生藥鑒定的一般程序和方法

1、生藥鑒定的一般程序和方法生藥鑒定就是依據(jù)國家藥典,部頒和地方藥品標(biāo)準(zhǔn)以及有關(guān)資料規(guī)定或記載的生藥標(biāo)準(zhǔn),對商品生藥或檢品進(jìn)行真實性、純度、品質(zhì)優(yōu)良度的檢定。生藥真實性鑒定,包括原植(動物鑒定、性狀鑒定、顯微鑒定、理化鑒定及生物檢定等項。生藥純度檢定是檢查樣品中有無雜質(zhì)及其數(shù)量是否超過規(guī)定的限度。雜質(zhì)包括生藥原植(動物的非藥用部分、有機(jī)雜質(zhì)和無機(jī)雜質(zhì)。無機(jī)雜質(zhì)的檢查一般采用過篩及灰分、酸不溶性灰分定量等方法來測定。生藥品質(zhì)優(yōu)良度檢定是包括水分、浸出物、有效成分含量的測定,以確定檢品的質(zhì)量是否合乎規(guī)定的要求。中國藥典附錄部分收載的藥材取樣法,藥材檢定通則,藥材及成方制劑顯微鑒別法,藥材炮制通則,雜質(zhì)

2、檢查法,水分測定法,灰分測定法,浸出物測定法,揮發(fā)油測定法,色譜法(層析法等,都是生藥鑒定方法的依據(jù),現(xiàn)將部分常規(guī)操作方法介紹如下:一、生藥的取樣生藥的取樣是指選取供檢定用生藥樣品的方法。取樣的代表性直接影響到檢定結(jié)果的正確性。因此,必須重視取樣的各個環(huán)節(jié)。1.取樣前,應(yīng)注意品名、產(chǎn)地、規(guī)格等級及包件式樣是否一致,檢查包裝的完整性、清潔程度以及有無水跡、霉變或其他物質(zhì)污染等,詳細(xì)記錄。凡有異常情況的包件,應(yīng)單獨(dú)檢驗。2. 從同批生藥包件中抽取檢定用樣品原則如下:生藥總包件數(shù)在100件以下的,取樣5件;1001000件按5%取樣:超過1000件的,超過部分按1%取樣;不足5件的逐件取樣;對于貴重

3、生藥,不論包件多少均逐件取樣。3. 對破碎的、粉末狀的或大小在1cm以下的生藥,可用采樣器(探子抽取樣品,每一包件至少在不同部位抽取23份樣品,包件少的抽取總量應(yīng)不少于實驗用量的3倍;包件多的,每一包件取樣量一般規(guī)定:一般生藥100500g;粉末狀生藥25g;貴重生藥510g;個體大的生藥,根據(jù)實際情況抽取代表性的樣品。如個體較大時,可在包件不同部位(包件大的應(yīng)從10cm以下的深處分別抽取。4.將所取樣品混和拌勻,即為總樣品。對個體較小的生藥,應(yīng)攤成正方形,依對角線劃"×"字,使分為四等分,取用對角兩份;再如上操作,反復(fù)數(shù)次至最后剩余的量足夠完成必要的試驗以及留樣

4、數(shù)為止,此為平均樣品。個體大的生藥,可用其他適當(dāng)方法取平均樣品。平均樣品的量一般不得少于作真實性、純度和品質(zhì)優(yōu)良等實驗所需用量的3倍數(shù),即1/3供實驗室分析用,另1/3供復(fù)核用,其余1/3則為留樣保存,保存期至少一年。二、雜質(zhì)檢查生藥中混雜的雜質(zhì),系指來源與規(guī)定相同,但其性狀或部位與規(guī)定不符;來源與規(guī)定不同的物質(zhì);無機(jī)雜質(zhì)如砂石、泥塊、塵土等。檢查方法可取規(guī)定量的樣品,攤開,用肉眼或擴(kuò)大鏡(510倍觀察,將雜質(zhì)揀出,如其中有可以篩分的雜質(zhì),則通過適當(dāng)?shù)暮Y,將雜質(zhì)分出。然后將各類雜質(zhì)分別稱重,計算其在樣品中的百分?jǐn)?shù)。如生藥中混存的雜質(zhì)與正品相似,難以從外觀鑒別時,可進(jìn)行顯微、理化鑒別試驗,證明其

5、為雜志后,計入雜質(zhì)重量中。對個體大的生藥,必要時可破開,檢查有無蟲蛀、霉?fàn)€或變質(zhì)情況,雜質(zhì)檢查所用的樣品量,一般按生藥取樣法稱取。三、水分測定水分的測定,是為了保證生物不因所含水分超過限度而發(fā)霉變質(zhì)。水分測定的方法常用的有烘干法和甲苯法。供測定用的生藥樣品,一般先破碎成直徑不超過3mm的顆粒或碎片,直徑和長度在3mm以下的花類、種子類、果實類藥材,可不破碎。1. 烘干法適用于不含或少含揮發(fā)性成分的生藥。取樣品25g,平鋪于干燥至恒重的扁形稱量瓶中,厚度不超過5mm,疏松樣品不超過10mm,精密稱定,打開瓶蓋在100105干燥5小時,將瓶蓋蓋好,移置干燥器中,冷卻30分鐘,精密稱定重量,再在上述

6、溫度干燥1小時,冷卻,稱重,至連續(xù)兩次稱重的差異不超過5mg為止。根據(jù)減失的重量,計算供試品中含有水分的百分?jǐn)?shù)。2. 甲苯法適用于含揮發(fā)性成分的生藥,用化學(xué)純甲苯直接測定,必要時甲苯可先加少量蒸餾水,充分振搖后放置,將水層分離棄去,經(jīng)蒸餾后使用。儀器裝置如圖4-1。A為500ml的短頸圓底燒瓶;B為水分測定管;C為直形冷凝管,外管長40cm。使用前,全部儀器應(yīng)清潔,并置烘箱中烘干。測定時取樣品適量(約相當(dāng)于含水量14ml,精密稱定,置A瓶中,加甲苯約200ml,必要時加入玻璃珠數(shù)粒。將儀器各部分連接,自冷凝管頂端加入甲苯,至充滿B管的狹細(xì)部分,將A瓶置電熱套中或用其他適宜方法緩緩加熱,待甲苯開

7、始沸騰時,調(diào)節(jié)溫度,使每秒鐘餾出2滴。待水分完全餾出,即測定管刻度部分的水量不再增加時,將冷凝管內(nèi)部先用甲苯?jīng)_洗,再用飽蘸甲苯的長刷或其他適宜方法,將管壁上附著的甲苯推下,繼續(xù)蒸餾5分鐘,放冷至室溫,拆卸裝置,如有水粘附在B管的管壁上,可用蘸甲苯的銅絲推下,放置,使水分與甲苯完全分離(可加亞甲藍(lán)粉末少許,使水染成藍(lán)色,以便分離觀察。檢讀水量,改算成供試品中含有水分的百分?jǐn)?shù)。3. 減壓干燥法適用于含有揮發(fā)性成分的貴重藥品。減壓干燥器的裝置:取直徑12cm左右的培養(yǎng)皿,加入新鮮五氧化二磷干燥劑適量,使鋪成0.51cm的厚度,放入直徑30cm的減壓干燥器中。測定時取供試品24g,混合均勻。分取約0.

8、51g,置已在供試品同樣條件下干燥并稱重的稱瓶中,精密稱定,打開瓶蓋,放入上述減壓干燥器中,減壓至2.67kPa(20mmHg以下持續(xù)半小時,室溫放置24小時。在減壓干燥器出口連接新鮮無水氯化鈣干燥管,打開活塞,待內(nèi)外壓一致,關(guān)閉活塞,打開干燥器,蓋上瓶蓋,取出稱瓶迅速精密稱定重量,計算供試品中含有水分的百分?jǐn)?shù)。也可應(yīng)用紅外線干燥法和導(dǎo)電法測定水分含量,迅速而簡便。四、灰分測定生藥中灰分的來源,包括生藥本身經(jīng)過灰化后遺留的不揮發(fā)性無機(jī)鹽,以及生藥表面附著的不揮發(fā)性無機(jī)鹽類,即總灰分。同一種生藥,在無外來摻雜物時,一般都有一定的總灰分含量范圍。規(guī)定生藥的總灰分限度,對于保證生藥的品質(zhì)和純凈程度,

9、有一定的意義。如果總灰分超過一定限度,表明摻有泥土、砂石等無機(jī)物質(zhì)。有些生藥本身含有的無機(jī)物差異較大,尤其是含多量草酸鈣結(jié)晶的生藥,測定總灰分有時不足以說明外來無機(jī)物的存在,還需要測定酸不溶性灰分,即不溶于10%鹽酸中的灰分。因生藥所含的無機(jī)鹽類(包括鈣鹽大多可溶于稀鹽酸中而除去,而來自泥沙等的硅酸鹽類則不溶解而殘留,故測定酸不溶性灰分能較準(zhǔn)確地表明生藥中是否有泥沙等摻雜及其含量。1. 總灰分測定法供測定樣品須粉碎,使能通過二號篩,混合均勻后,稱取樣品23g(如需測定酸不溶性灰分,可取35g,置熾灼至恒重的坩堝中,稱定重量(準(zhǔn)確至0.01g,緩緩熾熱,注意避免燃燒,至完全碳化時,逐漸升高溫度至

10、500600,使完全灰化并至恒重。根據(jù)殘渣重量,計算供試品中含總灰分的百分?jǐn)?shù)。如樣品不易灰化,可將坩堝放冷,加熱蒸餾水或10%硝酸銨溶液2ml,使殘渣濕潤,然后置水浴上蒸干,殘渣照前法灼熾,至坩堝內(nèi)容物完全灰化。2. 酸不溶性灰分測定法取上項所得的灰分,在坩堝中加入稀鹽酸10ml,用表面皿覆蓋坩堝,置水浴上加熱10分鐘,表面皿用熱蒸餾水5ml沖洗,洗液并入坩堝中,用無灰濾紙濾過,坩堝內(nèi)的殘渣用蒸餾水洗于濾紙上,并洗滌至洗液不顯氯化物反應(yīng)為止,濾渣連同濾紙移至同一坩堝中,干燥,熾灼至恒重。根據(jù)殘渣重量,計算供試品中含酸不溶性灰分的百分?jǐn)?shù)。五、浸出物的測定對于有效成分尚不明確或尚無精確定量方法的生

11、藥,一般可根據(jù)已知成分的溶解性質(zhì),選用水或其它適當(dāng)溶劑為溶媒,測定一藥中可溶性物質(zhì)的含量,以示生藥的品質(zhì)。通常選用水,一定濃度的乙醇(或甲醇、乙醚作浸出物測定。供測定的生藥樣品須粉碎,使能通過二號篩,并混合均勻。1. 水溶性浸出物測定(1冷浸法:取樣品約4g,稱定重量(準(zhǔn)確至0.01g,置250300ml的錐形瓶中,精密加入水100ml,塞緊,冷浸,前6小時內(nèi)時時振搖,再靜置18小時,用干燥濾器迅速濾過,精密量取濾液20ml,置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中,在水浴上蒸干后,于105干燥3小時,移置干燥器中,冷卻30分鐘,迅速精密稱定重量,以干燥品計算供試品中含水溶性浸出物的百分?jǐn)?shù)。(2熱浸法:取樣品

12、約24g,稱定重量(準(zhǔn)確至0.01g,置250300ml的錐形瓶中,精密加入水50100ml,塞緊,稱定重量,靜止1小時后,連接回流冷凝管,加熱至沸騰,并保持微沸1小時。放冷后,取下錐形瓶,塞緊,稱定重量,用水補(bǔ)足減失的重量,搖勻,用干燥濾器濾過。精密量取濾液25ml,置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中,在水浴上蒸干后,于105干燥3小時,移置干燥器中,冷卻30分鐘,迅速精密稱定重量,以干燥品計算供試品中含水溶性浸出物的百分?jǐn)?shù)。2. 醇溶性浸出物測定取適當(dāng)濃度的乙醇或甲醇代替水為溶媒。照水溶性浸出物測定法進(jìn)行(熱浸法須在水浴上加熱。3. 醚溶性浸出物測定取樣品24g,稱定重量(準(zhǔn)確至0.01g,置于已恒

13、重?zé)康闹居统槌銎髦?用乙醚作溶劑,水浴加熱46小時,放冷,以少量乙醚沖洗回流器,洗液接入蒸餾瓶中,低溫蒸去乙醚,于105干燥3小時,移置干燥器中,冷卻30分鐘,迅速稱定重量,以干燥品計算供試品中含醚溶性浸出物的百分?jǐn)?shù)。六、揮發(fā)油測定適用于含較多量揮發(fā)油的生藥。測定用的樣品,一般須粉碎使能通過二號至三號篩,并混合均勻,儀器裝置如圖4-2。(注:裝置中揮發(fā)油測定的支管分岔處應(yīng)與基準(zhǔn)線平行測定法甲法:適用于測定相對密度在1.0以下的揮發(fā)油。取樣品適量(約相當(dāng)于含揮發(fā)油0.51.0ml,穩(wěn)定重量(準(zhǔn)確至0.01g,置1000ml的燒瓶中,加水300500ml(或適量與玻璃珠數(shù)粒,振搖混合后,連接揮發(fā)油測定器與回流冷凝管。自冷凝管上端加水使充滿揮發(fā)油測定器(有0.1ml的刻度的刻度部分,并溢流入燒瓶時為止,置電熱套中或用其他適宜方法緩緩加熱至沸,并保持微沸約5小時,至測定器中油量不再增加,停止加熱,放置片刻,開啟測定器下端的活塞,將水緩緩放出,至油層上端到達(dá)刻度0線上面5mm處為止。放置1小時以上,再開啟活塞使油層下降至其上端恰與刻度0線平齊,讀取揮發(fā)油量并計算供試品中含揮發(fā)油的百分?jǐn)?shù)。乙法:適用于測定相對密度在1.0以上