葡萄內(nèi)酯和馬爾敏的合成及活性研究

1、葡萄內(nèi)酯和馬爾敏的合成及活性研究         11-04-26 14:19:00     編輯：studa20           作者：張普照 黎艷剛 涂明珠 張亞梅 陳海芳 楊武亮【摘要】  目的研究葡萄內(nèi)酯和馬爾敏的合成方法及生物活性。方法以香葉醇和傘形酮為起始原料，通過(guò)氯代、成醚反應(yīng)合成葡萄內(nèi)酯，再經(jīng)Sharpless不對(duì)稱(chēng)烯烴羥基化反應(yīng)合成馬爾敏，采用1H-NMR

2、對(duì)化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定;通過(guò)體外藥理實(shí)驗(yàn)測(cè)定葡萄內(nèi)酯對(duì)小鼠胃腸蠕動(dòng)和大鼠腦組織勻漿中乙酰膽堿酯酶的影響。結(jié)果葡萄內(nèi)酯和馬爾敏的合成產(chǎn)率分別為50.67%，20.5%;葡萄內(nèi)酯促進(jìn)胃腸動(dòng)力作用強(qiáng)度為44%，低、中、高3個(gè)劑量組均能明顯抑制大鼠大腦組織勻漿乙酰膽堿酯酶的活性。結(jié)論該合成路線(xiàn)簡(jiǎn)單、產(chǎn)率高，能實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn);葡萄內(nèi)酯在促進(jìn)胃腸動(dòng)力和治療老年癡呆新藥研究具有潛在價(jià)值。 【關(guān)鍵詞】  葡萄內(nèi)酯; 馬爾敏; 合成; 胃腸動(dòng)力; 乙酰膽堿酯酶Abstract：Objective To study the synthesis and activity of auraptene and m

3、armin.MethodsAuraptene was prepared by chlorinenation and etherification with geraniol and umbelliferone as starting material.Marmin was synthesized by sharpless aymmetric dhydroxylation with auraptene as material. The structures of products were identified by 1H-NMR spectra. The gastrointestinal pr

4、opulsive motivity and acetylcholinesterase inhibition of auraptene were determined in vitro.ResultsTheir yield reached 50.67%, 20.5%,respectively.The bioactivity results indicated that auraptene showed similar gastrointestinal propulsive motivity with domperidone and the propulsive rate was higher t

5、han 44%.The low, middle and high doses of auraptene had the inhibitory effects on acetylcholinesterase in rat brain(P<0.5).ConclusionThis synthetic route has advantages of convenience,simple operation and high yield and is suitable for industrial manufacture.It has the potentiality in the study o

6、n medicine of the gastrointestinal propulsive motivity and Alzheimer's disease.Key words：Auraptene; Marmin; Gastrointestinal Motility; Synthesis; Acetylcholinesterase葡萄內(nèi)酯和馬爾敏是從葡萄皮和柑桔屬植物中分離得到的，其生物活性近年來(lái)引起了研究人員的關(guān)注，文獻(xiàn)報(bào)道馬爾敏和葡萄內(nèi)酯具有顯著的抗腫瘤、神經(jīng)保護(hù)、抗炎和自由基清除等活性16。我們通過(guò)動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)葡萄內(nèi)酯具有促進(jìn)胃腸動(dòng)力作用，兩者很可能成為新藥候選化合物，然

7、而在植物中的含量均較低，影響對(duì)其的開(kāi)發(fā)利用。我們對(duì)提取工藝進(jìn)行優(yōu)化后，雖能從枳殼等柑桔屬植物中提取分離到千克級(jí)的葡萄內(nèi)酯，然而提取費(fèi)用較高;與葡萄內(nèi)酯相比，馬爾敏的植物來(lái)源更少，在植物中的含量更低。所以，開(kāi)發(fā)葡萄內(nèi)酯和馬爾敏的化學(xué)合成方法既滿(mǎn)足現(xiàn)實(shí)的迫切需要，又有著潛在的經(jīng)濟(jì)利益和學(xué)術(shù)價(jià)值。據(jù)文獻(xiàn)與專(zhuān)利檢索得知，目前尚無(wú)有關(guān)葡萄內(nèi)酯化學(xué)合成方法的報(bào)道，馬爾敏的化學(xué)合成方法雖多有報(bào)道，但合成路線(xiàn)較復(fù)雜，收率較低，無(wú)法實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)7，8。本文結(jié)合手性合成的新研究成果，提出了全新的合成路線(xiàn)，合成路線(xiàn)如圖1所示，以香葉醇和傘形酮為初始原料，通過(guò)氯代、成醚反應(yīng)合成出葡萄內(nèi)酯(3)，再經(jīng)Sharples

8、s不對(duì)稱(chēng)烯烴羥基化反應(yīng)，合成馬爾敏(4)，步驟少，目標(biāo)化合物收率較高，適合工業(yè)化生產(chǎn)。圖1 葡萄內(nèi)酯和馬爾敏合成路線(xiàn)1 儀器與材料Bruker-Avance-400核磁共振儀(TMS為內(nèi)標(biāo))，722可見(jiàn)分光光度計(jì)(上海欣茂儀器有限公司制造)，DY89-1型電動(dòng)玻璃勻漿器(寧波新芝生物科技股份有限公司);氫溴酸加蘭他敏注射液(上海旭東海普藥業(yè)有限公司)，乙酰膽堿酯酶測(cè)定試劑盒(南京建成生物工程研究所第一分所)，蛋白定量測(cè)定盒(南京建成生物工程研究所第一分所)，香葉醇(sigma試劑)，三溴化磷(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)，7-羥基香豆素(AR，上海晶純?cè)噭┯邢薰?，AD-mix-(sigma試

9、劑)，其余試劑均為分析純。動(dòng)物：清潔級(jí)KM小鼠80只(雌雄各半，體質(zhì)量2022 g，江西省實(shí)驗(yàn)大小鼠生產(chǎn)基地提供);嗎丁啉(西安楊森制藥有限公司)。2 方法2.1 葡萄內(nèi)酯和馬爾敏的合成取香葉醇5.0 g(0.032 mol)溶于100 ml無(wú)水石油醚中，加熱溶解后，冰鹽浴下加入吡啶2.6 ml，攪拌下緩慢滴加含有PBr3 3.5 g(0.013 mol)的石油醚溶液26 ml，冰鹽浴下反應(yīng)3 h后，向其中加入10 ml水和80 ml甲醇的混合液，繼續(xù)攪拌5 min，分出有機(jī)層(上層)，用飽和NaHCO3溶液洗至pH=7，然后水洗，無(wú)水Na2SO4干燥，減壓濃縮得無(wú)色油狀液體5.5 g，粗產(chǎn)率

10、為78%。2.2 葡萄內(nèi)酯的活性測(cè)試啉組(6 mg/kg)，葡萄內(nèi)酯低劑量組(0.6 mg/kg)，中劑量組(1.2 mg/kg)，高劑量組(2.4 mg/kg)。各組小鼠禁食不禁水12 h，次日灌胃給藥一次(0.4 ml/20 g)，過(guò)60 min后灌服阿拉伯膠活性炭粉混合物(0.3 mL/只)，20 min后處死小鼠，立即取出胃腸，平鋪，測(cè)定碳末前端至幽門(mén)的距離和小腸全長(zhǎng)，以?xún)烧咧扔?jì)算推進(jìn)百分率。用于觀察小鼠胃腸推進(jìn)功能的指示劑為阿拉伯膠活性炭粉混合物 (2.5 g纖維鈉加水62.5 ml，加入奶粉4 g、糖2 g、淀粉2 g、活性炭0.75 g，攪拌混勻，配成75 ml的糊狀物)。小腸推進(jìn)率(%)=(碳糊移動(dòng)距離/幽盲全長(zhǎng))×100%蛋白標(biāo)含量=測(cè)定管OD值-空白