乳酸菌在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的研究進展

1、乳酸菌在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的研究進展       作為最有前途的抗生素替代品，綠色微生物制劑乳酸菌在水產(chǎn)動物中的研究卻剛起步，特別是其對水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境的影響以及抗菌機理的基礎(chǔ)研究還很少，將其潛能變成現(xiàn)實尚有一段距離   文/湛江恒興南方海洋科技有限公司 王昊 李色東  中國水產(chǎn)科學研究院南海水產(chǎn)研究所李純厚李卓佳     乳酸菌(Lactic acid bacterium，LAB)是一群能從可發(fā)酵性碳水化合物中產(chǎn)生大量乳酸的革蘭氏陽性細菌的通稱。乳酸桿菌有44個種，連同亞種共51個種，是革蘭氏陽

2、性、無芽孢、細長、有彎曲的桿菌。有9個屬：其中5個屬呈球狀，如乳酸球菌(1actococcus)、鏈球菌(streptococcus)等；4個屬呈桿狀，如乳酸桿菌(1actobacillus)、雙歧桿菌(bifidobactrium)等。    乳酸菌是被人類作為食品微生物利用的一大類菌，尤其在增強牛奶保健功能、提高青貯品質(zhì)、提高畜禽生產(chǎn)性能、降低畜產(chǎn)品貯藏對肉品風味的影響等方面已取得較好效果，廣泛應用于食品、醫(yī)藥、輕工業(yè)和畜牧業(yè)等領(lǐng)域。目前在水產(chǎn)上對乳酸菌的報道主要集中于乳酸菌在水產(chǎn)動物腸胃和其他內(nèi)臟器官中的棲息情況。乳酸菌在水產(chǎn)上的應用較多，主要是拌入飼料一起

3、投喂給養(yǎng)殖動物，或做為EM菌的主導菌在水體潑灑。   1、生理功能及代謝產(chǎn)物    1.1 乳酸菌的生理功能    乳酸菌在動物體內(nèi)能發(fā)揮許多生理功能。大量研究資料表明，乳酸菌能調(diào)節(jié)動物胃腸道正常菌群、維持微生態(tài)平衡，從而改善胃腸道功能；提高食物消化率和生物效價；降低血清膽固醇，控制內(nèi)毒素；抑制腸道內(nèi)腐敗菌生長；提高機體免疫力等。乳酸菌通過發(fā)酵產(chǎn)生的有機酸、特殊酶系、細菌表面成分等物質(zhì)具有一定生理功能，可刺激組織發(fā)育，對機體的營養(yǎng)狀態(tài)、生理功能、細胞感染、藥物效應、毒性反應、免疫反應、腫瘤發(fā)生、衰老過程和應激反應等

4、產(chǎn)生作用。    1.2 乳酸菌的代謝產(chǎn)物    乳酸菌最終代謝產(chǎn)物除乳酸、乙酸外，還能代謝產(chǎn)生其他形式的有機酸、細菌素、過氧化氫、乙醇和羅伊氏素等多種抑菌物質(zhì)。這些代謝產(chǎn)物不僅能抑制致病菌的生長，對其近緣相關(guān)的種或菌株也有生長抑制作用。乳酸菌產(chǎn)生的乳酸現(xiàn)已證明無論是在體內(nèi)還是在體外都可以對大腸桿菌等革蘭氏陰性菌產(chǎn)生抑制作用。盡管乳酸抑制革蘭氏陰性菌的作用機理目前尚無明確結(jié)論，但其中的一個原因是乳酸菌發(fā)酵的代謝終產(chǎn)物之一是乳酸，乳酸的積累導致周圍環(huán)境pH值下降，降低氧化還原點位，可對許多革蘭氏陽性或陰性細菌產(chǎn)生廣泛的抑制作用。有研究證

5、明，雙歧桿菌在發(fā)酵過程中產(chǎn)生的未解離的乳酸是對潛在腸道致病菌和腐敗菌拮抗作用的主要成分。乳酸菌產(chǎn)生的細菌素是一大類具有抑菌活性的多肽或蛋白類物質(zhì)，除對近緣相關(guān)的菌株具有抑制效果外，某些細菌素如Nisin具有廣譜性的抑菌能力。1933年Whitehead H R等從乳酸菌分離出一類細菌素，在1947年將其命名為尼生素(Nisin)。1953年，尼生素首先在英國上市，隨后在48個國家開始利用尼生素，1988年尼生素通過美國FDA批準作為食品添加劑。乳酸菌產(chǎn)生的過氧化氫能夠激活牛乳中的過氧化氫酶硫氰酸系統(tǒng)，抑制和殺滅革蘭氏陰性菌、過氧化氫酶陽性細菌如假單孢菌屬、大腸桿菌類和沙門氏菌屬等。 

6、   Hemandez等將奶酪中分離到的植物乳桿菌進行抑菌研究，發(fā)現(xiàn)對許多革蘭氏陽性菌有抑制作用，并確定抑菌物質(zhì)是細菌素類物質(zhì)，并且該物質(zhì)在pH值1-9內(nèi)都具有很好的抑菌活性。Vizoso等發(fā)現(xiàn)從人糞便和發(fā)酵產(chǎn)品上分離到的兩株乳酸菌具有體外抑菌活性，并認為是乳酸菌產(chǎn)生的有機酸在起作用。Shahani等認為乳酸桿菌產(chǎn)生的復合物可以抑制其它微生物的生長，細菌素是最主要的，但過氧化氫、乳酸也有一定的作用。Stoffels等發(fā)現(xiàn)肉食桿菌生長的肉食素對其他乳酸菌的抑制作用非常明顯。2、對水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境的適應性    2.1 乳酸菌在水產(chǎn)動物體內(nèi)的定植狀況&

7、#160;   乳酸菌作為魚類益生菌，在腸道內(nèi)具有較好的定植能力，而且在水產(chǎn)動物中，這種定植無明顯的宿主特異性。Ringoe應用從大西洋鮭分離的廣布肉桿菌，研究在大菱鲆幼魚腸道內(nèi)的定植時，證明了這一點。王福強等研究表明，來源不同的鼠李糖乳桿菌和干酪乳桿菌均可在牙鲆消化道定植，乳酸桿菌定植和對弧菌產(chǎn)生抑制作用的主要部位在小腸。Joborn 等用肉桿菌來研究其在虹鱒腸道內(nèi)的定植和對魚類病原菌的抑制作用，結(jié)果表明肉桿菌可以在虹鱒腸道內(nèi)大量增殖并定植下來，但定植效果不佳，停喂肉桿菌3d后廣布肉桿菌的數(shù)量明顯下降。Rengpipat等用Bacillus 11養(yǎng)殖斑節(jié)對蝦也得到類似的結(jié)

8、果，抑制了水中弧菌數(shù)量的增長。陳營研究表明，通過在飼料中添加由單一鼠李糖乳桿菌P15制備的微生態(tài)制劑，證明鼠李糖乳桿菌P15可以在牙鲆仔稚魚腸道中定植，并能控制腸道中的弧菌數(shù)量。      2.2 水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境對乳酸菌的影響一般水產(chǎn)養(yǎng)殖在養(yǎng)成期間環(huán)境的溫度、鹽度和pH值的變動范圍分別為20-35和0-38、6.9-8.7。有研究表明，通過環(huán)境因子對菌株生長影響的研究表明，乳酸桿菌(Lactobacillus.spp)對水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境有很好的適應性。乳酸桿菌生長的最適溫度為30-40，在溶解氧高或低的條件下都能很好生長，也可在分子氧存在下進行厭氧生

9、活。在池塘養(yǎng)殖水體中，中下層水的溶解氧一般較低，病原菌容易滋生，如在其中投入乳酸桿菌使其成為優(yōu)勢菌，可抑制病原菌的繁殖。乳酸菌的其他菌株對水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境的適應性的研究鮮有，有待進一步研究。           2.3 水產(chǎn)養(yǎng)殖常用抗菌藥物和消毒劑對乳酸菌的影響    利用有益菌來抑制病原菌，預防病害發(fā)生現(xiàn)已成為一個新的研究熱點，在生產(chǎn)中的應用也日益廣泛，但利用藥物來預防和治療疾病仍是最主要的手段。各種有益菌對不同抗菌藥物的敏感性不一，同一種細菌的不同菌株對不同抗菌藥物

10、的敏感性也常存有差異，因此在應用上要考慮菌對藥物的敏感性，以達到最佳的使用效果。    李平蘭等就微生態(tài)制劑中5種乳酸菌對抗生素的敏感性進行了研究，結(jié)果表明長雙歧桿菌(B.longum)、外嗜酸乳桿菌(L.acidophitus)、植物乳桿菌(L.plantarum)、干酪乳桿菌(L.case)和糞腸球菌(E.faecalis)對頭孢素類、青霉素類、-內(nèi)酰胺酶抑制劑復合物中的某些抗生素均表現(xiàn)了一定的耐藥性，而5種乳酸菌對四環(huán)素類抗生素和大環(huán)內(nèi)酯類抗生素都敏感。馬艷等發(fā)現(xiàn)乳酸菌1菌株對鹽酸林可霉素、慶大霉素敏感，而對丁胺卡那霉素不敏感，并發(fā)現(xiàn)復合益生菌可以改變抗生素

11、對原單株菌的最低抑菌濃度，降低原單株菌對某些抗生素的敏感性。周海平通過乳酸桿菌(Lactobacillus.spp)對氟苯尼考、土霉素、二氧化氯、二溴海因、強力碘的敏感性實驗結(jié)果顯示，這些藥物對菌有一定的抑制作用。  3、乳酸菌研究進展及其應用    由于抗生素、激素類藥物在水產(chǎn)上的不合理使用，導致農(nóng)藥殘留問題對人類健康造成了巨大威脅。水產(chǎn)養(yǎng)殖領(lǐng)域，人們越來越提倡生態(tài)養(yǎng)殖技術(shù)。美國在FDA(1989)規(guī)定的40多種飼用微生物中有近30種是乳酸菌。我國農(nóng)業(yè)部在1994年批準使用的微生物品種有蠟樣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、乳酸桿菌、乳鏈球菌等，其中大

12、部分為乳酸菌。乳酸菌耐酸，在pH為3.0-4.5時仍可生長，能適應胃腸內(nèi)的酸性條件，飼喂后能在水產(chǎn)動物體內(nèi)迅速定植，因此無疑是一種理想的微生物制劑。乳酸菌在水產(chǎn)中的應用大致可分為以下幾個方面：    3.1 抑制病原菌，抗病害    乳酸菌能有效調(diào)整水產(chǎn)動物腸道的菌群平衡，通過營養(yǎng)競爭、附著位點競爭或分泌抗生素、細菌素等毒素殺死或抑制病原微生物，增強抗感染能力，調(diào)節(jié)機體腸粘膜的免疫活性，提高動物在遭受病害侵襲時的存活率。近年來，一些乳酸菌開始應用于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)，實踐證明應用乳酸菌防治水生動物疾病是可行的。  

13、0; 陳營等從健康牙鲆腸道中分離得到多種乳酸菌，且體外實驗表明對弧菌均有抑制作用。周海平為探明乳酸桿菌(Lactobacillus.spp)對水產(chǎn)養(yǎng)殖病害的生物防治功能，采用試管稀釋法和平板抑菌圈檢測法，探討了乳酸桿菌代謝產(chǎn)物對沙蠶弧菌(Vibrio nereis)、哈維氏弧菌(Vibrio harveyi)、溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)、副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、漂浮弧菌(Vibrio natriegen)的抑制能力，結(jié)果表明：乳酸桿菌對病原弧菌具有良好的抑制作用。Jiravanichpaisal等報道了乳酸桿菌作為有益菌可以用來防

14、止由發(fā)光細菌感染造成的斑節(jié)對蝦的白點病。楊鶯鶯等研究乳酸桿菌L1對致病弧菌的抑制作用，證明乳酸桿菌及代謝物質(zhì)對鯊魚弧菌和溶藻弧菌具有協(xié)同抑制作用。楊勇等證明乳酸菌代謝產(chǎn)物對鰻弧菌的生長具有非常顯著的抑制作用，該代謝產(chǎn)物對鰻弧菌的抑制效率在90%以上。姜英輝等研究了乳酸鏈球菌L3-18的培養(yǎng)及其對海洋弧菌的抑制作用。竇曉明就乳酸菌胞外產(chǎn)物對副溶血弧菌抑制作用的研究表明，3株乳酸菌（命名為A-1，A-2，A-3）胞外產(chǎn)物對副溶血弧菌 (Vibrio parahaemolyticus)有較強的抑制作用。    3.2 促進生長，提高免疫力  

15、0;  乳酸菌能分泌乳酸，產(chǎn)生多種消化酶，可幫助魚類消化吸收，促進生長。Byurl等從鲆魚分離并篩選出一菌株Lactobacillus sp.DS-12，它表現(xiàn)出強的抗菌活性，能抑制多種魚體病原菌（如鰻弧菌、嗜水氣單胞菌等）的生長，在2次各為期1個月的飼喂實驗中，他們發(fā)現(xiàn)飼喂含有DS-12菌株的試驗組，魚的平均體重的增加均比對照組的快，揭示了乳酸菌同時擁有既抑菌又促生長的雙重機能。Gildberg等用含有大西洋鱈魚內(nèi)臟提取出來的乳酸菌的飼料喂鱈魚苗，3個月后將魚苗放養(yǎng)在帶有強致病弧菌的環(huán)境中，能夠提高抗病率。Gatesoupe利用乳酸菌飼養(yǎng)的輪蟲作為大菱鲆仔魚的鮮活餌料，證明乳酸菌可

16、以提高仔魚對病原弧菌的抵抗力。Nikoskelainent等研究表明，給虹鱒投喂含有乳酸桿菌的餌料，可以提高它們的免疫力。桂遠明等報道乳酸菌等微生物制劑對鯉具有促生長和提高抗病力作用。      3.3 凈化養(yǎng)殖水體    向養(yǎng)殖水體投放有益菌（光合細菌、乳酸菌、芽孢桿菌、酵母菌等）及有益酶（蛋白分解酶、纖維素酶、植酸酶等）的復合制劑，不僅促進餌料生物大量繁殖、生長，而且可分解魚類殘餌、糞便及水中有機質(zhì)，改良水體環(huán)境，抑制水體中有害菌的繁殖生長，調(diào)節(jié)藻相平衡，控制有害菌藻。使用以乳酸菌為主的微生態(tài)制劑，可以有效降低

17、水中的亞硝酸鹽含量；而芽孢桿菌對于水體中氨態(tài)氮和有機物的分解作用比較明顯，可降低水體中氨態(tài)氮、亞硝酸鹽的含量，避免了傳統(tǒng)肥料高耗氧、破壞和污染水質(zhì)、高發(fā)病率的缺點。所以乳酸菌可與芽孢桿菌、光合細菌、反硝化菌等有益菌混合使用，作為養(yǎng)殖水體的水質(zhì)調(diào)控劑，改善水中生態(tài)環(huán)境，凈化水質(zhì)，促進魚蝦類健康生長。       周海平就乳酸桿菌對養(yǎng)殖水體，飼料的降解作用進行了深入研究，結(jié)果表明，各實驗組中的NO2-N、NO3-N、PO43-P從實驗第1天到第4天一直處于下降趨勢，而NH4+-N呈上升趨勢，對COD無降解能力，溫度、菌濃度、底物濃度對NO

18、2-N、NO3-N、PO43-P、NH4+-N降解率的影響是極其顯著的。沈南南研究了地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis，BL)、光合細菌(PSB)和乳酸桿菌(Lactobacillus spp.)對凡納濱對蝦(Litopenaeus vannamei)封閉式高密度養(yǎng)殖水質(zhì)的調(diào)控效果，結(jié)果表明，芽孢桿菌結(jié)合乳酸桿菌使用，可以明顯降低養(yǎng)殖水體氨氮等有害物質(zhì)的含量。    EM是由多種有益微生物組成的活菌制劑，在水產(chǎn)養(yǎng)殖上既可用作水質(zhì)凈化、改良劑，保持水質(zhì)穩(wěn)定，又可作為餌料拌合劑，增強養(yǎng)殖品種的免疫力，促進養(yǎng)殖品種的健康生長，從而提高產(chǎn)量和效益。

19、乳酸菌作為EM菌的主導菌應用于水質(zhì)凈化的效果良好。白維東在成魚養(yǎng)殖池中使用EM菌，實驗池溶氧量比對照池提高11.2%，NH4+-N和NO2-N含量分別降低了54%、55%，餌料系數(shù)降低8.2%，單位面積凈產(chǎn)量提高14.4%。黃永春報道EM制劑能降低建鯉養(yǎng)殖池氨氮。林新華等研究表明，經(jīng)復合EM處理后能使養(yǎng)殖水體達到無污染排放。      4 應用前景    從目前的研究報道來看，乳酸菌對動物免疫有多方面的調(diào)節(jié)作用，能顯著提高機體的免疫功能，尤其是在對病原菌的定植拮抗方面，這使對乳酸菌等益生菌研究成為當今生物技術(shù)的熱門課題之一。    作為最有前途的抗生素替代品，乳酸菌正以其獨特的優(yōu)勢影響著醫(yī)藥、食品、畜牧等多種產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。乳酸菌在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應用前景是誘人的，完全有可能取代目前所用的抗生素、化學促生素，