量的測定用蘆丁做標(biāo)準(zhǔn)，分光光度法測定11。所得標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程是：Y= 0.001 2 + 0.035 8X，r2= 0.999 93 結(jié)果與分析3.1 金銀花水提液對H2O2的作用所有能產(chǎn)生O2-

10、83;的生物體系都能通過歧化反應(yīng)產(chǎn)生H2O2。H2O2能使少數(shù)酶的-SH基氧化失活，能迅速穿過細(xì)胞膜;在有過渡金屬離子(如Fe2+或Cu+)存在時，發(fā)生典型的Fenton反應(yīng)，生成·OH12。·OH是化學(xué)性質(zhì)最活潑、毒性最大的活性氧13。在反應(yīng)體系中對H2O2具有清除作用，就可能抑制H2O2對機(jī)體的不利影響。在取樣量為10 ml時，超聲波處理的和直接水煮的金銀花水提液對H2O2清除作用的實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。由表1可知，超聲波處理的和直接水煮的金銀花水提液對H2O2的清除作用隨濃度的增加而增加，但增加的幅度較小且清除能力非常弱表1 金銀花提取液對H2O2的作用

11、The peacock has fair feathers, but foul.  3.2 金銀花水提液對·OH的作用·OH是毒性最大的活性氧，對細(xì)胞內(nèi)DNA的破壞作用最大14，它可以形成堿基自由基。生成的這些嘧啶和嘌呤自由基可以相互結(jié)合，或再通過其它自由基反應(yīng)生成過氧化物，這些變化可造成堿基的破壞，從而產(chǎn)生遺傳突變。在取樣量為1.0ml時，超聲波處理的和直接水煮的金銀花水提液對·OH作用的實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。表2 金銀花提取液對·OH的清除率%You never know what you can do till you.&#

12、160; 由表2可知，超聲波處理的金銀花水提液對·OH的清除作用是隨濃度的增加而增強(qiáng)，當(dāng)加入120的提取液1.0 ml，對實(shí)驗(yàn)體系中·OH的清除率可達(dá)100%。而水煮得的金銀花水提液當(dāng)濃度低于20 mg/ml(150)時，隨濃度的增加對·OH的清除作用增強(qiáng)，然而當(dāng)濃度再增加，它們對·OH的清除作用反而減弱，當(dāng)提取液的濃度達(dá)到50 mg/ml(120)其清除率為0。本實(shí)驗(yàn)分析了這兩種提取液中綠原酸和總黃酮的含量，結(jié)果見表3。由表3可知，兩種提取液中綠原酸的含量無明顯差別，但總黃酮的含量差別較大，超聲波處理的金銀花水提液中總黃酮

13、的含量較高。是它們之間黃酮含量的差別導(dǎo)致對·OH的清除作用的差異還是其它成分在起作用有待進(jìn)一步研究。Silence in times of suffering is the best.  表3 金銀花提取液中綠原酸和總黃酮的含量g·ml-1以直接水煮得到的金銀花水提液中對·OH的清除作用最強(qiáng)的150的提取液為研究對象，考察不同的加入量對·OH的清除作用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖1。圖1 150的金銀花水提液對·OH的清除作用由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，當(dāng)加入量不超過0.7ml時，該提取液對·OH的清除率隨加入量的增加呈線性上升，

14、達(dá)到78.26%后，隨提取液加入量的增加，清除率的增加就非常緩慢。 論文教育信息網(wǎng)  3.3 金銀花水提液對O2-·的作用 以15(0.2g干花/ml)的金銀花液為樣本，研究不同加樣量超聲波處理的和直接水煮的金銀花水提液對O2-·的作用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖2。圖2 不同量金銀花提取液對O2-·的清除作用由圖2可知，超聲波處理的和直接水煮的金銀花水提液對O2-·都具有較強(qiáng)的清除作用，且作用的趨勢和能力一致。當(dāng)它們的加入量不超過250l時，對O2-·的清除率隨加入量的增加呈線性上升;以后隨加入量的增加，其

15、清除率基本不增加。One ploughs, another sow; who will reap  本文研究的金銀花的兩種提取液除對H2O2的清除作用較弱外，對·OH、O2-·都具有較強(qiáng)的清除作用，因而金銀花值得作為抗氧化劑進(jìn)一步開發(fā)。【參考文獻(xiàn)】  1 Nedyalka V. Yanishlieva, Emma Marinova, et al. Natural antioxidants from herbs and 

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