葡萄糖的一般雜質(zhì)檢查

1、實驗二 葡萄糖的一般雜質(zhì)檢查一、目的要求1掌握一般雜質(zhì)檢查的原理、操作方法及限量計算方法。2熟悉藥物中一般雜質(zhì)檢查的目的和意義。二、基本原理葡萄糖是用淀粉以無機酸水解或在酶催化下經(jīng)過水解得稀葡萄糖液，再經(jīng)脫色、濃縮結(jié)晶制得。1國內(nèi)生產(chǎn)方法有以下幾種：酸水解法：以無機酸將淀粉水解為葡萄糖。雙酶水解法：以生物酶為催化劑將淀粉水解為葡萄糖。酸酶水解法：以鹽酸為液化劑，糖化酶為催化劑，將淀粉水解為葡萄糖。根據(jù)葡萄糖生產(chǎn)工藝特點，應進行氯化物、重金屬、砷鹽等一般雜質(zhì)檢查，進行蛋白質(zhì)、可溶性淀粉等特殊雜質(zhì)檢查。2各種雜質(zhì)檢查原理如下：氯化物檢查法 氯化物在硝酸酸性溶液中與硝酸銀作用，生成氯化銀白色渾濁液，

2、與一定量的標準氯化鈉溶液和硝酸銀在同樣條件下處理生成的氯化銀渾濁相比較，測定供試品中氯化物的限量。C1- + Ag+ AgCl硫酸鹽檢查法 藥物中微量硫酸鹽與氯化鋇在酸性溶液中作用，生成硫酸鋇微粒而顯白色渾濁液，同一定量標準硫酸鉀溶液與氯化鋇在同樣條件下，用同法處理生成的渾濁比較，判斷藥物中含硫酸鹽的限量。SO4 2- 十Ba2+ BaS04鐵鹽檢查法 三價鐵鹽在硝酸酸性溶液中與硫氰酸鹽生成紅色可溶性硫氰酸鐵絡(luò)離子，與一定量標準鐵溶液用同法處理后進行比色。Fe3+6SCN- Fe(SCN)63- 紅色進行葡萄糖的鐵鹽檢查時，需在顯色前加硝酸3滴，煮沸5min，使Fe2+氧化為Fe3+。由于硝酸

3、中可能含有亞硝酸，亞硝酸也能與硫氰酸根離子反應生成紅色的亞硝酰硫氰化物，影響比色，因此加入顯色劑之前加熱煮沸有助于除去氧化氮，以消除氧化氮生產(chǎn)的亞硝酸干擾。重金屬檢查法 重金屬是指在實驗條件下，能與S2-作用生成硫化物而顯色的金屬雜質(zhì)，如，銀、鉛、汞、銅、鎘、鉍、砷、銻、錫、鋅、鉆、鎳等。在藥品生產(chǎn)過程中遇到鉛的機會較多，且鉛在體內(nèi)易積蓄中毒，故檢查時以鉛為代表。硫代乙酰胺(thioacetamide)在弱酸性(pH約3.5)溶液中水解，產(chǎn)生硫化氫，可與重金屬離子結(jié)合生成有色硫化物的均勻沉淀，可與對照標準液同法處理比較。本方法的適宜目視比色范圍為27mL溶液中含鉛1020mg，相當于標準鉛溶液

4、12mL，檢查中根據(jù)規(guī)定含重金屬的限量確定供試品的取用量。CH3CSNH2+H2O CH3CONH2+H2SPb2+H2S PbS+ 2H+砷鹽檢查法 中國藥典主要采用古蔡氏(Gutzeit)法檢查砷鹽。其原理是利用金屬鋅與酸作用產(chǎn)生新生態(tài)的氫，與藥物中的微量砷鹽作用生成具揮發(fā)性的砷化氫，遇溴化汞(或氯化汞)試紙，產(chǎn)生黃色至棕色的砷斑，與定量標準砷溶液所生成的砷斑比較，可判定藥物中含砷鹽的限量。其反應如下：AsO3 3- + 3Zn + 9H+AsH3 + 3Zn2+ + 3H2OAsH3 + 2HgBr22HBr + AsH(HgBr)2(黃色)AsH3 + 3 HgBr23HBr + As

5、(HgBr)3(棕色)五價砷在酸性溶液中也能被金屬鋅還原為砷化氫，但生成砷化氫的速度較三價砷慢，故在反應液中加入碘化鉀及酸性氯化亞錫將五價砷還原為三價砷，碘化鉀被氧化生成的碘又可被氯化亞錫還原為碘離子。 AsO43- + 2I-+ 2H+AsO33- + I2 + H2OAsO43- + Sn2+ 2H+AsO33- + Sn4+ H2OI2 + Sn2+2I- + Sn4+溶液中的碘離子，與反應中產(chǎn)生的鋅離子能形成配合物，使生成砷化氫的反應不斷進行。4I- + Zn2+ ZnI42-氯化亞錫與碘化鉀存在，可抑制銻化氫的生成，因銻化氫也能與溴化汞試紙作用生成銻斑，在實驗條件下l00mg銻存在不

6、會干擾測定。氯化亞錫又可與鋅作用，在鋅粒表面形成鋅錫齊，起去極化作用，從而使氫氣均勻而連續(xù)地發(fā)生。干燥失重測定法 干燥失重是指藥物在規(guī)定條件下經(jīng)干燥后所減失的重量，根據(jù)所減失的重量和取樣量計算供試品干燥失重的百分率。干燥失重檢查法主要控制藥物中的水分，也包括其他揮發(fā)性物質(zhì)如乙醇等。熾灼殘渣檢查法 熾灼殘渣系指有機藥物經(jīng)加熱炭化后再被硫酸破壞，于高溫(700800)熾灼，有機物質(zhì)被破壞分解為揮發(fā)性物質(zhì)逸出，殘留的非揮發(fā)性無機雜質(zhì)(多為金屬的氧化物或鹽類)成為硫酸鹽，稱為熾灼殘渣。如熾灼殘渣需留作重金屬檢查，則控制熾灼溫度在500600。三、儀器與試劑電熱恒溫干燥箱，高溫電爐(馬福爐)，普通電爐，

7、水浴鍋，50mL比色管，量筒，50mL燒杯；葡萄糖，硝酸銀，硝酸，硫酸，氯化鋇，硫氰酸銨，硫代乙酰胺，甘油，氫氧化鈉，溴化鉀，碘化鉀，20目無砷鋅粒，氯化亞錫，醋酸鉛，溴化汞，磺基水楊酸。四、實驗方法1. 酸度取本品2.0g，加水20mL溶解后，加酚酞指示液（取酚酞1g，加乙醇100mL使溶解,即得。）3滴與氫氧化鈉滴定液（0.02mol/L）0.20mL，應顯粉紅色。2溶液的澄清度與顏色取本品5.0g，加熱水溶解后，放冷，用水稀釋至10mL，溶液應澄清無色；如顯渾濁，與1號濁度標準液比較，不得更濃；如顯色，與對照液（取比色用氯化鈷液3.0mL、比色用鉻酸鉀液3.0mL與比色用硫酸銅液6.0m

8、L，加水稀釋成50mL）1.0mL加水稀釋至10mL比較，不得更深。濁度標準貯備液的制備 稱取于105干燥至恒重的硫酸肼1.00g，置100mL量瓶中，加水適量使溶解，必要時可在40的水浴中溫熱溶解，并用水稀釋至刻度，搖勻，放置46h；取此溶液與等容量的10%烏洛托品溶液混合，搖勻，于25避光靜置24h，即得。本液置冷處避光保存，可在兩個月內(nèi)使用，用前搖勻。濁度標準原液的制備 取濁度標準貯備液15.0mL，置1000mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，取適量，置1cm吸收池中，照紫外-可見分光光度法，在550nm的波長處測定，其吸光度應在0.120.15范圍內(nèi)。本液應在48h內(nèi)使用，用前搖勻。濁

9、度標準液的制備（1號） 取濁度標準原液5.0mL加水95.0mL ，搖勻，即得。3. 乙醇溶液的澄清度取本品1.0g，加90%乙醇30mL，置水浴上加熱回流約10min，溶液應澄清。4. 氯化物取本品0.60g，加水溶解使成25mL(如溶液呈堿性，可滴加硝酸使遇石蕊試紙顯中性反應)，再加稀硝酸（取105mL硫酸加水稀釋至1000mL，即得。）10mL，溶液如不澄清，應濾過；置50mL納氏比色管中，加水使成約40mL，搖勻，即得供試液。另取標準氯化鈉溶液6.0mL置50mL納氏比色管中，加稀硝酸10mL，用水稀釋使成約40mL，搖勻，即得對照液。向供試液與對照液中分別加硝酸銀試液(0.1mol/

10、L)1.0mL，用水稀釋使成50mL，搖勻，暗處放置5min，同置黑色背景上，從比色管上方向下觀察，如發(fā)生渾濁，樣品管不得比對照管更濃(0.01)。標準氯化鈉溶液的制備：稱取氯化鈉0.165g，置1000mL量瓶中，加水適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。臨用前，精密量貯備液10mL，置100mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得（每1mL相當于10g）5硫酸鹽取本品2.0g，加水溶解使成約40mL(如溶液顯堿性，可滴加鹽酸使遇石蕊試紙顯中性反應)；溶液如不澄清，應濾過；置50mL納氏比色管中，加稀鹽酸（取234mL硫酸加水稀釋至1000mL，即得。）2mL，25氯化鋇溶液5mL，加水稀

11、釋使成50mL，搖勻，放置10min，如發(fā)生渾濁，與標準硫酸鉀溶液2.0mL同法制成的對照液比較，不得更濃(0.01)。標準硫酸鉀溶液的制備：稱取硫酸鉀0.181g，置1000mL量瓶中，加水適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得（每1mL相當于100g的SO4）6. 亞硫酸鹽與可溶性淀粉取本品1.0g，加水10mL溶解后，加碘試液(0.05mol/L)1滴，應即顯黃色。7干燥失重取本品約1.0g，然后在105干燥至恒重，減失重量不得過9.5。8. 熾灼殘渣取本品1.02.0g置已熾灼至恒重的瓷坩堝中，精密稱定，緩緩熾灼至完全炭化，放冷，加硫酸0.51mL潤濕，低溫加熱至硫酸蒸氣除盡，在70080

12、0熾灼使完全灰化，移置干燥器內(nèi)，放冷，精密稱定后，再在700800熾灼至恒重，所得熾灼殘渣不得超過0.1。9. 蛋白質(zhì) 取本品1.0g，加水10mL溶解后，加磺基水楊酸溶液（15）3mL，不得發(fā)生沉淀。10鐵鹽取本品2.0g，加水20mL溶解后，加硝酸3滴，緩緩煮沸5min，放冷，加水稀釋使成45mL，加硫氰酸銨溶液(30100)3mL，搖勻，如顯色，與標準鐵溶液2.0mL用同一方法制成的對照液比較，不得更深(0.001)。標準鐵溶液的制備：稱取硫酸鐵銨（FeNH4(SO4)2·12H2O）0.863g，置1000mL量瓶中，加水溶解后，加硫酸2.5mL，用水稀釋至刻度，搖勻，作為貯

13、備液。臨用前，精密量取貯備液10mL，置100mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得（每1mL相當于10g的Fe）11重金屬取本品4.0g置于25mL納氏比色管中，加23mL水溶解后，加醋酸鹽緩沖液(pH3.5) 2mL，加硫代乙酰胺試液2mL，放置2min后，與標準鉛溶液(10mg/mL Pb2+)2mL用同一方法制成的對照液同置白紙上自上向下比較，不得更深(百萬分之五)。醋酸鹽緩沖液(pH3.5)：取醋酸銨25g,加水25mL溶解后,加7mol/L鹽酸溶液38mL,用2mol/L鹽酸溶液或5mol/L氨溶液準確調(diào)節(jié)pH至3.5(電位法指示),用水稀釋至100mL,即得。硫代乙酰胺試液配制：

14、取硫代乙酰胺4g，加水使溶解成100mL，置于冰箱中保存。臨用前取混合液由氫氧化鈉液(1mol/L)15mL，水5.0mL及甘油20mL組成5.0mL，加上述硫代乙酰胺溶液1.0mL，置水浴上加熱20s，冷卻，立即使用。標準鉛溶液的制備：稱取硝酸鉛0.160g，置1000mL量瓶中，加硝酸5mL與水50mL溶解后，用水稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。臨用前，精密量取貯備液10mL，置100mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得（每1mL相當于10g的Pb）。配制與貯存的玻璃容器均不得含鉛。12砷鹽取本品2.0g，置檢砷瓶中，加水5mL溶解后，加稀硫酸5mL與溴化鉀-溴試液（取溴30g，與溴化鉀3

15、0g，加水使溶解成100mL）0.5mL，置水浴上加熱約20min，使保持稍過量的溴存在，必要時，再補加溴化鉀溴試液適量，并隨時補充蒸發(fā)的水分，放冷，加鹽酸5mL與水適量使成28mL，加碘化鉀試液5mL及酸性氯化亞錫試液(取氯化亞錫1.5g，加水10mL與少量的鹽酸使溶解，即得。本液應臨用新配)5滴，在室溫放置10min后，加鋅粒2g，迅速將瓶塞塞緊(瓶塞上已安放好裝有醋酸鉛棉及溴化汞試紙的導氣管)，保持反應溫度在2540（視反應快慢而定，但不應超過40），反應45min后，取出溴化汞試紙，將生成的砷斑與標準砷溶液一定量制成的標準砷斑比較，顏色不得更深（0.0001%）。標準砷溶液的制備：稱取

16、三氧化二砷0.132g，置1000mL量瓶中，加20%氫氧化鈉溶液5mL溶解后，用適量的稀硫酸中和，再加稀硫酸10mL，用水稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。臨用前，精密量取貯備液10mL，置1000mL量瓶中，加稀硫酸10mL，用水稀釋至刻度，搖勻，即得（每1mL相當于1g的As）。標準砷斑的制備：精密吸取標準砷溶液2mL置另一檢砷瓶中，加鹽酸5mL與水21mL，自“再加碘化鉀試液5mL及”起，依法操作即可。五、操作注意事項1納氏比色管的選擇與洗滌比色或比濁操作，一般均在納氏比色管中進行，因此在選用比色管時，必須注意使樣品與標準管的體積相等，玻璃色質(zhì)一致，最好不帶任何顏色，管上的刻度均勻，如有差

17、別，不得大于2mm。納氏比色管用后應立即沖洗，比色管洗滌時避免用毛刷或去污粉等洗刷，以免管壁劃出條痕影響比色或比濁。2平行操作原則進行比色、比濁、砷鹽檢查時，樣品液與對照液的實驗條件應盡可能一致，嚴格按照操作步驟平行操作，按規(guī)定順序加入試劑。比色、比濁前可利用手腕轉(zhuǎn)動360º的旋搖使比色管內(nèi)試劑充分混勻。比色方法一般是將兩管同置于白色背景上，從側(cè)面觀察；比濁方法是將兩管同置于黑色或白色背景上，自上而下地觀察。3實驗中應準確選用量具，雜質(zhì)檢查中允許的誤差為±10，量筒的絕對誤差為1mL，刻度吸管的絕對誤差為0.010.1mL，在實驗中，應根據(jù)樣品、標準液的取用量正確選用量器。例如，取標準液2mL應選擇刻度吸管或移液管吸取標準液。取樣品2g，允許的誤差為0.2g，可選用稱量精度為0.1g的普通天平。4進行鐵鹽檢查時，采用硝酸將Fe2+氧化為Fe3+，標準液應與樣品液同法操作。樣品液加硝酸煮沸時，應注意防止暴沸，必要時補充適量水。5砷鹽檢查時采用濕法破壞葡萄糖，在酸性溶液中用溴進行有機破壞使砷游離。有機破壞可在檢砷瓶中進行，20min內(nèi)要保持過量的溴存在，隨時補充消耗的溴化鉀溴試液和水分，使溶液呈黃色，20min后必須將多余的溴除盡，使溶液五色，否則