高效液相色譜法的基本原理

1、職業(yè)教育醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)專(zhuān)業(yè)教學(xué)資源庫(kù)高效液相色譜法的基本原理 在液相色譜儀中，最常用的還是高效液相色譜儀，但隨著生物技術(shù)和生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)科的發(fā)展，制備型液相色譜儀、低壓液相色譜儀、超臨界流體色譜儀（特別是毛細(xì)管超臨界流體色譜儀）、膜色譜技術(shù)、離子色譜儀也在不斷研究、開(kāi)發(fā)和應(yīng)用。第一節(jié)第一節(jié) 高效液相色譜法高效液相色譜法概述概述二、基本原理二、基本原理 色譜是利用待分離的樣品組分在兩色譜是利用待分離的樣品組分在兩相中分配的差異而實(shí)現(xiàn)分離的。相中分配的差異而實(shí)現(xiàn)分離的。第一節(jié)第一節(jié) 高效液相色譜法高效液相色譜法概述概述檢測(cè)器檢測(cè)器色譜柱（固定相）色譜柱（固定相）樣品組分樣品組分1 12 23 3流動(dòng)

2、相流動(dòng)相流動(dòng)相流動(dòng)相流動(dòng)相流動(dòng)相流動(dòng)相流動(dòng)相流動(dòng)相流動(dòng)相流動(dòng)相流動(dòng)相時(shí)間（時(shí)間（t t）響響應(yīng)應(yīng)R R色譜分離原理示意圖色譜分離原理示意圖進(jìn)樣峰進(jìn)樣峰1 12 23 31 11 12 22 22 23 33 33 33 3第一節(jié)第一節(jié) 高效液相色譜法高效液相色譜法概述概述 色譜分離的兩要素色譜分離的兩要素是互不相溶的兩是互不相溶的兩相（流動(dòng)相及固定相）以及樣品（混合相（流動(dòng)相及固定相）以及樣品（混合物）各組分在兩相中分配的差異，是決物）各組分在兩相中分配的差異，是決定色譜最終分離結(jié)果好壞的基礎(chǔ)。定色譜最終分離結(jié)果好壞的基礎(chǔ)。第一節(jié)第一節(jié) 高效液相色譜法高效液相色譜法概述概述 高效液相色譜法（HPLC）：以氣相色譜為基礎(chǔ)，在經(jīng)典液相色譜實(shí)驗(yàn)和技術(shù)基礎(chǔ)上建立的一種液相色譜法，又稱(chēng)高速液相色譜法（SPLC）、高壓液相色譜法（HPLC）、高分辨液相色譜法（HRLC）。特點(diǎn)：高柱效（遠(yuǎn)高于LC）；高靈敏度；高選擇性；分析速度快；應(yīng)用范圍廣泛（可分析80%有機(jī)化合物）。第一節(jié)第一節(jié) 高效液相色譜法高效液相色譜法概述概述 主要區(qū)別：固定相、輸液設(shè)備和檢測(cè)手段的差別 1經(jīng)典LC：僅做為一種分離手段 柱內(nèi)徑13cm，固定相粒徑100m 且不均勻；常壓輸送流動(dòng)相； 柱效低（H，n）；分析周期長(zhǎng)；無(wú)法在線(xiàn)檢測(cè)。 2HPLC：分離和分析 柱內(nèi)徑26mm，固定相粒徑10m；高壓輸送流動(dòng)相；柱效高