Leber遺傳性視神經(jīng)病變患者的線粒體DNA檢測(cè)及中醫(yī)治療分析

1、Leber遺傳性視神經(jīng)病變患者的線粒體DNA檢測(cè)及中醫(yī)治療分析 作者：張銘連 石慧君 常永業(yè) 解世朋 龐朝善 毛愛(ài)玲【摘 要】 目的 分析中國(guó)人Leber遺傳性視神經(jīng)病變（LHON）3個(gè)原發(fā)致病基因突變的特征及中醫(yī)辨證治療的療效。 方法 對(duì)81例LHON患者分別用異源雙鏈-單鏈構(gòu)像多態(tài)性（HA-SSCP）、限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（RFLP）、突變特異性引物聚合酶鏈反應(yīng)（MSP-PCR）及DNA測(cè)序等方法檢測(cè)其mtDNA11778、14484、3460位點(diǎn)的基因突變情況，并進(jìn)行中醫(yī)辨證治療。 結(jié)果 81例患者（男59例，女22例）中，11778位點(diǎn)突變71例，占87.65%，14484位點(diǎn)突變8例

2、，占9.88%，3460位點(diǎn)突變2例，占2.47%。中醫(yī)辨證為肝經(jīng)郁熱型58例，肝郁腎虛型14例，肝腎陰虛型9例。 結(jié)論 中國(guó)人LHON患者mtDNA3個(gè)原發(fā)致病位點(diǎn)突變中，以11778位點(diǎn)突變?yōu)橹鳎?4484次之，3460最少。其發(fā)病與中醫(yī)肝腎的關(guān)系最為密切，中醫(yī)藥治療有一定的療效。 【關(guān)鍵詞】 DNA，線粒體;點(diǎn)突變;視神經(jīng)萎縮，遺傳性;聚合酶鏈反應(yīng);辨證論治 Detection of DNA in mitochondria and treatment of Lebers Hereditary 【Abstract】 Objective To analyze the characterist

3、ics of three primarily virulence genes mutation of Chinese Lebers Hereditary Optic Neuropathy（LHON）and the effect of differentiation of symptoms and signs.Methods Mutation status of mitochondria DNA11778，14484，3460in patients with LHONwere measured by HA-SSCP，RFLP，MSP-PCR and DNA sequencing.Results

4、In all patients87.65%was11778site mutation，9.88%was14484site mutation and2.47%was3460site mutation.The liver meridian stagnated heat type was58cases，stagnation of liver-QI renal deficiency type was14cases and hepatic and renal yin deficiency type was9cases.Conclusion In three primarily virulence gen

5、es mutation of Chinese LHON，11778site mutation was primary，14484site mutation was secondary，3460site mutation was least.The onset of LHON was related to hepatonephric Traditional Chinese Medicine. 【Key words】 Optic Neuropathy;DNA;Mitochondria;Differentiation of symptoms and signs of TCM Leber遺傳性視神經(jīng)病

6、變（Leber， shereditary optic neu-ropathy，LHON）是常見(jiàn)的一種線粒體DNA突變導(dǎo)致的遺傳性致盲性視神經(jīng)疾病，表現(xiàn)為急性或亞急性中心視力減退，雙眼同時(shí)發(fā)病，或先后發(fā)病，男性發(fā)病率高于女性，是青年人致盲的主要原因之一1 ，目前尚無(wú)有效治療方法。臨床上一部分患者無(wú)家族史或家族史不清，僅有視神經(jīng)損害，往往很難確診，線粒體DNA的位點(diǎn)突變目前認(rèn)為是LHON的特異性病征，其檢測(cè)為臨床早期診斷提供了重要依據(jù)。2001-122006-04，我們對(duì)81例Leber遺傳性視神經(jīng)病變患者進(jìn)行線粒體DNA檢測(cè)和中醫(yī)辨證治療，現(xiàn) 將結(jié)果分析如下。 1 資料與方法 1.1 一般資料

7、81例LHON患者均系我院住院患者，其中男59例，女22例，男女比例為2.681;有家族史者64例，無(wú)家族史17例;年齡最小7歲，最大42歲，平均16.86歲，其中712歲12例，1318歲55例，1942歲14例;病程3個(gè)月31例;雙眼同時(shí)發(fā)病71例，先后發(fā)病10例。所有患者均進(jìn)行常規(guī)全身檢查，視力、裂隙燈、眼底、視野檢查。Octopus-101全自動(dòng)視野檢查，表現(xiàn)為中心暗點(diǎn)者113只眼，旁中心暗點(diǎn)1只眼，中心相對(duì)暗點(diǎn)1只眼，廣泛性視野損害21只眼，未能查視野24只眼，正常視野2只眼。28例行視覺(jué)誘發(fā)電位（P-VEP）檢查，表現(xiàn)為P100 波潛伏期延長(zhǎng)和振幅值降低者52只眼，P100 波潛伏

8、期正常而振幅值降低者2只眼，圖形熄滅2只眼。10例患者行頭顱CT掃描未見(jiàn)異常。6例行MRI檢查未見(jiàn)異常。25例熒光素眼底血管造影（FFA）檢查，未見(jiàn)明顯異常。眼底表現(xiàn)為視盤(pán)充血，毛細(xì)血管充盈，彎曲79只眼，正常眼底12只眼，視盤(pán)顳側(cè)色淡45只眼，視盤(pán)色蒼白26只眼。 1.2 中醫(yī)分型 根據(jù)患者全身癥狀和舌脈象，參考眼底表現(xiàn)，采用全身辨證與局部辨病相結(jié)合的方法，將81例Leber遺傳性視神經(jīng)病變患者分為3型。 1.3 病例選擇標(biāo)準(zhǔn) 雙眼同時(shí)或先后在青春期發(fā)病，呈急性或亞急性視力下降。視野有中心或旁中心暗點(diǎn)，P-VEP表現(xiàn)P100 波潛伏期延長(zhǎng)和振幅值降低。眼底早期視盤(pán)正?；蜉p度充血、水腫、毛細(xì)血

9、管擴(kuò)張，晚期顳側(cè)色淡或蒼白。符合上述特征有陽(yáng)性家族史;或原因不明的患者;或經(jīng)積極治療無(wú)明顯效果者均進(jìn)行線粒體DNA檢測(cè)。檢測(cè)陽(yáng)性者納入觀察范圍。 1.4 檢測(cè)方法 首先詳細(xì)詢問(wèn)患者的家族史，進(jìn)行視力、裂隙燈、眼底檢查、視野及常規(guī)全身檢查。征得知情同意后抽取患者外周靜脈血，利用血液濾紙法，郵寄至中山大學(xué)中山眼科中心分子遺傳室。將標(biāo)本進(jìn)行全血直接裂解和微量DNA提取，采用3種原發(fā)致病位點(diǎn)聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）擴(kuò)增，用常規(guī)酚氯仿方法，從患者和正常人外周血中提取DNA，進(jìn)行PCR擴(kuò)增;突變特異性引物PCR檢測(cè);異源雙鏈-單鏈構(gòu)像多態(tài)性分析（SSCP）;經(jīng)單鏈構(gòu)像多態(tài)性分析異常條帶做DNA測(cè)序，片段經(jīng)純

10、化后，由自動(dòng)測(cè)序儀測(cè)序。檢測(cè)患者mtDNA11778、14484、3460位點(diǎn)的基因突變情況。1.5 治療方法2 結(jié) 果 2.1 mtDNA突變檢測(cè)結(jié)果 81例Leber遺傳性視神經(jīng)病變mtDNA突變中，11778位點(diǎn)突變71例，占87.65%;14484位點(diǎn)突變8例，占9.88%;3460位點(diǎn)突變2例，占2.47%。2.2 治療前后視力比較 見(jiàn)表1。 表1 治療前后視力比較 略 2.3 隨訪 66例患者經(jīng)平均26個(gè)月隨訪，66只眼視力提高12行，62只眼視力保持不變，4只眼視力下降23行。 3 討 論 1871年由德國(guó)眼科醫(yī)生Leber首先描述了一種以雙眼中心視力急性或亞急性下降，多累及青年

11、男性為特征的遺傳性眼病，故命名為L(zhǎng)eber遺傳性視神經(jīng)病變。1988年Wallace等3 首先報(bào)告線粒體DNA第11778核苷酸位點(diǎn)突變可引起LHON。Hwang等4 統(tǒng)計(jì)435例視神經(jīng)疾病患者，72例（17%）是LHON。國(guó)內(nèi)韋企平5 報(bào)告母系中確有發(fā)病者的37例LHON患者中11778位點(diǎn)突變者33例，占89.2%;14484位點(diǎn)突變者3例，占8.1%。無(wú)家族史的疑似病例及病因不明的視神經(jīng)疾病82例患者中11778位點(diǎn)突變26例，占31.7%。郭向明等報(bào)告6 11778位點(diǎn)突變占92.9%，14484位點(diǎn)突變占5.7%，3460位點(diǎn)突變占1.4%。 本研究統(tǒng)計(jì)球后視神經(jīng)炎339例，Lebe

12、r病66例，占19.47%，對(duì)其中有家族史64例和無(wú)家族史而懷疑為L(zhǎng)eb-er病34例共98例患者進(jìn)行基因檢測(cè)，81例陽(yáng)性，占82.65%。有家族史的64例基因檢測(cè)均為陽(yáng)性，34例無(wú)家族史而懷疑為L(zhǎng)HON，經(jīng)基因檢測(cè)17例陽(yáng)性，占50%。81例mtDNA突變患者中，11778位點(diǎn)突變71例，占87.65%，14484位點(diǎn)突變8例，占9.88%，3460位點(diǎn)突變2例，占2.47%。本組病例14484位點(diǎn)和3460位點(diǎn)突變略高于有關(guān)報(bào)道。 本病以男性發(fā)病者居多，左煒7 報(bào)告男女比例為6.51，韋企平5 報(bào)告男女比例為5.61。本組病例男性的發(fā)病率低于有關(guān)報(bào)道，而女性發(fā)病率高于有關(guān)報(bào)道，男59例，占

13、72.84%，女22例，占26.16%，男女比例為2.681，Hotta等8 研究了29個(gè)LHON家系共334例患者，發(fā)現(xiàn)有2個(gè)家系無(wú)任何mtDNA位點(diǎn)變異。本組病例涉及79個(gè)家系81例患者均有位點(diǎn)突變。 對(duì)無(wú)家族史的17例視神經(jīng)炎患者在行mtDNA檢測(cè)前，于發(fā)病早期給予糖皮質(zhì)激素沖擊治療1014日，均無(wú)明顯治療效果，與未用糖皮質(zhì)激素治療的HLON患者效果相同。提示本病糖皮質(zhì)激素沖擊治療無(wú)效。因此，在臨床工作中除對(duì)原因不明視神經(jīng)炎或視神經(jīng)萎縮患者進(jìn)行詳細(xì)的家族史調(diào)查及視力、眼底、視野、視覺(jué)誘發(fā)電位等檢查外，應(yīng)及早進(jìn)行mtDNA基因檢測(cè)，以避免重復(fù)多項(xiàng)檢查或給予患者不必要的可能有害的治療。 Le

14、ber遺傳性視神經(jīng)病變屬于中醫(yī)眼科青盲范疇。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，肝開(kāi)竅于目，經(jīng)脈上連目系?！案问苎芤暋保案魏蛣t目能辨五色矣”?！澳I為先天之本”，腎主藏精，精能生髓，腦為髓海，目系內(nèi)通于腦。肝腎同源，精血相互化生。因此，肝腎與目系的關(guān)系最為密切，正如張景岳所謂“肝腎之氣充則神采光明”。本組81例Leber遺傳性視神經(jīng)病變患者經(jīng)采用全身辨證與局部辨病相結(jié)合的方法，分為肝經(jīng)郁熱，肝郁腎虛、肝腎陰虛型3型，且其早期多表現(xiàn)為肝經(jīng)郁熱，中晚期多表現(xiàn)為肝郁腎虛或肝腎陰虛型，進(jìn)一步說(shuō)明本病與肝腎的功能有著密切的關(guān)系。在治療上應(yīng)注重解肝郁，養(yǎng)肝血，滋腎陰，尤其在本病的中晚期，視神經(jīng)已發(fā)生萎縮，應(yīng)以滋補(bǔ)肝腎為主。今

15、后我們將進(jìn)一步通過(guò)現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)研究具有滋補(bǔ)肝腎功能的中藥治療LHON的確切機(jī)理。  參考文獻(xiàn) 1 Leber T.Uber herebitare und congenital SehenervenleidenJ.Graefs Arch Ophthalmol，1871，17:249-291 2 龐贊襄.中醫(yī)眼科臨床實(shí)踐M.石家莊:河北人民出版社，1979:106 3 Wallace DC，Singh G，LottMT，Hodeg JA，Schurr TG，Lazza AMS，et al.Mitochondrial DNAmutation associated with Lebers h

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