抗生素和血清制劑治療小鼠膿毒癥時(shí)對(duì)血漿內(nèi)毒素和細(xì)胞因子的影響

1、抗生素和血清制劑治療小鼠膿毒癥時(shí)對(duì)血漿內(nèi)毒素和細(xì)胞因子的影響 摘要目的通過(guò)觀察膿毒癥小鼠的治療過(guò)程，研究抗生素和血清制劑對(duì)血中內(nèi)毒素脂多糖(LPS)和細(xì)胞因子的影響。方法膿毒癥模型采用NH1小鼠，腹腔大腸桿菌。治療分3組，先鋒霉素5(CEF)，新生小牛血清(NBS)，生理鹽水(NS)。結(jié)果NBS組的72小時(shí)生存率明顯高于NS組(P0.05)。CEF組3小時(shí)白細(xì)胞計(jì)數(shù)低于NS組(P0.05)。NBS組的1、3小時(shí)LPS水平低于NS對(duì)照組(P0.05)，血IL-1和TNF低于NS組(P0.05)。結(jié)論抗生素對(duì)抑制白細(xì)胞升高起主導(dǎo)作用，對(duì)LPS和細(xì)胞因子活性無(wú)明顯抑制作用。血清制劑可能同時(shí)具有抗休克

2、和抗炎癥的雙重作用，對(duì)提高早期生存率起重要作用。關(guān)鍵詞膿毒癥細(xì)胞因子內(nèi)毒素抗生素血清Effect of antibiotics and anti-TNF agent on the serum endotoxin and cytokines in the treatment of sepsis in miceZHANG Haiying, LI Xinjian, MENG Xianjun. Department of Experimental Surgery of Eastern Building, PLA General Hospital, Beijing 100853Abstract Obje

3、ctive To investigate the efficacy of an anti-TNF monoclonal antibody (Z12) administrated at different time points in the treatment of septic mice. Methods NH1 male mice were challenged twice at a 12 h interval with intraperitoneal (IP) bolus injection of E. Coli O111 B4 suspension. Z12 at 0.1 mg per

4、 mouse was IP injected at first challenge for early group and at second challenge for later group respectively, and the same volume (0.5 ml) of normal saline (NS) was IP infected as control group. Survival, white blood cells of peripheral blood and cytokines activities were investigated. Results Sur

5、vival of later group was higher than that of early group (P0.01). Both early and later Z12 groups showed lower WBC count and blood cytokine activities than the NS control group (P0.05). The TNF and IL-6 levels in the early group were lower than in the later group (P0.05). But IL-1 in the early group

6、 was higher than in the later group (P0.05). Conclusion Anti-TNF antibody should be applied in later time rather than in early time after infection.Key words Sepsis Cytokine Endotoxin An tibiotics Serum由于全身炎癥反應(yīng)綜合征(SIRS)理論的提出，抗生素和抗休克藥物對(duì)炎癥反應(yīng)的影響越來(lái)越受到重視。本研究旨在探討抗生素和血清制劑治療小鼠膿毒癥時(shí)對(duì)血漿內(nèi)毒素和細(xì)胞因子的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。材料與方法1

7、.膿毒癥模型10周齡NH1雄性小鼠，腹腔注射O111 B4大腸桿菌生理鹽水懸液0.5?ml，濃度為(4.65.6)107 cfu/ml(1/2LD90)，共2次，間隔12小時(shí)。共分3組，NBS 1.0mg，CEF 1.0mg，NS 0.5ml，均為每鼠劑量，于第1次攻擊時(shí)給藥。2.觀察指標(biāo)及方法(1)生存率：每組小鼠1617只，隨機(jī)分組后，常規(guī)飼養(yǎng)3日，給藥后觀察并記錄距第2次攻擊后每12小時(shí)成活數(shù)(12、24、36小時(shí)和3、5、7天)，計(jì)算成活率(%)。(2)標(biāo)本采集：每時(shí)間點(diǎn)每組6只小鼠，于第2次攻擊后1、3、12小時(shí)采集血標(biāo)本。(3)外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)：乙醚麻醉下心腔穿刺抽取外周血，取20

8、l加入2%冰醋酸溶液380l。常規(guī)鏡下計(jì)數(shù)。(4)血漿LPS水平L定量鱟試劑分析法：使用鱟試劑盒(上海醫(yī)學(xué)化驗(yàn)研究所生產(chǎn)并銷售)。(5)細(xì)胞因子活性檢測(cè)1：IL-1活性檢測(cè)采用ConA協(xié)同的小鼠胸腺細(xì)胞增殖法；IL-6活性檢測(cè)采用IL-6依賴性小鼠淋巴細(xì)胞系7TD1細(xì)胞增殖法；TNF活性檢測(cè)采用在放線菌素D增敏的L929細(xì)胞溶解法。3.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法用方差分析計(jì)算各組外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)以及血漿細(xì)胞因子活性水平的差異，利用2檢驗(yàn)計(jì)算成活率的差異性，利用回歸方程檢驗(yàn)生存曲線的相關(guān)性。結(jié)果1.白細(xì)胞計(jì)數(shù)第2次攻擊后3小時(shí)的白細(xì)胞總數(shù)，CEF組明顯低于NS組，分別為(11.94.0)109個(gè)/L和(19.6

9、5.7)109個(gè)/L(P0.05)。NS和NBS組分別為(19.65.7)109個(gè)/L和(16.24.3)109個(gè)/L(P0.05)。2.成活率抗生素組略高于NS組(P0.05)；NBS組的72小時(shí)生存率明顯高于NS組(P0.05)，見(jiàn)1。 1NBS和NS組小鼠的生存曲線3.血漿LPS水平各組之間差異無(wú)顯著性，見(jiàn)2。 2小鼠血漿LPS水平4.血細(xì)胞因子的活性第2次攻擊后1小時(shí)3種細(xì)胞因子活性比較，NS組的TNF高于CEF組，但差異無(wú)顯著性(P0.05)；NBS對(duì)細(xì)胞因子有明顯抑制作用：1小時(shí)時(shí)，NBS組的IL-1和TNF低于NS組(P0.050.01)，見(jiàn)3。 3第2次攻擊后1小時(shí)各組小鼠血細(xì)

10、胞因子活性*注：IL-1，IL-6為OD540光密度值，TNF為L(zhǎng)929細(xì)胞裂解%討論現(xiàn)在認(rèn)為，膿毒癥休克與膿毒癥幾乎同時(shí)發(fā)生24。因此，早期使用抗休克藥物十分重要。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，早期使用血清制劑，可以改善感染動(dòng)物的早期成活率。其作用不僅在于擴(kuò)充血容量，還有廣泛的抗炎癥作用，對(duì)細(xì)胞因子有明顯的抑制作用，在抑制細(xì)胞因子和改善動(dòng)物生存率兩項(xiàng)指標(biāo)上均獲得陽(yáng)性結(jié)果。這說(shuō)明，一方面是血清性抗休克制劑的優(yōu)越性，另一方面，抗休克過(guò)程可能就是抗炎癥過(guò)程，在特異性阻斷劑療效不理想的時(shí)候，非特異性血清制劑可能有助于這一問(wèn)題的解決。膿毒癥導(dǎo)致多器官功能衰竭，抗生素對(duì)此無(wú)效。本實(shí)驗(yàn)CEF組的生存率并未明顯改善，證明

11、了這一事實(shí)；但是，與前期報(bào)道有所不同1，本實(shí)驗(yàn)沒(méi)有證明抗生素具有使血漿LPS增加的結(jié)果，可能原因?yàn)椋股厥辜?xì)菌繁殖受到抑制，細(xì)菌數(shù)量減少，LPS總含量減少。雖然抗生素能夠抑制白細(xì)胞升高，但是，對(duì)LPS和細(xì)胞因子活性無(wú)明顯的抑制作用，因此，不能控制炎癥反應(yīng)和改善生存率。這說(shuō)明，在膿毒癥治療中單純依靠抗生素顯然不足，應(yīng)當(dāng)配合抗炎癥治療。作者單位：張海鷹100853北京軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院五所三室李新建孟憲鈞解放軍總醫(yī)院參考文獻(xiàn)1方福德，周呂，丁濂，等.現(xiàn)代醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)技巧全書(shū).北京：北京醫(yī)科大學(xué)中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社，1995.298-299.2 Sibbald WJ, Marshall J, Christou N, et al “Sepsis”-Clarity of Existing TerminologyOr More Confusion Crit Care Med, 1991,19:996-998.3 Bone