高中生物選修一--分解纖維素的微生物的分離

1、纖維二糖纖維二糖C C1 1酶、酶、CxCx酶酶葡萄糖苷酶葡萄糖苷酶葡萄糖葡萄糖纖維素纖維素取二支取二支20mL20mL的試管的試管實(shí)驗(yàn)：纖維素酶分解纖維素的實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)：纖維素酶分解纖維素的實(shí)驗(yàn)各加入一張濾紙條各加入一張濾紙條各加入各加入pH4.8pH4.8，物質(zhì)量為，物質(zhì)量為0.1mol/L0.1mol/L的醋酸醋酸鈉緩沖液的醋酸醋酸鈉緩沖液11ml11ml和和10ml10ml甲甲 乙乙在乙試管中加入在乙試管中加入1mL1mL纖維素酶纖維素酶兩支試管固定在錐形瓶中，放在兩支試管固定在錐形瓶中，放在140r/min140r/min的搖床上振蕩的搖床上振蕩1h1h結(jié)果：乙試管的濾紙條消失結(jié)果：乙試

2、管的濾紙條消失 討論討論：乙試管的濾紙條為什么會消失？甲試管的作用是：乙試管的濾紙條為什么會消失？甲試管的作用是什么？什么？提示：提示： 本實(shí)驗(yàn)的本實(shí)驗(yàn)的自變量是是纖維素酶的有無自變量的操縱方法是：在在一支試管中中添加適量（添加適量（1mL1mL）的纖維素酶溶液）的纖維素酶溶液，另一支試管不添加纖維素酶，但需不添加纖維素酶，但需加入等量的加入等量的緩沖液緩沖液，不能加入蒸餾水，否則會影響溶液的，不能加入蒸餾水，否則會影響溶液的pHpH。實(shí)驗(yàn)分析：實(shí)驗(yàn)分析：P P2727的小實(shí)驗(yàn)是如何構(gòu)成對照的小實(shí)驗(yàn)是如何構(gòu)成對照的？的？可根據(jù)是否可根據(jù)是否產(chǎn)生產(chǎn)生透明圈透明圈來篩選纖維來篩選纖維素分解菌素分解

3、菌培養(yǎng)基成分分析培養(yǎng)基成分分析培養(yǎng)基組成培養(yǎng)基組成提供主要的營養(yǎng)物質(zhì)提供主要的營養(yǎng)物質(zhì)纖維素粉纖維素粉 5g碳源（能源）碳源（能源）NaNO3 1g氮源、無機(jī)鹽氮源、無機(jī)鹽KCl 0.5g Na2HPO47H2O 1.2gKH2PO4 0.9g MgSO4 7H2O 0.5g無機(jī)鹽無機(jī)鹽酵母膏酵母膏 0.5g生長因子、生長因子、氮源氮源、少量碳源少量碳源水解酵素水解酵素 0.5g氮素、生長因子氮素、生長因子溶解后，蒸餾水定容至溶解后，蒸餾水定容至1000mL水水比較項(xiàng)目比較項(xiàng)目分解尿素的細(xì)菌分解尿素的細(xì)菌纖維素分解菌纖維素分解菌選選擇擇培培養(yǎng)養(yǎng)基基原理原理培養(yǎng)基培養(yǎng)基類型類型目的目的鑒鑒定定培

4、培養(yǎng)養(yǎng)基基原理原理現(xiàn)象現(xiàn)象方法方法將細(xì)菌涂布在只有將細(xì)菌涂布在只有尿素做氮源的選擇尿素做氮源的選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)基上將細(xì)菌涂布在只有將細(xì)菌涂布在只有纖維素粉做碳源的纖維素粉做碳源的選擇培養(yǎng)基上選擇培養(yǎng)基上固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基篩選菌株篩選菌株選擇培養(yǎng)選擇培養(yǎng)思考：本實(shí)驗(yàn)的流程與課題思考：本實(shí)驗(yàn)的流程與課題2 2中的實(shí)驗(yàn)流程有哪些中的實(shí)驗(yàn)流程有哪些異同？異同？ 課題課題2 2是將土樣制成的菌懸液直接涂布在是將土樣制成的菌懸液直接涂布在以尿以尿素為唯一氮源的選擇性培養(yǎng)基上，直接分離素為唯一氮源的選擇性培養(yǎng)基上，直接分離得得到菌落。到菌落。本課題通過本課題通過選擇培養(yǎng)，使纖維素分解菌

5、得到增選擇培養(yǎng)，使纖維素分解菌得到增殖后，殖后，再將菌液涂布在選擇培養(yǎng)基上。其他步再將菌液涂布在選擇培養(yǎng)基上。其他步驟基本一致。驟基本一致。 101102103104105106培養(yǎng)基組成培養(yǎng)基組成提供的主要營養(yǎng)物質(zhì)提供的主要營養(yǎng)物質(zhì)CMC-Na 510g碳源碳源酵母膏酵母膏 1g碳源碳源、氮源、生長因子、氮源、生長因子KH2PO4 0.25g無機(jī)鹽無機(jī)鹽土豆汁土豆汁 100mL碳源碳源、生長因子、生長因子瓊脂瓊脂 15g凝固劑凝固劑上述物質(zhì)溶解后，加蒸上述物質(zhì)溶解后，加蒸餾水定容至餾水定容至1000mL氫元素、氧元素氫元素、氧元素鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基的培養(yǎng)基(水溶性羧甲基纖維素鈉水溶性羧

6、甲基纖維素鈉)比較比較項(xiàng)目項(xiàng)目分解尿素的細(xì)菌分解尿素的細(xì)菌纖維素分解菌纖維素分解菌選選擇擇培培養(yǎng)養(yǎng)原理原理培養(yǎng)基類培養(yǎng)基類型型目的目的鑒鑒定定培培養(yǎng)養(yǎng)基基原原理理現(xiàn)現(xiàn)象象方方法法在細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)在細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)中，細(xì)菌合成的脲酶將尿素中，細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成了氨，氨會使培養(yǎng)基分解成了氨，氨會使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)，的堿性增強(qiáng)，pHpH升高。在培升高。在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，如養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，如果果pHpH升高指示劑會變紅升高指示劑會變紅剛果紅可以與纖維素形成剛果紅可以與纖維素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被纖維素酶催化分解后紅色纖維素酶催化分解后紅色復(fù)合物無法形成，培養(yǎng)基復(fù)合物無法形成，培養(yǎng)基上就會出現(xiàn)以纖維素分解上就會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈菌為中心的透明圈觀察菌落周圍是否有觀察菌落周圍是否有著色的環(huán)帶出現(xiàn)來鑒定尿素分解菌帶出現(xiàn)來鑒定尿素分解菌觀察菌落周圍是否出現(xiàn)觀察菌落周圍是否出現(xiàn)透明圈來篩選纖維素分解菌來篩選纖維素分解菌脲酶檢測法脲酶檢測法剛果紅染色法剛果紅染色法 為了確定分離得到的是纖維素分解菌，為了確定分離得到的是纖維素分解菌，還需要進(jìn)行還需要進(jìn)行_實(shí)驗(yàn)，纖維素酶的實(shí)驗(yàn)，纖維素酶的發(fā)酵方法有發(fā)酵方法有_ _ 發(fā)酵和發(fā)酵和_ _ 發(fā)酵。纖發(fā)酵。纖維