《不規(guī)則抗體篩選》ppt課件

1、抗體挑選檢查祁新華祁新華2021.09.28 明確規(guī)定部分病人應(yīng)做“抗體挑選檢測(cè)，第四章第17條：“凡遇以下情況必需按有關(guān)規(guī)定做抗體挑選實(shí)驗(yàn)：1、交叉配血不合的； 2、對(duì)有輸血史、妊娠史或短期內(nèi)需接受多次輸血者。為什么要開(kāi)展輸血前的“抗體挑選檢查 1、目前知紅細(xì)胞有26個(gè)抗原系統(tǒng)確認(rèn)21個(gè)，如ABO、Rh、MN、LW、MNS、JK等，500多種抗原確認(rèn)200多種。紅細(xì)胞抗原的多樣性決議了抗體的多樣性，檢測(cè)抗A、抗B、抗DABO血型、Rh血型可確保絕大多數(shù)病人的輸血平安，但仍不能防止因血型不合ABO、Rh血型以外而引發(fā)的溶血。2、臨床有的病人出現(xiàn)慢性緩慢性溶血反響，易忽視或引不起臨床醫(yī)師注重。

2、實(shí)際上講，成年人每輸1U的濃縮紅細(xì)胞，在不喪失、不被破壞溶血的前提下，應(yīng)能提升Hb5-10g/L (0.5-1g/dl),堅(jiān)持15-30天。假設(shè)輸3-4U RBC，病人Hb上升不到10g/L，或幾天后1周內(nèi)Hb仍舊下降到原來(lái)程度，甚至更低。這種情況，就要思索能否有慢性溶血反響存在。3、有利于早期發(fā)現(xiàn)和確認(rèn)具有臨床意義的抗體，獲得充足的時(shí)間來(lái)選擇相配合的血，防止由于尋覓不到相合的血液而呵斥患者病情的延誤。抗體挑選檢查 一、什么叫“抗體挑選檢查 1、不規(guī)那么抗體的含義：通常把抗A、抗B以外的一切紅細(xì)胞血型抗體稱為不規(guī)那么抗體。如抗D、抗N、抗M、jk-抗體。 2、“抗體挑選的含義：器具備有臨床意義

3、的血型抗原的O型紅細(xì)胞，檢測(cè)病人血清含多種抗體；假設(shè)出現(xiàn)聚集景象，那么提示病人有不規(guī)那么抗體存在，可判為“抗體挑選陽(yáng)性。試劑試劑n抗體挑選用紅細(xì)胞懸液1#、2#、3#n試劑紅細(xì)胞必需含有以下抗原：D,C,E,c,e,M,N,S,s,P1,Lea,Leb,K,k,Fya,Fyb,Jka,和JkbnLIM 液、Polybrene及重懸液n抗球蛋白血清n受檢者血清n受檢者5%紅細(xì)胞懸液鹽水法n原理：鹽水介質(zhì)中的紅細(xì)胞膜上的抗原原理：鹽水介質(zhì)中的紅細(xì)胞膜上的抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合，交叉結(jié)合構(gòu)成肉眼可與相應(yīng)抗體結(jié)合，交叉結(jié)合構(gòu)成肉眼可見(jiàn)的凝集塊。見(jiàn)的凝集塊。實(shí)驗(yàn)步驟n取4支小試管，按表標(biāo)志及參與相應(yīng)試劑。

4、n 1# 2# 3# 自 身 n受檢者血清 2滴 2滴 2滴 2滴n挑選用紅細(xì)胞懸液1# 1滴n挑選用紅細(xì)胞懸液2# 1滴n挑選用紅細(xì)胞懸液3# 1滴n受檢者5%紅細(xì)胞懸液 1滴n混勻后3400rpm離心15秒，立刻察看結(jié)果 同前本卷須知n標(biāo)本編號(hào)清楚！n試劑紅細(xì)胞是保管在保管液中，一旦用生理鹽水或Liss液洗滌后那么應(yīng)該在24小時(shí)內(nèi)運(yùn)用，否那么會(huì)因污染、抗原喪失導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)錯(cuò)誤。n加血清和紅細(xì)胞懸液的量必需準(zhǔn)確不能多加，少加,以免引起前帶和后帶效應(yīng)n轉(zhuǎn)速不能太快或太慢、時(shí)間不能過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短，以免引起假陽(yáng)性或假陰性。Polybrene法n原理：聚凝胺是一種多價(jià)陽(yáng)離子聚合物，在溶原理：聚凝胺是一種多價(jià)

5、陽(yáng)離子聚合物，在溶液中有多個(gè)陽(yáng)離子集團(tuán)，能中和紅細(xì)胞外表的液中有多個(gè)陽(yáng)離子集團(tuán)，能中和紅細(xì)胞外表的負(fù)電荷，并借助正負(fù)電荷的作用，引起紅細(xì)胞負(fù)電荷，并借助正負(fù)電荷的作用，引起紅細(xì)胞的非特異性凝聚，這種凝聚是可逆的。當(dāng)紅細(xì)的非特異性凝聚，這種凝聚是可逆的。當(dāng)紅細(xì)胞與血清在低離子介質(zhì)中孵育，胞與血清在低離子介質(zhì)中孵育，IgGIgG抗體與紅抗體與紅細(xì)胞上相應(yīng)抗原結(jié)合后，在聚凝胺的作用下發(fā)細(xì)胞上相應(yīng)抗原結(jié)合后，在聚凝胺的作用下發(fā)生凝集，凝聚和凝集外表上不能區(qū)分，參與枸生凝集，凝聚和凝集外表上不能區(qū)分，參與枸櫞酸鈉重懸液后，枸櫞酸根的負(fù)電荷中和了聚櫞酸鈉重懸液后，枸櫞酸根的負(fù)電荷中和了聚凝胺上的正電荷，使

6、紅細(xì)胞凝聚景象消逝，而凝胺上的正電荷，使紅細(xì)胞凝聚景象消逝，而真正的凝集不消逝。真正的凝集不消逝。( (見(jiàn)圖見(jiàn)圖). ). 實(shí)驗(yàn)步驟取4支小試管，按表標(biāo)志及參與相應(yīng)試劑。 1# 2# 3# 自 身 受檢者血清 2滴 2滴 2滴 2滴挑選用紅細(xì)胞懸液1# 1滴挑選用紅細(xì)胞懸液2# 1滴挑選用紅細(xì)胞懸液3# 1滴受檢者5%紅細(xì)胞懸液 1滴LIM液 12滴 0.6ml 0.6ml 0.6ml 0.6ml混勻后室溫靜置1分鐘。然后各參與Polybrene試劑1滴，混勻后3400rpm 離心 15秒，輕扣察看有無(wú)凝集。向試管中各參與重懸液 1滴，輕搖察看凝集能否散開(kāi)。本卷須知n標(biāo)本盡能夠不用肝素抗凝血，

7、假設(shè)用需求多加1滴聚凝胺。肝素是大分子的陰離子物質(zhì),可以中和凝聚胺的陽(yáng)離子，導(dǎo)致假陰性。n在接納標(biāo)本時(shí)，要訊問(wèn)抽血時(shí)能否正在輸液或者剛輸過(guò)液，假設(shè)有這種情況那么要咨詢臨床醫(yī)師液體中能否含有止血敏 ， KCL，VitC ，這些藥品會(huì)干擾聚凝胺的作用導(dǎo)致假陰性，引起事故。n加血清量不能多加，否那么會(huì)提高致敏過(guò)程中的離子強(qiáng)度，降低致敏效果。n加聚凝胺，只需加1滴，多加能夠?qū)е轮貞乙簾o(wú)法充分解散非特異性凝集，出現(xiàn)假凝集，導(dǎo)致假陽(yáng)性。n看結(jié)果：陰性結(jié)果-紅細(xì)胞迅速散開(kāi)，并在1分鐘內(nèi)完全散開(kāi)?？稍阽R下察看。n 陽(yáng)性結(jié)果-紅細(xì)胞不完全散開(kāi)，弱凝集能夠在30分鐘內(nèi)明顯減弱或消逝，因此以立刻看的結(jié)果為準(zhǔn)。n轉(zhuǎn)速

8、不能太快或太慢、時(shí)間不能過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短，以免引起假陽(yáng)性或假陰性?？骨虻鞍讓?shí)驗(yàn)抗球蛋白實(shí)驗(yàn)n原理：抗體分子和補(bǔ)體成分都是球蛋白，原理：抗體分子和補(bǔ)體成分都是球蛋白，用這些球蛋白免疫動(dòng)物使之產(chǎn)生抗體即用這些球蛋白免疫動(dòng)物使之產(chǎn)生抗體即抗人球蛋白，抗球蛋白試劑可以和致敏抗人球蛋白，抗球蛋白試劑可以和致敏在紅細(xì)胞上的人球蛋白抗體分子和補(bǔ)在紅細(xì)胞上的人球蛋白抗體分子和補(bǔ)體分子反響，經(jīng)過(guò)架橋作用使致敏紅體分子反響，經(jīng)過(guò)架橋作用使致敏紅細(xì)胞出現(xiàn)凝集。見(jiàn)圖細(xì)胞出現(xiàn)凝集。見(jiàn)圖 抗球蛋白實(shí)驗(yàn) 抗球蛋白實(shí)驗(yàn)步驟 n 1# 2# 3# 自 身 n受檢者血清 2滴 2滴 2滴 2滴n挑選用紅細(xì)胞懸液1# 1滴n挑選用紅細(xì)胞

9、懸液2# 1滴n挑選用紅細(xì)胞懸液3# 1滴n受檢者5%紅細(xì)胞懸液 1滴n混勻后置37水浴30分鐘后，用生理鹽水洗滌3次怎樣洗最后1次用吸水紙吸盡鹽水，然后加1滴抗球蛋白血清，混勻后以3400rpm 離心15秒鐘，輕搖，察看結(jié)果。結(jié)果意義挑選紅細(xì)胞1、2、3 本身紅細(xì)胞 血清中存在的抗體+ 同種抗體+ + 本身抗體，或本身抗 體和同種抗體同時(shí)存 在 + 本身抗體本卷須知n必需進(jìn)展間接抗人球蛋白實(shí)驗(yàn)。必需進(jìn)展間接抗人球蛋白實(shí)驗(yàn)。n必需同時(shí)作本身抗體的檢查，即患者血清與本身紅細(xì)胞的反必需同時(shí)作本身抗體的檢查，即患者血清與本身紅細(xì)胞的反響，以識(shí)別同種抗體、本身抗體或兩者能否都存在。響，以識(shí)別同種抗體、

10、本身抗體或兩者能否都存在。n察看水浴箱的溫度、血清對(duì)細(xì)胞的比例準(zhǔn)確、反響時(shí)間、轉(zhuǎn)察看水浴箱的溫度、血清對(duì)細(xì)胞的比例準(zhǔn)確、反響時(shí)間、轉(zhuǎn)速、。速、。n察看結(jié)果時(shí)輕搖試管，以免將弱凝集搖散呵斥假陰性，引起察看結(jié)果時(shí)輕搖試管，以免將弱凝集搖散呵斥假陰性，引起事故。事故。n假設(shè)抗體挑選時(shí)，無(wú)論哪一種方法出現(xiàn)陽(yáng)性反響時(shí)，都必需假設(shè)抗體挑選時(shí)，無(wú)論哪一種方法出現(xiàn)陽(yáng)性反響時(shí)，都必需進(jìn)一步進(jìn)展抗體特異性的鑒定進(jìn)一步進(jìn)展抗體特異性的鑒定.(.(以判別抗體的臨床意義并給以判別抗體的臨床意義并給予配合型血液輸注，以預(yù)防溶血性輸血反響的發(fā)生及預(yù)測(cè)新予配合型血液輸注，以預(yù)防溶血性輸血反響的發(fā)生及預(yù)測(cè)新生兒溶血病等疾病生兒溶血病等疾病) )n建議：作抗體挑選實(shí)驗(yàn)的時(shí)候最好先做抗人球法建議：作抗體挑選實(shí)驗(yàn)的時(shí)候最好先做抗人球法抗體特異性鑒定了解n運(yùn)用譜細(xì)胞確定抗體的特異性，譜細(xì)胞普通由8-16種含有不同抗原的O型紅細(xì)胞配套組成，根據(jù)譜細(xì)胞的反響格局普通可以鑒定常見(jiàn)的抗體。n實(shí)驗(yàn)方法和抗體挑選實(shí)驗(yàn)一樣二 實(shí)驗(yàn)原理n 血型就是紅細(xì)胞膜上特