血液成分制備操作規(guī)程

1、3 血液成分制備操作規(guī)程血液成分制備是用離心分離、照射、過濾及光化學(xué)等方法制備各種血液成分，包括紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板、血漿和冷沉淀凝血因子制品等。 3.1血液成分制備的一般要求：血液成分制備的環(huán)境要求.1 血液成分制備的環(huán)境應(yīng)整潔衛(wèi)生，定期有效消毒。.2 密閉系統(tǒng)制備血液成分，可在潔凈的環(huán)境中進行。.3 開放系統(tǒng)制備血液成分，整體須在醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)類環(huán)境、局部在醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)類環(huán)境中進行。.4 輻照室的環(huán)境，須符合電離輻射防護與輻射源安全基本標(biāo)準(zhǔn)的要求。.5 血液成分制備環(huán)境溫度應(yīng)滿足冷鏈的要求。血液成分制備應(yīng)盡可能縮短室溫條件下的制備時間，以確保血液成分制品的有效性和安全性。 血液成分

2、制備的設(shè)備要求.1 血液成分制備所涉及的設(shè)備應(yīng)與相應(yīng)工作匹配，其數(shù)量及功能應(yīng)能滿足制備工作的要求。.2 血液成分制備的關(guān)鍵設(shè)備，必須建立設(shè)備檔案；應(yīng)建立和實施設(shè)備的確認(rèn)、維護、校準(zhǔn)和持續(xù)監(jiān)控等管理制度，實施惟一性標(biāo)簽及狀態(tài)標(biāo)記，以確保設(shè)備符合預(yù)期使用要求。 血液成分制備的物料要求.1 成分制備所涉及的物料應(yīng)能滿足制備工作的需要。.2 成分制備所涉及的物料須符合國家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)并經(jīng)確認(rèn)。.3 使用物料前，必須檢查物料的有效期、外觀質(zhì)量等，確認(rèn)符合質(zhì)量要求后方可使用。對不合格物料，進行有效標(biāo)識、隔離，防止誤用。 血液制備程序和方法的審核確認(rèn)開展新的血液成分制品制備前或原血液成分制品制備條件發(fā)生改變時，

3、血液制備程序和方法需進行確認(rèn)。 血液成分制備前的血液要求.1 血液接收時，須核對血液數(shù)量，檢查血液外觀、血袋標(biāo)簽及血液運輸過程中的溫度記錄等內(nèi)容，確認(rèn)符合符合質(zhì)量要求后方可進行成分制備。.2 用于制備手工血小板、新鮮冰凍血漿及冷沉淀凝血因子的血液應(yīng)采集順利、無凝血。.3 制備冰凍紅細(xì)胞的血液自采血之日起6日內(nèi)進行制備。.4 采用白細(xì)胞濾器制備少白細(xì)胞血液成分制品，應(yīng)在血液貯存前進行制備。.5 制備血小板的血液保存溫度為22±2。 血液成分制備的時間要求.1 制備濃縮血小板應(yīng)在血液采集后6小時內(nèi)完成。.2 制備新鮮冰凍血漿時，抗凝劑為CPD、CP2D、CPDA-1的血液應(yīng)在血液采集后8

4、小時之內(nèi)分離并速凍，抗凝劑為ACD的血液應(yīng)在血液采集后6小時之內(nèi)分離并速凍。.3 自血液采集至冰凍完成的時間超過中規(guī)定的時間，可制備冰凍血漿。 血液成分制備離心時的溫度要求.1 制備血小板濃縮液的離心溫度為22±2。.2 制備冷沉淀凝血因子的離心溫度為2±2。.3 制備其它血液成分的離心溫度為在4±2。 血液制備過程的標(biāo)識要求.1 使用聯(lián)袋制備時，在原袋和轉(zhuǎn)移袋分離之前，應(yīng)檢查每個血袋上獻血條碼的一致性。.2 血液進行過濾、分裝和冰凍等操作而需要采用非一體性的血袋時，必須保證在每一個血袋貼上正確的獻血條碼。.3 應(yīng)對血液制備過程中發(fā)現(xiàn)的不合格品進行標(biāo)識。 血液制備

5、過程的目視檢查要求.1 每一袋血液在接收、離心、分離、熱合及交付的各個環(huán)節(jié)都應(yīng)經(jīng)過目視檢查。.2 血液制備過程的目視檢查內(nèi)容主要包括：血袋標(biāo)簽是否完整、是否有滲漏、離心界面是否清晰、血漿外觀顏色是否正常及熱合口是否嚴(yán)密等。.3 在血液制備過程中若發(fā)現(xiàn)有質(zhì)量異常，應(yīng)按不合格品實施標(biāo)識、隔離及進一步處理；血袋滲漏的一律報廢,不得用于臨床。 血液成分制備的質(zhì)量記錄.1 血液成分制備記錄應(yīng)確保對血液制備過程的人員、設(shè)備、血液來源和原材料、方法、環(huán)境條件及相關(guān)信息的可追溯性。.2 血液成分制備的質(zhì)量記錄主要包括：血液交接，成分制備的過程，儀器使用、維護校準(zhǔn)，成分室環(huán)境控制，醫(yī)療廢物的處理等。 血液制備過

6、程中，有關(guān)血液接收、成分制備及血液成分制品交付等信息必須正確輸入計算機信息管理系統(tǒng)中。2 制備的血液成分制品質(zhì)量，須達(dá)到全血及成分血質(zhì)量要求的相關(guān)規(guī)定。3 血液成分制備過程中產(chǎn)生的醫(yī)療廢物，應(yīng)依照醫(yī)療廢物管理條例的有關(guān)規(guī)定進行處置。3.2 多聯(lián)袋血液成分制備利用多聯(lián)袋技術(shù)，依據(jù)不同的離心轉(zhuǎn)速、時間和溫度，在適宜的條件下進行血液成分的制備。 離心.1 根據(jù)離心機種類和血液成分制品的制備要求，確定離心時間、溫度、轉(zhuǎn)速。離心溫度見3.1.7.2 將多聯(lián)袋按不同制備要求，分別整理，平衡血袋；必須將所有的平衡物和多聯(lián)袋放入離心杯中并將離心杯對稱放入離心機內(nèi)。.3 根據(jù)不同血液成分制品的操作規(guī)程進行離心，

7、最大相對離心力不能超過5000g。.4 離心過程中須對離心機的運行進行監(jiān)視并記錄。.5 離心機停止轉(zhuǎn)動之前，不可開蓋，不可晃動。.6 離心工作結(jié)束后，擦拭、保養(yǎng)離心機，清潔整理臺面、地面衛(wèi)生。如有漏血，立即用有效消毒液消毒處理。 離心機轉(zhuǎn)速與相對離心力的換算公式為：RCF（g）=11.18×(rpm/1000)2×Rrpm=299×RCF/R式中： RCF為相對離心力，R為半徑，rpm為轉(zhuǎn)速，離心半徑是離心機軸中央到離心機杯底間的距離，單位用厘米表示。 血液成分分離 血液成分分離有虹吸、夾板法及機器分離方法。機器分離應(yīng)按設(shè)備操作規(guī)程操作。.1 離心后的外觀檢查.1

8、.1 離心后輕輕取出離心杯，觀察血袋、塑料管有無滲漏，離心杯中有無血痕，如有破損應(yīng)查找滲漏點。血袋破漏的,應(yīng)作報廢處理并做好記錄，記錄包括：血袋生產(chǎn)廠家、產(chǎn)品批號、破損部位、血袋編號等。.1.2 觀察血液的分層情況，若有分層不清、脂血嚴(yán)重、血細(xì)胞比積過低等不合格項目，按不同情況予以處理。.2 二聯(lián)袋制備(2種血液成分)。經(jīng)一次重離心可制備濃縮紅細(xì)胞和血漿，若需制備血清可用無抗凝劑的二聯(lián)袋制備。.3 三聯(lián)袋制備(23種血液成分)。.3.1 紅細(xì)胞、新鮮冰凍血漿(FFP)的制備程序：第一次重離心后將一定量的血漿分入第2袋；再將第3袋的紅細(xì)胞保存液加入原袋與紅細(xì)胞混合即為懸浮紅細(xì)胞。熱合分開紅細(xì)胞袋

9、，血漿再經(jīng)第二次重離心，上清血漿分入第3袋中，速凍并冰凍保存，如符合的時間要求，制備成新鮮冰凍血漿。.3.2 紅細(xì)胞、濃縮血小板（PC）、乏血小板血漿（PPP）的制備程序（富血小板血漿法）：第一次輕離心，制備富含血小板血漿（PRP）和紅細(xì)胞，紅細(xì)胞含一定量血漿及保存液。再次將PRP袋重離心，制備PC和PPP，不保存PC容量留2530ml/袋，保存PC容量為5070ml/袋。PC在室溫靜置12小時，使其自然解聚后，輕搖血袋使其成為均勻混懸液，在22±2的環(huán)境下振蕩保存；PPP速凍并冰凍保存。3.2.2.3.3 紅細(xì)胞、冷沉淀凝血因子血漿的制備程序：第一次重離心，將血漿分入第2袋，第3袋

10、保存液加入原袋紅細(xì)胞內(nèi)，若血漿外觀符合質(zhì)量要求即與另一空袋立即速凍并冰凍保存，待制備冷沉淀凝血因子使用（冷沉淀凝血因子制備詳見3.6）。.4 四聯(lián)袋制備(34種血液成分).4.1 紅細(xì)胞、濃縮血小板、冷沉淀凝血因子及冷上清的制備程序（PRP法）：第一次輕度離心，將PRP分入第2袋，原袋紅細(xì)胞與保存液混合，即為懸浮紅細(xì)胞。PRP再次重度離心，制成PC和PPP，PC容量同，PPP及空袋一起速凍并冰凍保存（冷沉淀凝血因子及冷上清的制備詳見3.6）。.4.2 紅細(xì)胞、濃縮血小板、新鮮冰凍血漿(FFP)的制備程序（白膜法）：第一次重離心，將血漿分入第2袋，將含有一定量血漿及白膜層分入第3袋；再將第4袋的

11、紅細(xì)胞保存液加入原袋與紅細(xì)胞混合即為少白細(xì)胞的紅細(xì)胞。第3袋及另一空袋再次輕離心，分離制備成PC。血漿制備符合.2，即為FFP。3.3 開放性血液成分制備 對血液成分制備的環(huán)境要求見.3 血液成分制備所需器具應(yīng)高壓消毒，所用剪刀、鹽水、針頭等器材均應(yīng)每袋一份，防止交叉污染。 工作人員進入凈化室前應(yīng)洗手并穿戴工作服、口罩、帽子和手套。操作應(yīng)符合無菌技術(shù)操作規(guī)程的要求。 血液成分離心、制備程序參見多聯(lián)袋血液成分制備。3.4 洗滌紅細(xì)胞制備 鹽水聯(lián)袋式洗滌紅細(xì)胞（手工法）：用三聯(lián)鹽水袋或四聯(lián)鹽水袋洗滌紅細(xì)胞時，應(yīng)使用無菌導(dǎo)管連接設(shè)備連接紅細(xì)胞袋和鹽水袋。 .1 三聯(lián)鹽水袋洗滌紅細(xì)胞三聯(lián)鹽水袋為3個容

12、積為400ml的單袋，用塑料管道相連的密閉無菌、無熱原系統(tǒng)。每袋內(nèi)裝有200ml注射用生理鹽水，首袋有游離管或接穿刺針頭一個，3個袋子之間用導(dǎo)管夾夾住，彼此不相通。.1.1 凡未超過保存期的紅細(xì)胞均可洗滌。.1.2 將三聯(lián)鹽水袋首袋上的針頭插入紅細(xì)胞袋的進針座或用無菌導(dǎo)管連接設(shè)備與紅細(xì)胞袋相連，使首袋內(nèi)的鹽水緩慢流入紅細(xì)胞袋內(nèi)，邊加鹽水邊混合，將中間塑料管道用導(dǎo)管夾夾住。.1.3 4個袋子分別裝于兩個離心杯中（一側(cè)裝血袋與空袋，另側(cè)裝兩個鹽水袋），平衡后，離心杯對稱放入離心機內(nèi)離心。.1.4 離心后將血袋輕輕取出，懸掛于支架上或放入分漿夾中，將上清液及白膜層分入空袋內(nèi)，然后熱合并切斷相連接的導(dǎo)

13、管，棄去裝有上清液和白膜層的廢液袋。.1.5 依次反復(fù)洗滌紅細(xì)胞至少3次。.1.6 最后一次擠出上清液及殘余白膜后灌入生理鹽水制成洗滌紅細(xì)胞。.2 四聯(lián)袋洗滌紅細(xì)胞：四聯(lián)袋為4個容積為300ml（或350ml）的單袋，用塑料管道相連無熱原、無菌的密閉系統(tǒng)。每袋內(nèi)裝有100150ml注射用生理鹽水，各袋之間用導(dǎo)管夾夾住，彼此不相通。.2.1 凡未超過保存期的紅細(xì)胞均可洗滌。.2.2 將連接管與紅細(xì)胞袋相連，使首袋內(nèi)的鹽水緩慢流入紅細(xì)胞袋內(nèi)，邊加鹽水邊混合，混勻后將中間塑料管用導(dǎo)管夾夾住。.2.3 將5個袋子按要求放入離心機內(nèi)離心。.2.4 離心后將血袋輕輕取出，懸掛于支架上或放入分漿夾中，把上清

14、和白膜層分入空袋中，熱合并切斷相連接的導(dǎo)管，棄去廢液袋。.2.5 同.2.6 同. 開放式洗滌紅細(xì)胞.1 凡未超過保存期的紅細(xì)胞均可洗滌。.2 在百級凈化臺內(nèi)按無菌操作技術(shù)將無菌、無熱原生理鹽水加入被洗滌的紅細(xì)胞袋內(nèi)，熱合后離心。.3 在百級凈化臺內(nèi)分出上清液及白膜層至廢液袋中。.4 同.5 同. 機器洗滌紅細(xì)胞 .1 選擇適用于血細(xì)胞洗滌設(shè)備所規(guī)定的儲存期以內(nèi)的紅細(xì)胞。.2 按照細(xì)胞洗滌設(shè)備操作說明書進行洗滌制備。所制備的洗滌紅細(xì)胞須達(dá)到全血及成分血質(zhì)量要求。3.5 少白細(xì)胞的紅細(xì)胞制備（濾器過濾法） 白細(xì)胞過濾方法按濾器生產(chǎn)廠家說明書操作。 檢查待濾過血液的外觀質(zhì)量并充分混勻血液。 根據(jù)血

15、液的規(guī)格選擇合格的白細(xì)胞過濾器。 關(guān)閉過濾器袋上所有導(dǎo)管夾，用無菌導(dǎo)管連接設(shè)備將過濾器與血袋連接。 打開濾器兩端夾子使主血袋內(nèi)血液通過濾器流入貯存袋內(nèi)，關(guān)閉濾器兩端夾子。 用熱合機熱合切斷少白細(xì)胞制品與濾器裝置的連接,并留取血樣以供臨床血型鑒定及配血交叉使用。3.6 冷沉淀凝血因子制備 離心法：.1 取出待制備冷沉淀的新鮮冰凍血漿（FFP），置室溫中約5分鐘，待雙聯(lián)袋導(dǎo)管（連接管）變軟后進行制備。.2 在26水浴裝置中融化血漿。.3 當(dāng)血漿基本融化時，取出血漿，在2±2的環(huán)境線重離心，使冷沉淀凝血因子下沉于塑料袋底部。.4 離心后將上清分入空袋內(nèi)，血袋底部的沉淀內(nèi)大約含有2030ml

16、血漿，即為冷沉淀凝血因子。 虹吸法：.1 同.2 將新鮮冰凍血漿袋置于26水浴裝置中，另一空袋懸于水浴箱外且位置低于血漿袋，兩袋形成一定的高度落差。.3 新鮮冰凍血漿融化時，上清血漿隨時被虹吸入空袋中，冷沉淀遺留在新鮮冰凍血漿袋中。在融化過程中控制水浴溫度在26。.4 待新鮮冰凍血漿融化至約4050ml時，即為冷沉淀凝血因子。3.7 冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞制備 手工制備法（羥乙基淀粉鹽溶液洗滌法）：.1 紅細(xì)胞甘油化.1.1 取采集之日起6天內(nèi)的全血或懸浮紅細(xì)胞，離心去除上清及白膜層，用無菌接管技術(shù)將1單位紅細(xì)胞轉(zhuǎn)移至400ml血袋內(nèi)。.1.2 紅細(xì)胞在無菌條件下，緩慢滴加復(fù)方甘油溶液，邊加邊振

17、蕩，使其充分混勻。.1.3 在室溫中靜置平衡30分鐘,置-65以下保存。.2 解凍冰凍紅細(xì)胞從-65以下的冰箱中取出冰凍紅細(xì)胞，立即放入3740恒溫水浴箱中，輕輕振動使其快速融化，直至冰凍紅細(xì)完全解凍。.3 冰凍紅細(xì)胞去甘油化紅細(xì)胞去甘油化，采取滲透壓梯度遞減方法洗滌。洗滌冰凍紅細(xì)胞質(zhì)量須達(dá)到全血及成份血質(zhì)量要求。 全自動細(xì)胞洗滌設(shè)備操作程序.1 紅細(xì)胞加甘油冰凍操作程序.1.1 將400ml全血低溫輕離心后擠去白膜和血漿，得到濃縮少白細(xì)胞紅細(xì)胞制劑，用無菌導(dǎo)管連接設(shè)備將其與8001000ml血袋無菌接合，然后將濃縮少白細(xì)胞紅細(xì)胞制劑轉(zhuǎn)移至8001000ml血袋中。.1.2 將濃縮少白細(xì)胞紅細(xì)

18、胞制品用無菌導(dǎo)管連接設(shè)備與配套耗材的無菌接合。.1.3 紅細(xì)胞甘油化按設(shè)備操作說明書操作。.1.4 將甘油化紅細(xì)胞，室溫靜置30分鐘，離心去上清液， -65以下保存。.2 紅細(xì)胞解凍去甘油操作程序.2.1 將-65以下保存的冰凍紅細(xì)胞取出，放入水浴箱中37-40，輕輕振動使其快速融化，直至冰凍紅細(xì)完全解凍至液體狀態(tài)后取出。.2.2 紅細(xì)胞去甘油按設(shè)備操作說明書操作。3.8 病毒滅活血漿(亞甲藍(lán)光化學(xué)法) 亞甲藍(lán)光化學(xué)法血漿病毒滅活原理為：亞甲藍(lán)是一種光敏劑，可以與病毒的核酸以及病毒的脂質(zhì)包膜相結(jié)合，在可見光的作用下發(fā)生光化學(xué)反應(yīng)，使病毒核酸斷裂、包膜破損，從而達(dá)到病毒滅活效果。 病毒滅活血漿操

19、作規(guī)程3.8.2.1 根據(jù)設(shè)備操作說明書設(shè)置醫(yī)用血漿病毒滅活柜的參數(shù)。3.8.2.2 根據(jù)血漿的規(guī)格選擇適宜、質(zhì)量合格的耗材。3.8.2.3 用無菌導(dǎo)管連接設(shè)備將血漿袋與耗材連接。 3.8.2.4 將血袋懸掛于支架上，打開導(dǎo)管夾，使血漿經(jīng)“亞甲藍(lán)添加元件”，流入光照袋。3.8.2.5 在醫(yī)用血漿病毒滅活柜中進行光照。3.8.2.6 光照處理后的血漿經(jīng)病毒滅活裝置配套用輸血過濾器過濾，濾除亞甲藍(lán)和絕大部分白細(xì)胞,即得病毒滅活血漿。3.9 輻照血 采用血液輻照儀，用2530Gy射線照射以滅活含有白細(xì)胞的血液成分制品中的活性淋巴細(xì)胞，從而防止輸血相關(guān)移植物抗宿主?。═A-GVHD）的發(fā)生。 按照輻照

20、儀說明書的要求，設(shè)置程序及參數(shù)。 輻照血液制品，按照輻照儀說明書的操作規(guī)程操作。3.10 速凍血漿操作規(guī)程 速凍是保存血漿內(nèi)各種有效蛋白質(zhì)成分及生物活性因子的重要條件。為達(dá)到快速冷凍的目的，可采用速凍裝置，具體操作按速凍設(shè)備操作說明書操作。311 血液成分保存的條件及有效期限（見表3-1）表3-1 血液成分保存、運輸?shù)臈l件及有效期限編號品名貯存溫度運輸溫度最終有效期限備注1全 血26210ACD/CPD/CP2D：21天CPDA：35天2紅細(xì)胞26210ACD/CPD/CP2D：21天CPDA-1：35天特殊添加液：42天開放系統(tǒng)：24小時3冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞26210解凍后24小時4冰凍紅細(xì)胞（40%甘油）冰凍紅細(xì)胞（20%甘油）65120冷凍狀態(tài)10年采集后6天內(nèi)冷凍5去白細(xì)胞紅細(xì)胞26210ACD/CPD/C