腫瘤標志物（課堂PPT）

1、1張張 鵬鵬 主任技師主任技師天津醫(yī)科大學腫瘤醫(yī)院天津醫(yī)科大學腫瘤醫(yī)院2人體癌癥地圖人體癌癥地圖3在腫瘤發(fā)生和增殖過程中，由腫瘤細胞合在腫瘤發(fā)生和增殖過程中，由腫瘤細胞合 成、釋放、或者是宿主對腫瘤反應產(chǎn)生的成、釋放、或者是宿主對腫瘤反應產(chǎn)生的 一類生化物質一類生化物質在血液、體液及組織中腫瘤標志物的定量在血液、體液及組織中腫瘤標志物的定量 或定性檢測可以作為腫瘤篩查（僅或定性檢測可以作為腫瘤篩查（僅AFPAFP與與 PSAPSA用于高危人群）、鑒別診斷、用于高危人群）、鑒別診斷、治療后治療后 病情監(jiān)測及預后判斷的標志與依據(jù)病情監(jiān)測及預后判斷的標志與依據(jù)腫瘤標志物腫瘤標志物 【tumor ma

2、rkers TM】4腫瘤標志物應用的一般準則腫瘤標志物應用的一般準則是大分子物質是大分子物質( (多為糖蛋白或脂蛋白成分多為糖蛋白或脂蛋白成分),),其在外周血其在外周血 和和 / / 或 其 他 體 液 中 的 表 達 和 濃 度 變 化 與 惡或 其 他 體 液 中 的 表 達 和 濃 度 變 化 與 惡 性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關系密切性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關系密切在腫瘤細胞表面或腫瘤細胞內合成，或通過其它細胞誘在腫瘤細胞表面或腫瘤細胞內合成，或通過其它細胞誘 導而成導而成 用 于 診 斷 的用 于 診 斷 的 “ 理 想 標 志 物理 想 標 志 物 ” 應 具 備 ： 僅 在 細 胞應 具 備

3、 ： 僅 在 細 胞 惡 變 后 才 產(chǎn) 生 、 分 泌 到 血 中 ， 濃 度 可 達 被 檢 測惡 變 后 才 產(chǎn) 生 、 分 泌 到 血 中 ， 濃 度 可 達 被 檢 測 到；一經(jīng)檢測即可知腫瘤發(fā)生的部位到；一經(jīng)檢測即可知腫瘤發(fā)生的部位5目前臨床應用腫瘤標志物現(xiàn)狀目前臨床應用腫瘤標志物現(xiàn)狀理想形式理想形式特異性特異性100%真陰性真陰性100%假陽性假陽性 0%健康人健康人臨界值臨界值敏感性敏感性100%真陽性真陽性100%假陰性假陰性 0%腫瘤患者腫瘤患者實際狀況實際狀況假陰性假陰性假陽性假陽性臨界值臨界值敏感性敏感性100%特異性特異性- 60%健康人健康人腫瘤患者腫瘤患者特異性特

4、異性100%敏感性敏感性- 50%敏感性上升敏感性上升特異性上升特異性上升腫瘤標志物參數(shù)在健康人和腫瘤患者兩組人群間的區(qū)別腫瘤標志物參數(shù)在健康人和腫瘤患者兩組人群間的區(qū)別實際狀態(tài)：假陰性和假陽性在選擇臨界值中的作用：實際狀態(tài)：假陰性和假陽性在選擇臨界值中的作用：特異性越高，敏感特異性越高，敏感性越低，反之亦然性越低，反之亦然6腫瘤標志物檢測質量標準腫瘤標志物檢測質量標準 TMTM的診斷數(shù)值取決于其敏感性和特異性的診斷數(shù)值取決于其敏感性和特異性 TMTM的特異性是：在健康人或良性疾病患者的特異性是：在健康人或良性疾病患者 所檢測到的真陰性結果發(fā)生率，即所檢測到的真陰性結果發(fā)生率，即假陽性假陽性

5、結果百分率越低，特異性越好結果百分率越低，特異性越好 TMTM的敏感率是腫瘤患者檢測陽性結果的百分率的敏感率是腫瘤患者檢測陽性結果的百分率47TM敏感性和特異性在診斷上的意義敏感性和特異性在診斷上的意義關鍵依賴于腫瘤分期和對照組的選擇，只有關鍵依賴于腫瘤分期和對照組的選擇，只有 腫瘤分期確定后，敏感性的數(shù)據(jù)才是可靠的腫瘤分期確定后，敏感性的數(shù)據(jù)才是可靠的只有對照組有明確限定特征，其特異性才有只有對照組有明確限定特征，其特異性才有 意義意義目前研究結果不僅是特異性和敏感性，還應目前研究結果不僅是特異性和敏感性，還應 指出群體研究中的個體結果以及普遍的分類指出群體研究中的個體結果以及普遍的分類8T

6、M的臨界值設定原則的臨界值設定原則 臨 界 值 是 指 某 一臨 界 值 是 指 某 一 T M 在 正 常 人 或 良 性 疾 病 患 者 中在 正 常 人 或 良 性 疾 病 患 者 中 的假定上限值的假定上限值 臨 界 值 無 固 定 數(shù) 值 ， 可 隨 試 驗 的 目 的 而 改 變 ；臨 界 值 無 固 定 數(shù) 值 ， 可 隨 試 驗 的 目 的 而 改 變 ； 鑒鑒 定 盡 可 能 多 的 腫 瘤 患 者 ， 降 低 臨 界 值 以 增 加 其 敏定 盡 可 能 多 的 腫 瘤 患 者 ， 降 低 臨 界 值 以 增 加 其 敏 感性（假陽性感性（假陽性 ，特異性，特異性 ） 最

7、大 可 能 地 指 示 出 腫 瘤 發(fā) 生 ， 臨 界 值 可 設 定 得 高最 大 可 能 地 指 示 出 腫 瘤 發(fā) 生 ， 臨 界 值 可 設 定 得 高 些 ， 以 增 加 其 特 異 性 （ 假 陰 性些 ， 以 增 加 其 特 異 性 （ 假 陰 性 ， 敏 感 性， 敏 感 性 ） T M 的 診 斷 價 值 很 大 程 度 上 取 決 于 臨 界 值 的 選 擇 ；的 診 斷 價 值 很 大 程 度 上 取 決 于 臨 界 值 的 選 擇 ； 在 相 對 于 健 康 人 和 良 性 疾 病 患 者 特 異 性 為在 相 對 于 健 康 人 和 良 性 疾 病 患 者 特 異 性

8、 為 9 5 % 的的 臨 界 值 水 平 上 比 較 其 數(shù) 據(jù) ， 可 提 高 此臨 界 值 水 平 上 比 較 其 數(shù) 據(jù) ， 可 提 高 此 T M 的 敏 感 性的 敏 感 性9特異性、敏感性及陰性和陽性預期值定義特異性、敏感性及陰性和陽性預期值定義特異性特異性=真陰性結果數(shù)真陰性結果數(shù)真陰性結果數(shù)真陰性結果數(shù)+假陽性結果數(shù)假陽性結果數(shù)敏感性敏感性=真陰性結果數(shù)真陰性結果數(shù)真陽性結果數(shù)真陽性結果數(shù)+假陰性結果數(shù)假陰性結果數(shù)陽性預期值陽性預期值=真陽性結果數(shù)真陽性結果數(shù)真陽性結果數(shù)真陽性結果數(shù)+假陽性結果數(shù)假陽性結果數(shù)陰性預期值陰性預期值=真陰性結果數(shù)真陰性結果數(shù)真陰性結果數(shù)真陰性結果

9、數(shù)+假陰性結果數(shù)假陰性結果數(shù)10臨床實驗室選用腫瘤標志物試驗的要求臨床實驗室選用腫瘤標志物試驗的要求可靠性和重復性可靠性和重復性批內變異批內變異 5%批間變異批間變異10%寬分析范圍寬分析范圍合理收費和減輕工作人員負擔合理收費和減輕工作人員負擔高特異性高特異性95%高敏感性高敏感性50%最佳陽性和陰性預期值（最佳陽性和陰性預期值（PV）與腫瘤大小的相關性與腫瘤大小的相關性本地區(qū)適合的試劑和批號本地區(qū)適合的試劑和批號敏感性（敏感性（%）特異性（特異性（%）10080-60-40-20-0100 80 60 40 20 0標志標志A標志標志B兩條兩條ROC（接受器工作特性）曲線，（接受器工作特性）

10、曲線，A在對照組和惡性腫瘤之間分布好，在對照組和惡性腫瘤之間分布好，B不能進行分布不能進行分布11腫瘤胚胎性抗原腫瘤胚胎性抗原 甲胎蛋白（甲胎蛋白（AFP）、癌胚抗原（）、癌胚抗原（CEA）異位激素異位激素 絨毛膜促性腺激素（絨毛膜促性腺激素（HCG）、促腎上腺皮質激素）、促腎上腺皮質激素 （ACTH）、降鈣素）、降鈣素酶和同工酶酶和同工酶 乳酸脫氫酶（乳酸脫氫酶（LDH） 神經(jīng)元特異性烯醇化酶（神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE） 前列腺酸性磷酸酶（前列腺酸性磷酸酶（PAP）血漿蛋白血漿蛋白 2巨球蛋白（巨球蛋白（PsM）細胞代謝產(chǎn)物細胞代謝產(chǎn)物 脂質相關涎酸脂質相關涎酸腫瘤抗原腫瘤抗原 CAl9

11、9、CAl25癌基因和抑癌基因蛋白產(chǎn)物癌基因和抑癌基因蛋白產(chǎn)物 cmyc、ras、p53、Rb微量元素微量元素 砷、銅、鐵、硒、鋅砷、銅、鐵、硒、鋅腫瘤標志物分類腫瘤標志物分類12生化特性：生化特性： 糖蛋白，糖蛋白，4560%糖，電泳糖，電泳遷移率，遷移率，6個個 抗原決定基抗原決定基分子量：分子量： 180,000發(fā)生部位：發(fā)生部位： 胚胎及胎兒腸黏膜胚胎及胎兒腸黏膜參考值范圍：參考值范圍：3ng/ml臨床應用：臨床應用： 監(jiān)測結直腸癌、胃癌、乳腺癌和支氣管監(jiān)測結直腸癌、胃癌、乳腺癌和支氣管 癌病程及療效癌病程及療效影響因素：影響因素： 5%吸煙者檢測值可至吸煙者檢測值可至2.55ng/m

12、l， 1%至至1020ng/ml；肝炎疾病可使；肝炎疾病可使CEA 水平短暫升高水平短暫升高癌胚抗原癌胚抗原 【CEA】99mTc(鍀）標記抗癌胚抗原單抗C50片段Fab13生化特性：生化特性： 糖蛋白，糖蛋白，4%糖，電泳糖，電泳-1-遷移率遷移率分子量：分子量： 70，000發(fā)生部位：發(fā)生部位： 卵黃囊、胚胎肝卵黃囊、胚胎肝參考值范圍：參考值范圍：15ng/ml臨床應用：臨床應用： 發(fā)現(xiàn)原發(fā)性肝細胞癌發(fā)現(xiàn)原發(fā)性肝細胞癌,監(jiān)測治療效果監(jiān)測治療效果;用用 于診斷生殖細胞腫瘤于診斷生殖細胞腫瘤影響因素：影響因素： 肝炎疾病可使肝炎疾病可使AFP水平短暫升高水平短暫升高;AFP可通過胎盤可通過胎盤

13、,妊娠妊娠3236周可達高峰；羊水中周可達高峰；羊水中AFP濃度與胎兒身長與孕周呈負相關（其濃度與胎兒身長與孕周呈負相關（其95%參考上限參考上限5500200ng/ml，2441孕周），于正常提示胎兒畸形、死胎、無腦兒和開孕周），于正常提示胎兒畸形、死胎、無腦兒和開放性神經(jīng)缺損等放性神經(jīng)缺損等甲胎蛋白甲胎蛋白【AFP】肝癌細胞AFP+HCC患者外周血AFP mRNA RT-PCR （反轉錄）產(chǎn)物電泳圖譜14生化特性：生化特性： 單鏈糖蛋白，前列腺分泌產(chǎn)物單鏈糖蛋白，前列腺分泌產(chǎn)物分子量：分子量： 36，000發(fā)生部位：發(fā)生部位： 前列腺分泌腺管前列腺分泌腺管參考值范圍：參考值范圍：3.7ng

14、/ml臨床應用：臨床應用： 監(jiān)測前列腺癌監(jiān)測前列腺癌影響因素：影響因素： 具有組織特異性，但不是腫瘤所特異具有組織特異性，但不是腫瘤所特異 的，注意：應在的，注意：應在直腸癌指診前取血直腸癌指診前取血， 前列腺癌患者多高于前列腺癌患者多高于10ng/ml前列腺特異抗原前列腺特異抗原 【 t-PSA】PCR及重疊延伸產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳 構建抗前列腺特異抗原(PSA)單鏈抗體（scFv）/人羧肽酶A（hCPA） 融合 基因 總PSA（t-PSA）中80%以結合形式存在，稱復合PSA（c-PSA）；20%以游離形式存在，稱游離PSA（f-PSA）；t-PSA及f-PSA升高，而f-PSA/t-PS

15、A比值降低，提示前列腺癌當總PSA在3.010.0ng/ml時，f-PSA/t-PSA比值低于0.190.10時，前列腺癌的可能性較大15生化特性生化特性： 糖蛋白，由兩個單克隆抗體：糖蛋白，由兩個單克隆抗體： 1.115D8抗乳脂膜及抗乳脂膜及2.DF3抗乳腺癌抗乳腺癌 細胞系所證實細胞系所證實分子量：分子量： 115D8： 400，000；DF3290，000發(fā)生部位：發(fā)生部位： 乳腺癌細胞和某些上皮細胞乳腺癌細胞和某些上皮細胞參考值范圍：參考值范圍：28U/ml臨床應用：臨床應用： 監(jiān)測乳腺癌療效監(jiān)測乳腺癌療效影響因素：影響因素： 與與CEA聯(lián)合檢測聯(lián)合檢測癌抗原癌抗原15-3 【CA1

16、5-3】糖與多肽連接的兩種方式 ？是是1984年由年由Kufer和和Hilkens發(fā)現(xiàn)，是由鼠抗人乳腺癌肝發(fā)現(xiàn)，是由鼠抗人乳腺癌肝細胞轉移株的膜的單克隆抗體細胞轉移株的膜的單克隆抗體DF3制備的制備的16生化特性：生化特性： 糖脂糖脂,Lewis()血型決定基半抗原血型決定基半抗原分子量：分子量： 抗原抗原:36,000;粘蛋白粘蛋白:106D發(fā)生部位：發(fā)生部位： 各種腫瘤各種腫瘤,在胎兒胃腸道上皮細胞在胎兒胃腸道上皮細胞,許多許多 粘膜細胞粘膜細胞參考值范圍：參考值范圍：37U/ml臨床應用：臨床應用： 監(jiān)測胰腺癌療效監(jiān)測胰腺癌療效影響因素：影響因素： 結直腸結直腸TM的第二選擇的第二選擇糖

17、類抗原糖類抗原19-9 【CA19-9】是是1981年由年由Koprowski從大腸腺癌細胞系和從大腸腺癌細胞系和免疫鼠雜交瘤產(chǎn)物分離而成免疫鼠雜交瘤產(chǎn)物分離而成17生化特性：生化特性： 糖蛋白糖蛋白,以卵巢癌細胞系免疫所獲以卵巢癌細胞系免疫所獲 單克隆抗體所證實單克隆抗體所證實分子量：分子量： 200,000發(fā)生部位：發(fā)生部位： 卵巢癌卵巢癌(膜結合物膜結合物),胎兒和成人支氣胎兒和成人支氣 管正常上皮細胞管正常上皮細胞參考值范圍：參考值范圍：35U/ml (65U/ml)臨床應用：臨床應用： 監(jiān)測卵巢癌病程及療效，透明細胞癌，子宮內膜癌、輸卵監(jiān)測卵巢癌病程及療效，透明細胞癌，子宮內膜癌、輸

18、卵 管埃及未分化卵巢癌明顯升高管埃及未分化卵巢癌明顯升高影響因素：影響因素： 來源于體腔上皮細胞衍生物的分化抗原來源于體腔上皮細胞衍生物的分化抗原(Mller管上皮管上皮),特特 異性低；血清濃度輕微升高正常婦女，以及良性卵巢疾患，異性低；血清濃度輕微升高正常婦女，以及良性卵巢疾患， 懷孕前懷孕前3個月、行經(jīng)期、肝硬化、子宮纖維變性、急性輸卵個月、行經(jīng)期、肝硬化、子宮纖維變性、急性輸卵 管炎、胸膜炎和心包感染等也稍高。管炎、胸膜炎和心包感染等也稍高。 糖類抗原糖類抗原125 【 CA125】1981年由年由Bast發(fā)現(xiàn)的由鼠抗人乳頭狀囊性卵巢上皮細胞系發(fā)現(xiàn)的由鼠抗人乳頭狀囊性卵巢上皮細胞系OC

19、125制備而成制備而成18生化特性：生化特性： 烯醇化酶二聚體烯醇化酶二聚體分子量：分子量： 87,000發(fā)生部位：發(fā)生部位： 神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)元和神經(jīng)內分泌細胞神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)元和神經(jīng)內分泌細胞,紅細胞紅細胞,血小板血小板參考值范圍：參考值范圍：12.5ng/ml 臨床應用：臨床應用： 神經(jīng)元特異性烯醇化酶是小細胞肺癌神經(jīng)元特異性烯醇化酶是小細胞肺癌(SCLC)和神經(jīng)母細胞瘤的腫和神經(jīng)母細胞瘤的腫瘤標志物，可用于鑒別診斷、病情監(jiān)測、療效評價和復發(fā)預報。用神經(jīng)元特異性瘤標志物，可用于鑒別診斷、病情監(jiān)測、療效評價和復發(fā)預報。用神經(jīng)元特異性烯醇化酶監(jiān)測小細胞肺癌的復發(fā)，比臨床確定復發(fā)要早烯醇化酶監(jiān)測小

20、細胞肺癌的復發(fā)，比臨床確定復發(fā)要早412周。神經(jīng)元特異性周。神經(jīng)元特異性烯醇化酶還可用于神經(jīng)母細胞瘤和腎母細胞瘤的鑒別診斷，前者神經(jīng)元特異烯醇化酶還可用于神經(jīng)母細胞瘤和腎母細胞瘤的鑒別診斷，前者神經(jīng)元特異性烯醇化酶異常增高而后者增高不明顯。性烯醇化酶異常增高而后者增高不明顯。增高：見于小細胞肺癌（最敏感最特異增高：見于小細胞肺癌（最敏感最特異的腫瘤標志物之一）的腫瘤標志物之一） 、神經(jīng)母細胞瘤、神經(jīng)內分泌細胞腫瘤（如嗜鉻細胞、神經(jīng)母細胞瘤、神經(jīng)內分泌細胞腫瘤（如嗜鉻細胞瘤、胰島細胞瘤、黑色素瘤）等瘤、胰島細胞瘤、黑色素瘤）等影響因素：影響因素： 不要將血放置太久，否則將出現(xiàn)假高值；一不要將血放

21、置太久，否則將出現(xiàn)假高值；一 小時內離心；檢測小時內離心；檢測SCLC時，與時，與CEA聯(lián)合應用聯(lián)合應用神經(jīng)特異性烯醇化酶神經(jīng)特異性烯醇化酶 【 NSE】19生化特性：生化特性： 糖蛋白激素，由兩個非共價結合的亞單糖蛋白激素，由兩個非共價結合的亞單 位組成，位組成，a a ，分子量：分子量： a a：14,000；：24,000發(fā)生部位：發(fā)生部位： 胎盤合體滋養(yǎng)層胎盤合體滋養(yǎng)層,滋養(yǎng)層組織中的胚細胞滋養(yǎng)層組織中的胚細胞 腫瘤腫瘤,合體滋養(yǎng)層巨細胞合體滋養(yǎng)層巨細胞(精原細胞來源精原細胞來源 許多中空器官的上皮細胞成分許多中空器官的上皮細胞成分)參考值范圍：參考值范圍：男性男性:05mU/ml 臨

22、床應用：臨床應用： 非精原細胞瘤胚芽細胞瘤非精原細胞瘤胚芽細胞瘤(4886%),睪睪 丸或胎盤絨毛膜腫瘤丸或胎盤絨毛膜腫瘤(100%),胞蟲囊狀胞蟲囊狀 痣痣(97%),精原細胞瘤精原細胞瘤(合并腫瘤合并腫瘤)(714%)人絨毛膜促性腺激素人絨毛膜促性腺激素【HCG】RNA的甲醛變性膠電泳結果，可見清晰的18S、28S兩條帶及其距加樣孔的距離 PCR擴增后進行PAGE電泳及放射自顯影結果箭頭所示條帶T26只在絨癌中顯示，在正常絨毛中不顯示 20生化特性：生化特性： 增生性抗原增生性抗原,多肽，由多肽，由B1、B2和和C三個亞基組成，其三個亞基組成，其 活性主要在活性主要在B1分子量：分子量：

23、17,00043,000發(fā)生部位：發(fā)生部位： 卵黃囊卵黃囊,胚胎肝胚胎肝參考值范圍：參考值范圍：80U/L臨床應用：臨床應用： 膀胱癌？膀胱癌？正常人陽性率正常人陽性率4.7%。但有相當一部分非惡性腫瘤。但有相當一部分非惡性腫瘤患者血清中有患者血清中有TPA存在，其陽性率約為存在，其陽性率約為14%35%，以下呼吸道、肝及，以下呼吸道、肝及尿路感染者多見，故尿路感染者多見，故TPA亦非腫瘤所特有的標志。但亦非腫瘤所特有的標志。但在惡性腫瘤者中，在惡性腫瘤者中，TPA的增高往往是持續(xù)性的，因此，若進行連續(xù)監(jiān)測，常常有利于惡性的增高往往是持續(xù)性的，因此，若進行連續(xù)監(jiān)測，常常有利于惡性腫瘤與非惡性病

24、變的鑒別腫瘤與非惡性病變的鑒別 影響因素：影響因素： 測定值測定值80:膀胱、支氣管、卵巢、胃癌，可能為肝，腎，膀胱、支氣管、卵巢、胃癌，可能為肝，腎，肺等疾病；特異性低肺等疾??；特異性低組織多肽抗原組織多肽抗原【TPA】21生化特性：生化特性： 多肽（多肽（32個氨基酸）個氨基酸）分子量：分子量： 3,500發(fā)生部位：發(fā)生部位： C細胞，胸腺也有分泌降鈣素的機能細胞，胸腺也有分泌降鈣素的機能 參考值范圍：參考值范圍： 100pg/ml臨床應用：臨床應用： 甲狀腺髓樣癌甲狀腺髓樣癌：此種癌起源于：此種癌起源于甲狀腺甲狀腺濾泡旁細胞（濾泡旁細胞（C細胞），可產(chǎn)生多種生物活性物質，其中以降鈣素為主

25、?；颊哐寮毎?，可產(chǎn)生多種生物活性物質，其中以降鈣素為主?；颊哐褰碘}素水平高于正常數(shù)十到數(shù)百倍。如經(jīng)手術治療，則降鈣素水平降鈣素水平高于正常數(shù)十到數(shù)百倍。如經(jīng)手術治療，則降鈣素水平恢復正?；謴驼Ｓ绊懸蛩兀河绊懸蛩兀?適用于危險人群篩查和輔助診斷；適用于危險人群篩查和輔助診斷；肺小細胞癌可產(chǎn)生肺小細胞癌可產(chǎn)生多種激素，其中包括降鈣素多種激素，其中包括降鈣素 降鈣素降鈣素22生化特性：生化特性： 糖蛋白糖蛋白,即由兩個單克隆抗體所識別的即由兩個單克隆抗體所識別的 TAG72:1:CC49,2:B72-3分子量：分子量： 400,000發(fā)生部位：發(fā)生部位： 上皮細胞上皮細胞參考值范圍：參考值范

26、圍： 3U/ml臨床應用：臨床應用： 胃癌胃癌,卵巢粘液癌卵巢粘液癌影響因素影響因素: 與與CEA聯(lián)合檢測胃癌聯(lián)合檢測胃癌,卵巢癌的卵巢癌的 第二選擇標志物第二選擇標志物癌抗原癌抗原72-4 【 CA72-4】1989年由年由Gero首先測定首先測定23生化特性：生化特性： 與與IgG分子的重鏈和輕鏈的分子的重鏈和輕鏈的C片段同型片段同型,與與 HLA共同片段的部分相同共同片段的部分相同分子量：分子量： 11,800發(fā)生部位：發(fā)生部位： 淋巴細胞淋巴細胞,巨嗜細胞和一些上皮細胞表面巨嗜細胞和一些上皮細胞表面參考值范圍：參考值范圍：1.22.5mg/l臨床應用：臨床應用： 多發(fā)性骨髓瘤多發(fā)性骨髓

27、瘤,非何杰金氏淋巴瘤（非何杰金氏淋巴瘤（NHL）影響因素：影響因素： 在腎臟疾病診斷中也有重要意義在腎臟疾病診斷中也有重要意義 -2-微球蛋白微球蛋白 【 -2-m】24生化特性生化特性： 糖蛋白糖蛋白,腫瘤抗原腫瘤抗原T4分子量：分子量： 48,000發(fā)生部位：發(fā)生部位： 主要存在于子宮頸鱗狀細胞癌主要存在于子宮頸鱗狀細胞癌,正常正常 鱗狀上皮鱗狀上皮參考值范圍：參考值范圍：2.5ng/ml臨床應用：臨床應用： 監(jiān)測宮頸、耳、鼻、喉、肺和食管鱗監(jiān)測宮頸、耳、鼻、喉、肺和食管鱗 狀細胞癌病程及治療狀細胞癌病程及治療影響因素：影響因素： 被皮膚或唾液污染后可導致假性高值被皮膚或唾液污染后可導致假

28、性高值鱗狀上皮細胞癌抗原鱗狀上皮細胞癌抗原 【 SCC】25生化特性：生化特性： 細胞角蛋白片段細胞角蛋白片段19分子量：分子量： 30,000發(fā)生部位：發(fā)生部位： 存在于許多組織中，特別是肺中存在于許多組織中，特別是肺中參考值范圍：參考值范圍： 3.3ng/ml臨床應用：臨床應用： 非小細胞肺癌非小細胞肺癌影響因素：影響因素： 被唾液污染后可導致假性高值被唾液污染后可導致假性高值細胞角蛋白組分細胞角蛋白組分19 【 CYFRA21-1】細胞角蛋白陽性細胞肺癌腦轉移26糖類抗原糖類抗原50 【CA50】生化特性：生化特性：糖類抗原糖類抗原CA50是一種以唾液酸酯和唾液酸糖蛋白為主是一種以唾液酸

29、酯和唾液酸糖蛋白為主 的腫瘤標志物的腫瘤標志物參考范圍：參考范圍： 23U/ml臨床意義：臨床意義：糖類抗原糖類抗原CA50是一種非特異性的廣譜腫瘤標志物，與是一種非特異性的廣譜腫瘤標志物，與癌抗原癌抗原19-9有一定的交叉抗原性，主要用于胰腺癌、結腸直腸有一定的交叉抗原性，主要用于胰腺癌、結腸直腸癌、胃癌的輔助診斷，其中胰腺癌病人增高最明顯。增高：見于癌、胃癌的輔助診斷，其中胰腺癌病人增高最明顯。增高：見于胰腺癌（陽性率可達胰腺癌（陽性率可達87）、結腸直腸癌、胃癌、肺癌。肝癌。）、結腸直腸癌、胃癌、肺癌。肝癌。卵巢癌、乳腺癌等惡性腫瘤；潰瘍性結腸炎、肝硬化、黑色素瘤、卵巢癌、乳腺癌等惡性腫

30、瘤；潰瘍性結腸炎、肝硬化、黑色素瘤、淋巴瘤、自身免疫性疾病等也增高淋巴瘤、自身免疫性疾病等也增高27糖類抗原糖類抗原242 【 CA242】CA242是一種唾液酸化的新型粘蛋白類糖類腫瘤抗原是一種唾液酸化的新型粘蛋白類糖類腫瘤抗原1993年年Pujol等采用遲緩銪鑭熒光分析技術測定等采用遲緩銪鑭熒光分析技術測定102例例NSCLC患者患者血清血清CA242濃度，濃度，CA242血清濃度閾值為血清濃度閾值為20.0U/ml，結果其敏感，結果其敏感性及特異性分別為性及特異性分別為28.5%和和95.6%。肺鱗癌患者血清。肺鱗癌患者血清CA242水平顯水平顯著低于非鱗癌著低于非鱗癌(腺癌和大細胞肺癌

31、腺癌和大細胞肺癌)患者，發(fā)生遠處轉移者的患者，發(fā)生遠處轉移者的CA242濃度高于未轉移者，且濃度高于未轉移者，且期濃度逐漸增加。從整體角度看，期濃度逐漸增加。從整體角度看，CA242水平與生存不相關，但是，在不能手術切除的水平與生存不相關，但是，在不能手術切除的NSCLC患者患者中，中，CA242濃度升高患者的生存期較濃度低于濃度升高患者的生存期較濃度低于20U/ml患者顯著短?；颊唢@著短。由 于由 于 C A 2 4 2 敏 感 性 較 低 ， 對敏 感 性 較 低 ， 對 N S C L C 的 診 斷 無 意 義的 診 斷 無 意 義CA242可作為胰腺癌和結腸癌校好的腫瘤標志物，其靈敏

32、度與可作為胰腺癌和結腸癌校好的腫瘤標志物，其靈敏度與CA19-9相仿，但特異性、診斷效率則優(yōu)于相仿，但特異性、診斷效率則優(yōu)于CA19-9參考值：參考值： 25U/ml28CA549也是乳腺癌的標志物，它是一種酸性也是乳腺癌的標志物，它是一種酸性 糖蛋白糖蛋白大部分健康女性大部分健康女性11 UmL異常升高者比例并不高，可見于異常升高者比例并不高，可見于50%乳腺乳腺 癌、卵巢癌、癌、卵巢癌、40%前列腺癌、前列腺癌、33%肺癌患肺癌患 者。由此，作為乳腺癌的早期診斷，者。由此，作為乳腺癌的早期診斷，CA則則 還較欠缺，應聯(lián)合應用其它還較欠缺，應聯(lián)合應用其它TM糖類抗原糖類抗原594【CA549

33、】29血清堿性磷酸酶血清堿性磷酸酶【ALP 或AKP 】是一組底物特異性較低，在堿性環(huán)境中能水解很多磷酸單酯化合物的酶是一組底物特異性較低，在堿性環(huán)境中能水解很多磷酸單酯化合物的酶AFP在器官組織的含量：在器官組織的含量：肝腎胎盤小腸骨磷酸對硝基酚磷酸對硝基酚（底物）2-氨基氨基-2-甲基甲基-1-丙酮丙酮（受體）+ALP對硝基酚對硝基酚+堿性溶液堿性溶液405nm變黃色，連續(xù)監(jiān)測法參考值：女性：參考值：女性：112歲歲500U/L；15歲，歲，40150U/L 男性：男性：112歲歲500U/L；1215歲，歲，750U/L 15歲，歲，40150U/LAFP活力測定常作為肝膽疾病和骨骼疾病

34、的臨床輔助診斷指標。活力測定常作為肝膽疾病和骨骼疾病的臨床輔助診斷指標。升高：骨升高：骨Paget病、膽道梗阻、病、膽道梗阻、惡性腫瘤骨轉移或肝轉移惡性腫瘤骨轉移或肝轉移、佝僂病、骨軟化、佝僂病、骨軟化、成骨細胞瘤成骨細胞瘤、甲狀旁腺功能亢進及骨折愈合期、甲狀旁腺功能亢進及骨折愈合期降低：少見，呆小癥、磷酸酶過少癥、維生素降低：少見，呆小癥、磷酸酶過少癥、維生素C缺乏癥。甲功低下、惡性貧血缺乏癥。甲功低下、惡性貧血臨床意義臨床意義30阻塞性黃疸、肝硬化、肝壞死，堿性磷酸酶明顯升高（肝細胞性黃阻塞性黃疸、肝硬化、肝壞死，堿性磷酸酶明顯升高（肝細胞性黃疸則升高不明顯）疸則升高不明顯） 原發(fā)性和繼發(fā)

35、性肝癌時堿性磷酸酶亦明顯升高，與癌組織中或癌腫原發(fā)性和繼發(fā)性肝癌時堿性磷酸酶亦明顯升高，與癌組織中或癌腫周圍肝細胞合成堿性磷酸酶增加有關周圍肝細胞合成堿性磷酸酶增加有關其他腫瘤如乳腺癌、肺癌、卵巢癌、骨細胞瘤、骨肉瘤等，堿性磷其他腫瘤如乳腺癌、肺癌、卵巢癌、骨細胞瘤、骨肉瘤等，堿性磷酸酶增高時，提示可能有肝臟轉移酸酶增高時，提示可能有肝臟轉移 變形性骨炎、成骨細胞癌、佝僂病、骨軟化、甲狀腺及甲狀旁腺功變形性骨炎、成骨細胞癌、佝僂病、骨軟化、甲狀腺及甲狀旁腺功能亢進、腎小管性酸中毒、遺傳性磷酸酶過多癥能亢進、腎小管性酸中毒、遺傳性磷酸酶過多癥 很多藥物可使堿性磷酸酶增高，如巴比妥類、抗生素（紅霉

36、素、慶很多藥物可使堿性磷酸酶增高，如巴比妥類、抗生素（紅霉素、慶大霉素、氯霉素、卡那霉素、氨芐青霉素等大霉素、氯霉素、卡那霉素、氨芐青霉素等 常見于重癥慢性腎炎、乳糜瀉、貧血、惡病質、兒童甲狀腺功能不常見于重癥慢性腎炎、乳糜瀉、貧血、惡病質、兒童甲狀腺功能不全或減退、維生素全或減退、維生素C缺乏癥壞血病）。營養(yǎng)不良、呆小癥、遺傳性缺乏癥壞血?。I養(yǎng)不良、呆小癥、遺傳性低磷酸酶血癥。低磷酸酶血癥。 增增 高高減減 低低血清堿性磷酸酶血清堿性磷酸酶【ALP 或AKP 】31酸性磷酸酶測定酸性磷酸酶測定【ACP】磷酸麝香草酚酞（YMP）ACP麝香草酚酞 + 無機磷堿液終止反應麝香草酚酞 呈藍色59

37、5nm-磷酸萘胺磷酸萘胺 ACP 酸性條件-萘胺萘胺 + 磷酸磷酸固紅TR鹽重氮化合物重氮化合物總酸性磷酸酶活性總酸性磷酸酶活性非前列腺酸性磷酸酶活性非前列腺酸性磷酸酶活性=前列腺酸性磷酸酶活性前列腺酸性磷酸酶活性酒石酸抑制405nm參考值：成人總酶活性為參考值：成人總酶活性為09U/L，前列腺酸性磷酸酶活性為，前列腺酸性磷酸酶活性為03U/LACP含量無性別差異，新生兒出生后含量無性別差異，新生兒出生后1個月血清酶活性甚高，隨年齡增長而逐漸個月血清酶活性甚高，隨年齡增長而逐漸下降；青春期又可出現(xiàn)一活性峰值，至下降；青春期又可出現(xiàn)一活性峰值，至20歲降至成人水平歲降至成人水平ACP主要用于前列

38、腺癌的輔助診斷及療效觀察指標，特別是轉移時，血清主要用于前列腺癌的輔助診斷及療效觀察指標，特別是轉移時，血清ACP可明顯增高可明顯增高溶血性疾病、變形性骨炎、急性尿潴留及近期做過直腸檢查者，此酶也可增高溶血性疾病、變形性骨炎、急性尿潴留及近期做過直腸檢查者，此酶也可增高臨床意義臨床意義32P53蛋白是一種由蛋白是一種由393個氨基酸組成的含磷蛋白，位于細胞核。個氨基酸組成的含磷蛋白，位于細胞核。研究發(fā)現(xiàn)在癌旁正常和鱗狀化生的支氣管上皮未見研究發(fā)現(xiàn)在癌旁正常和鱗狀化生的支氣管上皮未見P53蛋白表蛋白表達，達，在輕在輕中中重度不典型增生、原位癌、浸潤癌中，重度不典型增生、原位癌、浸潤癌中，P53蛋

39、蛋白 表 達 的 陽 性 率 逐 漸 升 高 ， 表 明白 表 達 的 陽 性 率 逐 漸 升 高 ， 表 明 P 5 3 基 因 與 肺 癌 發(fā)基 因 與 肺 癌 發(fā)生有關生有關對對P53基因的不同類型腫瘤中突變頻率檢測結果，鱗癌為基因的不同類型腫瘤中突變頻率檢測結果，鱗癌為63.6%，腺癌為，腺癌為65%，發(fā)現(xiàn)，發(fā)現(xiàn)P53蛋白在不同分化程度肺癌組織蛋白在不同分化程度肺癌組織之間無顯著性差異，但之間無顯著性差異，但在肺鱗癌組織中隨分化程度降低在肺鱗癌組織中隨分化程度降低P53表表達卻增強，認為達卻增強，認為P53蛋白與肺鱗癌的關系可能較肺腺癌更為密蛋白與肺鱗癌的關系可能較肺腺癌更為密切切。而

40、且在肺鱗癌伴有和不伴有淋巴結轉移病例中，。而且在肺鱗癌伴有和不伴有淋巴結轉移病例中，P53表達表達無顯著性差異，而肺腺癌中伴有與不伴有淋巴結轉移者無顯著性差異，而肺腺癌中伴有與不伴有淋巴結轉移者P53表表達 具 有 顯 著 性 差 異 ， 提 示達 具 有 顯 著 性 差 異 ， 提 示 P 5 3 過 度 表 達 與 肺 腺 癌 淋過 度 表 達 與 肺 腺 癌 淋巴結轉移有關巴結轉移有關P53蛋白蛋白鱗癌鱗癌P53細胞核陽性細胞核陽性33bcl-2蛋白是原癌基因蛋白是原癌基因bcl-2編碼的一種能調節(jié)細胞死亡而不影編碼的一種能調節(jié)細胞死亡而不影響細胞增殖的蛋白質，響細胞增殖的蛋白質，199

41、3年年Pezzella等研究等研究bcl-2在在NSCLC患者中的表達與預后之間的關系。該實驗采用患者中的表達與預后之間的關系。該實驗采用bcl-2特異性單特異性單克隆抗體及免疫組化染色測定克隆抗體及免疫組化染色測定80例肺鱗癌及例肺鱗癌及42例肺腺癌患者例肺腺癌患者腫瘤組織中腫瘤組織中bcl-2蛋白。結果蛋白。結果25%(20/80)的鱗癌患者及的鱗癌患者及12%(5/42)的腺癌患者的腺癌患者bcl-2蛋白陽性蛋白陽性，在鄰近的正常呼吸道上，在鄰近的正常呼吸道上皮中，皮中，bcl-2蛋白僅存在于基底細胞。蛋白僅存在于基底細胞。bcl-2蛋白陽性患者的蛋白陽性患者的5年生存率高于陰性患者年生

42、存率高于陰性患者(P0.1)，年齡為，年齡為60歲或歲或60歲以上歲以上bcl-2蛋白陽性患者的預后最好蛋白陽性患者的預后最好(P0.02)。該研究表明，原癌基因。該研究表明，原癌基因bcl-2在肺癌患者中發(fā)生異常表達，其表達與預后有一定關系在肺癌患者中發(fā)生異常表達，其表達與預后有一定關系原癌基因原癌基因bcl-2蛋白蛋白34腫瘤標志物的組合應用腫瘤標志物的組合應用-標志標志 CEA ARP CA19-9 CA72-4 CA125 CA15-3 SCC HCG 腫瘤腫瘤結腸結腸 胰腺胰腺 胃胃 食道食道 肝臟肝臟 膽囊膽囊 乳腺乳腺 卵巢卵巢 子宮頸子宮頸 絨毛膜絨毛膜 35腫瘤標志物的組合應

43、用腫瘤標志物的組合應用-標志標志 CEA ARP NSE SCC CYFRA21-1 HCG PSA TPA Calcitonin HTG 腫瘤腫瘤肺（肺（SCLC） 肺（肺（NSCLS） 胚胎細胞胚胎細胞 前列腺前列腺 膀胱膀胱 甲狀腺甲狀腺 C-細胞細胞 耳鼻咽喉耳鼻咽喉 36臨床檢測腫瘤標志物試驗方法進展臨床檢測腫瘤標志物試驗方法進展單相瓊脂擴散法單相瓊脂擴散法雙相瓊脂擴散法雙相瓊脂擴散法血凝法血凝法對流電泳法對流電泳法火箭電泳法火箭電泳法放射免疫法放射免疫法（RIA）免疫放射法免疫放射法（IRMA） ELISA法法斑點法斑點法金標法金標法熒光免疫法熒光免疫法化學發(fā)光法化學發(fā)光法（CLI

44、A）電化學發(fā)光法電化學發(fā)光法（ECLIA）分子生物學分子生物學37雙相瓊脂擴散法雙相瓊脂擴散法單相瓊脂擴散法單相瓊脂擴散法抗體與凝膠混合抗體與凝膠混合后，裝于小玻璃管中，后，裝于小玻璃管中，待凝固后待凝固后加入抗原加入抗原溶液，使其擴散入凝溶液，使其擴散入凝膠與抗體反應形成環(huán)狀乳白色沉淀帶膠與抗體反應形成環(huán)狀乳白色沉淀帶 一種抗原或抗體混合物成分的定性與定量一種抗原或抗體混合物成分的定性與定量的分析方法的分析方法。通常采用。通常采用凝膠作為支持介質凝膠作為支持介質，讓抗原與抗體混合物在介質中互相擴散，讓抗原與抗體混合物在介質中互相擴散，相 互 反 應 形 成 沉 淀 弧 線 或 沉 淀 弧 帶

45、相 互 反 應 形 成 沉 淀 弧 線 或 沉 淀 弧 帶 38血凝法血凝法細菌和紅細胞等顆粒性抗原，當細菌和紅細胞等顆粒性抗原，當與相應抗體特異結合后，在適量與相應抗體特異結合后，在適量電解質存在的條件下，可逐漸聚電解質存在的條件下，可逐漸聚集，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象稱集，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象稱為凝集反應為凝集反應。反應中的抗原稱為。反應中的抗原稱為凝集原（凝集原（agglutinogen），抗體），抗體稱為凝集素（稱為凝集素（agglutinin）根據(jù)凝集反應的原理，以后又發(fā)根據(jù)凝集反應的原理，以后又發(fā)展建立了，各種間接凝集試驗、展建立了，各種間接凝集試驗、間接凝集抑制試驗以及固相免疫間

46、接凝集抑制試驗以及固相免疫吸附血凝試驗等新方法吸附血凝試驗等新方法39 膠乳微粒免疫檢測技術膠乳微粒免疫檢測技術是在膠乳凝集定性試驗基礎上發(fā)是在膠乳凝集定性試驗基礎上發(fā)展建立的展建立的-種非放射性均相免疫種非放射性均相免疫測定法，可以測定法，可以對各種微量的抗原對各種微量的抗原物質和小分子半抗原物質和小分子半抗原(加藥物、加藥物、團體激素等團體激素等)進行精確的定量測進行精確的定量測定定。根據(jù)特異性抗體致敏的膠乳。根據(jù)特異性抗體致敏的膠乳微粒微粒(一般為一般為直徑約直徑約1m的聚苯的聚苯乙烯膠乳乙烯膠乳)，與待測標本中的相，與待測標本中的相應抗原相遇時發(fā)生凝集反應，膠應抗原相遇時發(fā)生凝集反應，

47、膠乳凝集程度與被測物的濃度呈函乳凝集程度與被測物的濃度呈函數(shù)關系，由此可測出標本中待測數(shù)關系，由此可測出標本中待測物的含量。測定方法主要有粒子物的含量。測定方法主要有粒子計數(shù)法和濁度法兩種計數(shù)法和濁度法兩種 40 對流免疫電泳對流免疫電泳(counter immunoelectrophoresis, CIEP) 是將雙向免疫擴散與電泳相結合的一種技術。是將雙向免疫擴散與電泳相結合的一種技術。在在pH8.6的緩沖液中，蛋白質的緩沖液中，蛋白質抗原帶負電荷抗原帶負電荷向正極泳動向正極泳動；而；而抗體抗體大部分屬于大部分屬于Ig，由于分，由于分子量大，暴露的極性基團較少，在離子瓊脂子量大，暴露的極性

48、基團較少，在離子瓊脂中泳動緩慢，同時中泳動緩慢，同時受電滲作用的影響向負極受電滲作用的影響向負極泳動泳動 (電滲是指在電場中液體對于一個固定電滲是指在電場中液體對于一個固定固體的相對移動。固體的相對移動。瓊脂瓊脂是一種酸性物質，在是一種酸性物質，在堿性溶液中堿性溶液中帶負電荷帶負電荷，而，而與它接觸的溶液帶與它接觸的溶液帶正電荷，因此液體向負極泳動正電荷，因此液體向負極泳動，產(chǎn)生電滲產(chǎn)生電滲) 在在抗原抗體相遇的最適比例處形成乳白色沉抗原抗體相遇的最適比例處形成乳白色沉淀線淀線。由于電場的作用，限制了抗原、抗體。由于電場的作用，限制了抗原、抗體的自由擴散，而使其定向泳動，因而增加了的自由擴散，

49、而使其定向泳動，因而增加了試驗的靈敏度，并縮短反應時間。此法操作試驗的靈敏度，并縮短反應時間。此法操作簡便，僅需簡便，僅需3060分鐘，靈敏度比雙向擴分鐘，靈敏度比雙向擴散 高散 高 1 0 1 5 倍 ； 但 缺 點 是 特 異 性倍 ； 但 缺 點 是 特 異 性不如雙向瓊脂擴散高不如雙向瓊脂擴散高 41 火箭免疫電泳火箭免疫電泳(rocketimmunoelectrophoresis，RIEP)是將單向免疫擴散和電泳相結是將單向免疫擴散和電泳相結合的一種定量檢測技術。電泳時，含合的一種定量檢測技術。電泳時，含于瓊脂凝膠中的抗體不發(fā)生移動，而于瓊脂凝膠中的抗體不發(fā)生移動，而在電場的作用下促

50、使樣品中的抗原向在電場的作用下促使樣品中的抗原向正極泳動。當正極泳動。當抗原與抗體分子達到適抗原與抗體分子達到適當比例時，形成一個形狀如火箭的不當比例時，形成一個形狀如火箭的不溶性免疫復合物沉淀峰溶性免疫復合物沉淀峰，峰的高度與峰的高度與撿樣中的抗原濃度呈正相關撿樣中的抗原濃度呈正相關。因此，。因此，當瓊脂中抗體濃度固定時，以不同稀當瓊脂中抗體濃度固定時，以不同稀釋度標準抗原泳動后形成的沉淀峰為釋度標準抗原泳動后形成的沉淀峰為縱坐標，抗原濃度為橫坐標，繪制標縱坐標，抗原濃度為橫坐標，繪制標準曲線。根據(jù)樣品的沉淀峰長度即可準曲線。根據(jù)樣品的沉淀峰長度即可計算出待測抗原的含量；反之，當瓊計算出待測

51、抗原的含量；反之，當瓊脂中抗原濃度固定時，便可測定待測脂中抗原濃度固定時，便可測定待測抗體的含量抗體的含量(即反向火箭免疫電泳即反向火箭免疫電泳) 42競爭法競爭法雙抗體夾心法雙抗體夾心法間接法間接法 酶聯(lián)免疫吸附試驗酶聯(lián)免疫吸附試驗1971年瑞典學者年瑞典學者Engvail和和Perlmannn,荷蘭學者荷蘭學者Van Weerman和和Schuurs分別報道將免疫技術分別報道將免疫技術發(fā)展為檢測體液中微量物質的固相免疫測定方法，發(fā)展為檢測體液中微量物質的固相免疫測定方法，稱為酶聯(lián)免疫吸附試驗稱為酶聯(lián)免疫吸附試驗)。最初發(fā)展的免疫酶測。最初發(fā)展的免疫酶測定方法。是使酶與抗體或抗原結合，用以檢

52、查組定方法。是使酶與抗體或抗原結合，用以檢查組織中相應的抗原或抗體的存在。后來發(fā)展為織中相應的抗原或抗體的存在。后來發(fā)展為將抗將抗原或抗體吸附于固相載體，在載體上進行免疫酶原或抗體吸附于固相載體，在載體上進行免疫酶染色，底物顯色后用肉眼或分光光度計判定結果染色，底物顯色后用肉眼或分光光度計判定結果。這種技術就是目前應用最廣的酶聯(lián)免疫吸這種技術就是目前應用最廣的酶聯(lián)免疫吸附試驗，俗稱附試驗，俗稱ELISA (enzyme linked immunosorbant assay) 43 免疫印跡技術免疫印跡技術免疫印跡免疫印跡(immunoblotting)又稱又稱蛋白質印跡蛋白質印跡(Wester

53、n blotting)，是一種是一種借助特異性抗體鑒定抗原的借助特異性抗體鑒定抗原的有效方法有效方法。該法是在凝膠電泳和固。該法是在凝膠電泳和固相免疫測定技術基礎上發(fā)展起來的相免疫測定技術基礎上發(fā)展起來的一種新的免疫生化技術。將含有目一種新的免疫生化技術。將含有目標蛋白標蛋白(抗原抗原)的樣品首先用的樣品首先用SDS-聚聚丙烯酰胺凝膠電泳丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)或或非變性電泳非變性電泳(Native-PAGE)等分離等分離后，通過轉移電泳原位轉印至硝酸后，通過轉移電泳原位轉印至硝酸纖維素膜或其它膜的表面，然后將纖維素膜或其它膜的表面，然后將膜表面的蛋白質再用抗原抗體反應膜表面的蛋白

54、質再用抗原抗體反應進行特異性檢測進行特異性檢測44 免疫微粒技術免疫微粒技術是利用高分子材料合成一定粒度大小的固相是利用高分子材料合成一定粒度大小的固相微粒作為載體，包被上具有特異性親和力的微粒作為載體，包被上具有特異性親和力的各種免疫活性物質各種免疫活性物質(抗原或抗體抗原或抗體)，使其致敏，使其致敏為免疫微粒，用于免疫學及其他生物學檢測為免疫微粒，用于免疫學及其他生物學檢測與分離的一項技術。作為載體的微粒通常是與分離的一項技術。作為載體的微粒通常是以某種高分子有機單體為原料，經(jīng)過乳液聚以某種高分子有機單體為原料，經(jīng)過乳液聚合、懸浮聚合及輻照聚合等高分子聚合方法合、懸浮聚合及輻照聚合等高分子

55、聚合方法制備而成。由于制備材料及工藝不同，微粒制備而成。由于制備材料及工藝不同，微粒的種類繁多，現(xiàn)已制成的種類繁多，現(xiàn)已制成惰性微粒惰性微粒如聚苯乙烯如聚苯乙烯膠乳微粒、膠乳微粒、活性微?；钚晕⒘Ｈ玺然郾揭蚁┪⒘！⑷玺然郾揭蚁┪⒘?、磁性微粒磁性微粒及及標記微粒標記微粒(用同位素、熒光素或用同位素、熒光素或酶標記酶標記)等四大類微粒，數(shù)量多達幾十種。等四大類微粒，數(shù)量多達幾十種。將制備好的微粒與抗原將制備好的微粒與抗原(或抗體或抗體)經(jīng)物理吸附、經(jīng)物理吸附、化學偶聯(lián)及生物素親合親橋聯(lián)法等致敏方法化學偶聯(lián)及生物素親合親橋聯(lián)法等致敏方法形成免疫微粒。廣泛形成免疫微粒。廣泛應用于各種可溶性大分應用

56、于各種可溶性大分子物質的檢測、分離與純化、細胞標記與識子物質的檢測、分離與純化、細胞標記與識別別等。近年來，等。近年來，微粒技術在核酸分子雜交、微粒技術在核酸分子雜交、DNA與與RNA的分離及的分離及PCR等研究領域等研究領域亦顯示出廣闊的應用前景亦顯示出廣闊的應用前景 45 免疫熒光細胞化學技術免疫熒光細胞化學技術是是采用熒光素標記的已知抗采用熒光素標記的已知抗體體(或抗原或抗原)作為探針，檢測待作為探針，檢測待測組織、細胞標本中的靶抗測組織、細胞標本中的靶抗原原(或抗體或抗體)，形成的抗原抗體，形成的抗原抗體復合物帶有熒光素，在熒光復合物帶有熒光素，在熒光顯微鏡下，由于受高壓汞燈顯微鏡下，

57、由于受高壓汞燈光源的紫外光照射，熒光素光源的紫外光照射，熒光素發(fā)出明亮的熒光，這樣就可發(fā)出明亮的熒光，這樣就可以分辨出抗原以分辨出抗原(或抗體或抗體)的所在的所在位置及其性質，并可利用熒位置及其性質，并可利用熒光定量技術計算抗原的含量，光定量技術計算抗原的含量，以達到對抗原物質定位、定以達到對抗原物質定位、定性 和 定 量 測 定 的 目 的性 和 定 量 測 定 的 目 的46 免疫組織化學技術免疫組織化學技術又稱免疫細胞化學，是指帶顯色劑標記又稱免疫細胞化學，是指帶顯色劑標記的特異性抗體在組織細胞原位通過抗原的特異性抗體在組織細胞原位通過抗原抗體反應和組織化學的呈色反應，抗體反應和組織化學

58、的呈色反應，對相對相應抗原進行定性、定位、定量測定的一應抗原進行定性、定位、定量測定的一項新技術項新技術。把免疫反應的特異性、組織。把免疫反應的特異性、組織化學的可見性巧妙地結合起來，借助顯化學的可見性巧妙地結合起來，借助顯微鏡微鏡(包括熒光顯微鏡、電子顯微鏡包括熒光顯微鏡、電子顯微鏡)的的顯像和放大作用，在細胞、亞細胞水平顯像和放大作用，在細胞、亞細胞水平檢測各種抗原物質檢測各種抗原物質(如蛋白質、多肽、酶、如蛋白質、多肽、酶、激素、病原體以及受體等激素、病原體以及受體等) 。全過程包。全過程包括：括：抗原的提取與純化；抗原的提取與純化； 免疫動物免疫動物或細胞融合，制備特異性抗體以及抗體或

59、細胞融合，制備特異性抗體以及抗體的純化；的純化； 將顯色劑與抗體結合形成標將顯色劑與抗體結合形成標記抗體；記抗體； 標本的制備；標本的制備； 免疫細胞化免疫細胞化學反應以及呈色反應；學反應以及呈色反應； 觀察結果觀察結果 47 免疫電鏡技術免疫電鏡技術( I m m u n e e l e c t r o n microscopy，IEM)是將抗是將抗原抗體反應的特異性與電原抗體反應的特異性與電子顯微鏡的高分辨力相結子顯微鏡的高分辨力相結合，合，在亞細胞和超微結構在亞細胞和超微結構水平上對抗原物質進行定水平上對抗原物質進行定位分析的一種高度精確、位分析的一種高度精確、靈敏的方法靈敏的方法。特異

60、性抗體。特異性抗體用電子致密物質，如鐵蛋用電子致密物質，如鐵蛋白、膠體金等標記后，使白、膠體金等標記后，使之與組織超薄切片中的抗之與組織超薄切片中的抗原結合，在電鏡下觀察到原結合，在電鏡下觀察到標記物所在位置，即為抗標記物所在位置，即為抗原抗體反應的部位。首創(chuàng)原抗體反應的部位。首創(chuàng)此 項 技 術 的 是此 項 技 術 的 是 S i n g e r (1959)，他最先使用鐵蛋，他最先使用鐵蛋白標記抗體的方法白標記抗體的方法 48 流式細胞儀流式細胞儀(Flow cytometer，F(xiàn)CM)能快能快速、速、精確地測量精確地測量通過檢測區(qū)液通過檢測區(qū)液流中的各種粒子。這些粒子可流中的各種粒子。這