米諾環(huán)素片生物等效性研究

1、米諾環(huán)素片生物等效性研究         【摘要】  目的： 研究米諾環(huán)素片的藥代動力學(xué)和相對生物利用度. 方法： 采用HPLC 法測定20名健康男性志愿受試者隨機自身交叉單劑量口服米諾環(huán)素片和米諾環(huán)素膠囊200 mg 后的血藥濃度, 得出相應(yīng)的藥時曲線, 計算各藥代參數(shù)和相對生物利用度. 結(jié)果： 半衰期T1/2 分別為（19.53±2.67）和（19.52±2.32）h, 達峰時間Tmax分別為（1.72±0.41）和（1.72±0.70）h, 峰值血漿濃度Cma

2、x分別為（3.404±1.050）和（3.284±0.472） mg/L, 藥時曲線下面積 AUC(060 h) 分別為（62.50±11.77）和（56.93±7.33）（mg·h）/L. 兩種制劑的藥動學(xué)參數(shù)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0. 05), 受試制劑的相對生物利用度(F)為111.5%. 結(jié)論： 兩種制劑具有生物等效性. 【關(guān)鍵詞】  米諾環(huán)素片 生物利用度 色譜法 高效液相0引言鹽酸米諾環(huán)素(minocycline hydrochloride)為半合成四環(huán)素類廣譜抗生素, 具高效和長效性, 在四環(huán)素類抗生素中, 本品的抗菌作用

3、最強,抗菌譜與四環(huán)素相近. 據(jù)文獻報道1口服本品0.2 g, 14 h內(nèi)達血藥峰濃度, 為2.15.1 mg/L.本品排泄緩慢, 血消除半衰期為11.122.1 h. 我們通過研究健康志愿者口服鹽酸米諾環(huán)素片（試驗制劑）和市售鹽酸米諾環(huán)素膠囊（參比制劑）血藥濃度經(jīng)時過程,計算出相應(yīng)的藥代動力學(xué)參數(shù)和相對生物利用度, 對米諾環(huán)素片的生物等效性做出評價, 為臨床用藥提供依據(jù).1材料和方法1.1材料System Gold高效液相色譜儀（Beckman公司，125型二元梯度泵, 7725i手動進樣器, 20 L定量環(huán), 168型紫外檢測器, 32 Karat TMSoftware色譜工作站）.鹽酸米諾

4、環(huán)素片, 規(guī)格：50 mg/片； 批號：20050322, 西安迪賽生物藥業(yè)有限責(zé)任公司.鹽酸米諾環(huán)素膠囊(美滿), 規(guī)格：100 mg/粒；批號：0507056, 惠氏制藥有限公司.鹽酸米諾環(huán)素對照品（西安迪賽生物藥業(yè)有限責(zé)任公司,含量為99.36%）.甲醇、乙腈、三乙胺為色譜純（美國天地公司）, 水為自制超純水, 其余試劑均為分析純.1.2方法1.2.1分組選取20名健康男性志愿受試者, 年齡為2229歲，采用雙周期交叉設(shè)計（twoperiod crossover design）自身對照試驗法, 將20名受試者隨機分為2組, 交叉口服受試品鹽酸米諾環(huán)素片和參比品鹽酸米諾環(huán)素膠囊,劑量為單次

5、口服200 mg, 清洗期14 d. 每次試驗前1 d 1900后即禁食. 試驗當(dāng)日晨空腹, 用250 mL溫開水吞服藥物. 服藥2 h后方可再飲水, 在服藥4 h后進食統(tǒng)一低蛋白、低脂肪標(biāo)準(zhǔn)餐, 試驗期間禁止劇烈活動, 禁止吸煙、飲酒或含藥物、酒精的飲料等.口服藥物前抽取空白血樣5 mL, 在服藥后0.5, 1, 1.5, 2, 3, 4, 6, 8, 12, 24, 48, 60 h分別采靜脈血5 mL, 置無菌干燥的肝素抗凝試管中, 離心分離出血漿置無菌塑料管中, -20保存, 在14 d內(nèi)完成鹽酸米諾環(huán)素的血藥濃度測定.1.2.2血藥濃度的測定1.2.2.1色譜條件3-4色譜柱為菲羅門

6、公司C8柱（250 mm×4.6 mm, 5 m）；流動相為10 g/L三乙胺溶液（高氯酸酸調(diào)節(jié)pH至2.05）；乙腈=6733；柱溫室溫；流速1 mL/min；檢測波長350 nm；進樣量20 L.1.2.2.2血漿樣品處理5-6精取血漿樣品0.5 mL, 置于1.5 mL離心管中, 加6%高氯酸0.5 mL沉淀蛋白, 漩渦混合0.5 min, 17209 g離心15 min, 取上清液20 L進樣.1.2.2.3方法的專屬性 取空白血漿, 空白血漿加對照品及樣品血漿各1.0 mL, 按“1.2.2.2”項下操作, 進樣20 L, 結(jié)果表明, 空白血漿中雜質(zhì)不干擾鹽酸米諾環(huán)素的測定

7、.               A：空白血漿； B：添加鹽酸米諾環(huán)素標(biāo)準(zhǔn)品血漿； C：受試者血樣.圖1反相高效液相色譜法測定鹽酸米諾環(huán)素色譜（略）1.2.2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍取空白血漿分別加入適量對照品溶液,使血漿中鹽酸米諾環(huán)素濃度分別為0.207, 0.517, 1.034, 2.068, 3.102, 4.653 ，6.204  mg/L,按“1.2.2.2”項下處理, 測定對照品峰面積.以鹽酸米諾環(huán)素濃度C（mg/L）對色譜峰面積（A）作線性回歸

8、, 線性方程為A=14560 C+38.5(r=0.9999), 線性范圍為0.2076.204 mg/L.1.2.2.5提取回收率分別配制低、中、高3個濃度（0.517, 2.068，4.653 mg/L）的對照品溶液和鹽酸米諾環(huán)素血漿樣品（血樣按“1.2.2.2”項下處理）, 進樣20 L, 測得提取回收率分別為（90.16±2.28）%, （95.07±3.53）%, （96.18±3.32）%；相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）分別為2.53%, 3.71%, 3.45%.1.2.2.6相對回收率取空白血漿配制低、中、高3個濃度（0.517，2.068，4.653 m

9、g/L）的鹽酸米諾環(huán)素血漿樣品, 按“1.2.2.2”項下處理, 測定6次, 由隨行標(biāo)準(zhǔn)曲線計算測得濃度, 計算方法回收率依次為（102.32±1.99）%,（95.95±1.81）%和（98.48±1.70）%.1.2.2.7血漿中鹽酸米諾環(huán)素方法精密度將低、中、高3個濃度（0.517, 2.068, 4.653 mg/L）的血漿樣品, 在1 d內(nèi)按 “1.2.2.2”項下處理, 重復(fù)測定5次, 求得日內(nèi)RSD分別為2.02%, 3.24%和2.57%. 將上述3個濃度的樣品在3 d內(nèi)連續(xù)各重復(fù)測定5次, 求得日間RSD分別為4.44%, 3.47%和2.71%

10、.         1.2.2.8穩(wěn)定性試驗7將低、中、高（0.517, 2.068, 4.653 mg/L）3個濃度的鹽酸米諾環(huán)素血漿樣品處理后分別置于常溫下2, 4, 8, 16和24 h, 按前述方法測定鹽酸米諾環(huán)素血漿濃度變化.計算樣品穩(wěn)定性, 求得室溫穩(wěn)定性RSD分別為3.79%, 1.64%和1.71%.將低、中、高（0.517, 2.068,4.653 mg/L）3個濃度的鹽酸米諾環(huán)素血漿樣品反復(fù)凍融6次并分別測定每次復(fù)融后濃度, 計算凍融對樣品穩(wěn)定性的影響, 求得凍溶穩(wěn)定性RSD分別為1.57%,

11、1.44%和1.13%.統(tǒng)計學(xué)處理7-8: 以非房室模型估算受試者的主要藥代動力學(xué)參數(shù), Cmax和Tmax采用實測值, 藥時曲線下面積(AUC)用梯形法計算. 所得參數(shù)先進行自然對數(shù)轉(zhuǎn)換后再進行方差分析和雙單側(cè)t檢驗, Tmax采用非參數(shù)法檢驗(Wilcoxon 符號秩檢驗) 進行統(tǒng)計, 以=0.05為檢驗水準(zhǔn).2結(jié)果2.1藥時曲線20名健康受試者交叉單劑量口服鹽酸米諾環(huán)素片后的平均血藥濃度時間曲線見圖2.2.2主要藥動學(xué)參數(shù)和相對生物利用度20名受試者口服米諾環(huán)素片和米諾環(huán)素膠囊后主要藥動學(xué)參數(shù)見表1.對AUC(060 h)和Cmax作對數(shù)轉(zhuǎn)換后先經(jīng)方差分析, 兩制劑在藥物制劑間、個體間、

12、周期間和服藥順序間無統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）, 經(jīng)雙單側(cè)t檢驗, 兩種制劑的主要藥動學(xué)參數(shù)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）, Tmax經(jīng)非參數(shù)法檢驗(Wilcoxon 符號秩檢驗)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）, 表明兩種制劑具有生物等效性.圖2健康受試者交叉單劑量口服鹽酸米諾環(huán)素后的平均血藥濃度時間曲線(n=20)（略）表1健康受試者單劑量200 mg米諾環(huán)素的主要藥動學(xué)參數(shù)（略）3討論本試驗考察了不同實驗條件下, 被檢測物質(zhì)對流動相的選擇性. 在查閱國內(nèi)外文獻的基礎(chǔ)上, 根據(jù)鹽酸米諾環(huán)素對pH值敏感性, 流動相中引入了高氯酸, 但米諾環(huán)素的峰嚴重拖尾, 為了減少拖尾, 改善峰形, 流動相中又

13、加入10 g/L三乙胺; 中國藥典（2005版）規(guī)定檢測波長為280 nm, 但在該檢測波長下, 有與米諾環(huán)素不可分離的雜質(zhì)干擾,為排除雜質(zhì)干擾, 考慮其他檢測波長, 確定最終色譜條件：色譜柱為菲羅門公司 C8柱（250 mm×4.6 mm, 5 m）；流動相為10 g/L三乙胺水溶液（高氯酸酸調(diào)節(jié)pH至2.05）; 乙腈=6733；柱溫室溫；流速1 mL/min；檢測波長350 nm；進樣量20 L. 本文所建立的高效液相色譜法靈敏, 準(zhǔn)確性好, 保留時間短, 精密度高, 可滿足米諾環(huán)素臨床血藥濃度檢測和藥動學(xué)研究的需要.米諾環(huán)素的不良反應(yīng)有消化道反應(yīng)、肝損害、腎損害、過敏、色素沉

14、著、影響骨發(fā)育和牙齒發(fā)育、激發(fā)反應(yīng)等. 本試驗過程中, 未發(fā)現(xiàn)有不良反應(yīng)發(fā)生, 但不排除個體差異, 在臨床用藥過程中, 應(yīng)重視藥物的不良反應(yīng), 對發(fā)育期青少年應(yīng)慎用.本試驗應(yīng)用雙周期交叉自身對照實驗設(shè)計方案, 對米諾環(huán)素片受試品和米諾環(huán)素膠囊參比制劑進行了人體生物等效性評價, 分別對主要藥動學(xué)參數(shù)AUC, Cmax, Tmax采用方差分析、單雙側(cè)配對檢驗及90%置信區(qū)間三種方法進行等效性統(tǒng)計學(xué)處理, 結(jié)論為受試品與參比品的各主要藥動學(xué)參數(shù)間均無統(tǒng)計學(xué)差異, 受試制劑米諾環(huán)素片對參比制劑米諾環(huán)素膠囊的相對生物利用度為111.5%, 兩種米諾環(huán)素制劑在人體內(nèi)具有生物等效性.【參考文獻】 

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