提取法用于伊曲康唑膠囊微生物限度方法檢查

1、最新精品提取法用于伊曲康唑膠囊微生物限度方法檢查更多專業(yè)、稀缺文檔請(qǐng)?jiān)L問一一此文檔的上傳用戶主頁(yè)提取法用于伊曲康唑膠囊微生物限度方法檢查提取法用于伊曲康唑膠囊微生物限度方法檢查【摘要】目的:探討伊曲康唑膠囊微生物限度方法學(xué)驗(yàn)證。方法:采用十四烷酸異丙脂提取法，將有抑菌成分的物質(zhì)轉(zhuǎn)移至油相，水相用于試驗(yàn)。結(jié)果:白色念珠菌、黑曲霉菌的回收率達(dá)到70,以上。結(jié)論:提取法可以用于伊曲康唑膠囊微生物限度方法檢查，簡(jiǎn)單易行?！娟P(guān)鍵詞】提取法;伊曲康唑膠囊文章編號(hào):1009-5519(2007)03-0343-02中圖分類號(hào):R9文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A伊曲康唑膠囊是抗真菌的藥物，在水中不溶，其內(nèi)容物為包衣顆粒，進(jìn)行

2、微生物限度方法學(xué)驗(yàn)證時(shí)發(fā)現(xiàn)真菌的回收率不到70,，選用離心薄膜過濾法無(wú)法濾過，我們利用油水相分層原理選用適宜的提取液提取供試品的稀釋液，將水相用于試驗(yàn)。1 儀器與材料1.1 玻璃器皿:培養(yǎng)皿，量筒，輸液瓶(100ml,250ml)，一次性注射器。1.2 試劑:十四烷酸異丙脂(國(guó)產(chǎn)和進(jìn)口)。培養(yǎng)基:營(yíng)養(yǎng)肉湯、營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基、pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液。對(duì)照菌:枯草桿菌CMCC(B)63501第三代；金黃色葡萄球菌CMCC(B)260031三代；大腸埃希菌CMCC(B)441021三代；白色念珠菌CMCC(F)98001第三代；黑曲霉菌CMCC(F)980031三代。供

3、試品：伊曲康口膠囊(批號(hào)20060106生產(chǎn)廠家；成都倍特藥業(yè)有限公司)。2 試驗(yàn)方法更多專業(yè)、稀缺文檔請(qǐng)?jiān)L問一一此文檔的上傳用戶主頁(yè)2.1 常規(guī)法2.1.1 菌液制備:(1)取經(jīng)35?培養(yǎng)24小時(shí)，金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌的肉湯培養(yǎng)物1ml加9ml無(wú)菌生理鹽水，10倍稀釋至10-5,10-7，細(xì)菌數(shù)約為50,100cfu/ml，做活菌計(jì)數(shù)備用。(2)取經(jīng)25?培養(yǎng)24小時(shí)的白色念珠菌霉菌液體培養(yǎng)物1ml加9ml無(wú)菌生理鹽水，10倍稀釋至10-5,10-7，細(xì)菌數(shù)約為50,100cfu/ml，做活菌計(jì)數(shù)備用。(3)取經(jīng)25?培養(yǎng)1周的黑曲霉菌斜面培養(yǎng)物，加5ml鹽水洗下霉菌孢子，吸

4、取出菌液，然后取1ml加9ml無(wú)菌生理鹽水，逐管10倍稀釋為10-4，細(xì)菌數(shù)約為50,100cfu/ml，做活菌計(jì)數(shù)備用。2.1.2 供試液的制備：取伊曲康唾10g,加pH值為7.0的無(wú)菌氯化鈉-蛋白陳緩沖液200ml，45?保溫，使膠囊溶解，使分散均勻，制得1?20供試液，分別人工污染上述5種代表試驗(yàn)菌株。再加15,20ml瓊脂培養(yǎng)基，待凝固后，置規(guī)定溫度培養(yǎng)24,72小時(shí)觀察結(jié)果細(xì)菌與霉菌計(jì)數(shù)，測(cè)定回收率。2.1.3 該供試品對(duì)大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草桿菌的回收率試驗(yàn)均高于70%，可采用常規(guī)方法檢驗(yàn)。對(duì)白色念珠菌、黑曲霉菌有很強(qiáng)的抗菌活性，供試品回收率為0%，均低于70%。2.2

5、采用十四烷酸異丙脂提取將有抑菌成分的物質(zhì)轉(zhuǎn)移至油相、水相用于試驗(yàn)。2.2.1 提取液的篩選試驗(yàn):取本品10g，加45?pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液200ml，使分散均勻，取該1?20供試液上清液10ml置于100ml輸液瓶中，分別加無(wú)菌十四烷酸異丙脂20 ml 、 30 ml 、 40 ml 、 50 ml ，充分振搖，將輸液瓶倒置，靜置使油水明顯分層，分別取其水層1ml加入平皿，分別人工污染白色念珠菌、黑曲霉菌2種試驗(yàn)菌株，再加15,20ml瓊脂培養(yǎng)基，待凝固后，置規(guī)定溫度培養(yǎng)72小時(shí)觀察結(jié)果細(xì)菌與霉菌計(jì)數(shù)，測(cè)定回收率。結(jié)果見表1。2.2.2 稀釋液回收率試驗(yàn):十四烷酸異丙脂50ml中

6、加入稀釋液（pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液）10ml共5瓶，分別人工污染枯草桿菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、白色念珠菌、黑曲霉菌5更多專業(yè)、稀缺文檔請(qǐng)?jiān)L問一一此文檔的上傳用戶主頁(yè)種試驗(yàn)菌株，振搖5分鐘，倒置分層，分別取其水層1ml加入平皿。再加15,20ml瓊脂培養(yǎng)基，待凝固后，置規(guī)定溫度培養(yǎng)48,72小時(shí)觀察結(jié)果細(xì)菌與霉菌計(jì)數(shù)，測(cè)定回收率。結(jié)果見表2。另取十四烷酸異丙脂油層平皿計(jì)數(shù)，均無(wú)菌生長(zhǎng)。表1結(jié)果證明，采用提取法加入提取液50ml時(shí)可消除供試品對(duì)人工污染白色念珠菌和黑曲霉菌的抑菌作用，回收率達(dá)到70%以上。表2結(jié)果說(shuō)明，細(xì)菌和真菌基本上存在水相，稀釋液回收率80,以上。因此，提取

7、法可用于伊曲康唑膠囊的霉菌檢查。3 討論3.1 供試品為膠囊劑，需45?水浴保溫使囊殼溶解;其內(nèi)容物為包衣顆粒，需用勻漿儀或研細(xì)方法讓供試品分散均勻;1?10的濃度比較黏稠，雖然伊曲康唑?qū)?xì)菌沒有抑菌作用，也將細(xì)菌和大腸埃希菌檢查都采用1?20。3.2 霉菌檢查時(shí)不能將十四烷酸異丙脂直接加入供試品中;十四烷酸異丙脂用量太大，成本太高。吸取上清液10ml時(shí)應(yīng)注意不要吸入顆粒，否則會(huì)堵塞注射器針頭;分層后用注射器緩慢吸取下層水相，注意不要吸取到十四烷酸異丙脂層。3.3 伊曲康唑在十四烷酸異丙脂中有紫外吸收，我們用紫外檢查的方法對(duì)提取液油相進(jìn)行測(cè)定，以檢查提取液是否提取完全，20ml，30ml，40ml，50ml，提取后，取水相又用十四烷酸異丙脂第二次提取，測(cè)定十四烷酸異丙脂層的吸收值，理論上提取液應(yīng)有線性關(guān)系，但試驗(yàn)結(jié)果不理想。微生物限度檢查的供試品制備主要目的是檢查微生物，在制樣時(shí)與含量測(cè)定要求不同，所用溶劑不同。3.4 進(jìn)口與國(guó)產(chǎn)的十四烷酸異丙脂回收率進(jìn)行