抗生素和血清制劑治療小鼠膿毒癥時對血漿內(nèi)毒素和細(xì)胞因子的影響

1、抗生素和血清制劑治療小鼠膿毒癥時對血漿內(nèi)毒素和細(xì)胞因子的影響 摘要目的通過觀察膿毒癥小鼠的治療過程，研究抗生素和血清制劑對血中內(nèi)毒素脂多糖(LPS)和細(xì)胞因子的影響。方法膿毒癥模型采用NH1小鼠，腹腔大腸桿菌。治療分3組，先鋒霉素5(CEF)，新生小牛血清(NBS)，生理鹽水(NS)。結(jié)果NBS組的72小時生存率明顯高于NS組(P0.05)。CEF組3小時白細(xì)胞計數(shù)低于NS組(P0.05)。NBS組的1、3小時LPS水平低于NS對照組(P0.05)，血IL-1和TNF低于NS組(P0.05)。結(jié)論抗生素對抑制白細(xì)胞升高起主導(dǎo)作用，對LPS和細(xì)胞因子活性無明顯抑制作用。血清制劑可能同時具有抗休克

2、和抗炎癥的雙重作用，對提高早期生存率起重要作用。關(guān)鍵詞膿毒癥細(xì)胞因子內(nèi)毒素抗生素血清Effect of antibiotics and anti-TNF agent on the serum endotoxin and cytokines in the treatment of sepsis in miceZHANG Haiying, LI Xinjian, MENG Xianjun. Department of Experimental Surgery of Eastern Building, PLA General Hospital, Beijing 100853Abstract Obje

3、ctive To investigate the efficacy of an anti-TNF monoclonal antibody (Z12) administrated at different time points in the treatment of septic mice. Methods NH1 male mice were challenged twice at a 12 h interval with intraperitoneal (IP) bolus injection of E. Coli O111 B4 suspension. Z12 at 0.1 mg per

4、 mouse was IP injected at first challenge for early group and at second challenge for later group respectively, and the same volume (0.5 ml) of normal saline (NS) was IP infected as control group. Survival, white blood cells of peripheral blood and cytokines activities were investigated. Results Sur

5、vival of later group was higher than that of early group (P0.01). Both early and later Z12 groups showed lower WBC count and blood cytokine activities than the NS control group (P0.05). The TNF and IL-6 levels in the early group were lower than in the later group (P0.05). But IL-1 in the early group

6、 was higher than in the later group (P0.05). Conclusion Anti-TNF antibody should be applied in later time rather than in early time after infection.Key words Sepsis Cytokine Endotoxin An tibiotics Serum由于全身炎癥反應(yīng)綜合征(SIRS)理論的提出，抗生素和抗休克藥物對炎癥反應(yīng)的影響越來越受到重視。本研究旨在探討抗生素和血清制劑治療小鼠膿毒癥時對血漿內(nèi)毒素和細(xì)胞因子的影響，現(xiàn)報道如下。材料與方法1

7、.膿毒癥模型10周齡NH1雄性小鼠，腹腔注射O111 B4大腸桿菌生理鹽水懸液0.5?ml，濃度為(4.65.6)107 cfu/ml(1/2LD90)，共2次，間隔12小時。共分3組，NBS 1.0mg，CEF 1.0mg，NS 0.5ml，均為每鼠劑量，于第1次攻擊時給藥。2.觀察指標(biāo)及方法(1)生存率：每組小鼠1617只，隨機分組后，常規(guī)飼養(yǎng)3日，給藥后觀察并記錄距第2次攻擊后每12小時成活數(shù)(12、24、36小時和3、5、7天)，計算成活率(%)。(2)標(biāo)本采集：每時間點每組6只小鼠，于第2次攻擊后1、3、12小時采集血標(biāo)本。(3)外周血白細(xì)胞計數(shù)：乙醚麻醉下心腔穿刺抽取外周血，取20

8、l加入2%冰醋酸溶液380l。常規(guī)鏡下計數(shù)。(4)血漿LPS水平L定量鱟試劑分析法：使用鱟試劑盒(上海醫(yī)學(xué)化驗研究所生產(chǎn)并銷售)。(5)細(xì)胞因子活性檢測1：IL-1活性檢測采用ConA協(xié)同的小鼠胸腺細(xì)胞增殖法；IL-6活性檢測采用IL-6依賴性小鼠淋巴細(xì)胞系7TD1細(xì)胞增殖法；TNF活性檢測采用在放線菌素D增敏的L929細(xì)胞溶解法。3.統(tǒng)計學(xué)方法用方差分析計算各組外周血白細(xì)胞計數(shù)以及血漿細(xì)胞因子活性水平的差異，利用2檢驗計算成活率的差異性，利用回歸方程檢驗生存曲線的相關(guān)性。結(jié)果1.白細(xì)胞計數(shù)第2次攻擊后3小時的白細(xì)胞總數(shù)，CEF組明顯低于NS組，分別為(11.94.0)109個/L和(19.6

9、5.7)109個/L(P0.05)。NS和NBS組分別為(19.65.7)109個/L和(16.24.3)109個/L(P0.05)。2.成活率抗生素組略高于NS組(P0.05)；NBS組的72小時生存率明顯高于NS組(P0.05)，見1。 1NBS和NS組小鼠的生存曲線3.血漿LPS水平各組之間差異無顯著性，見2。 2小鼠血漿LPS水平4.血細(xì)胞因子的活性第2次攻擊后1小時3種細(xì)胞因子活性比較，NS組的TNF高于CEF組，但差異無顯著性(P0.05)；NBS對細(xì)胞因子有明顯抑制作用：1小時時，NBS組的IL-1和TNF低于NS組(P0.050.01)，見3。 3第2次攻擊后1小時各組小鼠血細(xì)

10、胞因子活性*注：IL-1，IL-6為OD540光密度值，TNF為L929細(xì)胞裂解%討論現(xiàn)在認(rèn)為，膿毒癥休克與膿毒癥幾乎同時發(fā)生24。因此，早期使用抗休克藥物十分重要。本實驗結(jié)果證明，早期使用血清制劑，可以改善感染動物的早期成活率。其作用不僅在于擴(kuò)充血容量，還有廣泛的抗炎癥作用，對細(xì)胞因子有明顯的抑制作用，在抑制細(xì)胞因子和改善動物生存率兩項指標(biāo)上均獲得陽性結(jié)果。這說明，一方面是血清性抗休克制劑的優(yōu)越性，另一方面，抗休克過程可能就是抗炎癥過程，在特異性阻斷劑療效不理想的時候，非特異性血清制劑可能有助于這一問題的解決。膿毒癥導(dǎo)致多器官功能衰竭，抗生素對此無效。本實驗CEF組的生存率并未明顯改善，證明

11、了這一事實；但是，與前期報道有所不同1，本實驗沒有證明抗生素具有使血漿LPS增加的結(jié)果，可能原因為，抗生素使細(xì)菌繁殖受到抑制，細(xì)菌數(shù)量減少，LPS總含量減少。雖然抗生素能夠抑制白細(xì)胞升高，但是，對LPS和細(xì)胞因子活性無明顯的抑制作用，因此，不能控制炎癥反應(yīng)和改善生存率。這說明，在膿毒癥治療中單純依靠抗生素顯然不足，應(yīng)當(dāng)配合抗炎癥治療。作者單位：張海鷹100853北京軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院五所三室李新建孟憲鈞解放軍總醫(yī)院參考文獻(xiàn)1方福德，周呂，丁濂，等.現(xiàn)代醫(yī)學(xué)實驗技巧全書.北京：北京醫(yī)科大學(xué)中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社，1995.298-299.2 Sibbald WJ, Marshall J, Christou N, et al “Sepsis”-Clarity of Existing TerminologyOr More Confusion Crit Care Med, 1991,19:996-998.3 Bone