臨床分子生物學(xué)技術(shù)緒論

1、1醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)系醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)系 李子博李子博臨床分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)臨床分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)23 緒緒 論論4 第一節(jié)臨床分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展第一節(jié)臨床分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展 5 一、什么是臨床分子生物學(xué)技術(shù)一、什么是臨床分子生物學(xué)技術(shù) 臨床分子生物學(xué)臨床分子生物學(xué)= =分子生物學(xué)分子生物學(xué)+ +臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)6什么是分子生物學(xué)？什么是分子生物學(xué)？ 分子生物學(xué)是以分子生物學(xué)是以核酸核酸和和蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)等生物大分子的結(jié)等生物大分子的結(jié)構(gòu)、功能及其在信號傳遞中的作用為研究對象，在構(gòu)、功能及其在信號傳遞中的作用為研究對象，在分子分子水平水平研究生命現(xiàn)象及其規(guī)律的一門學(xué)科。研究生命現(xiàn)象及其規(guī)律的一

2、門學(xué)科。CellNucleusChromosomeProteinGene (DNA)Gene (mRNA), single strand7“第一代診斷技術(shù)第一代診斷技術(shù)” 早期的細(xì)胞學(xué)檢查早期的細(xì)胞學(xué)檢查“第二代診斷技術(shù)第二代診斷技術(shù)” 生化指標(biāo)分析（生化指標(biāo)分析（2020世紀(jì)世紀(jì)5050年代）年代）“第三代診斷技術(shù)第三代診斷技術(shù)” 免疫學(xué)診斷（免疫學(xué)診斷（2020世紀(jì)世紀(jì)6060年代）年代）“第四代診斷技術(shù)第四代診斷技術(shù)”臨床分子生物學(xué)診斷（臨床分子生物學(xué)診斷（2020世紀(jì)世紀(jì)7070年代末）年代末）臨臨床床診診斷斷技技術(shù)術(shù)的的發(fā)發(fā)展展臨床分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展臨床分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展

3、8前三代技術(shù)前三代技術(shù) 以疾病的以疾病的表型表型改變?yōu)橐罁?jù)改變?yōu)橐罁?jù) 非特異性、滯后非特異性、滯后 難以早期診斷難以早期診斷分子診斷分子診斷 以疾病以疾病基因基因及表型為探測及表型為探測 對象對象 特異、敏感特異、敏感 早期診斷、預(yù)測早期診斷、預(yù)測9窗口期：窗口期： HBV 56HBV 56天（縮短天（縮短6-156-15天）天） HCV 70HCV 70天（縮短天（縮短41-6041-60天）天） HIV 22HIV 22天（縮短天（縮短10-1510-15天）天）101 1、尋找、尋找分子生物學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)志物。分子生物學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)志物。2 2、建立實(shí)用、可靠的、建立實(shí)用、可靠的檢測技術(shù)方法。檢測技

4、術(shù)方法。 進(jìn)行方法學(xué)評價(jià)和臨床意義評價(jià)進(jìn)行方法學(xué)評價(jià)和臨床意義評價(jià)3 3、建立分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)的、建立分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)的 質(zhì)量控制和質(zhì)量管理。質(zhì)量控制和質(zhì)量管理。臨床分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)的主要任務(wù)臨床分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)的主要任務(wù)1119781978年，年，KanKanYuet-Wai首次應(yīng)用液相首次應(yīng)用液相DNADNA分子雜交技術(shù)分子雜交技術(shù)成功的進(jìn)行鐮狀細(xì)胞貧血的產(chǎn)前基因診斷，成功的進(jìn)行鐮狀細(xì)胞貧血的產(chǎn)前基因診斷，標(biāo)志著標(biāo)志著檢驗(yàn)診斷進(jìn)入基因診斷時(shí)代。檢驗(yàn)診斷進(jìn)入基因診斷時(shí)代。 二、臨床分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展二、臨床分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展第一階段：以第一階段：以DNADNA分子雜交技術(shù)

5、分子雜交技術(shù)為基礎(chǔ)的診斷方法。為基礎(chǔ)的診斷方法。 - -開展遺傳病的基因診斷開展遺傳病的基因診斷12簡悅威（美國科學(xué)院院士）：簡悅威（美國科學(xué)院院士）：1936年生于香港，年生于香港，1958年畢業(yè)于香港大年畢業(yè)于香港大學(xué)醫(yī)學(xué)院，并于學(xué)醫(yī)學(xué)院，并于1980年取得香港大年取得香港大學(xué)理學(xué)博士學(xué)位。他于學(xué)理學(xué)博士學(xué)位。他于1972年前往年前往加州大學(xué)舊金山分校工作，現(xiàn)為該加州大學(xué)舊金山分校工作，現(xiàn)為該校羅氏達(dá)蒙教授。校羅氏達(dá)蒙教授。Kan Yuet-WaiYuet Wai Kan and Andree M. Dozy. Polymorphism of DNA Sequence Adjacent t

6、o Human -globin Structural Gene: Relationship to Sickle Mutation. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1978,75：5631- 5635.13第三階段：以第三階段：以生物芯片技術(shù)生物芯片技術(shù)為代表的高通量密集型為代表的高通量密集型 檢測技術(shù)。檢測技術(shù)。 - -開展多基因多因素疾病的基因診斷開展多基因多因素疾病的基因診斷第二階段：以第二階段：以PCRPCR技術(shù)技術(shù)為基礎(chǔ)的診斷方法。為基礎(chǔ)的診斷方法。 - -開展獲得性基因?。ú≡⑸铮┑幕蛟\斷開展獲得性基因?。ú≡⑸铮┑幕蛟\斷 第四階段：以第四階段：以

7、DNADNA測序技術(shù)和生物質(zhì)譜技術(shù)測序技術(shù)和生物質(zhì)譜技術(shù)為代表的為代表的 檢測技術(shù)。檢測技術(shù)。14 第二節(jié)第二節(jié) 臨床分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)應(yīng)用臨床分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)應(yīng)用 15基因組基因組DNADNA是目前最常用的分子靶標(biāo)是目前最常用的分子靶標(biāo) DHPLC技術(shù)技術(shù)16一、病原生物基因組一、病原生物基因組1.1.菌種鑒定：測序和探針雜交鑒定結(jié)核桿菌。菌種鑒定：測序和探針雜交鑒定結(jié)核桿菌。2.2.確定病毒感染和病毒載量：確定病毒感染和病毒載量：3.3.病毒分析：病毒分析：4.4.細(xì)菌耐藥性檢測和分子流行病學(xué)調(diào)查：細(xì)菌耐藥性檢測和分子流行病學(xué)調(diào)查：二、基因變異二、基因變異1.1.致病基因的分子缺陷：單基

8、因致病基因檢測致病基因的分子缺陷：單基因致病基因檢測2.2.線粒體基因突變：線粒體基因突變：3.3.腫瘤相關(guān)基因：腫瘤相關(guān)基因：4.DNA4.DNA重排形成融合基因：重排形成融合基因：17三、基因多態(tài)性三、基因多態(tài)性1.1.基因定位和遺傳病相關(guān)性分析基因定位和遺傳病相關(guān)性分析2.2.藥物代謝酶與血藥濃度藥物代謝酶與血藥濃度3.3.疾病診斷和遺傳咨詢疾病診斷和遺傳咨詢4.4.多基因病的研究多基因病的研究5.5.器官移植配型和個(gè)體識別器官移植配型和個(gè)體識別四、循環(huán)游離核酸四、循環(huán)游離核酸腫瘤、產(chǎn)前診斷腫瘤、產(chǎn)前診斷18 第三節(jié)第三節(jié) 臨床分子生物學(xué)檢驗(yàn)發(fā)展與應(yīng)用臨床分子生物學(xué)檢驗(yàn)發(fā)展與應(yīng)用 19感

9、染性疾病的分子診斷感染性疾病的分子診斷：病原微生物（病毒、病原菌、病原微生物（病毒、病原菌、 衣原體、螺旋體等）衣原體、螺旋體等）遺傳性疾病的分子診斷遺傳性疾病的分子診斷：血友病、血紅蛋白病、產(chǎn)前嬰血友病、血紅蛋白病、產(chǎn)前嬰 兒檢查兒檢查腫瘤的分子診斷：腫瘤的分子診斷：個(gè)體化醫(yī)學(xué)：個(gè)體化醫(yī)學(xué)：1 1、臨床應(yīng)用、臨床應(yīng)用8080年代以來，基因檢測在許多國家已成為常規(guī)檢驗(yàn)?zāi)甏詠?，基因檢測在許多國家已成為常規(guī)檢驗(yàn)項(xiàng)目，主要用于感染性和遺傳性疾病等的診斷。項(xiàng)目，主要用于感染性和遺傳性疾病等的診斷。20分子診斷技術(shù)在我國分子診斷技術(shù)在我國 針對感染性疾病的病原體的分子診斷，有嚴(yán)格的管理針對感染性疾病的

10、病原體的分子診斷，有嚴(yán)格的管理 - -項(xiàng)目報(bào)批：衛(wèi)生部批準(zhǔn)項(xiàng)目報(bào)批：衛(wèi)生部批準(zhǔn) - -實(shí)驗(yàn)室：通過驗(yàn)收，定期校驗(yàn)儀器與器材實(shí)驗(yàn)室：通過驗(yàn)收，定期校驗(yàn)儀器與器材 - -試劑：試劑：國家藥監(jiān)局批準(zhǔn)國家藥監(jiān)局批準(zhǔn) - -工作人員：經(jīng)過培訓(xùn)，持證上崗工作人員：經(jīng)過培訓(xùn)，持證上崗 - -質(zhì)量控制：室內(nèi)質(zhì)量控制，質(zhì)量控制：室內(nèi)質(zhì)量控制，室間質(zhì)量評價(jià)室間質(zhì)量評價(jià) 針對遺傳性疾病的分子診斷？！針對遺傳性疾病的分子診斷？！ 針對多基因（多因素）疾病的分子診斷？！針對多基因（多因素）疾病的分子診斷？！ 212 2、存在的問題、存在的問題假陽性和假陰性問題假陽性和假陰性問題重復(fù)性問題重復(fù)性問題檢測結(jié)果可比性差，難于

11、質(zhì)控，使檢測結(jié)果可比性差，難于質(zhì)控，使分子診斷分子診斷 的標(biāo)準(zhǔn)化和監(jiān)管體系問題已迫在眉睫的標(biāo)準(zhǔn)化和監(jiān)管體系問題已迫在眉睫儀器設(shè)備要求苛刻、儀器設(shè)備要求苛刻、操作復(fù)雜、費(fèi)用高操作復(fù)雜、費(fèi)用高22分子診斷廣泛應(yīng)用于臨床的前提分子診斷廣泛應(yīng)用于臨床的前提 分子診斷技術(shù)方法的標(biāo)準(zhǔn)化分子診斷技術(shù)方法的標(biāo)準(zhǔn)化 建立分子診斷的標(biāo)準(zhǔn)化操作程序建立分子診斷的標(biāo)準(zhǔn)化操作程序 建立分子診斷的標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)室建立分子診斷的標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)室 測定方法的標(biāo)準(zhǔn)化測定方法的標(biāo)準(zhǔn)化 建立分子診斷項(xiàng)目室內(nèi)質(zhì)控和室間評價(jià)系統(tǒng)建立分子診斷項(xiàng)目室內(nèi)質(zhì)控和室間評價(jià)系統(tǒng) 23從單一病因診斷發(fā)展到綜合檢驗(yàn)診斷。從單一病因診斷發(fā)展到綜合檢驗(yàn)診斷。3 3、發(fā)展趨勢、發(fā)展趨勢從利用分子雜交、從利用分子雜交、PCRPCR等單一技術(shù)的診斷發(fā)展到有機(jī)組合多項(xiàng)技等單一技術(shù)的診斷發(fā)展到有機(jī)組合多項(xiàng)技術(shù)的