《病原生物學和免疫學》實驗教學大綱

1、病原生物學和免疫學實驗教學大綱課程編號：40921105課程類別：專業(yè)基礎課實驗學時：26學時學 分：1.5適用專業(yè)：護理學本科一、實驗教學目的和任務病原生物學和免疫學實驗是為了使學生牢固掌握病原生物學和免疫學的基本方法與實驗技術；加深學生對病原生物學和免疫學基本理論的理解；同時通過實驗，培養(yǎng)學生觀察問題、提出問題、分析問題和解決問題的能力；培養(yǎng)學生實事求是、嚴謹踏實的科學態(tài)度和良好作風，以及敢于創(chuàng)新的開拓精神；也為學生進一步深入學習其他醫(yī)學相關學科奠定基礎。二、實驗教學基本要求1、每次實驗前必須充分預習實驗內(nèi)容，明確實驗目的、原理、方法以及操作中的注意事項，保持思路清晰。2、在實驗過程中，應

2、持嚴肅認真的科學態(tài)度，并要注意合理地分配和利用時間。3、認真及時做好實驗記錄，對于當時不能得到結果而需要連續(xù)觀察的實驗，則需要記下每次觀察的現(xiàn)象和結果，以便分析。4、在微生物學的整個實驗過程中，應嚴格加強“無菌觀念”的培養(yǎng)和訓練。5、每次的實驗結果，應以實是求實的科學態(tài)度填入實驗報告，力求簡明準確，并及時匯交教師批閱。如實驗結果與理論不符，應分析原因，訓練科學思維的能力。三、實驗教學內(nèi)容實驗項目一1、實驗項目名稱：溶菌酶的溶菌試驗2、實驗內(nèi)容提要：（1）制備含溶壁微球菌的瓊脂平板。（2）打孔 凝固后，用打孔器打孔，孔間距1.52cm。（3）加樣 周圍四孔分別加入5、25、100、500g溶菌酶

3、標準品。（4）結果 觀察各孔周圍溶菌情況，測量溶菌環(huán)直徑。實驗項目二1、實驗項目名稱：白細胞吞噬試驗2、實驗內(nèi)容提要：（1）吸取肝素加于凹玻片內(nèi)。（2）取耳垂血0.04ml，放在有肝素的凹玻片內(nèi)，搖勻。（3）取葡萄球菌培養(yǎng)液0.02ml加于有抗凝血的凹玻片內(nèi)，搖勻。（4）將凹玻片直于濕盒中，3730分鐘，每10分鐘搖勻一次。（5）取一滴全血菌液混合液，置載玻片上，推片，待干。（6）滴加甲醇固定3分鐘，水洗。（7）再加瑞氏染液染色1-2分鐘，水洗、印干。（8）置顯微鏡下觀察吞噬和未吞噬細菌的白細胞數(shù)。實驗項目三1、實驗項目名稱：凝集反應妊娠乳膠試驗2、實驗內(nèi)容提要：（1）分別用毛細管吸取生理鹽水

4、和待檢尿滴于玻璃板的左右兩側。（2）在兩側內(nèi)各加一滴抗HCG血清，輕輕搖晃約2min。（3）在兩側內(nèi)各加一滴HCG乳膠抗原試劑，搖勻，約5min觀察結果。實驗項目四1、實驗項目名稱：沉淀反應雙向瓊脂擴散試驗2、實驗內(nèi)容提要：（1）將1%生理鹽水瓊脂糖加熱融化（100ml生理鹽水中加1%瓊脂糖粉）。（2）將已融化的瓊脂3-4毫升趁熱傾注在玻片上，制成厚薄均勻的瓊脂糖凝膠板。（3）待瓊脂糖凝固后，用打孔器在凝膠板上打三孔。（4）孔內(nèi)分別注入20微升的生理鹽水、血清、抗人IgG的血清。（5）將瓊脂糖凝膠板放入濕盒中，置于37的溫箱中，24小時后，取出觀察結果。實驗項目五1、實驗項目名稱：顯微鏡的使用

5、及細菌基本形態(tài)結構的觀察2、實驗內(nèi)容提要：（1）將顯微鏡平放在實驗臺上。（2）用低倍鏡對光，使光線集中于集光器。（3）標本片放在載物臺上。（4）低倍鏡找出標本所在位置的范圍，再換高倍鏡或油鏡觀察。（5）觀察細菌的基本形態(tài)標本片：球菌、桿菌、弧菌。實驗項目六1、實驗項目名稱：細菌特殊結構的觀察2、實驗內(nèi)容提要：（1）將顯微鏡平放在實驗臺上。（2）用低倍鏡對光，使光線集中于集光器。（3）標本片放在載物臺上。（4）低倍鏡找出標本所在位置的范圍，再換高倍鏡或油鏡觀察。（5）觀察細菌的特殊結構標本片：莢膜、鞭毛、芽胞。實驗項目七1、實驗項目名稱：培養(yǎng)基的制備與滅菌2、實驗內(nèi)容提要：（1）培養(yǎng)基配制的大體

6、流程如下：原料稱量 加熱溶解 調節(jié)PH 過濾 分裝 塞棉塞包扎 滅菌（2）高壓蒸汽鍋的使用a、鍋內(nèi)加入適量的水。b、將滅菌物體放在擱架上，不要放的過滿，蓋好鍋蓋。c、加熱排氣。d、保溫保壓，壓力達到1.05kg/cm2，溫度達到121，維持20min，切斷電源。 e、出鍋，當壓力表降到0時，打開排氣閥，旋開固定螺旋，開蓋，取出滅菌物品。實驗項目八1、實驗項目名稱：革蘭染色法 2、實驗內(nèi)容提要：（1）細菌染色片的制作（涂片-干燥-固定）（2）革蘭氏染色法a、初染：將結晶紫染液滴加到已固定的標本片上，染色1min，水洗。b、媒染：滴加碘液媒染1min，水洗。c、脫色：滴加95%的酒精脫色，使無紫色

7、為止，一般30s，水洗。d、復染：滴加復紅復染1min，水洗，用洗水紙吸干，用油鏡觀察。實驗項目九1、實驗項目名稱：細菌的人工培養(yǎng)及現(xiàn)象觀察2、實驗內(nèi)容提要：（1）平板劃線接種法（2）液體培養(yǎng)基接種法（3）半固體穿刺接種法（4）斜面培養(yǎng)基接種法實驗項目十1、實驗項目名稱：外界因素對細菌的影響2、實驗內(nèi)容提要：（1）紫外線殺菌實驗（2）藥敏實驗（紙片法）（3）單糖發(fā)酵實驗實驗項目十一1、實驗項目名稱：常見病原微生物的觀察2、實驗內(nèi)容提要：（1）將顯微鏡平放在實驗臺上。（2）用低倍鏡對光，使光線集中于集光器。（3）標本片放在載物臺上。（4）低倍鏡找出標本所在位置的范圍，再換高倍鏡或油鏡觀察。（5）

8、觀察破傷風桿菌、肉毒桿菌、白喉桿菌、結核桿菌、大分生孢子等標本片。實驗項目十二1、實驗項目名稱：腸道寄生線蟲、絳蟲和吸蟲的觀察2、實驗內(nèi)容提要：（1）識別蛔蟲受精卵與未受精卵，了解受精卵發(fā)育過程。（2）認識鞭蟲卵的形態(tài)特征。（3）掌握蟯蟲卵的形態(tài)特征。（4）掌握十二指腸鉤蟲及美洲鉤蟲的形態(tài)鑒別和鉤蟲卵的形態(tài)特征。（5）掌握帶絳蟲卵的特征。（6）掌握布氏姜片吸蟲（姜片蟲）蟲卵形態(tài)特點。實驗項目十三1、實驗項目名稱：組織內(nèi)及血液與淋巴系統(tǒng)寄生蟲的形態(tài)觀察2、實驗內(nèi)容提要：（1）掌握華枝睪吸蟲（肝吸蟲）蟲卵形態(tài)特點。（2）掌握衛(wèi)氏并殖吸蟲（肺吸蟲）蟲卵形態(tài)特點。（3）掌握日本血吸蟲的成熟蟲卵和毛蚴的

9、形態(tài)特征。（4）熟悉瘧原蟲各期形態(tài)特征。四、實驗項目與學時分配實驗項目與學時分配表序號實驗項目名稱學時實驗類型實驗主要儀器設備備注1溶菌酶的溶菌試驗2驗證性培養(yǎng)箱、打孔器必做2白細胞吞噬試驗2驗證性顯微鏡必做3凝集反應2驗證性移液器必做4沉淀反應2驗證性水浴箱、打孔器必做5油鏡的使用及細菌的基本形態(tài)的觀察2驗證性顯微鏡、標本片必做6細菌特殊結構的觀察2驗證性顯微鏡、標本片必做7培養(yǎng)基的制備及滅菌2綜合性培養(yǎng)箱、滅菌鍋必做8革蘭染色法2驗證性顯微鏡必做9細菌的人工培養(yǎng)及生長現(xiàn)象的觀察2演示性培養(yǎng)箱必做10外界因素對細菌的影響2驗證性培養(yǎng)箱必做11常見病原微生物的觀察2驗證性顯微鏡、標本片必做12腸道寄生線蟲、絳蟲和吸蟲的觀察2驗證性顯微鏡、標本片必做13組織內(nèi)及血液與淋巴系統(tǒng)寄生蟲的形