基礎(chǔ)生物學(xué)實驗講義

1、基礎(chǔ)生物學(xué)實驗講義（生命科學(xué)類本科生使用）廣西大學(xué)行健文理學(xué)院實驗一 普通光學(xué)顯微鏡的使用與生物繪圖一、實驗?zāi)康?. 了解普通光學(xué)顯微鏡的基本構(gòu)造，能規(guī)范和較熟練地使用；2. 學(xué)習(xí)細胞臨時裝片的制作方法和生物繪圖的方法。 二、實驗材料細菌涂片三、實驗用具顯微鏡、載玻片、蓋玻片、膠頭滴管四、實驗內(nèi)容1、普通光學(xué)顯微鏡的基本構(gòu)造、使用方法及保護顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)顯微鏡構(gòu)造很復(fù)雜，種類很多，但基本結(jié)構(gòu)是由機械和光學(xué)兩大部分構(gòu)成，現(xiàn)分述如下：1.1 機械部分它是為光學(xué)部分服務(wù)的部件，包括以下六部分：(1) 鏡座：顯微鏡最下面呈馬蹄形或圓形的部分，起穩(wěn)定和支持顯微鏡作用。(2) 鏡柱：直立于鏡座上的短柱，

2、支持顯微鏡的其它部分。(3) 鏡臂：彎曲成馬蹄形的部分，便于手持，下端與鏡柱相連接的地方有一個傾斜關(guān)節(jié)，可使鏡臂傾斜，便于觀察。(4) 載物臺：自鏡臂下端向前伸出，放置標本用的平臺，其中央有一個園孔，叫通光孔。臺上有一移動器（老式的左右各有一個壓片夾），用以固定和移動標本。(5) 鏡筒：和鏡臂上方連接的園筒部分。有的顯微鏡鏡筒內(nèi)有一抽管，可適當(dāng)抽長，一般長度是160-170mm。鏡筒上端裝有目鏡，下端有一個可轉(zhuǎn)動的園盤，叫物鏡轉(zhuǎn)換器（或叫物鏡旋轉(zhuǎn)盤），其上裝有2-4 個物鏡。(6) 調(diào)焦器（調(diào)節(jié)器或調(diào)節(jié)螺旋）：為鏡壁上兩種可轉(zhuǎn)動的螺旋，一大一小，能使鏡筒上下移動，調(diào)節(jié)焦距。大的叫粗調(diào)焦器，升降

3、鏡筒較快，用于低倍鏡對焦；小的叫細調(diào)焦器，升降鏡筒較慢。1.2 光學(xué)部分由接目鏡、接物鏡、反光鏡、聚光器等四部件組成。(1) 接目鏡：裝于鏡筒上方，由兩組透鏡構(gòu)成，接目鏡的作用是把接物鏡所形成的倒立實像再放大成為一個虛像。接目鏡上刻有5×，8×，10×，15×，25×等符號，表示放大倍數(shù)。我們所觀察到的標本的物像，其放大倍數(shù)是接物鏡和接目鏡放大倍數(shù)的乘積。如接物鏡是10×，接目鏡是8×，其物像的放大倍數(shù)是10×880 倍?？稍诮幽跨R內(nèi)兩個透鏡間的光欄上可裝一根剪短的毛發(fā)，做為指針，用以指示要觀察的材料。(2) 接物

4、鏡：裝在鏡筒下端物鏡轉(zhuǎn)換器的孔中，一般的顯微鏡有 2-4 個接物鏡鏡頭，每個鏡頭都是由一系列的復(fù)式透鏡組成的，其上也有放大倍數(shù)記號，有4×，10×，40×及100×。4×及10×接物鏡是低倍鏡，40×是高倍鏡，100×是油鏡。低倍鏡常用于搜索觀察對象及觀察標本全貌，高倍鏡則用于觀察標本某部分或較細微的結(jié)構(gòu)，油鏡則常用于觀察微生物或動植物更細微的結(jié)構(gòu)。(3) 聚光器（集光器）：位于載物臺（通光孔）下方，由兩塊或數(shù)塊鏡組成，它能將反光鏡反射來的光線集中以射入接物鏡和接目鏡，有的聚光器可升降，便于調(diào)光，集光器下有一可伸縮

5、的園形光圈，叫虹彩光圈，可調(diào)集光器口徑的大小和照射面，以調(diào)節(jié)光線強弱（有的顯微鏡只有遮光極而無集光器）。光線過強時，可縮小虹彩光圈。(4) 反光鏡：是顯微鏡觀察時獲得光源的裝置，位于顯微鏡鏡座中央，一面為平面鏡，一面為凹面鏡。轉(zhuǎn)動反光鏡，可使外面光線通過集光器照射到標本上。使用時，光線強用平面鏡，光線弱用凹面鏡。顯微鏡的使用方法(1) 取好光源（調(diào)光）用顯微鏡觀察標本前，先要取好光源。首先把顯微鏡放在自己左肩一側(cè)臺前，鏡座距桌邊約兩寸，鏡臂朝自己，鏡筒朝外。用手轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器，使低倍接物鏡和鏡筒成一直線，正對通光孔。用左眼從接目鏡向下注視，同時用手撥動反光鏡，讓鏡面對著光源，當(dāng)看到圓形鏡界（視

6、野）呈現(xiàn)光亮而均勻的時候即調(diào)好光了，如視野陰暗不明，則需再調(diào)節(jié)反光鏡和集光器，直到視野明亮均勻為止。若為自帶電源，則在使用前打開電源開關(guān)，逐步調(diào)節(jié)光亮度旋鈕，直至亮度合適為止。(2) 觀察將要觀察的玻片標本放在載物臺通光孔的中央，玻片標本兩端用壓片夾夾緊，再用手沿順時針方向旋轉(zhuǎn)粗調(diào)節(jié)器，把鏡筒徐徐降到物鏡頭差不多接近玻片標本（約半厘米）為止（從側(cè)面觀察下降鏡筒）。然后左眼觀察，邊觀察邊用調(diào)節(jié)器將鏡筒徐徐上升（逆時針方向旋轉(zhuǎn)粗調(diào)節(jié)器）直到發(fā)現(xiàn)物象，觀察清晰為止。如果觀察部分不在視野中心，可移動玻片標本到視野中心，再上下轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)器至物象清晰為止。如果要觀察視野內(nèi)某部分更細微的結(jié)構(gòu)，則需要用高倍鏡

7、觀察，首先要把觀察的部分移至視野中心，然后移動物鏡轉(zhuǎn)換器換上高倍鏡（使正對通光孔）（使用鏡頭轉(zhuǎn)化器，不要直接扳動鏡頭），再用粗調(diào)節(jié)器徐徐將鏡筒距離調(diào)整，至視野中出現(xiàn)物象，然后用細調(diào)節(jié)器調(diào)節(jié)到看清物象止。如光線太弱，可放大虹彩光圈的口徑或調(diào)節(jié)光亮度旋鈕。高倍鏡下觀察的標本，如果放大倍數(shù)還不夠，可用油鏡，換用前，同樣要先在高倍鏡下觀察，把要觀察的部分放在視野的正中央。觀察到清晰的物象之后，在蓋玻片上表面的中央滴一小滴香柏油，再換上油鏡頭，使油鏡頭與香柏油接觸，然后由目鏡觀察。一邊觀察，一邊用手稍移動細調(diào)節(jié)器（切忌用粗調(diào)節(jié)器）以看清物象。用油鏡觀察完畢后，轉(zhuǎn)開油鏡，必須用擦鏡紙點二甲苯擦去鏡頭上的香

8、柏油。下降鏡筒，直立反光鏡，使光學(xué)部件的光線不再對在一條直線上。應(yīng)當(dāng)了解的是，在顯微鏡中觀察到的物象是倒象，因此移動玻片時，應(yīng)注意移動方向。如果要使物象左移動就要向右移動玻片，同樣要使物象向前移動，就要向后移動玻片。觀察結(jié)束后，降下載物臺，取掉載玻片，光源調(diào)至最弱后關(guān)閉電源（為防止下次打開電源時因電流過大燒毀照明燈泡，請在關(guān)閉電源前一定將光源亮度調(diào)至最暗）。顯微鏡的保養(yǎng)(1) 取送顯微鏡時，必須右手握住鏡臂，左手托住鏡座，輕拿輕放。(2) 顯微鏡的使用，一定要按實驗指導(dǎo)寫的方法和步驟，認真仔細去做，不然，容易損壞標本和鏡頭，又達不到看清物象的目的。(3) 觀察標本時，一定要先用低倍鏡觀察，再用

9、高倍鏡，低倍鏡能看清，就不必用高倍鏡。(4) 不能用硬紙擦透鏡，必須用干凈的擦鏡紙或細軟紗布，朝一個方向擦試透鏡，以免損壞鏡頭。(5) 不要隨便轉(zhuǎn)動粗細調(diào)節(jié)器，以免機器損傷，調(diào)節(jié)失靈。(6) 載物臺要保持清潔、干凈，不要讓水或其他液體（酸、堿或其他化學(xué)藥品等）流到臺上，以免生銹或腐蝕。(7) 避免陽光直接照射，要防潮濕、防灰塵，經(jīng)常保持鏡體和鏡體箱的干燥和清潔。2細菌涂片形態(tài)、結(jié)構(gòu)的觀察將標本片置于鏡臺上，先練習(xí)低倍鏡的使用，然后再換高倍鏡和油鏡觀察，繪出各細菌形態(tài)圖。生物繪圖的要求(1) 具有高度的科學(xué)性，不得有科學(xué)性錯誤。形態(tài)結(jié)構(gòu)要準確，比例要正確，要求真實感，立體感，精美而美觀。(2)

10、圖面要力求整潔，鉛筆要保持尖銳，盡量少用橡皮。(3) 繪圖大小要適宜，位置略偏左，右邊留著注圖。(4) 繪圖的線條要光滑、勻稱，點點要大小一致。(5) 繪圖要完善，字體用正楷，大小要均勻，不能潦草。注圖線用直尺畫出，間隔要均勻，且一般多向右邊引出，圖注部分接近時可用折線，但注圖線之間不能交叉，圖注要盡量排列整齊。(6) 繪圖完成后在繪圖紙上方要寫明實驗名稱、班級、姓名、時間，在圖的下方注明圖名及放大倍數(shù)。生物繪圖的方法生物繪圖的方法有多種，最常見的是點點襯陰法和線條襯陰法。點點襯陰法即將圖形畫出后，用鉛筆點出圓點，以表示明暗和深淺，給予立體感。在暗處點要密，明處要疏，但要求點要均勻，點點要從明

11、處點起，一行行交互著點，物體上的斑紋描出再點點襯陰。線條襯陰法又稱涂抹陰影法，是依靠線條的疏密來表示陰暗和深淺。點點襯陰法要求不能用涂抹陰影的方法以代替點點。生物繪圖的步驟(1) 繪圖前認真的觀察標本，搞清實物標本的結(jié)構(gòu)特點，切忌抄書或平空想象。(2) 用 HB 鉛筆輕輕將圖輪廓畫出，作為草圖要掌握好比例和位置。(3) 在草圖的基礎(chǔ)上繪詳圖，此時要用 2H 和3H 鉛筆，線條要流暢，點要勻稱，點線不要重復(fù)描繪。(4) 按注圖要求繪圖，寫上圖名及班級、姓名、放大倍數(shù)等。五、實驗要求按實驗?zāi)康牡囊笸瓿蓪嶒瀮?nèi)容和實驗報告，報告要求：1. 寫出使用普通光學(xué)顯微鏡的注意事項。2. 按生物繪圖的要求準確

12、繪出細菌形態(tài)。實驗二 生物細胞的顯微結(jié)構(gòu)一、實驗?zāi)康?1) 了解植物細胞的基本構(gòu)造及裝片觀察的操作方法。(2) 了解動物細胞及基本組織的結(jié)構(gòu)和功能。(3) 進一步掌握顯微鏡的使用方法。二、實驗材料洋蔥鱗葉、白菜葉、胡蘿卜三、實驗用具顯微鏡、刀片、攝子、載玻片、蓋玻片、培養(yǎng)皿、滴管、蒸餾水、吸水紙四、實驗內(nèi)容1、植物細胞的顯微結(jié)構(gòu)1.1 觀察洋蔥鱗葉的表皮細胞首先在干凈的載玻片中央加一滴蒸餾水，然后取洋蔥鱗莖剝?nèi)ネ馄ぽ^老的鱗葉片，用攝子撕去內(nèi)部鱗片葉表皮一小塊放在載玻片水滴中，將其展平后，再用攝子夾取一干凈的蓋玻片，將其一邊放于載玻片上，和水面接觸，另一邊慢慢放下，以免產(chǎn)生氣泡防礙觀察。如水不足

13、，沿蓋玻片邊緣滴加，如邊緣水分過多，可用紗布拭去，這樣做成臨時裝片后，就可放置顯微鏡下觀察。先用低倍鏡觀察，再選擇一個清晰的細胞用高倍鏡仔細觀察細胞形狀及各部分構(gòu)造，可見洋蔥鱗片葉表皮細胞多數(shù)呈長方形，外為細胞壁，內(nèi)有無色細胞質(zhì)和細胞核，圓形的細胞核內(nèi)可見到1-2 個更小的折光較強的核仁。由于洋蔥表皮細胞較為透明，故必須縮小虹彩光圈，避免過強光線，否則反而看不清。1.2 質(zhì)體(1) 觀察白菜葉肉細胞中的葉綠體取載玻片一塊，在其中滴入清水，然后用攝子撕取白菜葉帶葉肉的下表皮，放在載玻片的水滴中，蓋上蓋玻片，在顯微鏡下觀察，可看見在葉的細胞中有許多圓形綠色顆粒葉綠體。在表皮細胞中一般不含葉綠體，但

14、在組成氣孔的兩個半圓的保衛(wèi)細胞中可見圓形葉綠體。(2) 觀察胡蘿卜細胞的有色體在培養(yǎng)皿中盛好水，將胡蘿卜（儲藏根）切成 2-3cm 長，用左手的食指和大姆指夾持，中指在下頂住，使胡蘿卜頂部置于指上4-6mm，右手拿刀片，刀口朝內(nèi)保持水平方向，自左前方向右后方拉動刀片，胡蘿卜片就被切下。為了切得厚薄均勻，刀片與材料斷面要平行，左手保持平穩(wěn)不動，右手拉刀迅速均勻，材料與刀片保持濕潤。切好的切片，立即放入培養(yǎng)皿的水中。選擇最薄的切片，做成水裝片，在顯微鏡下觀察，有色體為紅橙色，不規(guī)則的顆粒或棒狀。2、動物細胞的顯微結(jié)構(gòu)人口腔上皮細胞用牙簽粗的一端放在自己的口腔里，輕輕地在口腔頰內(nèi)刮幾下（注意不要用力

15、過猛，以免損傷頰部）。將刮下的白色粘性物薄而均勻地涂在載玻片上，加一滴0.7NaCl 溶液，然后加蓋玻片，在低倍鏡下觀察?？谇簧掀ぜ毎讉€連接在一起。由于口腔上皮細胞薄而透明，因此光線需要暗些。找到口腔上皮細胞后，將其放在視野中心，再轉(zhuǎn)高倍鏡觀察?？谇簧掀ぜ毎时馄蕉噙呅?。試辨認細胞核、細胞質(zhì)、細胞膜。若觀察不清楚時，可在蓋片一側(cè)加一滴0.1的亞甲基藍，另一側(cè)放一小塊吸水紙。如此，可使染液流入蓋片下面，將細胞染成淺藍色。核染色較深。注意染液不可加得過多，以免妨礙觀察。五、實驗要求(1) 繪一個洋蔥鱗片葉的表皮細胞，并注明各部分名稱。(2) 繪白菜葉肉中的葉綠體，胡蘿卜根細胞中的有色體。(3)

16、 繪人口腔上皮細胞圖。實驗三 植物細胞的質(zhì)壁分離與質(zhì)壁分離復(fù)原一、實驗?zāi)康?1) 了解植物細胞質(zhì)壁分離的原理，了解滲透勢與植物水分代謝、生長及抗逆性等的密切關(guān)系。原理：生長的植物細胞是一個滲透系統(tǒng)，活細胞的原生質(zhì)及其表層具有分別透性，原生質(zhì)層內(nèi)部含有一個大液泡，具有一定的溶質(zhì)勢。當(dāng)細胞與外界高滲溶液接觸時，細胞內(nèi)的水分外滲，原生質(zhì)隨著液泡一起收縮而發(fā)生質(zhì)壁分離，其后，當(dāng)與清水（或低滲溶液）接觸，或當(dāng)外面的溶質(zhì)進入時，具有液泡的原生質(zhì)體就又吸水而發(fā)生質(zhì)壁分離復(fù)原。(2) 進一步掌握顯微鏡的使用方法。二、實驗材料洋蔥鱗葉三、實驗用具顯微鏡、小培養(yǎng)皿、載玻片、蓋玻片、刀片、尖頭鑷子、酒精燈、火柴、吸

17、水紙適量、0.03%中性紅溶液；1mol/L 硝酸鉀溶液四、實驗內(nèi)容(1) 切下一片較幼嫩的洋蔥鱗片，用單面刀片在鱗片內(nèi)側(cè)割劃成0.5cm2 左右的小塊，用尖頭鑷子將內(nèi)表皮小塊輕輕撕下，投入0.03%的中性紅溶液中染色510min，取出12 片，在蒸餾水中稍加沖洗，在載玻片上滴一滴蒸餾水，小心地將制片平展到載玻片上，加蓋玻片，在顯微鏡下觀察，可以看出明顯的液泡染色，無色透明的原生質(zhì)層則緊貼細胞壁（在細胞的角隅上可以看見）。(2) 從蓋玻片的一邊滴一滴 1mol/L 硝酸鉀溶液并在對邊用濾紙吸水，將硝酸鉀溶液引入蓋玻片下使與制片接觸并立即鏡檢，可看到細胞內(nèi)很快發(fā)生凸形質(zhì)壁分離。(3) 觀察到質(zhì)壁

18、分離后，在蓋玻片一邊小心加清水一滴，并對邊用濾紙緩緩吸去硝酸鉀溶液，重復(fù)二次，使質(zhì)壁分離劑（即高滲的硝酸鉀溶液）被基本上洗吸掉。鏡檢，可看到質(zhì)壁分離停止進行，相反，帶有液泡的原生質(zhì)體開始重新吸水膨大，最后又充滿整個細胞腔，這就是質(zhì)壁分離復(fù)原現(xiàn)象。質(zhì)壁分離復(fù)原緩緩進行時，細胞仍會正常存活；如進行很快，則原生質(zhì)體會發(fā)生機械破壞而死亡。(4) 另取一部分制片置載玻片上，先在酒精燈上加熱，以殺死細胞，再引入高滲硝酸鉀溶液，觀察有無質(zhì)壁分離發(fā)生。五、實驗要求繪細胞的質(zhì)壁分離及質(zhì)壁分離復(fù)原圖。實驗四 原生動物的顯微觀察一、實驗?zāi)康耐ㄟ^對大草履蟲等的觀察，了解原生動物的主要特征。二、實驗材料大草履蟲培養(yǎng)液三

19、、實驗用具顯微鏡，載玻片，蓋玻片，吸管，吸水紙， 5冰醋酸。四、實驗內(nèi)容滴 1 滴草履蟲培養(yǎng)液制成臨時裝片，在低倍鏡下觀察，可見許多形似草鞋的草履蟲。若其游動太快，可用吸水紙在蓋玻片一側(cè)吸去一些水，等靜止后，再行觀察。首先分辨出草履蟲的前、后端，前端較圓后端較尖。選擇1 個比較清晰而不太活動的草履蟲，將光線調(diào)暗一些觀察，可見蟲體長滿纖毛，并時時擺動。在蟲體的前端稍后，有一斜向后直達體中部的口溝，口溝后端有胞口，其下連一短管為胞咽。蟲體最外為表膜，有彈性，當(dāng)蟲體穿過棉纖維時，體形可以改變。表膜以內(nèi)是透明的外質(zhì)，外質(zhì)內(nèi)有橢圓形的刺絲泡。外質(zhì)以內(nèi)是顆粒狀的內(nèi)質(zhì)，里面有食物泡，前后有2 個伸縮泡，當(dāng)伸

20、縮泡縮小時，可見其周圍有6-7 個放射狀的長形小管-收集管。請注意前、后伸縮泡之間及伸縮泡與收集管之間的收縮規(guī)律。它們有何功能？草履蟲有 2 個細胞核，位于內(nèi)質(zhì)里，小核不易看到，在蓋玻片一邊滴1 滴5的冰醋酸，另一邊用吸水紙吸水，過23min 后，在光線充足的情況下，用低倍鏡即可見到腎形的大核，換高倍鏡，在大核凹處可見有一點狀的結(jié)構(gòu)，即為小核。五、實驗要求1繪草履蟲的形態(tài)結(jié)構(gòu)圖并注明各部分的名稱。草履蟲的培養(yǎng)方法一、草履蟲（Paramecium）草履蟲屬于原生動物門的纖毛綱，是一類體型較大的原生動物，在自然界廣泛分布，又容易采集和培養(yǎng)，是觀察研究原生動物的好材料。草履蟲種類很多，其中體型最大和

21、最常見的是大草履蟲（Paramecium caudatum）。1. 采集草履蟲通常生活在水流速度不大的水溝、池塘和稻田中，大多積聚在有機質(zhì)豐富，光線充足的水面附近。當(dāng)水溫在1422時，繁殖最旺盛，數(shù)目最多、草履蟲的這些習(xí)性，是確定采集地點和方法的重要依據(jù)。(1)到水溝、池塘采集草履蟲。水溝和池塘是草履蟲的主要生活場所。在氣候溫暖的季節(jié)，到水質(zhì)沒有污染的水溝、池塘岸邊，選擇枯枝落葉多的地方，用廣口瓶沿水面采集池水，這樣的池水往往含有許多草履蟲。為了更有把握，可在不同地點多采幾瓶。采集后，廣口瓶內(nèi)要放置少許水草，瓶口不要加蓋，以免草履蟲因缺氧而窒息死亡?；氐綄嶒炇液?，要把盛有池水的廣口瓶放在溫暖、

22、明亮、陽光又不直射的地方，使瓶中的草履蟲迅速繁殖。三五天以后，對著光線用肉眼觀察，如果看到水中有許多小白點在不停地游動，很可能就是草履蟲。這時，用吸管吸取一滴帶有小白點的水，放在載玻片上，用顯微鏡進行觀察，在視野中會看到各種微小生物。如果發(fā)現(xiàn)有象倒置的草鞋一樣的小動物，不停地螺旋運動，那就是草履蟲，采集就成功了。(2)到稻田采集草履蟲。在稻田灌水期間，尋找田中的舊稻茬，用廣口瓶在稻茬附近取水，隨后放進幾根舊稻草。這樣的水中往往會有許多草履蟲。返回實驗室后，放在溫暖明亮處，三五天后，用顯微鏡檢查是否有草履蟲存在。(3)從新鮮稻草上采集草履蟲。當(dāng)環(huán)境變得干旱或寒冷時，草履蟲能向身體表面分泌一層蛋白

23、質(zhì)的薄膜，蟲體不吃不動，進入休眠狀態(tài)。這種狀態(tài)叫作包囊。在稻田水抽干時，草履蟲便形成許多包囊，附著在稻草近根部的幾節(jié)莖上。因此，可選取新鮮稻草近根部的幾節(jié)，剪成34 厘米長的小段，放入廣口瓶中，注入清水，放在明亮溫暖處，一周以后，用顯微鏡檢查是否有草履蟲。2.配制培養(yǎng)液草履蟲的食物主要是細菌。為了培養(yǎng)繁殖草履蟲，必須配制含有大量細菌的培養(yǎng)液。培養(yǎng)液的配制方法通常有以下兩種。(1)稻草培養(yǎng)液。取新鮮潔凈的稻草，去掉上端和基部的幾節(jié)，將中部稻莖剪成34 厘米長的小段，按1 克稻草加清水100 毫升的比例，將稻草和清水放入大燒杯中，加熱煮沸1015 分鐘，當(dāng)液體呈現(xiàn)黃褐色時停止加熱。這樣的液體，由于

24、加熱煮沸，只留下了細菌芽孢，其它生物已均被殺死，為培養(yǎng)草履蟲創(chuàng)造了良好條件。為了防止空氣中其它原生動物的包囊落入和蚊蟲產(chǎn)卵，燒杯口要用雙層紗布包嚴。然后放置在溫暖明亮處進行細菌繁殖。經(jīng)過 34 天，稻草中的枯草桿菌的芽孢開始萌發(fā)，并依靠稻草液中的豐富養(yǎng)料迅速繁殖，液體逐漸混濁，等到大量細菌在液體表面形成了一層灰白色薄膜時，稻草培養(yǎng)液便制成了。由于草履蟲喜歡微堿性環(huán)境，如果培養(yǎng)液呈酸性，可用1碳酸氫鈉調(diào)至微堿性，但pH 值不能大于7.5。(2)麥粒培養(yǎng)液。將5 克麥粒（大麥、小麥均可）放入1000 毫升清水中，加熱煮沸，煮到麥粒脹大裂開為止。然后在溫暖明亮處放置34 天，便制成了麥粒培養(yǎng)液，此時

25、培養(yǎng)液中已繁殖有大量的細菌。3.接種接種是指將采集來的草履蟲轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)液的過程。接種草履蟲時必須提純，否則會混入其它小動物。這不但會影響草履蟲的純度，而且一旦混入草履蟲的天敵水輪蟲（Rotaria），將會使培養(yǎng)液中草履蟲的數(shù)量急劇下降。接種時，先將含有草履蟲的水液吸到表面皿中，再將表面皿置于低倍顯微鏡或解剖鏡下檢查，發(fā)現(xiàn)有草履蟲后，用口徑不大于0.2 毫米的微吸管，將表面皿中草履蟲逐個吸出，接種到培養(yǎng)液的廣口瓶中進行繁殖。如果要培養(yǎng)純系的草履蟲，可按上述方法，在顯微鏡或解剖鏡下，從表面皿中吸出一個草履蟲，放入盛有少量培養(yǎng)液的凹玻片中，上面再覆蓋一片凹玻片，用以防止培養(yǎng)液干燥。待草履蟲經(jīng)過橫分裂

26、達到2030 個個體時，移到培養(yǎng)液的廣口瓶中進行繁殖。4.培養(yǎng)(1)將接種有草履蟲的培養(yǎng)液的廣口瓶，放在溫暖明亮處進行培養(yǎng)，培養(yǎng)液的容器口要用紗布包嚴。大約1 周后，就會有大量草履蟲出現(xiàn)。(2)如果是長期培養(yǎng)，就要定期更新培養(yǎng)液。這是因為隨著蟲體大量繁殖，培養(yǎng)液中營養(yǎng)逐漸減少，而蟲體排出代謝物卻又不斷增加，這就會引起草履蟲數(shù)量減少甚至全部死亡。因此在培養(yǎng)過程中，每隔3 天左右須更新一次培養(yǎng)液。更新時，用吸管從廣口瓶底部吸去培養(yǎng)液及沉淀物，每次要吸去一半培養(yǎng)液，加入等量新鮮培養(yǎng)液。這樣可使草履蟲長期得到保存。方法一：將稻草用水煮沸，然后添加部分自來水，使稻草與水的比例大致達到1：100，同時將水

27、溫控制在20左右，或者也可以放置在陽光下照射。如此，大約經(jīng)過10 余天后，草履蟲便會在此環(huán)境中自行繁殖出來。但需要即時撈取，并不斷添加適量的新水和煮沸的稻草，草履蟲就會不斷地生長，這樣就可以用之不竭了！草履蟲的培養(yǎng)方式是非常簡單，也可以說沒有任何操作上的麻煩，而且培養(yǎng)的數(shù)量，可以根據(jù)實際需求情況自行調(diào)整容器的大小來決定。但是，這種以人工方式培養(yǎng)的草履蟲畢竟營養(yǎng)不夠豐富。一般情況下，并不適合長期喂飼，一旦仔魚可以進食一些體型較大的餌料的時候，就應(yīng)該改換其他餌料，以不影響它們的正常發(fā)育生長。實驗五 葉綠體色素的提取、分離及含量測定一、實驗?zāi)康?1) 掌握葉綠素的提取、分離和定量測定方法。(2) 熟

28、練掌握分光光度計的使用原理及其方法。二、實驗原理根據(jù)葉綠體色素提取液對可見光譜的吸收，利用分光光度計在某一特定波長下測定其光密度，即可用公式計算出提取液中各色素的含量。根據(jù)朗伯比爾定律，某有色溶液的光密度D 與其中溶質(zhì)濃度C 和液層厚度L 成正比，即： D = kCL式中：k 為比例常數(shù)。當(dāng)溶液濃度以百分濃度為單位，液層厚度為1cm 時，k 為該物質(zhì)的比吸收系數(shù)。各種有色物質(zhì)溶液在不同波長下的比吸收系數(shù)可通過測定已知濃度的純物質(zhì)在不同波長下的光密度而求得。如果溶液中有數(shù)種吸光物質(zhì)，則此混合液在某一波長下的總光密度等于各組分在相應(yīng)波長下光密度的總和，這就是光密度的加和性。測定葉綠體色素混合提取液

29、中葉綠素a、b和類胡蘿卜素的含量，只需測定該提取液在三個特定波長下的光密度D，并根據(jù)葉綠素a、b 及類胡蘿卜素在該波長下的比吸收系數(shù)即可求出其濃度。在測定葉綠素a、b 時為了排除類胡蘿卜素的干擾，所用單色光的波長選擇葉綠素在紅光區(qū)的最大吸收峰。已知葉綠素 a、b 的80%丙酮提取液在紅光區(qū)的最大吸收峰分別為663 nm 和645 nm，又知在波長663 nm 下，葉綠素a、b 在該溶液中的比吸收系數(shù)分別為82.04 和9.27，在波長645 nm 下分別為16.75 和45.60，可根據(jù)加和性原則列出以下關(guān)系式：D663 = 82.04Ca+9.27Cb （1）D645 = 16.75Ca+4

30、5.60Cb （2）式（1）、（2）中的D663 和D645 為葉綠素溶液在波長663 nm 和645 nm 時的光密度，Ca、Cb 分別為葉綠素a 和b 的濃度，以mg/L 為單位。解方程組（1）、（2），得：Ca = 12.72D663 2.59D645 （3）Cb = 22.88D645 4.67D663 （4）將 Ca 與Cb 相加即得葉綠素總量（CT）：CT = Ca + Cb =20.29D645 + 8.05D663 （5）另外，由于葉綠素a、b 在652 nm 的吸收峰相交，兩者有相同的比吸收系數(shù)（均為34.5），也可以在此波長下測定一次光密度（D652）而求出葉綠素a、b 總

31、量：CT = Ca+b =（D652 × 1000）/ 34.5 （6）在有葉綠素存在的條件下，用分光光度法可同時測定出溶液中類胡蘿卜素的含量。丙酮提取液中類胡蘿卜素的含量：Ck = 4.7D440 - 0.27Ca+b由于葉綠體色素在不同溶劑中的吸收光譜有差異，因此，在使用其他溶劑提取色素時，計算公式也有所不同。葉綠素a、b 在96%乙醇中最大吸收峰的波長分別為665 nm 和649 nm，類胡蘿卜素為470 nm，可據(jù)此列出以下關(guān)系式：Ca = 13.95D665 6.88D649 （7）Cb = 24.96D649 7.32D665 （8）Ck =（1000D470 2.05C

32、a 114.8Cb）/ 245 （9）三、實驗材料新鮮的菠菜葉片四、實驗用具分光光度計、研缽、剪刀 1 把、玻璃棒、25ml 棕色容量瓶3 個、小漏斗3 個、直徑7cm 定性濾紙、吸水紙、擦鏡紙、滴管、電子天平、大試管（帶膠塞）、大頭針、毛細管、96%乙醇、石英砂、碳酸鈣粉。推動劑：按石油醚：乙醚（4：1）（VV）。五、實驗內(nèi)容1、葉綠體色素的提取(1) 取新鮮植物葉片，擦凈組織表面污物，剪碎，混勻。(2) 稱取剪碎的新鮮樣品 1 g，共2 份，放入研缽中，加少量石英砂和碳酸鈣粉及23 mL 96%乙醇，研成勻漿，再加96%乙醇5 mL，繼續(xù)研磨至組織變白，靜置35min。(3) 取濾紙 1

33、張，置漏斗中，用96%乙醇濕潤，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，過濾到25 ml棕色容量瓶中，用少量乙醇沖洗研缽、研棒及殘渣數(shù)次，最后連同殘渣一起倒入漏斗中。(4) 用滴管吸取乙醇，將濾紙上的葉綠體色素全部洗入容量瓶中。直至濾紙和殘渣中無綠色為止。最后用96%乙醇定容至25ml，搖勻。2、葉綠體色素的含量測定(1) 將上述色素提取液倒入光徑 1 cm 的比色杯內(nèi)。以 96%乙醇為空白，在波長665 nm、649nm 和470 nm 下測定光密度。(2) 將測得的光密度值代入公式，分別計算葉綠素a、b、a+b 和類胡蘿卜素的濃度（mgL）。并按下式計算組織中單位鮮重的各色素的含量：色素含量(mg/g(

34、fw)= 色素濃度(mg/L) × 提取液總體積(mL) / 樣品重量(g) × 10003、葉綠體色素的分離(1) 點樣：取前端剪成三角形的濾紙條，用毛細管取剩余的葉綠素提取液，如圖點樣于“色點”處（用毛細吸管吸取色素濾液，采用毛筆的執(zhí)筆方式握住毛細吸管，懸腕，沿濾紙條上的鉛筆劃線作快速的劃動，就可以得到細、勻、齊的濾液細線），注意每次所點溶液不可過多，點樣后晾干，再重復(fù)操作23 次。(2) 分離：在大試管中加入推動劑，然后將濾紙固定于膠塞上，插入試管中，使尖端浸入溶劑內(nèi)（色點要高于液面，濾紙條邊緣不可碰到試管壁），蓋緊膠塞，直立于陰暗處層析。(3) 當(dāng)推動劑前沿接近濾紙

35、邊緣時，取出濾紙，風(fēng)干，觀察色帶的分布。葉綠素 a 為藍綠色，葉綠素 b 為黃綠色，葉黃素為黃色，胡蘿卜素為橙黃色。用鉛筆標出各種色素的位置和名稱。 ，六、實驗要求計算組織中單位鮮重的各色素的含量，給出各種色素分離圖。【注意事項】1為了避免葉綠素的光分解，操作時應(yīng)在弱光下進行，研磨時間應(yīng)盡量短些。2葉綠體色素提取液不能渾濁?？稍?10 nm 或750 nm 波長下測量光密度，其值應(yīng)小于當(dāng)波長為葉綠素a 吸收峰時光密度值的5%，否則應(yīng)重新過濾。3用分光光度計法測定葉綠素含量，對分光光度計的波長精確度要求較高。如果波長與原吸收峰波長相差1 nm，則葉綠素a 的測定誤差為2%，葉綠素b 為19%，使

36、用前必須對分光光度計的波長進行校正。校正方法除按儀器說明書外，還應(yīng)以純的葉綠素a 和b 來校正。4在使用低檔型號分光光度計（如：72 型、125 型、721 型等）測定葉綠素a、b 含量時，因儀器的狹縫較寬，分光性能差，單色光的純度低（±57nm），與高中檔儀器如島津UV-120、UV-240 等測定結(jié)果相比，葉綠素a 的測定值偏低，葉綠素b 值偏高，a/b 比值嚴重偏小。因此，使用時必須用高檔分光光度計對低檔的分光光度計進行校正。實驗六 洋蔥根尖有絲分裂染色體標本制備及觀察一、實驗?zāi)康耐ㄟ^對植物根尖的制片和觀察，要求學(xué)生初步學(xué)會對植物組織、細胞的固定、離析和壓片方法，了解有絲分裂的

37、全過程及其染色體的動態(tài)變化情況，掌握有絲分裂各時期的特征。二、實驗原理有絲分裂是細胞均等增殖的過程，是體細胞分裂的主要方式。在有絲分裂過程中，細胞內(nèi)每條染色體都能復(fù)制一份，然后分配到子細胞中，因此兩個子細胞與母細胞所含的染色體在數(shù)目、形態(tài)和性質(zhì)上均是相同的，在各種生長旺盛的植物組織中均存在著有絲分裂。三、實驗材料洋蔥根尖四、實驗用具顯微鏡，載玻片，蓋玻片，玻璃皿，剪刀，鑷子15%HCl（質(zhì)量分數(shù)）和95酒精（體積分數(shù)）的混合液（1：1）、0.01gmL 龍膽紫溶液五、實驗內(nèi)容1、洋蔥根尖的培養(yǎng)在實驗課前 34 天，取洋蔥一個，放在廣口瓶上。瓶內(nèi)裝滿清水，讓洋蔥的底部接觸到瓶內(nèi)的水面。把這個裝置

38、放在溫暖的地方，注意經(jīng)常換水，使洋蔥的底部總是接觸到水。待根長5 cm 時，可取生長健壯的根尖制片觀察。2、裝片的制作(1) 解離 下午 2 時是洋蔥有絲分裂的高峰期，可在此時剪取洋蔥的根尖2 mm3 mm，立即放入含15%HCl 和95酒精的混合液（1：1）的玻璃皿中，在室溫下解離3 min5 min后取出根尖。(2) 漂洗 待根尖酥軟后，用鑷子取出，放入盛有清水的玻璃皿中漂洗約10 min.(3) 染色 把洋蔥根尖放進盛有0.01gmL 龍膽紫溶液的玻璃皿中，染色3 min5 min。(4) 制片 用鑷子將這段洋蔥根取出來，放在載玻片上，加一滴清水，并且用鑷子尖把洋蔥根尖弄碎，蓋上蓋玻片，

39、用拇指垂直輕壓蓋波片，以使細胞分散開。3、洋蔥根尖細胞有絲分裂的觀察(1) 低倍鏡觀察：把制作成的洋蔥根尖裝片先放在低倍鏡下觀察，慢慢移動裝片，要求找到分生巨細胞，它的特點是：細胞呈正方形，排列緊密，有的細胞正在分裂。(2) 高倍鏡觀察：找到分生區(qū)細胞后，把低倍鏡移走，換上高倍鏡，用微調(diào)螺旋和反光鏡把視野調(diào)整清晰，直到看清細胞物像為止。(3) 仔細觀察，可先找出處于細胞分裂期中期的細胞，然后再找出前期、后期、末期的細胞。注意觀察各個時期細胞內(nèi)染色體變化的特點。(4) 在一個視野里，往往不容易找全有絲分裂過程中各個時期的細胞。如果是這樣，可以慢慢地移動裝片，從鄰近的分生區(qū)細胞中尋找。六、實驗要求

40、繪出所觀察到的有絲分裂圖像，并注明時期。實驗七 魚的形態(tài)及解剖結(jié)構(gòu)一、實驗?zāi)康耐ㄟ^鯉魚的形態(tài)及結(jié)構(gòu)的觀察，了解魚類的結(jié)構(gòu)特征。二、實驗材料新鮮鯉魚三、實驗用具顯微鏡、解剖盤、解剖工具四、實驗內(nèi)容1、外形觀察鯉魚體呈紡垂形，略為側(cè)扁。頭的最前端為口，口兩側(cè)各有一對口須，口上有一對鼻孔。頭后兩例有寬扁的鰓蓋，鰓即位于其內(nèi)。背鰭一個，最前端有一硬刺。尾鰭兩葉相等為正形尾。臀鰭的前端亦有一硬刺，腹鰭已向前移位于胸鰭之后。軀干兩側(cè)有側(cè)線，位于皮膚下。肛門開口于臀鰭的基部，泄殖孔緊接其后。2、皮膚及鱗片的觀察用手撫摸鯉魚的體表，是否光滑？鯉魚的體表被以一層上皮組織，并由其分泌大量粘液，在游泳時可以減少魚身

41、和水的摩擦。在表皮之下覆蓋著一層鱗片，鱗片彼此呈整齊覆瓦狀排列。取一鱗片置顯微鏡下面觀察，可見它大致呈圓形，中間有很多同心圓的環(huán)紋（露于體表之部分上有很多色素）。環(huán)紋可用作鑒定年齡的依據(jù)，這種鱗片叫圓鱗。再取一被側(cè)線穿過的側(cè)線鱗置于顯微鏡下觀察，即可見有一管道由其中穿過。3、內(nèi)臟器官觀察取一條鯉魚放在解剖盤里，用解剖剪由肛門向前沿腹中線至胸鰭縱形剪開，使魚體右側(cè)向下，再從肛門向背方剪到脊柱，沿脊柱向前至鰓蓋后緣剪去一例的體壁，使內(nèi)臟全部露出（注意揭開左側(cè)體壁前先將體腔膜與體壁分開，以使內(nèi)臟器官與體壁分開時不致被損壞）。用棉花拭凈器官周圍的血跡及組織液，置于盛水的解剖盤內(nèi)觀察。(1) 原位觀察&

42、#1048633; 在胸腹腔前方、最后 1 對鰓弓的腹方，有一小腔，為圍心腔，它借橫隔與腹腔分開。􀀹 心臟位于圍心腔內(nèi)，心臟背上方有頭腎。􀀹 在胸腹腔里，脊柱腹方是白色囊狀的鰾，覆蓋在前、后鰾室之間的三角形暗紅色組織，為腎臟的一部分。􀀹 鰾的腹方是長形的生殖腺，在成熟個體，雄性為乳白色的精巢，雌性為黃色的卵巢。􀀹 胸腹腔腹側(cè)盤曲的管道為腸管，􀀹 在腸管之間的腸系膜上，有暗紅色、散漫狀分布的肝胰臟，體積較大。􀀹 在腸管和肝胰臟之間一細長紅褐色器官為脾臟。(2) 生殖系統(tǒng) 由生殖腺和生殖導(dǎo)管

43、組成 生殖腺􀀹 生殖腺外包有極薄的膜。􀀹 雄性有精巢 1 對，性未成熟時往往呈淡紅色，性成熟時純白色，呈扁長囊狀；􀀹 雌性有卵巢 1 對，性未成熟時為淡橙黃色，呈長帶狀，性成熟時呈微黃紅色，呈長囊形，幾乎充滿整個腹腔，內(nèi)有許多小型卵粒。生殖導(dǎo)管􀀹 生殖腺表面的膜向后延伸的短管，即輸精管或輸卵管。􀀹 左右輸精管或輸卵管在后端匯合后通入泄殖竇，泄殖竇以泄殖孔開口于體外。􀀹 觀察畢，移去左側(cè)生殖腺，以便觀察消化器官。(3) 消化系統(tǒng) 包括口腔、咽、食管、腸和肛門組成的消化管及肝胰臟和膽囊等消化

44、腺體。此處主要觀察食管、腸、肛門和膽囊。 食管􀀹 腸管最前端接于食管，􀀹 食管很短，其背面有鰾管通入，并以此為食管和腸的分界點。腸􀀹 用圓頭鑷頭將盤曲的腸管展開。􀀹 腸為體長的 23 倍（腸的長度與食性有何相關(guān)性？）􀀹 腸的前 2/3 段為小腸，后部為大腸，最后一部分為直腸，直腸以肛門開口于臀鰭基部前方。􀀹 腸的各部外形區(qū)別不甚明顯。膽囊􀀹 為一暗綠色的橢圓形囊，位于腸管前部右側(cè)，大部分埋在肝胰臟內(nèi)。􀀹 掀動肝臟，從膽囊的基部觀察膽管如何通入腸前部。&

45、#1048633; 觀察完畢，移去消化管肝胰臟，以便觀察其它器官。(4) 鰾 為位于腹腔消化管背方的銀白色膠質(zhì)囊。􀀹 從頭后一直伸展到腹腔后端，分前后 2 室。􀀹 后室前端腹面發(fā)出一細長的鰾管，通入食管背壁。（鰾有哪些功能？）􀀹 觀察畢，移去鰾，以便觀察排泄器官。(5) 排泄系統(tǒng) 包括腎臟、輸尿管和膀胱。腎臟􀀹 緊貼于腹腔背壁正中線兩側(cè)，1 對，為紅褐色狹長形器官，􀀹 在鰾的前、后室相接處，腎臟擴大使此處的寬度最大。􀀹 每腎的前端體積增大，向左右擴展，進入圍心腔，位于心臟的背方，為頭腎，

46、是擬淋巴腺。 輸尿管􀀹 每腎最寬處各通出 1 細管，即輸尿管，􀀹 沿腹腔背壁后行，在近末端處 2 管匯合通入膀胱。膀胱􀀹 兩輸尿管后端匯合后稍擴大形成的囊即為膀胱，其末端開口于泄殖竇。􀀹 用鑷子分別從臀鰭前的 2 個孔插入，觀察它們進入直腸或泄殖竇的情況，由此可在體外判斷肛門和泄殖孔的開口。(6) 循環(huán)系統(tǒng) 主要觀察心臟，血管系統(tǒng)從略。心臟位于 2 胸鰭之間的圍心腔內(nèi)，由1 心室、1 心房和靜脈竇等組成。􀁺 心室 淡紅色，其前端有一白色壁厚的圓錐形小球體，為動脈球，自動脈球向前發(fā)出1 條較粗大的血管，為腹

47、大動脈。􀁺 心房 位于心室的背側(cè)，暗紅色，薄囊狀。􀁺 靜脈竇 位于心房背側(cè)面，暗紅色，壁很薄，不易觀察。(7) 口腔與咽將剪刀伸入口腔，剪開口角，除掉鰓蓋，以暴露口腔和鰓?？谇?#1048633; 口腔由上、下頜包圍而成，頜無齒，口腔背壁由厚的肌肉組成，表面有粘膜，腔底后半部有一不能活動的三角形舌。咽􀀹 口腔之后為咽部，其左右兩側(cè)有 5 對鰓裂，相鄰鰓裂間生有鰓弓，共5 對。􀀹 第 5 對鰓弓特化成咽骨，其內(nèi)側(cè)著生咽齒。齒式為（鯽魚的咽齒僅1 列，齒式為4/4）。􀀹 在下面觀察鰓步驟完成后，將外側(cè)的4 對

48、鰓除去，暴露第5 對鰓弓，可見咽齒與咽背面的基枕骨腹面角質(zhì)墊相對，能夾碎食物。(8) 鰓鰓是魚類的呼吸器官。鯉魚的鰓由鰓弓、鰓耙、鰓片組成，鰓隔退化。鰓弓􀀹 位于鰓蓋之內(nèi)，咽的兩側(cè)，共 5 對。􀀹 每鰓弓內(nèi)緣凹面生有鰓耙。􀀹 第 14 對鰓弓外緣并排長有2 列鰓片，第5 對鰓弓沒有鰓片。 鰓耙􀀹 為鰓弓內(nèi)緣凹面上成行的三角形突起。􀀹 第 14 對鰓弓各有2 行鰓耙，左右互生，第1 對鰓弓的外側(cè)鰓耙較長。第5 對鰓弓只有1 行鰓耙。（鰓耙有何功能？）鰓片􀀹 薄片狀，鮮活時呈紅色。􀀹 每個鰓片稱半鰓，長在同一鰓弓上的 2 個半鰓合稱全鰓。И