紫外分光光度法測(cè)定維生素B1片的含量

1、紫外分光光度法測(cè)定維生素B1片的含量 2011年5月8日星期日摘 要 本試驗(yàn)采用紫外分光光度法對(duì)維生素B1片的含量進(jìn)行測(cè)定，對(duì)此法進(jìn)行方法驗(yàn)證，證明了此法具有專(zhuān)屬性高，回收率高、精密度高，線(xiàn)性好、測(cè)定范圍寬的特點(diǎn)，并對(duì)數(shù)據(jù)處理方法進(jìn)行了比較，發(fā)現(xiàn)采用對(duì)照品比較法進(jìn)行數(shù)據(jù)處理受儀器波動(dòng)影響較小，測(cè)定結(jié)果可信度較高。關(guān)鍵詞 維生素B1 紫外分光光度法 含量測(cè)定 方法驗(yàn)證 對(duì)照品比較法維生素B1及其制劑及其制劑常采用的方法有非水滴定法，紫外分光光度法和硫色素?zé)晒夥āＶ袊?guó)藥典用非水溶液滴定法測(cè)定原料藥，片劑和注射劑采用紫外分光光度法，USP采用硫色素?zé)晒夥ā２捎梅撬芤旱味ǚ赡苁艿綒潲u酸鹽的干擾，對(duì)

2、操作人員要求較高，采用硫色素滴定法不受氧化破壞產(chǎn)物的干擾，測(cè)定準(zhǔn)確但操作繁瑣，且熒光測(cè)定受干擾因素較多，本實(shí)驗(yàn)采用紫外分光光度法進(jìn)行含量測(cè)定。1 實(shí)驗(yàn)裝置及試劑1.1 儀器 BS210S型天平，UV751GD型紫外/可見(jiàn)分光光度計(jì)。1.2 實(shí)驗(yàn)材料 維生素B1片（來(lái)源：成都第一制藥，規(guī)格：1-00片*10mg，批號(hào)：061204），維生素B1標(biāo)準(zhǔn)品（分析純），維生素B1對(duì)照品（200ug/ml，2.0mg/ml），維生素B1標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.250mg/ml），空白輔料，鹽酸溶液（91000）。2 實(shí)驗(yàn)方法 處方分析：組成處方量(g)比例(%)維生素B11016.39淀粉2032.78糊精3049

3、.18硬脂酸鎂1.01.639生產(chǎn)1000片 根據(jù)處方量分析，維生素B1含16.39%，輔料含83.61%。平均片重約61mg，取相當(dāng)于25mg維生素B1的片粉約0.15g。1、測(cè)定方法：取供試品20片，精密稱(chēng)定，研細(xì)，稱(chēng)取片粉適量（約相當(dāng)于維生素B125mg），置100ml量瓶中，加鹽酸溶液（91000）約70ml，振搖15min使維生素B1溶解，再加鹽酸溶液（91000）稀釋至刻度，搖勻，用干燥濾紙濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液5ml，置另一100ml量瓶中，加鹽酸溶液（91000）稀釋至刻度，搖勻，照分光光度法，在246nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，按C12H17ClN4OS.HCl的吸收系數(shù)（）為42

4、1計(jì)算，即得。2、方法驗(yàn)證2.1.線(xiàn)性和范圍精密稱(chēng)取維生素B1對(duì)照品約25mg，置100 ml量瓶中，加鹽酸溶液（91000）溶解并稀釋至刻度，制備成含維生素B1 250g/ml的對(duì)照溶液。分別精密量取該溶液3、4、5、6、7ml置100ml量瓶中，加鹽酸溶液（91000）稀釋至刻度，搖勻，即得系列濃度的對(duì)照品溶液，照分光光度法，在246nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，以吸收度（A）對(duì)濃度（C）回歸處理，得標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)和回歸方程。2.2. 回收試驗(yàn)（準(zhǔn)確度試驗(yàn)）對(duì)照品溶液的制備：對(duì)照品溶液的制備，同2.1項(xiàng)下。供試品溶液的制備：精密稱(chēng)取維生素B1精制原料約0.25g，置50ml量瓶中，加入鹽酸溶液（910

5、00）稀釋至刻度，搖勻，制成5.0mg/m維生素B1溶液儲(chǔ)備液；分別精密量取該溶液4、5、6ml置已加入比例量輔料（0.15g，1/100天平）的100ml量瓶中（一式三份），加鹽酸溶液（91000）約70ml，振搖使之溶解，再加鹽酸溶液（91000）稀釋至刻度，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液5ml，置另一100ml量瓶中，搖勻，得高、中、低三種濃度的試驗(yàn)溶液，照分光光度法，在246nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，用對(duì)照品比較法計(jì)算含量。2.3、精密度試驗(yàn)取供試品20片，精密稱(chēng)定，研細(xì)，稱(chēng)取片粉適量（約相當(dāng)于維生素B125mg），一式5份，置100ml量瓶中，加鹽酸溶液（91000）適量，振搖15min，再加鹽

6、酸溶液（91000）稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液5ml，置另一100ml量瓶中，加鹽酸溶液（91000）稀釋至刻度，搖勻，即得約含維生素B112.5ug/ml的供試品溶液。另取維生素B1對(duì)照品適量，用鹽酸溶液（91000）稀釋制成12.5g/ml的對(duì)照品溶液。照分光光度法（ChP2005二部附錄IVA）在246nm處分別測(cè)定供試品溶液和對(duì)照品溶液的吸光度，用百分吸光度和對(duì)照品比較法分別進(jìn)行計(jì)算，即得。表1 維生素B1標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備編號(hào) 1 2 3 4 5對(duì)照液濃度 7.50 10.00 12.50 15.00 17.50（ug/ml）吸光度A 0.312 0.391 0.480 0.

7、559 0.640圖2 維生素B1標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系較好（R²=0.9997）。表2 維生素B1片回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果編號(hào)加入量（mg）對(duì)照液濃度（ug/ml）吸光度A測(cè)得對(duì)照液濃度（ug/ml）回收率（%）110.0010.000.3709.2692.6210.0010.000.3709.2692.6310.0010.000.3709.2692.6412.5012.500.45511.8494.7512.5012.500.45611.8795.0612.5012.500.45511.8494.7715.0015.000.53914.3895.9815.0015.000.53914.

8、3895.9915.0015.000.54114.4496.3123XRSDRSD高95.9%95.9%96.3%96%0.24%1.6%中94.7%95.0%94.7%94.8%0.18%低92.6%92.6%92.6%92.6%0回收率平均值(%)=94.48%RSD=1.6%由表2可得，采用此法進(jìn)行維生素B1含量的測(cè)定，加入量在10.00-15.00mg范圍內(nèi)，對(duì)照液濃度在10.00-15.00ug/ml范圍內(nèi)時(shí)，回收率較高。表3 維生素B1片精密度考察實(shí)驗(yàn)結(jié)果編號(hào)加入片粉量（g）吸光度A濃度（ug/ml）百分吸光度法（%）對(duì)照品比較法（%）標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)%10.17240.43112.578

9、1.4495.8888.3820.17300.42712.6180.4394.6987.1430.17230.42812.6180.6294.9187.3840.17160.42512.5180.7095.0087.3550.17230.43312.5681.8996.4089.03對(duì)照品0.44712.50 當(dāng)m=0.1715g 維B1濃度 12.50ug/mlRSD1（百分吸光度法）=0.8%RSD2（對(duì)照品比較法）=0.8%RSD3（標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)法）=0.9%表4 維生素B1片含量測(cè)定結(jié)果測(cè)定方法含量為標(biāo)示量的百分?jǐn)?shù)范圍含量為標(biāo)示量的百分?jǐn)?shù)均值百分吸光度法84.43%-81.89%81.02

10、%對(duì)照品比較法標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)法94.69%-96.40%87.14%-89.03%95.38%87.86%百分吸光度法：含量不符合規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)照品比較法：含量符合規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)。標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)法：含量符合規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)。實(shí)驗(yàn)討論本次試驗(yàn)中分別采用百分比吸光度法、標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)法和對(duì)照品比較法所測(cè)定結(jié)果精密度均較好，但結(jié)果相差較大，可能是由于儀器波長(zhǎng)變動(dòng)所引起的系統(tǒng)誤差，由于采用百分吸光度法進(jìn)行測(cè)定極易受到儀器穩(wěn)定性的影響，因此此次試驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)法和對(duì)照品比較法所測(cè)定結(jié)果比百分吸光度法所測(cè)得結(jié)果可信度更高。圖1 紫外/可見(jiàn)光區(qū)進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描圖（維生素B1標(biāo)準(zhǔn)品，維生素B1片粉，維生素B1空白輔料） 維生素B1片輔料紫外掃描圖 維生素B1片紫外掃描圖維生素B1對(duì)照品紫外掃描圖 維生素B