黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)

1、一、 利用紫外光譜測定黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)大多數(shù)黃酮類化合物在甲醇中的紫外吸收光譜由兩個主要吸收帶組成。出現(xiàn)在300400nm之間的吸收帶稱為帶，出現(xiàn)在240280nm之間的吸收帶稱為帶。不同類型的黃酮化合物的帶或帶的峰位、峰形和吸收強度不同，因此從紫外光譜可以推測黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)類型。當(dāng)向黃酮類化合物的甲醇（或乙醇）溶液中分別加入甲醇鈉（NaOMe）、乙酸鈉（NaOAc）、乙酸鈉-硼酸（NaOAc-H3BO3）、三氯化鋁或三氯化鋁-鹽酸（AlCl3/HCl）試劑能使黃酮的酚羥基離解或形成絡(luò)合物等，導(dǎo)致光譜發(fā)生變化。據(jù)此變化可以判斷各類化合物的結(jié)構(gòu)，這些試劑對結(jié)構(gòu)具有診斷意義，稱為診斷試劑。黃

2、酮和黃酮醇類（一）黃酮、黃酮醇類在甲醇中的UV光譜特征黃酮或黃酮醇的帶是由B環(huán)桂皮?；到y(tǒng)的電子躍遷所引起的吸收，帶是由A環(huán)的苯甲?；到y(tǒng)的電子躍遷所引起的吸收。黃酮和黃酮醇的UV光譜圖形相似，僅帶位置不同，黃酮帶位于304350nm，黃酮醇帶位于358385nm。利用帶的峰位不同，可以區(qū)別這兩類化合物。黃酮、黃酮醇的B環(huán)或A環(huán)上取代基的性質(zhì)和位置不同將影響帶或帶的峰位和形狀。例如，7和4位引入羥基、甲氧基等含氧取代基，可引起相應(yīng)吸收帶向紅位移。又如3-或5-位引入羥基，因能與C4O形成氫鍵締合，前者使帶向紅位移，后者使帶、帶均向紅位移。B環(huán)上的含氧取代基逐漸增加時，帶向紅位移值（nm）也逐漸

3、增加，但不能使帶產(chǎn)生位移。有時（例如3，4-位有2個羥基或2個甲氧基或亞甲二氧基）僅可能影響帶的形狀，使帶歧分為雙峰或1個主峰（b位于短波處）和1個肩峰（sh）或彎曲（a位于長波處）。A環(huán)上的含氧取代基增加時，使帶向紅位移，而對帶無影響，或影響甚微（但5-羥基例外）。黃酮或黃酮醇的3-，5-或4-羥基被甲基化或苷化后，可使帶向紫位移，3-OH甲基化或苷化使帶（328357nm）與黃酮的帶的波長范圍重疊（且光譜曲線的形狀也相似），5-OH甲基化使帶和帶都向紫位移515nm，4-OH甲基化或苷化，使帶向紫位移310nm。其他位置上的羥基取代對甲醇中的紫外光譜幾乎沒有影響。（二）利用診斷試劑對黃酮、

4、黃酮醇類化合物UV光譜的影響檢出羥基位置1甲醇鈉（NaOMe），主要是判斷是否有4-OH，3、4二OH或3、3、4三OH。2乙酸鈉，較為突出的是判斷是否有7-OH。舉例說明3乙酸鈉/硼酸主要判斷A環(huán)或B環(huán)是否有鄰二酚羥基（5，6-二OH除外）。舉例說明4三氯化鋁及三氯化鋁/鹽酸，為判斷有無鄰二酚羥基，3-OH、5-OH提供信息。（三）異黃酮、二氫黃酮和二氫黃酮醇類在甲醇中的UV光譜特征這三類化合物都有苯甲酰系統(tǒng)，而無桂皮酰結(jié)構(gòu)，所以它們的紫外光譜都有強的帶吸收，異黃酮帶吸收在245270nm，而二氫黃酮和二氫黃酮醇的帶在270295nm，一般只受A環(huán)的含氧取代基的影響，A環(huán)含氧取代基數(shù)增加，吸

5、收峰向紅位移。（四）利用診斷試劑對異黃酮、二氫黃酮和二氫黃酮醇類化合物的UV光譜的影響判斷羥基位置 1甲醇鈉帶向紅位移，示A環(huán)上有羥基。如有5，6，7-或5，7，8-三羥基或3，4-二羥基，則吸收帶將隨放置的延長而逐漸衰退。二氫黃酮、二氫黃酮醇帶向紅位移的大小取決于是否有游離的5-OH。2乙醇鈉乙醇鈉使7-羥基異黃酮的帶向紅位移620nm，但6-位有含氧取代基時，乙醇鈉幾乎不能使帶產(chǎn)生移動。4，5，6，7-四羥基異黃酮的紫外光譜隨時間延長而衰退。乙醇鈉使5，7-二羥基二氫黃酮和5，7-二羥基二氫黃酮醇帶向紅位移3437nm，而其相應(yīng)的5-去氧化合物則移動5158nm。5，6，7-三羥基二氫黃酮

6、的紫外光譜隨時間延長而衰退。3乙醇鈉/硼酸不能用NaOAc/H3BO3對異黃酮、二氫黃酮和二氫黃酮醇類的紫外光譜的影響來檢查B環(huán)鄰位二羥基，因為它們的B環(huán)與主要發(fā)色團缺少有效的共軛。但它們中的A環(huán)有6，7-二羥基時，加入NaOAc/H3BO3后使帶向紅位移1015nm。4三氯化鋁和三氯化鋁/鹽酸異黃酮、二氫黃酮（可能也包括二氫黃酮醇）的A環(huán)如有鄰二羥基（6，7-或7，8-，不包括5，6-），則帶在AlCl3中比在AlCl3/HCl中向紅位移1130nm。有5-羥基的異黃酮，其帶在AlCl3/HCl存在下與在甲醇中的光譜相比，向紅位移1014nm，而有5-羥基的二氫黃酮和有5-羥基的二氫黃酮醇類

7、的帶在同樣情況下向紅位移2026nm。目標(biāo)檢測：黃酮類化合物的鑒別與結(jié)構(gòu)測定現(xiàn)在多依賴于譜學(xué)的綜合解析，而化學(xué)方法和色譜方法已降至輔助地位。未知黃酮類化合物的鑒定，多在測定分子式的基礎(chǔ)上，利用PPC或TLC得到的Rf值或hRf值與文獻比較或分析對比樣品在甲醇溶液中及加入各種診斷試劑后得到的紫外及可見光譜進行剖析。同時，對于化合物的顏色反應(yīng)，以及在提取分離過程中所表現(xiàn)的行為（如溶解度、酸或堿中的溶解情況、鉛鹽沉淀等）也應(yīng)注意分析。但這些方法均有一定局限性，并曾導(dǎo)致得出過一些錯誤結(jié)論。質(zhì)子核磁共振（1HNMR）因為可定量測定H的個數(shù)，以及根據(jù)質(zhì)子的化學(xué)位移和芳香氫核之間的自旋偶合所提供的信息（裂分

8、數(shù)目及偶合常數(shù)大?。纱_定黃酮母核上的取代模式。近來由于儀器分辨率的不斷改進，加以同核去偶、溶劑位移以及核磁共振技術(shù)的使用，1HNMR譜的測定對分析天然黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)已經(jīng)成為一種非常重要的手段。但是正如以后談到的那樣，在黃酮類化合物的1H-NMR譜上，有時要想確切指認(rèn)每個信號并不是一件容易的事情。例如當(dāng)黃酮類母核的A-環(huán)上只有一個芳香氫核時，要想與H-3信號區(qū)別，就是十分困難的問題。解決這種問題，13C核磁共振(13CNMR)技術(shù)有很大的優(yōu)勢。加上各種取代基位移及苷化位移效應(yīng)的發(fā)現(xiàn)，使得圖譜的解析工作大大簡化。因此，13C-NMR技術(shù)在黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)鑒定中發(fā)揮著越來越重要的作用。質(zhì)譜

9、（MS）技術(shù)，尤其場解析質(zhì)譜（FDMS）與快速原子轟擊質(zhì)譜（FABMS）及串聯(lián)質(zhì)譜（MSMS）的出現(xiàn)與應(yīng)用，使其成為黃酮類化合物結(jié)構(gòu)鑒定的重要手段之一（質(zhì)譜技術(shù)的優(yōu)勢是只需要微量的樣品就可獲得有關(guān)整個分子結(jié)構(gòu)及其主要碎片結(jié)構(gòu)的重要信息）。實際工作中常常根據(jù)需要，靈活、綜合運用上述方法和手段，并輔以必要的化學(xué)方法，以求結(jié)構(gòu)鑒定獲得滿意的結(jié)果。二、色譜法在黃酮類化合物鑒別中的應(yīng)用紙色譜（PPC）適用于分離各種天然黃酮類化合物及其苷類的混合物。混合物的鑒定常采用雙向色譜法。以黃酮苷類來說，一般第一向展開采用某種醇性溶劑，如n-BuOHHOAcH2O（415上層，BAW）、t-BuOHHOACH2O

10、（311，TBA）或水飽和的n-BuOH等，這些主要是根據(jù)分配作用原理進行分離。第二向展開溶劑則用水或下列水溶液，如：26HOAc、3NaCl及HOAc-濃HClH2O（30310）等。它們主要是根據(jù)吸附作用原理進行分離。黃酮類化合物苷元一般宜用醇性溶劑或用C6H6HOAcH2O（125723）、CHCl3HOACH2O（136l）、PhOH-H2O（41）或 HOAC一濃HCl-H2O（3033） 進行分離。而花色苷及花色苷苷元，則可用含HCl或HOAC的溶液作為展開劑。多數(shù)黃酮類化合物在紙色譜上用紫外光燈檢查時，可以看到有色斑點，以氨蒸氣處理后常產(chǎn)生明顯的顏色變化。此外還可噴以2 AlCl

11、3（甲醇）溶液（在紫外光燈下檢查）或1FeC131K3Fe(CN)6（11）水溶液等顯色劑。黃酮類化合物苷元中，平面性分子如黃酮、黃酮醇、查耳酮等，用含水類溶劑如 35HOAC展開時，幾乎停留在原點不動（Rf0.02；而非平面性分子如二氫黃酮、二氫黃酮醇、二氫查耳酮等，因親水性較強，故Rf值較大(0.100.30)。黃酮類化合物分子中羥基苷化后，極性即隨之增大，故在醇性展開劑中Rf值相應(yīng)降低，同一類型苷元，Rf值依次為：苷元單糖苷雙糖苷。以在BAW中展開為例，多數(shù)類型苷元（花色苷元例外）Rf值在0.70以上，而苷則小于0.70。但在用水或2 8HOAC，3 NaCl或1 HCl展開時，則上列順

12、序?qū)嵉?，苷元幾乎停留在原點不動，苷類的Rf值可在0.5以上，糖鏈越長，則Rf值越大。另外，糖的結(jié)合位置對Rf值也有重要的影響。不同類型黃酮類化合物在雙向PPC展開時常常出現(xiàn)在特定的區(qū)域，因此可推測它們的結(jié)構(gòu)類型以及判定是否成苷以及含糖數(shù)量。除PPC外，TLC用于黃酮類化合物的鑒定也日趨廣泛。一般采用吸附薄層色譜，常用的吸附劑有硅膠與聚酸胺，其次是纖維素。硅膠薄層色譜；用于分離與鑒定弱極性黃酮類化合物較好。分離黃酮苷元常用的展開劑是甲苯-甲酸甲酯-甲酸 （541），并可以根據(jù)待分離成分極性的大小適當(dāng)?shù)卣{(diào)整甲苯與甲酸的比例。另外尚有苯-甲醇(95：5)、苯-甲醇-醋酸（3555）、氯仿一甲醇（

13、8.51.570.5）、甲苯-氯仿-丙酮(4O2535)、丁醇一吡啶-甲酸(4010：)等分離黃酮苷元的衍生物如甲醚或醋酸乙酯等中性成分，可用苯-丙酮（91）、苯-醋酸乙酯(7.52.5）等為展開劑。聚酸胺薄層色譜：適用范圍較廣，特別適合于分離合游離酚羥基的黃酮及其苷類。由于聚酸胺對黃酮類化合物吸附能力較強，因而需要可以破壞其氫鍵締合的溶劑為展開劑。在大多數(shù)展開劑中含有醇、酸或水。常用的展開劑有乙醇一水(32)、水-乙醇-乙酸丙酮(421)、水-乙醇-甲酸-乙酸丙酮(51.5l：0.5)、水飽和的正丁醇一醋酸（10011002）、丙酮-水（11）、丙酮-95乙醇-水（212）、95乙醇-醋酸（

14、1002）、苯-甲醇-丁酮（602020）等。Stahl總結(jié)前人的工作，介紹了一些黃酮苷元和黃酮苷用硅膠、聚酸胺與纖維素三種薄層色譜和四種混合溶劑作為展開劑所得到的hRf值。三、紫外及可見光譜在黃酮類化合物鑒別中的應(yīng)用紫外及可見分光光度法是鑒別黃酮類化合物結(jié)構(gòu)的一種重要手段，一般程序如下：（1）測定樣品在甲醇溶液中的UV光譜；（2） 測定樣品在甲醇溶液中加入各種診斷試劑后得到的UV及可見光譜。常用的診斷試劑有甲醇鈉（NaOMe）醋酸鈉（NaOAc）、醋酸鈉一硼酸（NaOAcH3BO3）三氯化鋁（AICI3）及三氯化鋁一鹽酸（AICI3HCI）等。提取與分離一、提取黃酮類化合物在花、葉、果等組織

15、中，一般多以苷的形式存在，而在木部堅硬組織中，則多以游離苷元形式存在。黃酮苷類以及極性稍大的苷元（如羥基黃酮、雙黃酮、橙酮、查耳酮等），一般可用丙酮、醋酸乙酯、乙醇、水或某些極性較大的混合溶劑進行提取。其中用得最多的是甲醇水（11）或甲醇。一些多糖苷類則可以用沸水提取。在提取花青素類化合物時，可加入少量酸（如0.1鹽酸）。但提取一般黃酮苷類成分時，則應(yīng)當(dāng)慎用，以免發(fā)生水解反應(yīng)。為了避免在提取過程中黃酮苷類發(fā)生水解，常按一般提取苷的方法事先破壞酶的活性。大多數(shù)黃酮苷元宜用極性較小的溶劑，如氯仿、乙醚、醋酸乙酯等提取，對多甲氧基黃酮的游離苷元，可用苯進行提取。對得到的粗提取物可進行精制處理，常用的

16、方法有：（一）溶劑萃取法：利用黃酮類化合物與混入的雜質(zhì)極性不同，選用不同溶劑進行萃取可達到精制純化目的。例如植物葉子的醇浸液，可用石油醚處理，以便除去葉綠素、胡蘿卜素等脂溶性色素。而某些提取物的水溶液經(jīng)濃縮后則可加入多倍量濃醇，以沉淀除去蛋白質(zhì)、多糖類等水溶性雜質(zhì)。有時溶劑萃取過程也可以用逆流分配法連續(xù)進行。常用的溶劑系統(tǒng)有：水一醋酸乙酯，正丁醇一石油醚等。溶劑萃取過程在除去雜質(zhì)的同時，往往還可以收到分離苷和苷元或極性苷元與非極性苷元的效果。（二）堿提取酸沉淀法黃酮苷類雖有一定極性，可溶于水，但卻難溶于酸性水，易溶于堿性水，故可用堿性水提取，再將堿水提取液調(diào)成酸性，黃酮苷類即可沉淀析出。此法簡

17、便易行，如蘆丁、橙皮苷、黃芩苷提取都應(yīng)用了這個方法?，F(xiàn)以從槐米中提取蘆丁為例說明該法的操作過程?；泵祝ɑ睒?SOphora japonica L花蕾）加約 6倍量水，煮沸，在攪拌下緩緩加入石灰乳至 pH 89，在此 pH條件下微沸 2030 min，趁熱抽濾，殘渣再加 4倍量的水煎一次，趁熱抽濾。合并濾液，在6070t的條件下，用濃鹽酸將合并濾液調(diào)至PH為5，攪勻后靜置24 h，抽濾。用水將沉淀物洗至中性， 60干燥得蘆丁粗品，用沸水重結(jié)晶， 70一80干燥后得蘆丁純品。在用堿酸法進行提取純化時，應(yīng)當(dāng)注意所用堿液濃度不宜過離，以免在強堿性下，尤其加熱時破壞黃酮母核。在加酸酸化時，酸性也不宜過強

18、，以免生成樣鹽，致使析出的黃酮類化合物又重新溶解，降低產(chǎn)品收率。當(dāng)藥材中含有大量果膠、粘液等水溶性雜質(zhì)時，如花、果類藥材，宜用石灰乳或石灰水代替其他堿性水溶液進行提取，以使上述含羧基的雜質(zhì)生成鈣鹽沉淀，不被溶出。這將有利于黃酮類化合物的純化處理。（三）炭粉吸附法主要適于苷類的精制工作。通常，在植物的甲醇粗提取物中，分次加入活性炭，攪拌，靜置，直至定性檢查上清液無黃酮反應(yīng)時為止。過濾，收集吸附苷的炭末，依次用沸水、佛甲醇、7酚一水、15酚一醇溶液進行洗脫。對各部分洗脫液進行定性檢查（或用 PPC鑒定）。通過對BaPtisia lecontei中黃酮類化合物的研究證明，大部分黃酮耷類可用7酚一水洗

19、下。洗脫液經(jīng)減壓蒸發(fā)濃縮至小體積，再用乙酸振搖除去殘留的酚，余下水層減壓濃縮即得較純的黃酮苷類成分。二、分離現(xiàn)將較常用的分離方法介紹如下：（一）柱色譜法分離黃酮類化合物常用的吸附劑或載體有硅膠、聚酰胺及纖維素粉等。此外，也有用氧化鋁、氧化鎂及硅藻土等。1硅膠柱色譜此法應(yīng)用范圍最廣，主要適于分離異黃酮、二氫黃酮、二氫黃酮醇及離度甲基化（或乙醇化）的黃酮及黃酮醇類。少數(shù)情況下，在加水去活化后也可用于分離極性較大的化合物，如多羥基黃酮醇及其苷類等。供試硅膠中混存的微量金屬離子，應(yīng)預(yù)先用濃鹽酸處理除去，以免干擾分離效果。2聚酰胺柱色譜對分離黃酮類化合物來說，聚酰胺是較為理想的吸附劑。其吸附強度主要取決

20、于黃酮類化合物分子中羥基的數(shù)目與位置及溶劑與黃酮類化合物或與聚酰胺之間形成氫鍵締合能力的大小。聚酰胺柱色譜可用于分離各種類型的黃酮類化合物，包括苷及苷元、查耳酮與二氫黃酮等。以Baptisialecontei為例：黃酮類化合物從聚酰胺柱上洗脫時大體有下述規(guī)律：（1）苷元相同，洗脫先后順序一般是：叁糖苷、雙糖苷、單糖苷、苷元。（2）母核上增加羥基，洗脫速度即相應(yīng)減慢。當(dāng)分子中羥基數(shù)目相同時，羥基位置對吸附也有影響，聚酰胺對處于羰基間位或?qū)ξ坏牧u基吸附力大于鄰位羥基，故洗脫順序為：具有鄰位羥基黃酮，具有對位（或間位）羥基黃酮。（3）不同類型黃酮化合物，先后流出順序一般是：異黃酮、二氫黃酮醇、黃酮、

21、黃酮醇。（4）分子中芳香核、共軛雙鍵多者易被吸附，故查耳酮往往比相應(yīng)的二氫黃酮難于洗脫。上述規(guī)律也適用于黃酮類化合物在聚酰胺薄層色譜上的行為。3葡聚糖凝膠（Sephadex gel）柱色譜對于黃酮類化合物的分離，主要用兩種型號的凝膠：SephadexG型及SephadexLH廠型。用葡聚糖凝膠分離黃酮類化合物的機制是：分離游離黃酮時，主要靠吸附作用。凝膠對黃酮類化合物的吸附程度取決于游離酚羥基的數(shù)目。但分離黃酮苷時，則分子篩的性質(zhì)起主導(dǎo)作用。在洗脫時，黃酮苷類大體上是按分子量由大到小的順序流出柱體。表6-5中Ve為洗脫樣品時需要的溶劑總量或洗脫體積； V0為柱子的空體積。VeV0數(shù)值越小說明化

22、合物越容易被洗脫下來。上表所列數(shù)據(jù)清楚地表明：苷元的羥基數(shù)越多，VeV0越大，越難以洗脫，而苷的分子量越大，其上聯(lián)結(jié)糖的數(shù)目越多，則VeV0越小，越容易洗脫。葡聚糖凝膠柱色譜中常用的洗脫劑有：（1）堿性水溶液（如 01molL NH4OH），含鹽水溶液（05 molL NaCI等）。（2）醇及含水醇，如甲醇，甲醇水（不同比例），叔丁醇甲醇（3：1）、乙醇等。（3）其他溶劑，如含水丙酮、甲醇氯仿等。 （二）鉛鹽法此法過去曾用于研究，目前已很少采用。一般是在乙醇或甲醇溶液中依次加入適量中性醋酸鉛、堿式醋酸鉛水液，分別使具有鄰二酚羥基成分（包括黃酮）及含羥基成分，具有一般酚羥基的成分分離，再分別將鉛

23、鹽沉淀懸浮于醇中，脫鉛后得到成分。（三）硼酸鉻合法有鄰二酚羥基的黃酮類化合物可與硼酸絡(luò)合，生成物易溶于水，借此可與無鄰二酚羥基的黃酮類化合物相互分離。（四）pH梯度萃取法pH梯度萃取法適合于酸性強弱不同的游離的黃酮類化合物的分離，將混合物溶于有機溶劑（如乙醚）中，依次用5NaHCO3（萃取出7，4二羥基黃酮）、5Na2CO3（萃取出7或4羥基黃酮）、0.2NaOH（萃取出具一般酚羥基黃酮）、4NaOH（萃取出5羥基黃酮）萃取而使之分離。聚酰胺薄膜的分離機制主要是分子鍵氫鍵和吸附。當(dāng)展開劑為不同比例的醇-水時，其分離機制與反相板類似，苷元較苷的Rf值低；當(dāng)展開劑為有機溶劑時，分離機制與正相板類似

24、，苷元較苷的Rf值高。常用顯色劑多了去了，看你是要用于鑒別什么了。碘蒸氣是通用顯色劑，對很多化合物都顯黃棕色。碘顯色過程中由碘蒸氣分子與化合物發(fā)生結(jié)合而顯色。香草醛濃硫酸顯色原理是使羧基脫水，增加雙鍵結(jié)構(gòu)，再經(jīng)雙鍵位移，雙分子縮合等反應(yīng)生成共軛雙鍵系統(tǒng)，又在酸作用下形成陽碳離子鹽而顯色。比如：（1）礬酸銨一濃硫酸溶液（Mandelin試劑）為1礬酸銨的濃硫酸溶液。如遇阿托品顯紅色，可待因顯藍色，士的寧顯紫色到紅色。（2）鉬酸銨一濃硫酸溶液（Frohde試劑）為1鉬酸鈉或鉬酸銨的濃硫酸溶液，如遇烏頭堿顯黃棕色，小檗堿顯棕綠色，阿托品不顯色。（3）甲醛一濃硫酸試劑（Marquis試劑）為30甲醛溶

25、液0.2ml與10ml濃硫酸的混合溶液。如遇嗎啡顯橙色至紫色，可待因顯紅色至黃棕色。（4）濃硫酸 如遇烏頭堿顯紫色、小檗堿顯綠色，阿托品不顯色。 （5）濃硝酸 如遇小檗堿顯棕紅色，秋水仙堿顯藍色，咖啡堿不顯色。(1) 重絡(luò)酸鉀-硫酸:檢查一般有機物.噴灑劑:5克重絡(luò)酸鉀溶于100毫升40%硫酸中.薄層檢查:噴灑后加熱到150至班點出現(xiàn)(2) 熒光素-溴:檢查不飽和化合物噴灑劑:0.1克熒光素溶于100毫升乙醇中溴試劑:5%的溴的四氯化碳溶液噴灑后處理:噴灑熒光素溶液后,放置存有溴溶液的缸內(nèi),可于紫外線分析燈下檢查熒光,熒光素與溴化和成曙紅(Eosin)(無螢光),而不飽和化合物則成溴加成物,保

26、留了原有熒光;若點樣較多,則呈黃色斑點,底板呈紅色.(3) 碘:檢查一般有機物.方法:a 層析譜放密閉缸內(nèi)或瓷盤內(nèi)，缸內(nèi)預(yù)先放有碘結(jié)晶少許，大部分有機化合物呈棕色斑點。B 層析譜放碘蒸氣中5分鐘（或噴5碘的氯仿溶液）取出置空氣中待過量的碘蒸氣全部揮發(fā)后，噴1淀粉的水溶液，斑點轉(zhuǎn)成藍色。（4）硫酸：通用噴灑劑：5的濃硫酸乙醇溶液，或15濃硫酸正丁醇溶液，或濃硫酸醋酸（1：1）噴灑后處理：空氣中干燥15分鐘，再熱至110直至出現(xiàn)顏色或熒光。（5）硝酸銀氫氧化銨（Tollen-Zaffaroni）試劑：檢查還原性物質(zhì)。溶液I : 0.1%N硝酸銀; 溶液II: 5N氫氧化銨噴灑劑: I和II以1:5

27、混合(臨用前混合)噴灑后處理: 105加熱510分鐘,至深黑色斑點出現(xiàn).(6)磷鉬酸或磷鎢酸,硅鎢酸:檢查還原性物質(zhì),類脂體,生物堿,甾體噴灑劑: 510%磷鉬酸或磷鎢酸或硅鎢酸乙醇溶液噴灑后處理: 120加熱至斑點出現(xiàn).沉淀試劑: 1克硅鎢酸溶于20毫升水中,加10%鹽酸至強堿性. 生物堿(7)硫酸?=硫酸:檢查生物堿及含碘化合物噴灑劑: 0.1克硫酸?混懸于4毫升水中,加入1克三氯醋酸,加熱至沸,逐滴加入濃硫酸至澄清.噴灑后處理: 110加熱數(shù)分鐘至斑點出現(xiàn).(8)碘化鉍鉀(Dragendorff)試劑:檢查生物堿及其他含氟化合物.溶液I: 0.85克次硝酸鉍溶于10毫升冰醋酸40毫升水中

28、溶劑II: 8克碘化鉀溶于20毫升水中.制備液I+II,等體積混合.可用于棕色瓶中保存較長時間,一般制備液可作沉淀試劑用.噴灑液: 制備液1毫升與2毫升醋酸,10毫升水混合即得(9).碘化汞鉀(Mayer)試劑: 檢查生物堿.制備液: 13.55克氯化汞和49.8克碘化鉀各溶于20毫升水中,等體積混合并用水稀釋至1000毫升.噴灑液: 制備液加1/10體積的17%鹽酸.噴灑后處理: 觀察斑點,并于紫外線熒光分析燈下檢出.(10) ?酸納-濃硫酸(Mandelin)試劑:檢查生物堿.1%>酸納的濃硫酸溶液.與多種生物堿呈不同顏色.(11)碘碘化鉀(Wagner)試劑:檢查生物堿.1克碘及1

29、0克碘化鉀,溶于50毫升水中,加熱,加2毫升醋酸,再用水稀釋至100毫升.可作紙層板顯色劑,液可作沉淀試劑.酚類,鞣質(zhì)(12)三氯化鐵:檢查酚類及?酸.噴灑劑:15%三氯化鐵的水溶液或乙醇溶液.并加鹽酸少許.?酸呈紅色斑點,酚類稱藍色或綠色斑點.(13)鐵氰化鉀-三氯化鉀:檢查酚類,芳香胺類及還原性物質(zhì).噴灑劑: 1%鐵氰化鉀水溶液,2%三氯化鐵水溶液.臨用前等體積混合.噴灑后處理: 噴灑后酚性物質(zhì)呈藍色斑點.再噴2N鹽酸,能使顏色加深,紙譜可用烯鹽酸洗去噴灑液.(14) 4-胺基安替比林-鐵氰化鉀(Emerson反應(yīng)): 檢查酚類.噴灑劑: I . 2%4-氨基安替比林乙醇溶液;II. 8%

30、鐵氰化鉀水溶液.或用0.9%4-氨基安替比林和5.4%鐵氰化鉀水溶液方法: 先噴灑I,再噴灑II,即顯色,或再放入密閉缸中,缸內(nèi)放25%氫氧化銨,即產(chǎn)生橙色至深紅色.(15) 對氨基苯磺酸,重氮鹽(Pauly試劑): 檢查酚類,芳香胺類及能偶合的雜環(huán)化合物.噴灑劑: 4.5克對氨基苯磺酸,加熱溶于45毫升12N鹽酸中,用水稀釋至500毫升,取10毫升稀釋液用冰冷卻,加10毫升冷4.5%亞硝酸鈉水溶液,0放15分鐘(此試劑于0可保存3天),用前加等體積1%碳酸鈉水溶液.一般重氮化試劑,也可用聯(lián)苯胺,對硝基苯胺等.(16) 對甲苯磺酸: 檢查甾體,黃酮,鞣質(zhì).噴灑劑: 20%對甲苯磺酸氯仿溶液.噴

31、灑后處理: 100加熱數(shù)分鐘,紫外線分析燈下檢查熒光斑點.含氧雜環(huán)及蒽醌類*(17) 三氯化鋁: 檢查黃酮體.噴灑1%三氯化鋁乙醇液于紫外線熒光分析燈下檢示,呈黃色熒光(18)堿式醋酸鉛: 檢查黃酮體.噴灑劑: 飽和堿式醋酸鉛(或飽和醋酸鉛)水溶液.于紫外線熒光分析燈下檢查熒光斑點.(19)醋酸鎂: 檢查蒽醌甙,甙元及黃酮體噴灑劑: 0.5%醋酸鎂甲醇溶液方法: 90加熱5分鐘,呈紅色至紫色斑點.(20)氫氧化鉀: 檢查香豆素,蒽醌甙及甙元噴灑劑: 510%氫氧化鉀的甲醇溶液.于日光及紫外線熒光分析燈下檢示斑點.萜類,甾體(21) 三氯化銻(Carr-Price試劑): 檢查甾體,萜類,皂類.

32、噴灑劑: 25克三氯化銻溶于75克氯仿中(亦可以用氯仿或四氯化碳的飽和溶液).噴灑后處理: 100加熱5分鐘,于紫外線熒光分析燈下檢示熒光.(22) 五氯化銻: 檢查甾體,萜類,皂甙.噴灑劑: 五氯化銻-氯仿或四氯化碳(1:4),用前新鮮配制.噴灑后處理: 120加熱至斑點出現(xiàn),并于紫外線熒光分析燈下檢示.(23)香蘭醛-硫酸: 檢查高級醇類,酚類,甾體,萜類,芳香油.噴灑劑: 1克香蘭素溶于100毫升濃硫酸,或0.5克香蘭醛溶于100毫升硫酸-乙醇(4:1)中.噴灑后處理: 室溫或120加熱觀察顯色斑點.(24) 4-二甲氨基苯甲醛,醋酸,磷酸(E.P.試劑): 檢查? Azulene 及?

33、前體 Proazulene.噴灑劑: 0.25克4-二甲氨基苯甲醛,溶于50毫升醋酸5克85磷酸和20毫升水的混合液中(棕色瓶中保存數(shù)月)?:烴室溫即成藍紫色斑點,>前體于80加熱10分鐘出現(xiàn)藍紫色斑點.(25) 氯胺T三氯醋酸: 檢查強心甙.噴灑劑: I. 3%氯仿T水溶液新鮮制備.II. 25%三氯醋酸乙醇溶液(能保存數(shù)天).10毫升I加40毫升II,用前混合.噴灑后處理: 110加熱7分鐘,紫外線熒光分析燈下檢示呈藍色或黃色熒光.(26) 亞硝酸基鐵氰化鈉-氫氧化鈉(Legal試劑): 檢查不飽和內(nèi)酯;甲基酮或活性次甲基,常用于強心甙噴灑劑: 1克亞硝基鐵氰化鈉溶于100毫升2N氫

34、氧化鈉-乙醇(1:1)的水溶液.顯紅色或紫色斑點.(27) 3,5-二硝基苯甲酸(Legal試劑): 檢查強心甙,-不飽和內(nèi)酯.噴灑劑: 1克3,5-二硝基苯甲酸溶于50毫升甲醇,加入1N氫氧化鉀50毫升.強心甙呈紫紅色斑點.糖類(28) 鄰苯二甲基苯胺: 檢查還原糖.噴灑劑: 0.93克苯氨,1.66克鄰苯二甲酸溶于100毫升水飽和的正丁醇中.噴灑后處理: 105加熱10分鐘.(29) 2,3,5-Triphenyl-tetrazolium chloride (T.T.C.)：檢查還原糖及其他還原物質(zhì)。溶液I：4（T.T.C.）甲醇溶液； 溶液II：1N氫氧化鈉。噴灑液：I，II，臨用前等體

35、積混合。噴灑后處理：100加熱510分鐘，得紅色斑點。（30）Keller-Kiliani試劑：檢查去氧糖，常用于強心甙。試液：100毫升冰醋酸加三氯化鐵試液0.5毫升混合均勻.試樣1毫克加試液2毫克溶解后,沿試官管壁滴入濃硫酸2毫升,接觸面即顯棕色,漸變淺綠,藍色.最后冰醋酸層全部燃呈藍色.(31) 1,3-二羥基萘-磷酸: 檢查糖類.噴灑液: 0.2%1,3-二羥基萘(Naphthoresorcinol)乙醇溶液100毫升,與10毫升85%磷酸混合.(32) 費林溶液(Fehling): 檢查還原糖.溶液I: 69.3克結(jié)晶硫酸銅溶于1000毫升水中.上述二溶液如不清可濾過.臨用前等體積混

36、合.氨基酸(33) 茚三酮: 檢查氨基酸及氨基糖.噴灑劑: 0.3克茚三酮溶于100毫升正丁醇,加入3毫升醋酸;或0.2克茚三酮溶于100毫升乙醇(或丙酮中).噴灑后處理: 110加熱至斑點出現(xiàn).(34) 吲哚醌: 檢查氨基酸和一些肽.噴灑劑: 0.2%吲哚醌(Isatin)丙酮溶液,含4%醋酸;或用100毫升1%吲哚醌丙酮溶液加10毫升醋酸.噴灑后處理: 100110加熱10分鐘.(35) 1,2-萘醌-4-硫磺酸(Folin試劑): 檢查氨基酸.噴灑劑: 新鮮制備0.02克1,2-萘醌-4-磺酸鈉,溶于100毫升5%碳酸鈉中.噴灑后處理: 室溫放于,不同氨基酸出現(xiàn)不同顏色.有機酸(36)

37、酸堿指示劑: 檢查有機酸.噴灑劑: 0.05%溴酚藍(或溴甲酚綠,或溴麝香草酚藍)的乙醇溶液.(37) 氧化還原顯色劑: 檢查有機酸.噴灑劑: I. 0.075%溴甲酚綠及0.025%溴酚藍的無水乙醇液.II. 0.5%高錳酸鉀及1%碳酸鈉.10H2O的蒸餾水液.臨用前,取I和II按1:1混合后噴酒.噴酒后處理: 穩(wěn)定時間為510分鐘.對不同的有機酸在紙譜上呈現(xiàn)不同顏色.(38) ? (Acridine): 檢查酸.噴灑劑: 0.005%的?乙醇溶劑.紫外線分析燈下呈黃色熒光.(39) 芳香胺-還原糖: 檢查酸.噴灑劑: 芳香胺(如苯氨5克)和還原糖(如木質(zhì)糖5克)溶于50%含水乙醇中.噴灑后

38、處理: 125130加熱出現(xiàn)棕色斑點一、通用試劑1、碘試劑 檢查一般有機化合物。（1）碘蒸氣 預(yù)先將盛有碘結(jié)晶的小杯置于密閉的玻璃容器內(nèi)，使容器空間被碘蒸氣飽和，將薄層置于容器內(nèi)數(shù)分鐘即顯棕色斑點。有時，于容器中加放一小杯水，增加容器內(nèi)的濕度，可提高顯色的靈敏度。 （2）0.5碘的氯仿溶液 噴灑試劑，置空氣中待過量的碘揮發(fā)后，噴1淀粉溶液，斑點由棕色轉(zhuǎn)為藍色。2、硫酸試劑 檢查一般有機化合物。5硫酸乙醇溶液作為色譜顯色劑用。噴灑后，置空氣中干燥15min，100烤至斑點呈色（不同化合物呈不同顏色）。3、重鉻酸鉀硫酸試劑 檢查一般有機化合物。5g重鉻酸鉀溶于l00ml40硫酸中。噴該試劑后，15

39、0加熱至斑點出現(xiàn)(不同化合物呈不同顏色)。4、磷鉬酸試劑 檢查還原性成分。5磷鉬酸乙醇溶液。噴灑后，120加熱至呈藍色斑點。5、磷鎢酸試劑檢查還原性成分20磷鎢酸乙醇溶液。噴灑后，120烘烤，還原性物質(zhì)呈藍色斑點。6、硝酸銀氫氧化銨試劑 檢查還原性成分。溶液I：0.1molL硝酸銀溶液。溶液：10氫氧化銨溶液。臨用前溶液I和以15混合。噴灑后105加熱5l0min，至深黑色斑點出現(xiàn)。7、中性高錳酸鉀試劑 檢查易還原性成分。0.05高錳酸鉀溶液。噴灑后粉紅色背景上顯黃色斑點。8、堿性高錳酸鉀試劑 檢查還原性成分。溶液I：1高錳酸鉀溶液。溶液：5碳酸鈉溶液。溶液I和等量混合使用，噴灑后，粉紅背景上

40、顯黃色斑點。9、四唑藍試劑 檢查還原性成分。溶液I：05四唑藍甲醇溶液。溶液：25氫氧化鈉溶液。臨用前兩液等量混合。噴灑后，微熱或室溫放置顯紫色斑點。10、熒光素溴試劑 檢查不飽和化合物。溶液I：0.1g熒光素溶于l00ml乙醇中。溶液：5g溴溶于l00ml四氯化碳中。先噴灑溶液I，然后將薄層板放入盛有溶液的缸內(nèi)，黃色斑點出現(xiàn)后，于紫外光燈下檢視，紅色底板上顯黃色熒光斑點。11熒光顯色試劑 檢查一般有機化合物。（1）0.22，7-'氯熒光素乙醇溶液。（2）0.01熒光素乙醇溶液。（3）0.1桑色素乙醇溶液。（4）0.05羅丹明B乙醇溶液。噴灑任一溶液，不同的化合物在熒光背景上可顯黑色或

41、其它熒光斑點。二、苷類鑒定試劑1、糖鑒定試劑（1） 萘酚硫酸試劑檢查還原糖。溶液I：10 萘酚乙醇溶液。溶液：硫酸。取lml樣品的稀乙醇溶液或水溶液，加入溶液I 23滴，混勻，沿試管壁緩緩加入少量溶液，二液面交界處產(chǎn)生紫紅色環(huán)為陽性反應(yīng)。15 萘酚乙醇溶液21m1、硫酸13ml、乙醇87ml及水8ml混勻后使用。噴灑于薄層板上，100烤36min，多數(shù)糖顯藍色，鼠李糖顯橙色，所顯顏色于室溫可穩(wěn)定2天3天。（2）斐林試劑 檢查還原糖。 溶液I：6.93g結(jié)晶硫酸銅溶于l00ml水中。溶液：34.6g酒石酸鉀鈉、10g氫氧化鈉溶于l00ml水中。取lml樣品熱水提取液，加入45滴用時配制的溶液、等

42、量混合液，在沸水浴中加熱數(shù)分鐘，產(chǎn)生磚紅色沉淀為陽性反應(yīng)。如檢查多糖和甙，取lml樣品水提液，加入lmll0鹽酸溶液，在沸水浴上加熱l0min，過濾，再用10氫氧化鈉溶液調(diào)至中性，按上述方法檢查還原糖。（3）氨性硝酸銀試劑 檢查還原糖。硝酸銀1g，加水20ml溶解，小心滴加適量氨水，邊加邊攪拌，至開始產(chǎn)生的沉淀將近全部溶解為止，過濾。取lml樣品的水溶液，加入lml試劑，混勻后，40微熱數(shù)分鐘，管壁析出銀鏡或產(chǎn)生黑色沉淀為陽性反應(yīng)。本試劑也可作為色譜顯色劑，噴灑后于110加熱數(shù)分鐘，顯棕黑色斑點為陽性反應(yīng)。還原性物質(zhì)如醛類、鄰二酚類等有干擾。（4）茴香醛硫酸試劑 檢查糖類化合物。硫酸lml加到

43、含茴香醛0.5ml的乙酸溶液50ml中，需臨用前配制。噴灑于薄層板上，105加熱至顯示色斑，不同糖顯不同顏色。 （5）苯胺鄰苯二甲酸試劑 檢查糖類化合物。苯胺0.93g和鄰苯二甲酸1.66g溶于100ml水飽和的正丁醇中。作色譜顯色劑用。噴后105烤5min，顯紅棕色斑點。（6）l,3二'羥基萘酚磷酸試劑 檢查酮糖、醛糖。0.21，3-'二羥基萘酚乙醇溶液50ml與85磷酸50ml混合均勻后使用。噴后105烤5min10min，酮糖呈紅色，醛糖顯淡藍色。（7）苯胺二苯胺磷酸試劑 檢查糖類化合物。苯胺4ml、二苯胺4g及85磷酸20ml溶于丙酮200ml中。噴灑于薄層板上，85加

44、熱10min，不同糖顯不同顏色。（8）2，3，5三苯基氯化四氮唑(TTC)試劑 檢查還原糖。溶液：4TTC甲醇溶液。溶液：4氫氧化鈉溶液。臨用時將溶液和等體積混合。噴灑后，100加熱510min，顯紅色斑點為陽性反應(yīng)(醛類無干擾)。 （9）三氯化鐵冰醋酸(KK)試劑 檢查 去氧糖，常用于強心甙。溶液I：1三氯化鐵溶液0.5ml，加冰醋酸至l00ml。溶液：硫酸。取樣品乙醇提取液lml，置試管中，水浴上蒸去乙醇，殘渣用0.5ml溶液I溶解，沿試管壁緩緩加入溶液lml，靜置分層，上層漸顯藍色，下層顯紅色或棕色為陽性反應(yīng)(其顏色隨苷元羥基和雙鍵的位置和個數(shù)不同而不同)。（10）占噸氫醇試劑 檢查 去

45、氧糖(常用于強心甙)。10mg占噸氫醇溶于100ml冰醋酸中，再加入lml硫酸混合。取lml樣品，加入試劑lml，置水浴上加熱30min，顯紅色為陽性反應(yīng)。 （11）Gregg-Gisvold試劑 檢查26去氧糖。溶液I：10三氯化鐵溶液。溶液：1鹽酸甲醇溶液(97.2ml甲醇中含28ml鹽酸)。0.5ml溶液I與100ml溶液混合。將樣品的乙醇溶液點于濾紙片上，晾干后，噴灑上述混合試劑，110加熱5min，顯藍色為陽性反應(yīng)。（12）3，5二氨基苯甲酸磷酸試劑 檢查2去氧糖。3，5二氨基苯甲酸二鹽酸鹽1g溶于80磷酸25ml，加水稀釋至60ml。噴灑后，100加熱15min，2去氧糖在日光下顯

46、棕色，在紫外光下顯黃綠色熒光。（13）對硝基苯胺過碘酸試劑 檢查去氧糖。溶液I：飽和偏高碘酸溶液1份加水2份混勻。溶液：1對硝基苯胺乙醇溶液4份與鹽酸1份混合。先噴溶液I，放置10min，再噴溶液，去氧糖顯黃色，紫外光下顯強熒光，再噴5氫氧化鈉甲醇溶液，顏色轉(zhuǎn)綠，乙二醇同樣顯色。2、酚類鑒定試劑（1）三氯化鐵試劑 檢查酚類化合物、鞣質(zhì)。15三氯化鐵水溶液或乙醇溶液，加鹽酸酸化。取1m1樣品的乙醇溶液，加入試劑12滴，顯綠、藍綠或暗紫色為陽性反應(yīng)。作色譜顯色劑用，噴灑后，顯綠或藍色斑點為陽性反應(yīng)。 ·（2）4氨基安替匹林鐵氰化鉀(Emerson)試劑 檢查酚羥基對位無取代基的化合物。

47、溶液I：24氨基安替匹林乙醇溶液。溶液：8鐵氰化鉀溶液。作色譜顯色劑用，先噴灑溶液I，再噴灑溶液，用氨氣熏，顯橙紅或深紅色斑點為陽性反應(yīng)。（3）Gibbs試劑 檢查酚羥基對位無取代基的化合物。 溶液I：0.52，6溴(氯)苯醌氯亞胺的乙醇溶液。溶液：1氫氧化鉀乙醇溶液。取lml樣品的乙醇溶液，滴加溶液，使pH910，再加入1滴2滴溶液I，顯深藍色為陽性反應(yīng)。（4）鐵氰化鉀三氯化鐵試劑 檢查酚類、芳香胺類及還原性物質(zhì)。溶液I：1鐵氰化鉀溶液。溶液：2三氯化鐵溶液。臨用前等體積混合。噴灑后酚性成分呈藍色斑點，再噴20鹽酸，能使顏色加深。紙色譜可用稀鹽酸洗去噴灑液。 （5）重氮化(Pauly)試劑

48、檢查酚羥基對位無取代基化合物。溶液I：0.35g對硝基苯胺溶于5ml鹽酸中，加水稀釋至50ml。溶液：5g亞硝酸鈉溶于70ml水中。取1m1樣品的乙醇溶液，加入1m13碳酸鈉溶液，在沸水浴中加熱3min，再在冰水浴中冷卻后，加入12滴溶液與的混合液(臨用時，在冰水浴中等量混合)，顯紅色為陽性反應(yīng)。作色譜顯色劑用，將溶液I與各l0ml混合，再加20ml 1碳酸鈉溶液(均臨用時在冰水浴中混合)，噴灑后，顯黃、紅、紫等色斑點為陽性反應(yīng)。（6）牢固藍B鹽試劑 檢查酚類化合物。溶液I：新配的0.5牢固藍B鹽的溶液。溶液：0.5氫氧化鈉溶液。先噴溶液I，再噴溶液，呈棕、紫、或綠色者為陽性反應(yīng)。能偶合的芳香

49、胺類有干擾。3黃酮類鑒定試劑 （1）鹽酸鎂粉試劑 檢查黃酮（醇）、二氫黃酮（醇）類化合物。取lml樣品的乙醇溶液，加入數(shù)毫克鎂粉，滴加數(shù)滴鹽酸，必要時水浴上微熱，顯紅紫色為陽性反應(yīng)。（2）Shinoda試劑采用含2鋅粉（WW）硅膠薄層板，展層后噴20鹽酸溶液，黃酮（醇）類呈紅紫色。（3）三氯化鋁試劑 檢查具有鄰二酚羥基或3羥基、4酮基或5羥基、4酮基的黃酮類化合物。1三氯化鋁乙醇溶液或5三氯化鋁乙醇溶液。噴灑前、后將薄層板置日光下和紫外光燈下觀察，呈黃色或黃綠色熒光為陽性反應(yīng)。也可在濾紙上和試管中進行。（4）中性醋酸鉛或堿式醋酸鉛試劑 檢查具鄰二酚羥基或酚羥基的黃酮化合物。飽和中性醋酸鉛或堿式

50、醋酸鉛溶液。取1ml樣品的乙醇溶液，加12滴試劑，產(chǎn)生黃色沉淀。 （5）鋯檸檬酸試劑 檢查具3羥基或5羥基的黃酮類化合物。溶液I：2二氯氧鋯甲醇溶液。溶液：2檸檬酸甲醇溶液。取1mg樣品，用甲醇溶解，加入溶液I lml，呈鮮黃色示有3羥基或5羥基；再加入溶液1m1，黃色不褪，示有3羥基；黃色褪去，加水稀釋后變?yōu)闊o色，示無3羥基，但有5羥基。也可在濾紙上進行，得到的鋯鹽絡(luò)合物多呈黃綠色，并具熒光。（6）氨性氯化鍶試劑 檢查具有鄰二酚羥基結(jié)構(gòu)的黃酮類化合物。溶液I：1氯化鍶甲醇溶液。溶液：氨蒸氣飽和的甲醇溶液。取1mg樣品的甲醇溶液，加入3滴溶液I，再加3滴溶液，產(chǎn)生綠棕黑色沉淀為陽性反應(yīng)。（7）

51、醋酸鎂試劑 檢查黃酮類、二氫黃酮類化合物，及羥基蒽醌類衍生物。1醋酸鎂甲醇溶液。在濾紙或薄層板上，點1滴樣品醇溶液，揮去醇后，點l滴試劑于樣品斑點邊緣，加熱干燥，于紫外燈下觀察，黃酮類顯黃色熒光，二氫黃酮類呈天藍色熒光。顯橙紅色為大黃素型蒽醌，顯紫色為茜草型蒽醌。（8）硼氫化鉀試劑 檢查二氫黃酮類化合物。2四氫硼鉀的甲醇溶液。取樣品12mg溶于甲醇中，加等量試劑lml后，加數(shù)滴鹽酸，呈紅-紫紅色為陽性反應(yīng)。薄層色譜上噴試劑，5min后放人鹽酸蒸氣槽內(nèi)呈色。 4醌類化合物鑒定試劑（1）Borntrager試劑 檢查羥基蒽醌衍生物。2氫氧化鈉或2碳酸鈉溶液(或甲醇溶液)。取lml樣品的乙醇溶液，加

52、lml試劑，呈紅色為陽性反應(yīng)。在薄層色譜上噴灑試劑，顯橙黃或紅色斑點。黃酮類化合物遇堿也能反應(yīng)生成黃、橙、紅色等。（2）菲格爾(Feigl)試劑 檢查醌類衍生物。溶液I：25碳酸鈉溶液。溶液：4甲醛的苯溶液。溶液：5鄰二硝基苯的苯溶液，取1滴樣品的苯溶液，加入上述3種試液各1滴，混勻，置水浴上加熱l4min，呈顯著的紫色為陽性反應(yīng)。（3）硼氫化鈉二甲基甲酰胺試劑 檢查蒽醌及其衍生物。20g硼氫化鈉溶于100ml二甲基甲酰胺中。作色譜顯色劑用。噴灑試劑后，于紫外光燈下觀察，顯強的黃、綠或藍色熒光為陽性反應(yīng)。（4）硼酸試劑 檢查羥基蒽醌類化合物。 1硼酸溶液。作色譜顯色劑用，噴灑后，置紫外光燈下觀

53、察，呈黃、橙、紅色熒光為陽性反應(yīng)。（5）對亞硝基二甲基苯胺試劑 檢查蒽酮類衍生物。0.1對亞硝基二甲基苯胺的吡啶溶液。取1m1樣品的乙醇溶液，置水浴上蒸干，殘渣用吡啶溶解，再滴試劑數(shù)滴，顯紫色或綠色為陽性反應(yīng)。（6）活性次甲基試劑 檢查苯醌及萘醌類衍生物。lg活性次甲基試劑(例如丙二酸酯、乙酰乙酸酯等)溶于30ml氨與乙醇的等體積混合溶液中。取5ml樣品的乙醇溶液，加入3ml試劑，顯藍、紫或紅色為陽性反應(yīng)，萘醌分子中具羥基，可使反應(yīng)減慢或不起反應(yīng)。5內(nèi)酯、香豆素類鑒定試劑（1）開環(huán)閉環(huán)試劑 檢查內(nèi)酯環(huán)。溶液I：1氫氧化鈉溶液。溶液：2鹽酸溶液。取lml樣品的乙醇溶液，加2ml溶液I，置沸水浴上

54、加熱34min，溶液比未加熱時澄清。再加溶液酸化(pH2)，放置，溶液又變?yōu)榛鞚帷７有曰衔锖陀袡C酸有干擾，但可用下法予以區(qū)別，取樣品乙醇溶液數(shù)毫升，置水浴上蒸干溶劑，用乙酸乙酯溶解后置分液漏斗內(nèi)，用5氫氧化鈉溶液萃取酚性及有機酸成分，乙酸乙酯溶液用水洗至中性后按上法檢測。（2）異羥肟酸鐵試劑 檢查內(nèi)酯環(huán)。溶液I：7鹽酸羥胺甲醇溶液(新鮮配制)。溶液：10氫氧化鉀甲醇溶液。溶液：1三氯化鐵甲醇溶液。取1m1樣品的甲醇溶液，加入溶液I、各5滴，置沸水浴上加熱3min4min，冷卻后，用稀鹽酸調(diào)至pH34，再加入溶液1滴2滴，顯橙紅或紫紅色為陽性反應(yīng)。作色譜顯色用，將溶液I，等量混合，噴灑后空氣中干燥10min，再噴溶于1鹽酸中的三氯化鐵溶液，顯橙紅或紫紅色斑點。（3）稀氫氧化鈉溶液 將檢樣點于濾紙片或薄層上，試樣邊緣點上堿液，晾干，置紫外燈光下觀察，多數(shù)羥基香豆素有強的熒光。 配合酚類鑒定試劑的檢查，以確定游離酚羥基的存在及取代位置。6，強心甙鑒定試劑 （1）堿性3，5二硝基苯甲酸