食用菌液體菌種的生產(chǎn)工藝研發(fā)與規(guī)?；耘嗉夹g(shù)應(yīng)用

1、項(xiàng)目中期檢查報(bào)告食用菌液體菌種的生產(chǎn)工藝研發(fā)與規(guī)模化栽培技術(shù)應(yīng)用2016江蘇省蘇北科技專項(xiàng)(BN2016057)、項(xiàng)目進(jìn)展與成效。1、項(xiàng)目的階段目標(biāo)完成情況1.1項(xiàng)目合同任務(wù)及考核指標(biāo)時(shí)間考核指標(biāo)2016 年 7 月至2016 年12月引進(jìn)擴(kuò)繁新品種2-3個(gè)，安裝調(diào)試液體菌種制備系統(tǒng)，設(shè)計(jì)開展新品種和新 配方篩選試驗(yàn)研究，篩選出咼效液體菌種培養(yǎng)基配方1個(gè)。2017年1月 至2017年6月優(yōu)化液體菌種生產(chǎn)工藝，集成關(guān)鍵栽培技術(shù)，開展食用菌規(guī)模化關(guān)鍵工序技 術(shù)優(yōu)化試驗(yàn)研究，縮短制種周期20天以上；產(chǎn)鮮菇3500噸，銷售收入2000萬元。2017年7月至2017年12月整理分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)，發(fā)表論文1篇

2、，進(jìn)一步優(yōu)化和提升關(guān)鍵技術(shù)。2018年1月 至2018年6月產(chǎn)鮮菇3500段，收入2000萬元，提供就業(yè)崗位20個(gè)，撰寫項(xiàng)目工作總結(jié)與 技術(shù)總結(jié)，準(zhǔn)備項(xiàng)目驗(yàn)收材料。為了更好的實(shí)施本項(xiàng)目，本項(xiàng)目組從以下幾個(gè)方面進(jìn)行項(xiàng)目的組織 實(shí)施工作：組織形式：本項(xiàng)目的實(shí)施將組建專項(xiàng)工作組作為本項(xiàng)目的管理決 策機(jī)構(gòu)。由項(xiàng)目負(fù)責(zé)人擔(dān)任組長(zhǎng)，統(tǒng)籌協(xié)調(diào)管理項(xiàng)目建設(shè)，直接負(fù)責(zé) 項(xiàng)目的總體建設(shè)進(jìn)度安排和各部門、各環(huán)節(jié)的協(xié)調(diào)溝通及對(duì)外合作。 研究經(jīng)費(fèi)采用專款專用，財(cái)務(wù)獨(dú)立核算，確保項(xiàng)目順利實(shí)施。技術(shù)支持：技術(shù)支持單位按合同要求開展本項(xiàng)目的相關(guān)研究工 作，承擔(dān)單位負(fù)責(zé)項(xiàng)目的實(shí)施地點(diǎn)和相關(guān)事宜， 落實(shí)技術(shù)服務(wù)單位按 合同要求在

3、承擔(dān)單位開展技術(shù)示范，并指導(dǎo)承擔(dān)單位的技術(shù)熟化與推 廣工作。承擔(dān)單位通過籌建相關(guān)的合作社，根據(jù)生產(chǎn)需求，以“合作社+農(nóng)戶”的方式帶動(dòng)農(nóng)戶從事生產(chǎn)，回收產(chǎn)品統(tǒng)一銷售。技術(shù)服務(wù)單位定期組織專家赴項(xiàng)目地進(jìn)行技術(shù)支撐；協(xié)助開展培訓(xùn)相關(guān)技術(shù)人員和農(nóng)戶。對(duì)照項(xiàng)目合同，本年度工作主要圍繞引進(jìn) 擴(kuò)繁新品種，安裝調(diào)試 液體菌種制備系統(tǒng)，設(shè)計(jì)開展新品種和新配方篩選試驗(yàn)研究等內(nèi)容，目前已經(jīng)完成了基地建設(shè)。同時(shí)完成了 10個(gè)菌株的引進(jìn)和篩選，獲得 了主推品種1個(gè)，其生物學(xué)效率相對(duì)其他品種提高5.8%完成了液體菌 種的培養(yǎng)配方和培養(yǎng)條件、進(jìn)行了出菇培養(yǎng)基的研究。獲得了高產(chǎn)培 養(yǎng)基配方各一個(gè)，菌絲滿袋時(shí)間液體菌種節(jié)省約2

4、2d時(shí)間。具體研究 工作如下：1.2.1菌種的引進(jìn)從江蘇農(nóng)科院引進(jìn)科杏3號(hào)，自用菌株P(guān)le0025、Ple0026、 Ple0028、 Pie0029、 Ple0032、 Pie0038、 Ple0040、 Ple0045 共10試驗(yàn)品種1.2.2菌種的篩選項(xiàng)目組對(duì)10菌株進(jìn)行篩選，進(jìn)行了如下試驗(yàn)：（1）菌絲活力實(shí)驗(yàn)：將10個(gè)供試菌株分別接入PDA斜面培養(yǎng)基，置 于25C恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)。定時(shí)觀察菌絲生長(zhǎng)情況，并測(cè)算菌絲日均生長(zhǎng) 速度。結(jié)論：菌絲萌發(fā)時(shí)間最快的為菌株只需1d,菌株 菌絲萌發(fā)最慢需2 d;菌株菌絲日均走速最快，菌株走速最慢； 菌絲走滿斜面均在710 d之間；菌株的菌絲長(zhǎng)勢(shì)粗壯、濃密、

5、潔白。菌絲活力的強(qiáng)弱主要表現(xiàn)在菌絲明發(fā)與走菌速度的快慢 以及菌絲生長(zhǎng)勢(shì)情況，綜上分析，菌株可做為篩選出的具 有菌絲活力強(qiáng)的菌株。（2）菌株抗雜能力本研究分別在PDA培養(yǎng)基中先后接入杏鮑菇菌株和雜菌（木霉、紅 色鏈孢霉、青霉），在培養(yǎng)過程中觀察杏鮑菇菌絲和雜菌菌絲生長(zhǎng)情 況，判斷不同杏鮑菇菌株抗雜能力，結(jié)論如下：紅色鏈孢霉都能壓過 菌絲繼續(xù)生長(zhǎng)，說明10個(gè)杏鮑菇菌株對(duì)紅色鏈孢霉均沒有抗雜能力； 菌株對(duì)木霉、青霉均有較強(qiáng)的抗雜能力，菌株對(duì)木霉、 青霉的抗雜能力弱，菌株對(duì)三種霉菌均沒有抗雜能力。 菌株僅對(duì) 青霉有較弱的抗雜能力，對(duì)其它兩種霉菌均沒有抗雜能力，菌株 對(duì)木霉的抗雜能力弱，但對(duì)青霉具有較強(qiáng)

6、的抗雜能力。經(jīng)分析，菌株 為選出的具有較強(qiáng)的抗雜能力的杏鮑菇菌株。123出菇試驗(yàn)對(duì)上述菌株按常規(guī)培養(yǎng)方法進(jìn)行出菇實(shí)驗(yàn)，考察其生物學(xué)轉(zhuǎn)化率， 結(jié)論如下：杏鮑菇菌株的生物學(xué)效率最高，平均為 86.2%，其次 為杏鮑菇菌株平均為81.4%，杏鮑菇菌株最低，平均為54.8%。 綜合上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，本項(xiàng)目選育出科杏 3號(hào)作為主推品種。其生物學(xué) 效率相對(duì)其他品種提高5.8%.1.2.4新品種和新配方篩選試驗(yàn)研究（1）液體培養(yǎng)基的優(yōu)化 杏鮑菇液體菌種的制備以選育出科杏3號(hào)作研究對(duì)象，從活化的PDA培養(yǎng)菌種上取3塊0.5 cm2的菌塊，接入250 mL三角瓶,28 C、180 rpm培養(yǎng)5 d ,制得液體一級(jí)種

7、子。然后按10 %接種量將一級(jí)種 子接入液體菌種培養(yǎng)基中，合適條件下培養(yǎng)，制得杏鮑菇液體菌種。 以科杏3號(hào)菌絲生物量為考察對(duì)象，恒重法測(cè)量獲得。 研究實(shí)驗(yàn)條件選擇碳源的選擇 選取葡萄糖2 %、蔗糖2 %、玉米粉4%、土豆20%、麩 皮10 %分別作為碳源，另外加入硫酸鎂0 .3 %、磷酸二氫鉀0.15 %、 蛋白胨0 .05 %、瓊脂0.1 %。在250 mL三角瓶中裝入100 mL培養(yǎng)基, 滅菌后接入10 mL 一級(jí)種子,28 C下180 rpm振蕩培養(yǎng)5 d ,測(cè)量生物 量。每個(gè)處理重復(fù)3次。氮源的選擇 選取蛋白胨0 .6 %、硫酸銨0.6 %、牛肉膏0 .6%、酵母 汁0.3 %、麥麩皮

8、10%作為氮源，另外加入硫酸鎂0 .3%、磷酸二氫鉀 0.15%、瓊脂0 .1 %、蔗糖0.5 %、玉米粉4 %。操作同上。液體菌種培養(yǎng)條件的確定 采用250 mL三角瓶振蕩培養(yǎng)，設(shè)置不同 的裝液量、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)間、搖床轉(zhuǎn)速，測(cè)量其生物量。每個(gè)處 理重復(fù)3次。 結(jié)果與分析不同碳源對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響當(dāng)以麥麩皮作為碳源時(shí)菌絲生物量明顯高于其他 4組。同時(shí)，觀 察發(fā)現(xiàn)當(dāng)麥麩皮做為碳源時(shí)，液體培養(yǎng)基中菌絲球整齊均一，而其它 組則出現(xiàn)菌絲球大小不一的現(xiàn)象。由此確定麥麩皮為5種待選碳源中 的最優(yōu)碳源。不同氮源對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響問題研究發(fā)現(xiàn)科杏3號(hào)菌株對(duì)氮源的利用能力依次為麥麩皮、 蛋白 胨、酵母汁、牛肉膏

9、、硫酸銨。以麥麩皮、蛋白胨、酵母汁為氮源時(shí) 菌絲球整齊均一。利用硫酸銨作氮源時(shí)，菌絲球長(zhǎng)勢(shì)最差，大小不一。 綜合原料來源、成本、菌絲生物量，選取麥麩皮同時(shí)作為杏鮑菇培養(yǎng) 基的碳源和氮源。同時(shí)，為了使菌種能迅速生長(zhǎng)，添加了 0 .4 %的葡萄糖作速效碳 源。由此，科杏3號(hào)液體菌種培養(yǎng)基為麥麩皮10%、葡萄糖0 .4 %、 硫酸鎂0 .3 %、磷酸二氫鉀0 .15%、瓊脂0 .1%, pH自然。（2）液體培養(yǎng)條件的優(yōu)化以上述培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基，科杏3號(hào)菌株為考察菌株。設(shè)置不同的 裝液量、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)間、搖床轉(zhuǎn)速，以科杏3號(hào)菌絲體生物量 為考察指標(biāo)。確定其液體菌種培養(yǎng)條件，其研究方案及結(jié)果如下：

10、 不同裝液量對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響設(shè)置不同裝液量水平分別從40、60、80、100、120、140、160ml/ 瓶,接種量10 %, 28C , 180 rpm培養(yǎng)5 d測(cè)量菌絲生物量。結(jié)果表明當(dāng) 裝液量在80100 mL時(shí)，菌絲生物量較大?？紤]到生產(chǎn)時(shí)需要使用 大量的液體菌種，因此選用裝液量為100 mL/瓶。 不同培養(yǎng)時(shí)間對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響采用裝液量100 mL ,接種量10 %,28 C下180 rpm培養(yǎng)不同天數(shù) 分別為2、3、4、5、6、7、8d,測(cè)量菌絲生物量。結(jié)果表明，杏鮑菇 培養(yǎng)至第6d時(shí)菌絲生物量達(dá)最大值。因此確定科杏3號(hào)菌株液體培養(yǎng) 時(shí)間為6d。 不同培養(yǎng)溫度對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響采用

11、裝液量100 mL ,接種量10 %,不同溫度180 rpm培養(yǎng)5 d,溫 度分別設(shè)置為20、24、28、32、36。測(cè)量菌絲生物量。結(jié)果 當(dāng)培養(yǎng) 溫度為24C時(shí)，菌絲生物量最高，在36C時(shí)菌種死亡。因此確認(rèn)科杏3 號(hào)菌株液體培養(yǎng)溫度為24 C。 不同搖床轉(zhuǎn)速對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響采用裝液量100 mL ,接種量10%, 25C下用不同轉(zhuǎn)速分別為80、120、160、180、200、240轉(zhuǎn)/分鐘培養(yǎng)6 d ,測(cè)量生物量。結(jié)果發(fā)現(xiàn) 菌絲生物量先隨轉(zhuǎn)速的提高而上升，至180 rpm時(shí)生物量最高，然后 下降。而當(dāng)轉(zhuǎn)速超過180 rpm時(shí)菌絲生物量下降。因此確認(rèn)科杏 3 號(hào)菌株液體培養(yǎng)搖床轉(zhuǎn)速為180轉(zhuǎn)/

12、分鐘。綜上研究表明科杏3號(hào)菌株液體菌種液體培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件如下： 科杏3號(hào)液體菌種培養(yǎng)基為麥麩皮10%、葡萄糖0 .4 %、硫酸鎂0 .3 %、 磷酸二氫鉀0 .15%、瓊脂0 .1%, pH自然。以100/250mL裝液量,10% 接種量,25 C下180 rpm轉(zhuǎn)速培養(yǎng)6 d,菌絲生物量最大。分別采用制備的液體菌種和傳統(tǒng)的固體菌種2種方式生產(chǎn)。菌絲滿袋時(shí)間液體菌種能節(jié)省約22d時(shí)間。(3) 科杏3號(hào)菌株出菇培養(yǎng)基的篩選培養(yǎng)基配比的核心問題在于其碳氮比是否適合菌絲的生長(zhǎng)，本項(xiàng) 目培養(yǎng)材料選用棉籽殼、木屑、麩皮等。根據(jù)培養(yǎng)料不同的含碳、氮 量。按不同的碳、氮比例設(shè)4個(gè)培養(yǎng)料配方：棉籽殼56%，

13、木屑22%,麩皮20%，石膏1%,糖1%（此配方C/N=30: 1）;棉籽殼 35%，木屑43%, 麩皮20%，石膏I %，糖1% （此配方C/N=40: 1）；棉籽殼14%，木屑64%,麩皮20%，石膏I %，糖I % （此配方C/ N=60: 1）;木屑75%, 麩皮23%，石膏1%,糖1% （此配方C /N=80: 1）。以上各配方料水比為1: 1. 5。研究發(fā)現(xiàn)杏鮑菇菌絲體 在4種不同碳氮比方的培養(yǎng)基中，配方培養(yǎng)基菌絲生長(zhǎng)速度最快、 菌絲粗壯、濃密，培養(yǎng)基的碳氮比最適宜杏鮑菇菌絲的生長(zhǎng)，是較好 的碳氮比培養(yǎng)料配方。2、成果示范推廣應(yīng)用中取得的經(jīng)濟(jì)社會(huì)效益等。本項(xiàng)目研發(fā)的優(yōu)質(zhì)菌株生物學(xué)效

14、率相對(duì)其他品種提高5.8% 研究開發(fā)的液體菌種生產(chǎn)技術(shù)在生產(chǎn)中應(yīng)用后菌絲滿袋時(shí)間液體菌種節(jié)省約22d，相對(duì)為生產(chǎn)企業(yè)節(jié)約生產(chǎn)成本達(dá) 10%以上。本項(xiàng)目目前已經(jīng)根據(jù)引進(jìn)和選育的優(yōu)質(zhì)品種科杏 3號(hào)開展了中 試，目前已經(jīng)在企業(yè)完成 2萬袋的生產(chǎn)規(guī)模，收獲杏鮑菇鮮菇 5.16 噸，按市場(chǎng)平均價(jià)格10元/公斤。產(chǎn)值5.16萬元。二、項(xiàng)目經(jīng)費(fèi)到位與使用情況。包括省撥經(jīng)費(fèi)、主管部門配 套經(jīng)費(fèi)、自籌經(jīng)費(fèi)等經(jīng)費(fèi)的到位以及按預(yù)算使用情況。目前，項(xiàng)目財(cái)政經(jīng)費(fèi)已經(jīng)到位，自籌經(jīng)費(fèi)已經(jīng)到位。但尚未開展財(cái)政經(jīng)費(fèi)的報(bào)帳使用。三、項(xiàng)目實(shí)施中存在的主要問題及改進(jìn)建議。項(xiàng)目實(shí)施的經(jīng)費(fèi)下?lián)茌^晚，對(duì)項(xiàng)目開展實(shí)施有一定的影響。菌種引進(jìn)過程中，