酸棗仁合劑的薄層鑒別及酸棗仁皂苷A的含量測定

1、酸棗仁合劑的薄層鑒別及酸棗仁皂苷A的含量測定    【摘要】  目的：建立酸棗仁合劑的鑒別和含量測定方法。方法：采用TLC法和HPLC法。結(jié)果：TLC法鑒別酸棗仁合劑中知母、茯苓和川芎等藥材；HPLC測定酸棗仁皂苷A的含量，酸棗仁皂苷A在0.551.1 mg/mL范圍內(nèi)線形關(guān)系良好（r0.9997），平均加樣回收率為100.45%，RSD為1.30%。結(jié)論：鑒別重復(fù)性好、專屬性強(qiáng)，含量測定方法簡便，準(zhǔn)確。 【關(guān)鍵詞】  酸棗仁合劑；薄層色譜法；高效液相色譜法；酸棗仁皂苷A    Abstract Obje

2、ctive:To identify Rhizoma Anemarrhenae, Poria and Rhizoma Chuanxiong, and to assay jujuboside A in Suanzaoren mixture. Methods:TLC and HPLC were used.Results:The spots of TLC were fairly clear. The HPLC method showed good repeatability. The linear range was 0.551.1 mg/mL, and the average recovery of

3、 jujuboside A was 100.45% with RSD of 1.30%. Conclusions:The method is simple, repeatable, accurate, and can effectively control the quality of Suanzaoren mixture.    Key words Suanzaoren mixture; TLC; HPLC; Jujuboside A    酸棗仁合劑源于酸棗仁湯，出自漢代張仲景金匱要略?血痹虛勞脈證并治第六。論文論文參考網(wǎng)方中酸棗

4、仁養(yǎng)肝血、安心神為君藥；川芎調(diào)血養(yǎng)肝、茯苓寧心安神為臣藥；知母滋陰降火、清熱除煩為佐藥；甘草和中緩肝為使藥。本方主治肝血不調(diào)、虛火內(nèi)擾心神所致的心煩失眠等癥。酸棗仁皂苷A為鎮(zhèn)靜催眠的有效成分之一，我們在文獻(xiàn)1方法的基礎(chǔ)上，改進(jìn)提取、純化方法，對酸棗仁合劑中酸棗仁皂苷A進(jìn)行了測定，并對處方中部分藥材進(jìn)行了薄層鑒別，結(jié)果較為滿意。    1  材料與儀器    LC?10A高效液相色譜儀（日本島津公司），電子天平（B?N型，梅特勒?餐欣?多儀器上海有限公司）。酸棗仁皂苷A對照品（734?9404），知母、茯苓和川芎對照藥材均購自

5、中國藥品生物制品檢定所，酸棗仁藥材自購，經(jīng)四川大學(xué)華西藥學(xué)院王天志教授鑒定。酸棗仁合劑為四川志遠(yuǎn)嘉寶藥業(yè)有限責(zé)任公司制備，其余試劑均為分析純。    2  薄層鑒別    2.1  知母的薄層鑒別    取酸棗仁合劑樣品20 mL，加乙醇40 mL，超聲處理30 min后，加入濃鹽酸2 mL，超聲處理30 min，過濾，濾液濃縮至約5 mL，加水10 mL，用苯萃取2次，每次20 mL，分取苯層，用1%氫氧化鈉溶液10 mL洗滌1次后，水洗3次，每次10 mL，苯萃取液水浴揮干，殘?jiān)?/p>

6、苯1 mL溶解即得。另取知母對照藥材3 g，用水50 mL回流提取1 h，過濾，濾液照供試品溶液方法制備知母對照藥材溶液。取上述兩種溶液各10 L，分別點(diǎn)于同一含0.4%CMC?Na的硅膠G薄層板上，以苯?脖?酮（101）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，于室溫、日光下檢視，樣品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，而陰性對照在相應(yīng)位置無此斑點(diǎn)。    2.2  茯苓的薄層鑒別    取酸棗仁合劑樣品20 mL，加乙酸乙酯30 mL，超聲處理30 min，取乙酸乙酯層，即得。另取茯苓對照藥材

7、2 g，加乙酸乙酯10 mL，超聲處理30 min，取乙酸乙酯層，即得茯苓對照藥材溶液。取上述兩種溶液各10 L，分別點(diǎn)于同一含0.4%CMC?Na的硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷?慘宜嵋陰?51）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下觀察，在與對照藥材色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，而陰性對照在相應(yīng)位置無此斑點(diǎn)。    2.3  川芎的薄層鑒別    取酸棗仁合劑樣品20 mL，加乙醚50 mL，超聲處理30 min，取乙醚層，減壓濃縮至干，殘?jiān)右宜嵋阴? mL溶解即得。另取川芎對照藥材3 g，加水50

8、 mL回流提取1 h，過濾，濾液同供試品溶液制備方法處理即得川芎對照藥材溶液。取上述兩種溶液各10 mL，分別點(diǎn)于同一含0.4%CMC?Na的硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷?慘宜嵋陰脖?醋酸（210.1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下觀察，在與對照藥材色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，而陰性對照在相應(yīng)位置無此斑點(diǎn)。論文參考網(wǎng)    3  酸棗仁皂苷A含量測定    3.1  色譜條件    采用Hypersil?C18（4.6 mm ID×150 mm

9、，5 m）色譜柱，以乙腈?菜?（3070）為流動相，檢測波長為204 nm，流速0.8 mL/min，柱溫25 。理論塔板數(shù)按酸棗仁皂苷A計(jì)算，不低于5 000，酸棗仁皂苷A與其相鄰色譜峰的分離度均大于1.5，見圖1。    圖1  酸棗仁皂苷A液相色譜圖    3.2  供試溶液的制備    取酸棗仁合劑供試品10 mL，置于處理好裝大孔樹脂（20 mm×150 mm），用60%乙醇洗柱至無色，再用蒸餾水洗柱至無色，備用的大孔樹脂上，依次用蒸餾水、20%乙醇、40%乙醇、6

10、0%乙醇洗滌小柱，分別洗至流出液無色，控制流出速度為23 mL/min，用液300 mL，收集60%乙醇洗脫成分，旋轉(zhuǎn)濃縮至干，殘?jiān)眉状既芙猓⒍ㄈ轂? mL，搖勻，離心，取上清液進(jìn)樣。    3.3  標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備    精密稱取酸棗仁皂苷A對照品0.0110 g，置10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，備用。分別精密吸取酸棗仁皂苷A對照品溶液（1.1 mg/mL）適量，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。以對照品峰面積為縱坐標(biāo)，以對照品量（mg/mL）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線得回歸方程：Y=1.677×

11、;105X-8.672×104（r0.9997）。酸棗仁皂苷A在0.551.1 mg/mL濃度范圍Y與X呈良好線性。    3.4  精密度試驗(yàn)    精密吸取對照品溶液10 L，進(jìn)樣5次，峰面積積分值的RSD為1.13%，表明儀器進(jìn)樣精密度良好。    3.5  重復(fù)性試驗(yàn)    取同一批樣品，制備6份供試樣品溶液，并測定其酸棗仁皂苷A含量，6份含量的RSD為0.99%。    3.6  加樣回收率試驗(yàn)&

12、#160;   取已知含量的一批酸棗仁合劑（0.233 mg/mL）10 mL，分別加入酸棗仁皂苷A溶液1.60、2.0、2.4 mL（濃度為1.2 mg/mL），按“供試溶液的制備”方法進(jìn)行處理測定并計(jì)算回收率，平均加樣回收率為100.45%，RSD為1.30%，見表1。    3.7  樣品的測定    取酸棗仁合劑供試品（批號為041101、041102、041103、050101、050102、050103）各10 mL，按“1.3.2項(xiàng)下”方法制備，并測定含量，結(jié)果分別為：0.231、0.234

13、、0.235、0.227、0.236和0.233 mg/mL。表1  酸棗仁皂苷A的加樣回收率注：酸棗仁合劑中酸棗仁皂苷A含量為0.233 mg/mL，平均加樣回收率為100.45%。    4  討論    酸棗仁中化學(xué)成分復(fù)雜，且酸棗仁皂苷A結(jié)構(gòu)中無共軛體系，紫外吸收波長較短，檢測極易受到干擾。對藥材的測定，采用石油醚脫脂，氨水對正丁醇層進(jìn)行堿化處理的方法，取得了很好的分離效果，且重現(xiàn)性良好。    酸棗仁合劑中，成分復(fù)雜，黃酮類成分在紫外區(qū)的干擾，處方中知母、甘草也含有皂苷，對酸棗仁皂苷A的測定影響很大，因此在純化過程中，既要排除黃酮類的干擾，也要排除其它皂苷的影響。    對供試樣品的預(yù)處理方法進(jìn)行了篩選，索氏提取的酸棗仁合劑供試品，用水飽和的正丁醇萃取，發(fā)現(xiàn)干擾明顯，酸棗仁皂苷A峰太小；選用大孔樹脂柱處理，其主要用于水溶性化合物的分離純化（因其在有機(jī)溶劑中的吸附能力極小），多用于皂苷及其它苷類化合物的分離。實(shí)驗(yàn)中，我們使用20%、40%、60%、80%乙醇分別洗脫，經(jīng)測定，20%乙醇能將大部分水溶性成分洗脫出來，60%乙醇基本將酸棗仁皂苷A洗脫。&