微生物絮凝劑產(chǎn)生菌的篩選和特性研究

1、微生物絮凝劑產(chǎn)生菌的篩選和特性研究                        摘要：從活性污泥中篩選出一株高效的微生物絮凝劑產(chǎn)生菌，初步鑒定為霉菌。該菌產(chǎn)絮凝劑與菌體生長相關(guān)，在菌生長的穩(wěn)定期后，達到最佳的絮凝效果。該絮凝劑主要為胞外產(chǎn)物，只有很少部分存在于菌體中。高嶺土絮凝實驗結(jié)果表明，該菌產(chǎn)絮凝劑在不添加任何助凝劑的情況下，絮凝率達到95.08。該絮

2、凝劑對城市污水的濁度去除率為88。 關(guān)鍵詞：絮凝劑 微生物 特性研究  Research on the Screening and Characteristics of A Bio-Flocculant-Producing BacteriumAbstract: A strain which was preliminarily identified as mould screened from the activated sludge can produce a high efficient bio-flocculant. The production of the flocculan

3、t correlates with the growth curve of the bacterium. The flocculation reaches its highest after the stationary stage. The main flocculant exists in the extracellular fluid. Experiments on kaolin suspension with produced bio-flocculant show that the flocculation efficiency achieves 95.08% without any

4、 aids and those on sewage show 88% of turbidity removal,Key words: wastewater treatment; flocculant; bio-flocculant微生物絮凝劑是一類由微生物產(chǎn)生的有絮凝活性的次生代謝產(chǎn)物。已經(jīng)知道的微生物絮凝劑有糖蛋白、多糖、蛋白質(zhì)、纖維素和DNA等1-4，均為分子量高于105的生物大分子，盡管性質(zhì)各異，但均能快速絮凝各種顆粒物質(zhì)，尤其具有廢水脫色的獨特效果。微生物絮凝劑產(chǎn)生菌來源廣泛，種類多。此外，微生物絮凝劑具有高效、無毒、無二次污染、使用條件粗放等特點。目前在細菌、霉菌、放線菌、酵母菌中均

5、有發(fā)現(xiàn)，種類有數(shù)十種之多，其中微生物絮凝劑產(chǎn)品的報道最多的主要是：以醬油曲霉AJ7002(Aspergillus)5-6為原料生產(chǎn)的AJ7002微生物絮凝劑、擬青霉素(Paecilomyces sp.)7微生物生產(chǎn)的PF101絮凝劑、紅平紅球菌(Rhodococcus erythropo-lis)8-9、微生物生產(chǎn)的NOC1絮凝劑等。本文從活性污泥中篩選分離到一株高效微生物絮凝劑產(chǎn)生菌，并對該菌產(chǎn)絮凝劑的效率和特性進行了初步研究。1 材料和方法 1.1 菌種及篩選培養(yǎng)基菌種源液：取自廣州市的污水處理廠生活污水。篩選培養(yǎng)基：葡萄糖20g，KH2PO42g，K2HPO45g，(NH4)SO40.2

6、g，NaCl0.1g，脲0.5g，酵母膏0.5g，pH7.5-8。1.2 篩選方法將樣品富集培養(yǎng)后，用平板劃線分離方法獲得單菌落，將純化后的菌種編號，各菌30搖床培養(yǎng)72h后，通過測定各菌培養(yǎng)液的絮凝活性進行初篩，對初篩獲得的菌，采用平行發(fā)酵培養(yǎng)，定量測定發(fā)酵液的絮凝活性，進行復篩。1.3 絮凝活性的測定100mL量筒中加入80mL蒸餾水，0.4g高嶺土，5mL1CaCl2溶液，2mL發(fā)酵液，然后加蒸餾水至100mL，調(diào)節(jié)PH至7.5，然后倒入150mL燒杯中，放在磁力攪拌器上攪拌2min，靜止5min，吸取上清液50mL處的液體采用722型分光光度計在550nm處測定吸光度(以A表示)，以不

7、加發(fā)酵液的吸光率(以B表示)為對照，來計算發(fā)酵液的絮凝程度。絮凝率()(AB)A×100 (1)1.4 菌產(chǎn)絮凝劑的周期在250mL三角瓶中裝入50mL培養(yǎng)基，30搖床培養(yǎng)，每隔一段時間取樣一次，測定培養(yǎng)液的pH值，菌生長量(以O(shè)D660表示)及絮凝率。1.5 不同陽離子對絮凝效果的影響不同陽離子(濃度為1)分別加到絮凝體系中，測定陽離子對絮凝效果的影響。1.6 培養(yǎng)液中絮凝活性的分布發(fā)酵液在3000rmin下離心30min，移去上清液。菌體用蒸餾水洗滌后懸浮在與培養(yǎng)液等體積的蒸餾水中，得菌細胞懸液。定量測定培養(yǎng)液、去菌細胞上清液及菌細胞懸液對高嶺土的絮凝率。 2 結(jié)果與討論 2.1

8、 菌種篩選以高嶺上懸濁液為測試水樣測定從樣品中純化出的菌株培養(yǎng)液絮凝活性。篩選共獲得11株有絮凝能力的菌株，分屬于細菌和真菌。有3株絮凝活性達到80以上，其中一株具有較高絮凝活性的真菌HHE6，根據(jù)它的生化和生理特征初步鑒定為霉菌，該菌株產(chǎn)生的絮凝劑對高嶺上懸濁液的絮凝率為9598，以下以菌株HHE6進行一些特性研究。2.2 菌產(chǎn)絮凝劑的周期測定HHE6菌株的生長曲線、pH值變化曲線及絮凝率曲線如圖1、圖2、圖3所示。 圖2顯示，在培養(yǎng)過程中，HHE6菌株一直保持在偏酸性的環(huán)境中生長，pH值先是下降，然后緩慢升高，并趨于穩(wěn)定。培養(yǎng)液絮凝率與菌生長量同步升高，在菌生長的穩(wěn)定期后期達到最佳的絮凝效

9、果。在此培養(yǎng)條件下，絮凝率在第5d左右達到最高值。絮凝活性與菌生長量成正相關(guān)性，與有關(guān)文獻1，7，8，10的報道結(jié)論相同。2.3 不同金屬離子對絮凝效果的影響不同陽離子(濃度為1)分別加到用高嶺土和培養(yǎng)液配制的水樣中，測定陽離子對菌株絮凝效果的影響，結(jié)果見表1。由表1顯示，不同金屬離子對絮凝效果的影響有差異，Ca2+的添加有利于菌產(chǎn)絮凝劑的絮凝作用，Al3+的添加基本上起不到促進絮凝的作用，而Fe2+、Mn2+、Cu2+、K+等陽離子的加入不利于絮凝作用的發(fā)生。 表1 陽郭子對絮凝效果的影響 陽離子種類絮凝率/%對照95.08Al3+95.15Ca2+97.08Fe2+62.81Mn2+85.

10、86Cu2+51.84K+79.58菌株發(fā)酵液離心分離得完整細胞及上清液。菌體用蒸餾水洗滌后，懸浮在與培養(yǎng)液等體積的蒸餾水中，得菌細胞懸液。測定菌細胞懸液及去菌細胞上清液的絮凝率，并與發(fā)酵液的絮凝率比較。絮凝實驗表明(見表2)，絮凝劑的絮凝活性主要表現(xiàn)在去菌細胞上清液中(相對絮凝率為96.89)，菌體細胞基本無絮凝能力。表2 菌株培養(yǎng)中絮凝活性的分布絮凝效果發(fā)酵液去菌細胞上清液菌細胞懸液絮凝率/%95.1592.190相對絮凝率*/%10096.8902.5 培養(yǎng)液對城市污水的絮凝效果取2種不同水質(zhì)的城市污水，在1L量杯中加入1000mL城市污水，50mL1CaCl2溶液，10mL發(fā)酵液，在六

11、聯(lián)攪拌機上進行絮凝實驗，用光電比濁儀測定上清液的濁度，實驗結(jié)果見表3。表3  培養(yǎng)液對城市污水的絮凝效果試驗用水pH濁度/NTU濁度去除率/%進水出水1#8.511713.688.42#7.510710.590.2由表3可看出，發(fā)酵培養(yǎng)液加氯化鈣對城市污水絮凝效果良好，濁度去除達88以上。3 結(jié)論 實驗結(jié)果表明，絮凝劑產(chǎn)生菌HHE6營養(yǎng)要求簡單，在菌生長的同時合成胞外高聚物，且絮凝劑的形成與菌體生長正相關(guān)。菌株HHE6產(chǎn)絮凝劑具有良好的絮凝效果，對高嶺土懸浮液最高絮凝率可達98，對城市污水濁度去除率達88以上，是一種很有應用前景的絮凝劑產(chǎn)生菌。   &#

12、160;                         參考文獻：1 王鎮(zhèn)，王孔星，謝裕敏，等.幾株微生物絮凝劑產(chǎn)生菌的特殊研究J.微生物學報，1995，35(2)：121129.2 Hiroaki Takagi Kiyoshi Kadowaki. Purification and Chemical Properties of a Flocculant P

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