蛋白質(zhì)濃度測(cè)定——考馬斯亮藍(lán)染色法(實(shí)驗(yàn)報(bào)告)

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上蛋白質(zhì)濃度測(cè)定考馬斯亮藍(lán)染色法（實(shí)驗(yàn)報(bào)告）實(shí)驗(yàn)日期：2015年4月28日 實(shí)驗(yàn)溫度：室溫實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)：生物化學(xué)與遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)室 指導(dǎo)老師：*班級(jí)：2013級(jí)生物技術(shù)1班 姓名：* 學(xué)號(hào)：* I. 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1.學(xué)習(xí)考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度的原理和方法； 2.熟悉蛋白質(zhì)含量測(cè)定的影響因素。II. 實(shí)驗(yàn)原理 考馬斯亮藍(lán)是根據(jù)蛋白質(zhì)與染料相結(jié)合的原理設(shè)計(jì)的，這是一種迅速、可靠的通過(guò)染色法測(cè)定溶液中蛋白質(zhì)濃度的方法。 考馬斯亮藍(lán)G-250在酸性游離狀態(tài)下呈棕紅色，最大吸收波長(zhǎng)465nm，與蛋白質(zhì)結(jié)合后變?yōu)樗{(lán)色，最大吸收波長(zhǎng)595nm，在一定的蛋白質(zhì)濃度范圍內(nèi)吸光度與蛋白質(zhì)含量成正

2、比。 蛋白質(zhì)與考馬斯亮藍(lán)G-250結(jié)合，反應(yīng)2min即可到達(dá)平衡，復(fù)合物在室溫下1h內(nèi)保持穩(wěn)定。蛋白質(zhì)考馬斯亮藍(lán)G-250復(fù)合物吸光系數(shù)，使得在測(cè)定蛋白質(zhì)濃度時(shí)靈敏度很高，可測(cè)微克級(jí)蛋白質(zhì)含量。III. 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器 1.實(shí)驗(yàn)試劑 (1) 100g/mL標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液 5mg酪蛋白溶于50mL的0.1mol/L氫氧化鈉溶液。(2)考馬斯亮藍(lán)G-250試劑 50mg考馬斯亮藍(lán)G-250溶于25mL的95%乙醇中，加85%的磷酸50mL，蒸餾水定容至500mL。(3)正常人血漿。 2.實(shí)驗(yàn)器材 可見(jiàn)分光光度計(jì)，100L 微量移液器16支，5mL刻度吸管8支，中試管。IV. 實(shí)驗(yàn)操作步驟mL012

3、345樣品1樣品2標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液00.20.40.60.81.0-血漿00.80.60.40.200.40.40.1mol/LNaOH-0.60.6考馬斯亮藍(lán)試劑各5.0 1.繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 取中試管8支，按下表加入各種試劑 混勻，室溫放置5min后即可比色。以“0”號(hào)管為空白，記錄于下表，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制數(shù)據(jù)表012345樣1樣2標(biāo)準(zhǔn)蛋白g數(shù)020406080100A59500.5170.8050.9411.1571.1921.4651.440 2.樣品測(cè)定 中試管2支分別加未知濃度蛋白質(zhì)（或人正常血漿）0.4mL，各加5.0mL考馬斯亮藍(lán)試劑搖勻，室溫放置5min，以“0”號(hào)管為空白比色，以所測(cè)A595于標(biāo)準(zhǔn)曲線查蛋白質(zhì)含量。V. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析 結(jié)果分析：實(shí)驗(yàn)未能達(dá)到預(yù)期的一條直線，原因可能為：血漿樣本放置時(shí)間太久，蛋白質(zhì)變性；實(shí)驗(yàn)比色杯由于使用后未及時(shí)擦洗，導(dǎo)致比色誤差（原因?。?；人為操作不當(dāng)，導(dǎo)致誤差。VI. 注意事項(xiàng) 1. 考馬斯亮藍(lán)試劑加入后室溫放置520m