食品微生物快速檢測常用方法-PCR技術(shù)對海產(chǎn)品保藏過程中的菌

1、食品微生物快速檢測常用方法食品微生物快速檢測常用方法- -PCRPCR技術(shù)對海產(chǎn)品保藏過程中的菌相分析技術(shù)對海產(chǎn)品保藏過程中的菌相分析 1 食品營養(yǎng)與檢測專業(yè)教學(xué)資源庫 目錄頁一一PCR技術(shù)檢測海產(chǎn)品中微生物的原理二二PCR技術(shù)檢測海產(chǎn)品中微生物的操作程序 食品營養(yǎng)與檢測專業(yè)教學(xué)資源庫 過渡頁PCR技術(shù)檢測海產(chǎn)品中微生物的原理一一 食品營養(yǎng)與檢測專業(yè)教學(xué)資源庫 PCR擴增DNA，其選擇性體現(xiàn)在引物上，因為引物決定了擴增區(qū)域和擴增片段長度。從理論上說，在細菌DNA高度保守區(qū)內(nèi)設(shè)計引物，則所有細菌都可有片段擴出；如果在細菌屬特異性區(qū)域內(nèi)設(shè)計引物，則只有本屬細菌能被擴增；如果在種特異性區(qū)域內(nèi)設(shè)計引物

2、，就只有該種細菌有特定片段擴出。那么反過來，可以根據(jù)已知的細菌遺傳信息，設(shè)計出某種特定引物，進行PCR。如果有特定長度的擴增產(chǎn)物出現(xiàn)，則說明擴增模板是這類細菌的DNA，亦即有這類細菌存在，反之則無。 食品營養(yǎng)與檢測專業(yè)教學(xué)資源庫 食品營養(yǎng)與檢測專業(yè)教學(xué)資源庫 過渡頁PCR技術(shù)檢測海產(chǎn)品中微生物的操作程序一一1.目的微生物的濃集增菌2.核酸的提取3. PCR擴增4. PCR擴增產(chǎn)物的檢測 食品營養(yǎng)與檢測專業(yè)教學(xué)資源庫 （PCR技術(shù)對海產(chǎn)品保藏過程中的菌相分析技術(shù)對海產(chǎn)品保藏過程中的菌相分析 ）目的微生物的濃集增菌 某些待檢微生物的濃度很低，往往需要濃集才能達到 PCR檢測的要求；濃集方法常有離心

3、法、濾膜收集法、物理吸附法等。 有時濃集方法效果不理想或不宜濃集時，將待檢樣品進行前培養(yǎng)預(yù)增殖也是必要的。 食品營養(yǎng)與檢測專業(yè)教學(xué)資源庫 （PCR技術(shù)對海產(chǎn)品保藏過程中的菌相分析技術(shù)對海產(chǎn)品保藏過程中的菌相分析 ）核酸的提取 從樣品中濃集到目的微生物后，必須經(jīng)過適當(dāng)處理，使其核酸暴露出來，才能用于PCR擴增。 處理的方法有加熱、反復(fù)凍融和化學(xué)試劑裂解等。 食品營養(yǎng)與檢測專業(yè)教學(xué)資源庫 （PCR技術(shù)對海產(chǎn)品保藏過程中的菌相分析技術(shù)對海產(chǎn)品保藏過程中的菌相分析 ）PCR擴增 PCR特異性擴增的關(guān)鍵在于引物。 PCR參數(shù)的優(yōu)化選擇：退火溫度、PC R的特異性、dNTP、引物、Mg2+、DNA多聚酶等，其中退火溫度是很重要的因素。 食品營養(yǎng)與檢測專業(yè)教學(xué)資源庫 （PCR技術(shù)對海產(chǎn)品保藏過程中的菌相分析技術(shù)對海產(chǎn)品保藏過程中的菌相分析 ）PCR擴增產(chǎn)物的檢測 常用的PCR擴增產(chǎn)物檢測方法為瓊脂糖凝