土壤有效磷的測(cè)定

1、土壤有效磷的測(cè)定0.5mol/L NaHCO3 浸提鉬銻抗分光光度法（Olsen法）崔玉玲黑龍江省農(nóng)墾科學(xué)院測(cè)試中13644545158目錄一、概述二、 Olsen方法原理三、主要儀器設(shè)備四、試劑五、操作步驟六、結(jié)果計(jì)算七、質(zhì)量控制一、概述土壤有效磷是土壤肥力的重要指標(biāo)之一，表明土壤的供磷水平，可以作為判斷施用磷肥的指標(biāo)，為推薦施肥提供依據(jù)。一、概述土壤有效磷含量只是一個(gè)相對(duì)的指標(biāo)，同一土壤用不同方法測(cè)得的有效磷量可以相差很多，即使用同一浸提劑，由于浸提條件如土液比、溫度、時(shí)間、振蕩方法不同其結(jié)果有很大差異，在相同條件下測(cè)得的結(jié)果才有相互比較的意義。1、浸提方法浸提

2、劑的選擇主要根據(jù)各種土壤的性質(zhì)而定。土壤有效磷測(cè)定采用的提取劑種類很多，目前應(yīng)用的主要測(cè)定方法有三種：Olsen法、 Bray法和Mehlich3法。1、浸提方法在目前使用較廣的幾種浸提劑中，一般認(rèn)為以 0.03mol/L NH4F- 0.025mol/LHCl (Bray法)浸提劑比較適合于風(fēng)化程度較高的酸性土壤；1、浸提方法石灰性土壤通常用 0.5 mol/L NaHCO3 (pH值為8.5)( Olsen法)浸提比較理想；對(duì)于中性和酸性水稻土NaHCO3法也有應(yīng)用。 1、浸提方法Mehlich3法是近年來(lái)研究較多并逐步推廣應(yīng)用的一種測(cè)試方法，其優(yōu)點(diǎn)主要是一次浸提可測(cè)定土壤中大部分有效養(yǎng)分

3、，便于大批量分析；缺點(diǎn)是應(yīng)用時(shí)間不長(zhǎng)，尚未建立土壤的豐缺指標(biāo)體系，需要進(jìn)行試驗(yàn)確定。 2、指標(biāo)體系即使簡(jiǎn)單地以“高”、“中”、“低”來(lái)分檔,不同提取方法的結(jié)果分起檔來(lái)其數(shù)值相差很遠(yuǎn);而且同一提取方法的結(jié)果對(duì)不同土壤,不同作物還應(yīng)該有不同的分檔標(biāo)準(zhǔn)。 2、指標(biāo)體系 單位：?jiǎn)挝唬簃g/kg 測(cè)定方法測(cè)定方法評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)0.03mol/L NH4F- 0.025mol/LHCl 法法0.5 mol/L NaHCO3法法低低156中中15-306-10高高30102、指標(biāo)體系因此，在報(bào)告有效磷結(jié)果時(shí)必須同時(shí)說(shuō)明所用的測(cè)定方法。3、Olsen法的影響因素浸提時(shí)間：Olsen法連續(xù)提取測(cè)定土壤有效磷的

4、結(jié)果表明，0.5 mol/L NaHCO3溶液浸提出的土壤有效磷量隨振蕩時(shí)間而增加。將各次連續(xù)測(cè)定值與各參比標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果表明Olsen法對(duì)土壤有效磷進(jìn)行一次提取已經(jīng)能夠反應(yīng)土壤的有效磷水平，無(wú)需進(jìn)行多次提取。3、Olsen法的影響因素溫度： Olsen法不同溫度浸提土壤有效磷的試驗(yàn)結(jié)果表明：提取溫度對(duì)Olsen法測(cè)定土壤有效磷的結(jié)果影響極大，在1030范圍內(nèi)，有效磷測(cè)定值隨溫度升高而增加，溫度每升高1所增加的磷的平均值為0.44mgkg，且隨著土壤含磷量不同，其影響程度也不同。二、 Olsen方法原理石灰性土壤由于大量游離碳酸鈣存在，不能用酸溶液來(lái)提取有效磷。一般用碳酸鹽的堿溶液。

5、由于碳酸根的同離子效應(yīng)，提取液中的 HCO3- 可和土壤溶液中的 Ca2+ 生成 CaCO3 沉淀，從而抑制了 Ca2+的活度而使某些活性較大的 CaP (磷酸鈣鹽) 被提取出來(lái)。二、方法原理酸性土壤中的磷主要是以FeP （磷酸鐵鹽）、Al-P （磷酸鋁鹽）的形態(tài)存在，碳酸鹽的堿溶液在酸性土壤中因 pH 提高而使 Fe-P 、Al-P 水解而部分被提取，也降低了鋁和鐵離子的活性，在浸提液中由于 Ca 、 Fe 、 Al 濃度較低，不會(huì)產(chǎn)生磷的次生沉淀。二、方法原理此外，碳酸氫鈉堿溶液中存在著OH-、HCO3-、CO32-等陰離子，有利于吸附態(tài)磷的置換。因此NaHCO3不僅適用于石灰性土壤，也適

6、應(yīng)于中性和酸性水稻土壤中速效磷的提取。三、主要儀器設(shè)備1、可控溫的往復(fù)振蕩機(jī)：本法浸提溫度對(duì)測(cè)定結(jié)果影響很大。因此必須嚴(yán)格控制浸提時(shí)的溫度條件，本方法要求是251 ，用恒溫振蕩機(jī)進(jìn)行提取。三、主要儀器設(shè)備2、分光光度計(jì)波長(zhǎng)為880nm或700nm波長(zhǎng)不能達(dá)到880nm時(shí)可用700nm，浸出液有顏色時(shí)可用活性炭脫色。 物質(zhì)顏色和吸收光顏色的關(guān)系物質(zhì)顏色和吸收光顏色的關(guān)系 吸吸 收收 光光 物質(zhì)顏色物質(zhì)顏色 顏顏 色色 波波 長(zhǎng)長(zhǎng)(nm) 黃黃 綠綠 紫紫 400 450 黃黃 藍(lán)藍(lán) 450 480 橙橙 綠綠 藍(lán)藍(lán) 480 490 紅紅 藍(lán)藍(lán) 綠綠 490 500 紫紫 紅紅 綠綠 500 56

7、0 紫紫 黃黃 綠綠 560 580 藍(lán)藍(lán) 黃黃 580 600 綠綠 藍(lán)藍(lán) 綠綠 600 650 藍(lán)藍(lán) 綠綠 紅紅 650 750三、主要儀器設(shè)備3、酸度計(jì)可準(zhǔn)確調(diào)節(jié)pH到8.5四、試劑1、 0.5 mol/L NaHCO3浸提液 稱取42.0g NaHCO3 于800mL水中，稀釋定容至1L。以50%（m/V）NaOH 溶液調(diào)節(jié)浸提液的pH至8.5（用pH計(jì)測(cè)定） 。貯存于聚乙烯或玻璃瓶中，用塞塞緊。此溶液曝于空氣中可因失去CO2而使pH增高，使用前應(yīng)檢查pH是否改變并校準(zhǔn)。四、試劑2、無(wú)磷活性炭 活性炭常含有磷，應(yīng)做空白試驗(yàn)，檢驗(yàn)有無(wú)磷存在。如含磷較多，須先用HCl（1+1）浸泡過(guò)夜，在

8、平板漏斗上抽氣過(guò)濾，用蒸餾水沖冼多次至無(wú) Cl-為止；再用0.5 mol/L NaHCO3浸泡過(guò)夜，在平板漏斗上抽氣過(guò)濾，每次用少量蒸餾水淋洗多次，并檢查到無(wú)磷為止，烘干備用。 如含磷較少，則直接用NaHCO3 處理即可。四、試劑3、鉬銻抗貯備液 稱取酒石酸銻鉀0.3g，溶于100毫升水中，制成0.3的溶液。 () 稱取10.0g 鉬酸銨溶于約60 300mL 水中，冷卻。 () 另取181mL 濃硫酸緩緩注入約800mL水中，攪勻冷卻 。 ()四、試劑將稀硫酸溶液()注入鉬酸銨溶液()中，邊加邊攪動(dòng)；再將100mL 0.3的酒石酸銻鉀溶液() 加入到鉬酸銨液中，最后用水稀釋至2L，貯于棕色瓶

9、中，此貯備液鉬酸銨濃度為0.5%，硫酸濃度為3.26mol/L (1/2H2SO4)。四、試劑4、鉬銻抗顯色劑稱取0.50g 抗壞血酸(左旋)溶于100mL鉬銻抗貯備液中。 (有效期24小時(shí)，如貯于2-8冰箱中，則有效期7天。)四、試劑5、磷標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液（100 mg/L）稱取0.4394g KH2PO4 (105烘2小時(shí)) 溶于約200mL 水中，加入5mL 濃H2SO4，轉(zhuǎn)移入1L 容量瓶中，用水定容，可較長(zhǎng)時(shí)間保存。四、試劑6、磷標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（5 mg/L ）取磷標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液用0.5 mol/L NaHCO3準(zhǔn)確稀釋20倍即為磷標(biāo)準(zhǔn)工作液，此液不宜久存。五、操作步驟1、稱取通過(guò)1mm (

10、18號(hào)篩)篩子的風(fēng)干土樣2.50g（精確0.01g）于干燥的200或250mL塑料瓶中，加入0.5 mol/L NaHCO3溶液50mL，塞緊瓶塞，在振蕩器上振蕩30min(速率為每分鐘180次， 251 )，然后立即用無(wú)磷濾紙過(guò)濾，濾液承接于干燥的三角瓶中，最初78ml濾液棄去，同時(shí)做空白試驗(yàn)。常用標(biāo)準(zhǔn)篩對(duì)照數(shù)據(jù)表國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)ISO美國(guó)篩制標(biāo)準(zhǔn)中國(guó)藥典篩標(biāo)準(zhǔn)2.00mmNo.10一號(hào)篩1.00mmNo.180.841mmNo.20二號(hào)篩0.355mmNo.45三號(hào)篩0.250mmNo.60四號(hào)篩0.150mmNo.100七號(hào)篩五、操作步驟2、如發(fā)現(xiàn)濾液的顏色較深，應(yīng)向土壤懸濁液中加入約0.3-0

11、.5g 無(wú)磷活性炭粉，搖勻后立即過(guò)濾，也可在振蕩前加入活性炭?；钚蕴亢蜑V紙是否含磷可進(jìn)行空白試驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證。五、操作步驟3、吸取濾液10.00mL于三角瓶中（含磷量高時(shí)少吸，同時(shí)應(yīng)補(bǔ)加0.5 mol/L NaHCO3溶液至10.00mL）（注1），然后加入鉬銻抗顯色劑5.00mL，慢慢搖動(dòng)，使CO2逸出，再準(zhǔn)確加入10.00mL水，充分搖勻，逐盡CO2，在室溫高于15 處放置30min后，進(jìn)行比色。五、操作步驟4、以空白溶液為參比液，使用1cm比色皿，在分光光度計(jì)上，用880nm或700nm波長(zhǎng)進(jìn)行比色，測(cè)讀吸光度。五、操作步驟注1:如果吸取濾液10mL于50mL容量瓶中，加水和鉬銻抗試劑后，會(huì)產(chǎn)

12、生大量的CO2氣體，由于容量瓶瓶口小， CO2氣體不易逸出，在搖勻過(guò)程中，常造成試液外溢，導(dǎo)致測(cè)定誤差。為了克服這個(gè)缺點(diǎn)，可以準(zhǔn)確加入提取液、水和鉬銻抗試劑于三角瓶中，混勻，顯色。 五、操作步驟5、標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：(1) 分別準(zhǔn)確吸取5mg/L磷標(biāo)準(zhǔn)使用溶液0、2.50、5.00、10.00、15.00、20.00、25.00mL于50mL容量瓶中，用0.5 mol/L NaHCO3溶液定容。此標(biāo)準(zhǔn)系列中磷的濃度依次為0、0.25、0.50、1.00、1.50、2.00、2.50mg/L 。五、操作步驟(2) 吸取標(biāo)準(zhǔn)系列溶液各10.00mL于三角瓶中，同樣品處理顯色（五、3），測(cè)讀吸光度。(3) 以上述標(biāo)準(zhǔn)系列的磷濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)繪制曲線。六、結(jié)果計(jì)算1、樣品的吸取體積為10mL時(shí)： 有效P (mg/kg)=C20 C從標(biāo)準(zhǔn)曲線求得查得濃 度， mg/L； 20浸提時(shí)的液土比 50mL/2.50 g。六、結(jié)果計(jì)算2、樣品的吸取體積小于10mL時(shí)： 有效P