2015版藥典沉降菌檢測操作規(guī)程

1、1 / 7題目：潔凈區(qū)（室）沉降菌監(jiān)測標準操作規(guī)程編碼：頒發(fā)部門：質(zhì)量部起草：日期:2015年 月 日修訂日期：年 月曰審核：日期：2015年 月 日生效日期：2016年 月 日批準：日期:2015年 月 日發(fā)放份數(shù)：版次：第1版分發(fā)部門：質(zhì)量部、中心化驗室1.目的：闡述潔凈室空氣中沉降菌檢測操作規(guī)程，保證藥品質(zhì)量，防止生產(chǎn)環(huán)境 對產(chǎn)品的污染。2.范圍：適用于本公司潔凈區(qū)（室）的沉降菌的監(jiān)測。3.責(zé)任：沉降菌檢測員。4.內(nèi)容：4.1基本概念：4.1.1菌落：細菌培養(yǎng)后,由一個或幾個細菌繁殖而形成的一細菌集落,簡稱CFU.通常用個數(shù)表示。4.1.2沉降菌：用GB/T16292-2010提及的方法

2、收集空氣中的活性微生物粒子， 通過專門的培養(yǎng)基在適宜的生長條件下繁殖到可見的菌落數(shù)。4.1.3沉降菌菌落數(shù)：規(guī)定時間內(nèi)每個平板培養(yǎng)皿收集到空氣中沉降菌的數(shù)目， 以個/皿表示。4.2測試原理：本測試方法利用沉降法，即通過自然沉降原理收集在空氣中的生 物粒子于培養(yǎng)基平皿，經(jīng)若干時間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落數(shù)， 以平板培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)來評定潔凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù)，并以此來評定潔凈區(qū)的潔凈度。4.3測試方法：4.3.1使用的儀器設(shè)備和培養(yǎng)基：高壓消毒鍋：使用時應(yīng)嚴格按照操作規(guī)程進行。恒溫培養(yǎng)箱：必須定期對培養(yǎng)箱的溫度計進行檢定2 / 7培養(yǎng)皿:一般采用90mM 15mn硼硅酸玻璃培養(yǎng)皿。使

3、用前將培養(yǎng)皿置于121 C濕熱滅菌20min。培養(yǎng)基:胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基。將培養(yǎng)基加熱熔化，冷卻至約45C在無菌操作條件下將培養(yǎng)基注入培養(yǎng)皿，每皿約15ml。待瓊脂培養(yǎng)基凝固后，將培養(yǎng)基平皿放入32C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72小時若培養(yǎng)基平皿上確無菌落生長即可供采樣用，制備好的培養(yǎng)基平皿應(yīng)在2-8C的壞境中存放。4.3.2測試時間：對單向流，如A級凈化房間內(nèi)及層流工作臺，測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運行不少于10分鐘后開始。對非單向流，如B級、C級、D級以上的凈化房間，測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運行不少于30分鐘開始。433采樣點數(shù)目及其布置：最少采樣點數(shù)目：沉降菌的最少采樣點數(shù)可按表1確定。在滿足最少

4、測點數(shù)的同時，不宜滿足最少培養(yǎng)皿數(shù)，見表2表1最少采樣點數(shù)目面積（m）潔凈度等級AB級C級D級v102-32210-v2042220-v4082240-v1001642100-V200401033 / 7注：表中的面積，對于單向流潔凈室，指的是送風(fēng)面積，對于非單向流潔凈室， 指的是房1可面積。表2最少培養(yǎng)皿數(shù)潔凈度等級所需90mm培養(yǎng)皿數(shù)（以沉降4h計）A14B2C2D2采樣點的布置：除受潔凈區(qū)的設(shè)備限制外，取樣點應(yīng)在整個潔凈區(qū)均勻布置。在日常監(jiān)控時，那些與產(chǎn)品相鄰近的區(qū)域，以及可能與產(chǎn)品直接接觸的空氣 及設(shè)備附近應(yīng)考慮增加取樣點和取樣次數(shù)（與產(chǎn)品非接觸區(qū)相比，這些區(qū)域應(yīng)視 為關(guān)鍵區(qū)）:人員活

5、動頻繁或人員較集中的區(qū)域也應(yīng)視為關(guān)鍵區(qū)，需加強監(jiān)控。取樣點一股布置在趾離地面0.8-1.0m之間或操作平臺的高度。取樣時，取樣沒備會對氣流產(chǎn)生干擾，取樣時應(yīng)避免可能對氣流組織的干擾。盡量避免在回風(fēng)口附近取樣（距離Im以上），且測試人員應(yīng)在取樣口的下風(fēng) 側(cè)，并盡量少走動。434測試步驟：4.341采樣方法:用無菌容器（如不銹鋼儲槽）將預(yù)先培養(yǎng)的培養(yǎng)皿（無菌平皿）帶至待測區(qū)，將 培養(yǎng)皿取出，放置在預(yù)先確定取樣點，打開培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露0.5小時，再將培養(yǎng)皿蓋上， 蓋后倒置。 檢測時記下培養(yǎng)皿打開的起始時間和結(jié)束時 間。4 / 74.3.4.2培養(yǎng)：全部采樣結(jié)束，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培

6、養(yǎng)。32C培養(yǎng)，時間為72小時。每批培養(yǎng)基應(yīng)有對照試驗， 檢查培養(yǎng)基本身是否污染， 可每批選定三個培養(yǎng) 皿做對照培養(yǎng)。4.3.4.3菌落計數(shù):用肉眼直接計數(shù)，然后用5-10倍放大鏡檢查，是否有遺漏。若培養(yǎng)皿上有2個或2個以上菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上計數(shù)。4.3.5注意事項：測試用具要做滅菌處理，以確保測試的可靠性、正確性。 采取一切措施防止人為對樣本的污染。對培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)作詳細的記錄。由于細菌種類繁多， 差別甚大， 計數(shù)時一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔 細觀察，不要漏計培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落，必要時用顯微鏡鑒別。采樣前應(yīng)仔細檢查每個培養(yǎng)皿的質(zhì)量，如發(fā)現(xiàn)變質(zhì)、破損或污染

7、的應(yīng)剔除。測試狀態(tài):沉降菌測試前， 被測試潔凈區(qū)的溫濕度須達到規(guī)定的要求， 靜壓差必須控制 在規(guī)定值內(nèi)。沉降菌測試前，被測試潔凈區(qū)己經(jīng)過消毒。測試狀態(tài)有靜態(tài)和動態(tài)兩種，在空調(diào)系統(tǒng)驗流時、長期停產(chǎn)恢復(fù)生產(chǎn)前、設(shè) 施設(shè)備大修復(fù)產(chǎn)前進行靜態(tài)測試，在日常監(jiān)測時進行動態(tài)監(jiān)測。測試人員：測試人員必須穿戴符合環(huán)境級別的工作服。靜態(tài)測試時，室內(nèi)測 試人員不得多于2個人。結(jié)果計算：用計數(shù)方法得出各個培養(yǎng)皿的菌落數(shù)。平均菌落數(shù)的汁算見下式：計算公式：5 / 7藝MiM=_n式中M為平均菌落數(shù)（CFUMi表示1,2,3,n號平皿菌落數(shù)；n表示平皿總數(shù)。6.標準：潔凈度級別沉降菌平均菌落數(shù)（CFU皿）以4h計AV1B5C50D1007.結(jié)果評定：用平均菌落數(shù)判斷潔凈室的空氣中的微生物。潔凈區(qū)內(nèi)的平均菌落數(shù)必須符合所選定的評定標準。若某潔凈區(qū)的菌落數(shù)超過評定標準， 則必須對此區(qū)域先行消毒， 然后重新測 試兩次，測試結(jié)果必須合格。8.偏差糾正一旦發(fā)現(xiàn)空氣微生物監(jiān)測結(jié)果超標，一般可以采取以下行