腦利鈉肽前體proBNP作業(yè)指導(dǎo)書(shū)

1、XXXXXX 醫(yī)院檢驗(yàn)科免疫室 分析項(xiàng)目作業(yè)指導(dǎo)書(shū)Elecsys E 170/E 411腦利鈉肽前體(proBNP)文件編號(hào)：LAB OP- MY020第1頁(yè)，共6頁(yè)版差A(yù)/0生效日期：2008-02-011. 分析原理采用雙抗體夾心法原理，整個(gè)過(guò)程18分鐘完成。 第1步：201d標(biāo)本、生物素化的抗腦利鈉月t前體單克隆抗體和釘(Ru)標(biāo)記的抗腦利鈉肽前體單克隆抗體混勻，形成夾心復(fù)合物。 第2步：加入鏈霉親和素包被的微粒，讓上述形成的復(fù)合物通過(guò)生物素與鏈霉親和素間的反應(yīng)結(jié)合到微粒上。 第3步：反應(yīng)混和液吸到測(cè)量池中，微粒通過(guò)磁鐵吸附到電極上，未結(jié)合的物質(zhì)被清洗液洗去，電極加電壓后產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，

2、通過(guò)光電倍增管進(jìn)行測(cè)定。Elecsys自動(dòng)將標(biāo)本產(chǎn)生的光電信號(hào)與從腦利鈉肽前體定標(biāo)液得出的Cutoff值相比較。2. 標(biāo)本要求血清：按標(biāo)準(zhǔn)常規(guī)方法采集或用含有分離膠的試管。血漿：含肝素鋰或肝素胺抗凝劑。標(biāo)本穩(wěn)定性：20C25c穩(wěn)定3天，在2 8度可穩(wěn)定6天，-20oC可穩(wěn)定12個(gè)月。含沉淀的標(biāo)本使用前需離心；不要使用加熱 滅活的標(biāo)本；標(biāo)本和質(zhì)控品禁用疊氮鈉防腐。標(biāo)本、定標(biāo)液和質(zhì)控品在測(cè)定前的溫度應(yīng)與室溫平衡；放入儀器后應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)測(cè)定以避免蒸發(fā)的影響。標(biāo)本、定標(biāo)液和質(zhì)控品在測(cè)定前應(yīng)預(yù)溫到室溫。3. 試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品和其他所需材料采用羅氏原裝配套試劑。試齊I：M 鏈霉親和素包被的微粒(透明瓶

3、蓋)，1瓶，6.5ml o粒子濃度0.72mg/ml ,含防腐劑。R1:生物素化的抗腦利鈉肽前體單克隆抗體(灰蓋)，1瓶，9ml,濃度1.5ug/l ,磷酸緩沖液40mmol/l , pH7.4含防腐劑。R2： Ru(bpy)32+標(biāo)記的抗腦利鈉肽前體單克隆抗體(黑蓋)，1瓶，9ml。濃度高于1.7ug/ml ,磷酸緩沖液40mmol/l , pH7.4含防腐劑。校準(zhǔn)品：Cal 1陰性定標(biāo)液(白蓋)，2*1mlCal 2陽(yáng)性定標(biāo)液(黑蓋)，2*1ml質(zhì)控品：Elecsys 腦利鈉肽前體質(zhì)控品 1和2 (PreciControl Cardiac )貨號(hào) 03530477其他所需材料：Elecsy

4、s2010/cobas e 411分析儀需要：貨號(hào) 11662988, Elecsys 系統(tǒng)緩沖液(ProCell ) 6X380S升貨號(hào) 11662970, Elecsys 測(cè)量池清洗液(CleanCell ) 6X380毫升貨號(hào) 11930346, Elecsys 添加劑液(SysWash 1X500S升貨號(hào) 11933159, Elecsys 系統(tǒng)清洗液支架(Adapter for SysClean )貨號(hào) 11706802, Elecsys 2010 反應(yīng)杯(Assay Cup)貨號(hào) 11706799, Elecsys 2010 吸樣頭(Assay Tip )E170/cobas e

5、601分析儀需要：貨號(hào) 12135019,Elecsys系統(tǒng)緩沖液(ProCell M )貨號(hào) 12135027,Elecsys測(cè)量池清洗液(CleanCell M ')貨號(hào) 03023141,Elecsys系統(tǒng)緩沖液/測(cè)量池清洗液預(yù)熱杯(PC/CC-Cup貨號(hào) 12102137,Elecsys反應(yīng)杯 / 吸樣頭盒(AssayCups/AssayTips CombimagazineM)貨號(hào) 03023150,Elecsys廢物盒(wasteliner)XXXXXX 醫(yī)院Elecsys E 170/E 411文件編號(hào)：LAB OP- MY020檢驗(yàn)科免疫室第2頁(yè)，共6頁(yè)版本：A/0分析項(xiàng)

6、目作業(yè)指導(dǎo)書(shū)生效日期：2008-02-01貨號(hào) 03027651, Elecsys 系統(tǒng)清洗液支架(SysClean Adapter M)各種分析儀均適用的材料貨號(hào)11298500, Elecsys系統(tǒng)清洗液(SysClean) , 5X 100ml系統(tǒng)洗液4.儀器和校準(zhǔn)使用儀器：瑞士羅氏診斷公司生產(chǎn)Elecsys 2010/E 170/E 411/e 601全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫自動(dòng)分析儀儀器校準(zhǔn)：每批腦利鈉肽前體試劑盒必須用新鮮試劑和腦利鈉肽前體Cal 1,Cal 2 定標(biāo)一次。另外，以下情況需要再次定標(biāo)：Elecsys2010 : 一個(gè)月（同一批號(hào)試劑） 7天（放置儀器上的同一試劑盒）各種

7、分析儀均適用的情況：根據(jù)要求進(jìn)行標(biāo)定：如質(zhì)控結(jié)果超出范圍時(shí)；根據(jù)規(guī)定進(jìn)行多次標(biāo)定。5.操作步驟（以E 170為例）5.1校準(zhǔn)操作步驟：在編緝各項(xiàng)目的參數(shù)時(shí)，已經(jīng)在 Application Calib菜單中定義好了定標(biāo)類(lèi)型和幾點(diǎn)定標(biāo)。因此在對(duì)各項(xiàng)目進(jìn)行定標(biāo)時(shí)，只需在定標(biāo)菜單 Calibration 中進(jìn)行即可。3.2進(jìn)入Calibration Status菜單，用鼠標(biāo)選擇需定標(biāo)的項(xiàng)目，再根據(jù)需要點(diǎn)單點(diǎn)定標(biāo)（BLANK®）或兩點(diǎn)定標(biāo)（TWCPOINT鍵）、跨距定標(biāo)（SPAN!）、多點(diǎn)定標(biāo)（FULL鍵）,再選擇其它項(xiàng)目進(jìn)行相應(yīng)選擇，最后點(diǎn)SAVE將定標(biāo)物放入在 CalibrationCal

8、ibrator中定義好的位置，點(diǎn)Start,再點(diǎn)Start ,儀器開(kāi)始定標(biāo)。在 Calibration 一Status菜單中看定標(biāo)結(jié)果，點(diǎn)Calibration Result鍵看定標(biāo)結(jié)果，點(diǎn)Reaction Monitor 鍵看每個(gè)定標(biāo)物的反應(yīng)曲線。5.2樣本檢測(cè)程序：?jiǎn)蝹€(gè)樣本輸入，在主菜單下選擇Workplace- Testslection ,在Sequence No欄輸入標(biāo)本號(hào)，然后選擇該標(biāo)本所需做的單個(gè)項(xiàng)目或組合項(xiàng)目，點(diǎn) SAVE®,樣本號(hào)自動(dòng)累加。批量常規(guī)標(biāo)本的輸入，在主菜單下選擇Workplace- Testslection ,在Sequence No欄輸入起始標(biāo)本號(hào)，然后

9、選擇該標(biāo)本所需做的單個(gè)項(xiàng)目或組合項(xiàng)目，點(diǎn) REPEA T輸入該批標(biāo)本的最后一個(gè)標(biāo)本號(hào)，點(diǎn)OK即可。進(jìn)樣分析，將標(biāo)本按在 Workplace菜單中輸入的標(biāo)本號(hào)順序在樣本架上排好，放入進(jìn)樣盤(pán)內(nèi)，按START®,輸入該批上機(jī)標(biāo)本的起始標(biāo)本號(hào)，再點(diǎn)START®,儀器自動(dòng)開(kāi)始推架檢測(cè)標(biāo)本。6.質(zhì)量控制用Elecsys腦利鈉肽前體質(zhì)控品1和2（PreciControl ）。質(zhì)控品1和質(zhì)控品2至少每24小時(shí)或每一次定標(biāo)后測(cè)定一次。質(zhì)控間隔期應(yīng)適用于各實(shí)驗(yàn)室的具體要求。檢測(cè)值應(yīng)落在確定的范圍內(nèi)，如出現(xiàn)質(zhì)控值落在范圍以外，應(yīng)采取校正措施。7. 計(jì)算方法儀器會(huì)自動(dòng)根據(jù)Cal 1和Cal 2的測(cè)

10、定值計(jì)算Cut-off值。每一個(gè)標(biāo)本的結(jié)果以有反應(yīng)性或無(wú)反應(yīng)性以及Cutoff指數(shù)形式（標(biāo)本信號(hào)/ Cutoff ）報(bào)告。8.參考范圍從參考組的信息中得出最合適的域值125pg/ml。9.分析性能精密度嚴(yán)格按照修訂方案的NCCLSEP-5A文件規(guī)則：每天6次，1伏；E170上批內(nèi)精確性，n=21。使用試劑，人血清和質(zhì)控測(cè)定得到重復(fù)性。SDR CV直如下表所示：Elecsys2010/e411批內(nèi)精密度總精密度XXXXXX 醫(yī)院檢驗(yàn)科免疫室 分析項(xiàng)目作業(yè)指導(dǎo)書(shū)Elecsys E 170/E 411文件編號(hào)：LAB OP- MY020第3頁(yè)，共6頁(yè)版本：A/0生效日期：2008-02-01均值標(biāo)準(zhǔn)

11、差CV% 標(biāo)準(zhǔn)差CV%pg/mlpmol/lpg/mlpmol/lpg/mlpmol/l人血清117520.74.670.563.2人血清235541.98.6812.4人血清31068126人血清4496258686.910.31.811413.52.3proBN艱控143451.27.690.911.8proBN艱控2678180011813.91.814617.22.2E170批內(nèi)精密度總精密度均值標(biāo)準(zhǔn)差CV%標(biāo)準(zhǔn)差標(biāo)準(zhǔn)差CV%pg/mlpmol/lpg/mlpmol/lpg/mlpmol

12、/lpg/mlpmol/l人血清147455.94.330.510.949458.328.73.395.8人血清2800594585101.1782792432137.884.1人血清3136821614118.513.980.913143155149057.83.7proBN艱控120825.51.740.210.820023.68.951.064.5proBN艱控23786447114.513.534002472144173.6分析靈敏度5pg/ml（0.6pmol/L）分析靈敏度只能區(qū)分空白與最低限。功能靈敏度50pg/ml （5.9pmol/L）功能靈敏度指NT-proBNP僉測(cè)在Cf

13、y20%寸的最低限。分析特異性Elecsys proBNP檢測(cè)時(shí)，對(duì)于下列物質(zhì)無(wú)交叉反應(yīng)10 .干擾因素該方法不受黃疸（膽紅素35mg/dl）、溶血（血紅蛋白1.4g/dl ）、脂血（脂質(zhì)4000mg/dl）和生物素30ng/ml干擾；接 受高劑量生物素（5mg慶）治療的病人，至少要等最后一次攝入生物素8小時(shí)后才能采血；不受類(lèi)風(fēng)濕因子干擾（1500U/ml）; proBN琳度在300,000ng/ml以?xún)?nèi)無(wú)鉤狀效應(yīng)；在51種常用藥上進(jìn)行體外測(cè)試，未發(fā)現(xiàn)干擾。測(cè)試品和少數(shù)血清間潛在免疫相互作用引起的干擾風(fēng)險(xiǎn)已通過(guò)合適的添加劑降到最小。極少情況下，由極高濃度 Streptavidin 和ruthe

14、nium引起的干擾可發(fā)生。ProBN哈添加劑減小這些影響。11 .臨床意義左心室功能不全發(fā)生在冠心病，動(dòng)脈高血壓，瓣膜疾病，原發(fā)性心臟病等疾病之后。如果左心室功能不全得不到治療或進(jìn)展，由于心臟猝死的原因，其潛在的死亡率較高。慢性心功能不全是由心臟泵功能受損引起的臨床綜合征?？梢愿鶕?jù)臨床癥狀 進(jìn)行分級(jí)。如：紐約心臟協(xié)會(huì)（NYHA分級(jí)為I, II , III , IV。臨床檢測(cè)及影像檢測(cè)用于診斷左心室功能不全。利鈉肽類(lèi)物質(zhì) 在心血管系統(tǒng)功能的控制中的意義已經(jīng)得到證實(shí)。早期的研究顯示利鈉肽類(lèi)物質(zhì)可用于診斷與左心室功能不全相關(guān)的疾病。該類(lèi)物質(zhì)如下列：心鈉肽（ANP ,腦鈉肽（BNP , C-型利鈉肽（

15、CNP o ANPBNP通過(guò)其促尿鈉排泄、利尿的作用，以及作為 腎素-血管緊張素-醛固酮的拮抗物質(zhì)，從而影響人體的電解質(zhì) -體液平衡。ProBN他108個(gè)氨基酸構(gòu)成，主要由心室分泌。然后XXXXXX 醫(yī)院檢驗(yàn)科免疫室 分析項(xiàng)目作業(yè)指導(dǎo)書(shū)Elecsys E 170/E 411文件編號(hào)：LAB OP- MY020第4頁(yè)，共6頁(yè)版本：A/0生效日期：2008-02-01被裂解為具有生物活性的BNP （77-108氨基酸）和N-端proBNP （1-76氨基酸）。Elecsys proBNP式劑含有多克隆抗體，可以識(shí)別N-端proBNP （1-76氨基酸）上的抗原決定簇。左心室功能不全的患者血清/血漿

16、中的BN膿度增高，作為BN降解產(chǎn)物，無(wú)生物活性的NT-proBNFW度也同樣增高。研究表明，NT-proBN阿以用于以下的診斷目的：提示左心室功能不全的預(yù)后；心源/非心源性疾病的鑒別診斷；血清/血漿NT-proBN冰平的變化，還可用于評(píng)價(jià)左心室功能不全的療效；以及心肌重塑的評(píng)估。13.參考文獻(xiàn)H留電士楠1. 廿一三1可丁制三Lflih y6NP 3PC MT-pr5etiF r由LpmHC斗慟 黑了巾巾小京F 口精二。reaft cih cn n Few卡.Pmitra二m"她七出匚七廠幻關(guān) 卻s d罵yxn s就工racy討a*uiy-aj3i5d mecttociVtUfnxao

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