上皮生長因子受體與非小細胞肺癌腫瘤免疫及轉(zhuǎn)移的相關關系

1、上皮生長因子受體與非小細胞肺癌腫瘤免疫及轉(zhuǎn)移的相關關系*摘 要 目的與方法： 采用鏈霉菌抗生物素蛋白過氧化物酶連結(jié)法(LSAB)免疫組化和象定量分析技術檢測50例非小細胞型肺癌 (其中伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者32例， 不伴轉(zhuǎn)移者18例)上皮生長因子受體(EGFR)的表達。 結(jié)果：EGFR表達與腫瘤間質(zhì)淋巴細胞浸潤(TIL)呈負相關(P0.01)，EGFR高表達時，TIL浸潤少，肺癌的轉(zhuǎn)移率高(83%)。EGFR的表達與肺癌的組織類型明顯相關(P0.05)，但與肺癌的分化程度與轉(zhuǎn)移無相關。結(jié)論：腫瘤細胞內(nèi)EGFR的表達程度與體內(nèi)腫瘤免疫機能密切相關，二者共同影響肺癌細胞的生長、分化和轉(zhuǎn)移。主題詞癌， 非

2、小細胞肺； 上皮；生長物質(zhì)；淋巴細胞，腫瘤浸潤 Correlations of EGFR to neoplasm immunity and non-small cell lung cancer metastasesZHONG Xue-Yun , XIAO Liu-Zhen, LIAO Jian-HuiDepartment of Pathology, Medical College,Jinan University ,Guangzhou (510632)Abstract AIM and METHODS: The expression of epidermal growth factor rece

3、ptor (EGFR) in 50 cases of non-small cells lung cancer cells (32 had node metastases and others without ) was examined by means of labeled streptoaviodin-brotin complex (LSAB) immunohistochemical technic, image analysis. RESULTS: Correlations were found between EGFR expression and histological types

4、 (P0.05), but the expression of EGFR in lung cancer had no correlation with its differeniation, and had significant negative correlation with tumour infiltrating lymphocytes (TIL) (P0.01), while EGFR expression was high the node metastatic percentage was 83% TIL was much less. CONCLUSION: The expres

5、sion of EGFR was closely correlated with immuno-system in vivo, they both had effects on growth, differentiation , and metastasis of cancer cells.MeSHCarcionma, non-small cell lung; Epithelium; Growth substances; Lymphocytes, tumor-infiltrating上皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor, EGFR)是由原癌基因c-

6、erb B-1編碼的跨膜糖蛋白的受體。EGFR胞內(nèi)片段具有蛋白酪氨酸激酶活性，能使細胞內(nèi)微環(huán)境發(fā)生變化，導致核內(nèi)原癌基因c-fos、c-myc表達來刺激細胞生長、增殖1, 2。腫瘤轉(zhuǎn)移與EGFR表達相關35。為了探討EGFR表達與腫瘤免疫以及腫瘤轉(zhuǎn)移之間的關系,用鏈霉菌抗生物素蛋白過氧化物酶連結(jié)法(labeled streptoaviodin-brotin comlex, LSAB)免疫組化和象定量分析技術，對伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和不伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的50例非小細胞肺癌進行EGFR的表達檢測，同時檢測這些非小細胞肺癌標本的腫瘤浸潤淋巴細胞(tumour infiltrating lymphocytes,

7、 TIL)，探討EGFR與人類肺癌轉(zhuǎn)移的關系及其相關機制。材料與方法一、 材料：50例手術切除人肺癌組織標本來自暨南大學醫(yī)學院附屬醫(yī)院。按照WHO分類判斷其組織類型，鱗癌22例，腺癌28例。其中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或遠處轉(zhuǎn)移者32例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者18例，伴有轉(zhuǎn)移的病例按TNM分期，輕度(N1)22例，中重度(N2)10例。標本用福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋切片。二、主要試劑： 一抗鼠抗人EGFR胞質(zhì)單抗系Sigma公司產(chǎn)品，B細胞抗體與 T細胞抗體均是武漢生物制品研究所產(chǎn)品，LSAB試劑盒(K681)為DAKO公司產(chǎn)品。三、免疫組化染色方法及結(jié)果判斷：常規(guī)切片脫蠟水化，按試劑盒說明書采用LSAB方法。

8、DAB染色，蘇木素復染。用正常血清取代一抗作陰性對照。選用EGFR表達強陽性標本做陽性對照。EGFR陽性細胞的陽性顆粒均呈棕黃色顆粒，定位于胞漿(1)。腫瘤間質(zhì)淋巴細胞浸潤的T、 B淋巴細胞染色陽性者呈棕黃色，分布于胞漿和胞膜上(2)。Fig 1Immunoreaction for EGFR in lung cancer1001肺癌EGFR免疫組化染色Fig 2 Immunoreaction for T-cell in lung cancer1002肺癌組織中的T淋巴細胞免疫染色四、象定量分析：免疫組化定量分析用Tigtr 920G象分析系統(tǒng)(重慶大學ICT研究所)，在系統(tǒng)光路中使用45049

9、0 nm,帶通光學濾片，每例標本隨機檢測5個高倍視野，細胞象通過電視攝像系統(tǒng)掃描，在監(jiān)視器熒屏上測定細胞EGFR陽性表達的平均光密度(AOD)和積分光密度(IOD)，用光密度表示EGFR的相對含量。每例檢測的各項參數(shù)輸入微機匯總，統(tǒng)計各組各項參數(shù)的平均值和標準差，進行t檢驗判斷顯著性。結(jié)果一、EGFR表達與肺癌的分型，轉(zhuǎn)移的關系：在50例石蠟肺癌標本中共有120個樣本數(shù)，EGFR陽性表達均定位于胞漿，陽性細胞在瘤組織內(nèi)散在分布，正常肺組織未見陽性表達。象定量分析肺鱗癌與肺腺癌EGFR陽性表達的分布面積和相對含量的變化有顯著差異(表1)，但與肺癌的分化，轉(zhuǎn)移無明顯相關(表2，3)。表1 EGFR

10、表達量與肺癌組織類型關系Tab 1 The relation between histological types and contents of EGFR expression in lung cancer (,n=120)GroupContents of EGFR expressionSquamous cell carcinoma0.27960.1849Adenocarcinoma0.04600.0610*P0.05, vs squamous cell carcinoma表2 EGFR表達量與肺癌的轉(zhuǎn)移關系Tab 2The relation between metastases and c

11、ontents of EGFRexpression in lung cancer (,n=120)GroupContents of EGFR expressionSquamous cell carcinomaMetastasis0.22890.1553No metastasis0.31330.1976*AdenocarcinomaMetastasis0.04760.0640No metastasis0.03530.0352*P0.05 , vs metastasis表3 EGFR表達量與肺癌分化的關系Tab 3The relation between differentiation and c

12、ontents of EGFRexpression in lung cancer (,n=120) GroupContents of EGFR expressionSquamous cell carcinomaWell differentiation0.34960.1582Mid differentiation0.28190.2063Low differentiation0.20940.1080*AdenocarcinomaWell differentiation0.05200.0706Mid differentiation0.03470.0346Low differentiation0.03

13、040.0203*P0.05, vs well differentiation二、EGFR與腫瘤免疫的關系：EGFR表達和TIL浸潤呈明顯的負相關，EGFR表達越強，TIL浸潤越少，EGFR表達越弱，TIL中重度浸潤越多。EGFR陰性或輕度表達的標本中，TIL中重度浸潤的百分率為73%(19/26)，而EGFR中重度表達的樣本中，TIL中重度浸潤的百分率只有25%(6/24)。它們之間的差別具有非常顯著的意義。在浸潤的淋巴細胞中，T淋巴細胞占80%，B淋巴細胞占10%。這一結(jié)果提示，EGFR在影響腫瘤細胞發(fā)生、發(fā)展過程中，可能通過某種程度的免疫抑制作用，促進腫瘤的惡性特性。三、EGFR、TIL

14、及肺癌轉(zhuǎn)移的關系：EGFR、TIL與肺癌轉(zhuǎn)移雖無單因素的明顯相關，但是，在EGFR中重度表達病例中，TIL浸潤越少，其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率越高，為83%(15/18)，TIL浸潤越多，其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率越低，為33%(2/6)，二者之間的差別顯著, (P0.05)，這一結(jié)果提示，EGFR過表達對TIL有著重要的影響作用，它們協(xié)同起來共同影響著腫瘤的轉(zhuǎn)移及其生物學特性。四、肺癌組織類型、TIL與轉(zhuǎn)移的關系：在22例肺鱗癌中有11例伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，轉(zhuǎn)移率為50%，28例肺腺癌中21例伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，轉(zhuǎn)移率為75%，TIL中重度浸潤，鱗癌68%(15/22)，腺癌為35%(10/28)，兩者之間有顯著差異，P0.

15、05。討論生長因子的信號傳遞與癌基因作用是目前國內(nèi)外癌癥分子生物學研究的活躍領域之一。但是，細胞生長、分化、癌變的調(diào)控是一個十分復雜的過程，尤其是在多細胞生物中，細胞失去單細胞生物那種生長的獨立性，置身于組織嚴密、互相制約的多種細胞群體的“社會”中。細胞生長分裂受到相鄰組織甚至生物整體的調(diào)控。大量的實驗及臨床資料表明，機體的免疫系統(tǒng)在控制腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程亦具有重要的作用。TIL被認為是代表了機體對腫瘤的特異性免疫反應。生長因子受體、TIL是不是在某種程度上具有協(xié)同或拮抗作用，以促進或阻止腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移過程，目前知之甚少。但從本實驗結(jié)果看來，TIL浸潤程度與腫瘤轉(zhuǎn)移有明顯相關。近年來

16、，有關腫瘤免疫逃避機制的研究取得了很大的進展，如細胞因子(r-IFN, IL-2等)的產(chǎn)生能力異常，腫瘤誘發(fā)的免疫抑制等6。有研究表明，某些生長因子的作用有多功能性，如成纖維細胞對高濃度纖維母細胞生長因子（FGF）呈負反應，對低濃度FGF呈有絲分裂反應；轉(zhuǎn)化生長因子-（TGF-）在細胞增殖分化過程中也有不同的促進或抑制作用7。一方面，許多腫瘤細胞可通過某些細胞因子的異常分泌來促進其增殖，使腫瘤在短時間內(nèi)得以快速生長，從而在一定程度上抵消了免疫系統(tǒng)對腫瘤的排斥作用; 另一方面，異常分泌的細胞因子又通過細胞信號的作用增加細胞內(nèi)DNA合成和某些蛋白質(zhì)（對免疫機能具有明顯的抑制作用）的分泌，進而抑制機

17、體對腫瘤的免疫機能8。EGFR是目前研究最為廣泛的細胞生長因子之一，它與腫瘤免疫抑制之間存在一定的相關性，Dean等9報道用抗EGFR抗體治療EGFR表達的腫瘤，發(fā)現(xiàn)腫瘤明顯縮小，機體免疫機能活化，并有腫瘤組織局部的浸潤白細胞增多的現(xiàn)象。腫瘤轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤致患者死亡的主要原因。已有不少文獻報道EGFR表達與腫瘤轉(zhuǎn)移相關。在Scid小鼠皮下植入表達人EGFR的黑色素瘤，結(jié)果發(fā)現(xiàn)有自發(fā)性遠隔臟器轉(zhuǎn)移。切除原腫瘤，注射特異性抗EGFR抗體的Fab段，可見轉(zhuǎn)移灶明顯縮小3， 4。還有研究表明，EGFR的表達與腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移潛能密切相關，Yudon等5則發(fā)現(xiàn)EGFR的表達在高轉(zhuǎn)移的鼠肉瘤細胞株中高于低轉(zhuǎn)

18、移細胞株，將EGFR加入EGFR高表達的細胞，這些細胞穿透matrigel、與細胞外基質(zhì)成分的粘附、 4型膠原酶的分泌等都增加，當加入抗EGFR的單抗，肺轉(zhuǎn)移率明顯降低，可見EGFR有助于腫瘤細胞轉(zhuǎn)移能力的獲得。本實驗中EGFR高表達、TIL浸潤少的樣本，其肺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率達83%。但目前尚未知EGFR通過何種因素來抑制TIL的浸潤，如能發(fā)現(xiàn)并加以利用的話，可能有助于臨床上對腫瘤轉(zhuǎn)移的預防和治療。* 國務院僑務辦公室重點科研基金課題作者單位:暨南大學醫(yī)學院病理學教研室(廣州510630)參考文獻1樂志培. 生物信息傳遞與細胞癌變. 國外醫(yī)學腫瘤學分冊，1989，3：146.2陸士新.人食道癌的分子基礎研究. 中國腫瘤，1998，3：9.3Muller BM, Romerdahl CA, Trebt JM, et al. Suppression of spontaneous melanoma metastasis in scid mice with an antibody to the epidermal growth factor receptor . Cancer Res, 1991， 51: 2193.4Khazaie K , Schirrmacher V, Lichtner