病毒學(xué)參考答案

1、植物病毒學(xué)復(fù)習(xí)題參考答案1 .你是怎么認(rèn)識(shí)病毒的害與益的？請(qǐng)舉例說(shuō)明。害：病毒危害多種多樣：侵害人體，影響人類健康，造成畜、禽等動(dòng)物的傳染疾??；危 害農(nóng)作物使其致病，影響產(chǎn)量和質(zhì)量。病毒確實(shí)有害，特別是經(jīng)濟(jì)全球化，人口城市化，加 上氣候變暖，環(huán)境惡化，更加劇了新興病毒的發(fā)生和原有病毒的傳播、危害。舉例：據(jù)報(bào)道，馬鈴薯卷葉病毒和馬鈴薯 丫病毒的一些株系，常使塊莖的產(chǎn)量減少50-80%。益：1.對(duì)生命科學(xué)理論研究的意義： 對(duì)生命的起源的認(rèn)識(shí)；2.逆轉(zhuǎn)錄病毒的發(fā)現(xiàn)和對(duì)中 心法則的補(bǔ)充：RNAI中瘤病毒：發(fā)現(xiàn)逆轉(zhuǎn)錄酶，證明遺傳信息從RNA-DNA勺傳遞，從而修改和補(bǔ)充了中心法則；3.利用病毒制備疫苗；

2、4.生物控制：利用昆蟲(chóng)病毒控制害蟲(chóng)具有專一 性、高效性、安全性、流行性和持續(xù)性，對(duì)農(nóng)林害蟲(chóng)防治和環(huán)境保護(hù)具有重要作用；5.環(huán)境保護(hù)：利用病毒及其制劑開(kāi)展有害生物的控制，可使環(huán)境免受污染；6.花卉增色：郁金香觀賞；7.病毒基因元件：?jiǎn)?dòng)子、 35s。2 .目前國(guó)內(nèi)外植物病毒研究的熱點(diǎn)和前沿是什么？熱點(diǎn)問(wèn)題：1.病毒基因組及基因功能研究；2.病毒與寄主植物相互關(guān)系研究；3.生物技術(shù)培養(yǎng)抗病品種；4.病毒作為載體及載體元件的研究。前沿：由于分子生物學(xué)的發(fā)展和電子顯微鏡的進(jìn)步，對(duì)植物病毒的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生物學(xué) 特性及理化特性都有深入的研究，近年來(lái)對(duì)植物病毒的研究已進(jìn)入分子水平。3 .病毒的發(fā)現(xiàn)能給我們什

3、么樣的啟示？在科學(xué)實(shí)踐中，僅僅有了新的發(fā)現(xiàn)還是不夠的，重要的是敢不敢或能不能面對(duì)自己發(fā)現(xiàn)的事實(shí)，做出客觀的分析，提出恰當(dāng)?shù)男赂拍?、新理論，才?duì)科學(xué)發(fā)展更為有益。4 .舉例說(shuō)明植物病毒在農(nóng)業(yè)中的地位及其應(yīng)用前景植物病毒在農(nóng)業(yè)中有著非常重要的地位，因病毒是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的大敵， 揭示病毒的致病本質(zhì)及其發(fā)病的規(guī)律，從而得以有效的控制。例如：煙草蝕紋病毒可抑制天仙子花葉病毒和馬 鈴薯Y病毒對(duì)煙草的侵染。它具有廣闊的應(yīng)用前景。隨著對(duì)自然界的病毒種類及其分布的深 入了解，我們就可以更好的興利除害，為現(xiàn)代農(nóng)業(yè)和科技進(jìn)步做出更大的貢獻(xiàn)。5 .以TMV為例來(lái)論述植物病毒胞間轉(zhuǎn)移和長(zhǎng)距離移動(dòng)分別在病毒系統(tǒng)侵染過(guò)程的作用

4、方式。植物細(xì)胞間的通道是胞間連絲，它在細(xì)胞之間起著信息傳遞，水分及有機(jī)物的運(yùn)輸和分配等作用：TMV在細(xì)胞內(nèi)編碼運(yùn)轉(zhuǎn)蛋白 30ku蛋白，運(yùn)轉(zhuǎn)蛋白一方面能夠與胞間連絲相互作用， 從而使胞間連絲孔徑擴(kuò)大， 另一方面能夠與病毒作用。 綜合作用結(jié)果得以使病毒順利通過(guò)胞 間連絲進(jìn)行運(yùn)轉(zhuǎn)。病毒在植物體內(nèi)的遠(yuǎn)距離運(yùn)轉(zhuǎn)，主要靠植物輸導(dǎo)組織中得營(yíng)養(yǎng)主流方向移動(dòng)，但是病毒也可以隨營(yíng)養(yǎng)等上、下雙向移動(dòng)。將TMVg種在番茄中部復(fù)葉尖端的小葉上， 經(jīng)過(guò)1-3天病毒可達(dá)整個(gè)小葉， 經(jīng)過(guò)3-5天病毒 已從葉脈、葉柄及莖等維管束轉(zhuǎn)移到番茄植株頂部的生長(zhǎng)點(diǎn)和根部組織；經(jīng)過(guò)25天病毒已達(dá)全株的所有生長(zhǎng)器官。6 .植物病毒的提取過(guò)程

5、中，為了濃縮病毒，采取的是聚乙二醇沉淀法，其試述其大致的濃縮原理。在一定白鹽（NaCl）濃度下，Na+中和帶負(fù)電的病毒核酸分子，減少核酸分子的同性電 荷相斥力，易于互相聚合而形成沉淀。所以聚乙二醇（ PEG可以使病毒沉淀，以分子質(zhì)量 為6000u的PEG效果最好。7 .植物病毒的基因組核酸類型有哪些，并分別列舉出其代表性的病毒？同時(shí)簡(jiǎn)述馬鈴薯Y病毒基因組翻譯的多聚蛋白（polyprotein ）如何形成10個(gè)功能蛋白體？1. （+） ssRNA 煙草花葉病毒（-）ssRNA 馬鈴薯黃矮病毒dsRNA 水稻赤矮病毒DsDNA花椰菜花葉病毒ssDNA 香蕉束頂病毒2.多聚蛋白需經(jīng)過(guò) P1.NIa-

6、類似胰蛋白酶氨酸蛋白酶，HC-類似木瓜蛋白酶的半胱氨基酸蛋白酶的切割而成為十個(gè)功能蛋白。8 .植物病毒分類的基本依據(jù)是什么？1）病毒的粒體特性：1.病毒立體形態(tài)特征2.病毒立體物理特性3.病毒基因組特 性4.病毒蛋白質(zhì)特性5.病毒脂類的含量和特性6.病毒糖類的含量和特性2）基因組構(gòu)與復(fù)制：包括基因組結(jié)構(gòu)，核酸復(fù)制策略 轉(zhuǎn)錄特點(diǎn) 翻譯和翻譯后 的修飾特點(diǎn)，裝配位點(diǎn)等3）抗原性質(zhì)：包括病毒血清學(xué)性質(zhì)及其與抗原的關(guān)系。4）病毒生物學(xué)特性：包括病毒寄主范圍，致病性及其與病變的關(guān)系，組織嗜性 病理學(xué)自然傳播方式傳播介體和地理分布9 . ICTV第8次分類報(bào)告的主要特點(diǎn)有哪些？與以往分類報(bào)告比較，新增了哪

7、些科哪些屬？ICTV第8次分類報(bào)告的主要特點(diǎn)：1）進(jìn)一步明確了 “種”作為病毒分類系統(tǒng)中的最小分類階元。2） 在每一個(gè)確定種下面列出了至少一個(gè)、至多幾十個(gè)不同的分離物以及它們?cè)贕enBank上的登錄號(hào)。3）增加了許多反映病毒基因序列同源性關(guān)系的系統(tǒng)樹(shù)圖。4）將原子分辨率的粒子三維結(jié)構(gòu)插入到相應(yīng)的科或?qū)僦?，使研究者?duì)病毒粒子空間結(jié)構(gòu)有更詳細(xì)的了解。國(guó)際病毒分類委員會(huì)第八次報(bào)告中的最新植物病毒分類系統(tǒng)18個(gè)科、81個(gè)屬，以及亞病毒感染因子的類病毒和病毒衛(wèi)星。與第七次報(bào)告相比 新增的3個(gè)科、9個(gè)屬分別是：矮縮病毒科、蕪菁黃花葉病毒科、線形病毒科、番茄偽曲頂病毒屬、香蕉束頂病毒屬、塞爾病毒 屬、內(nèi)源R

8、NA病毒屬、葡萄斑點(diǎn)病毒屬、柑橘病毒屬、葡萄卷葉病毒屬、溫州蜜柑矮縮病毒屬、櫻桃鏗葉病毒屬。10 .類病毒的定義。試述類病毒與植物病毒的異同點(diǎn)。（提示：基因組結(jié)構(gòu)和病毒粒子的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，以及它們所引起癥狀等方面論述）C類病毒的定義是：存在于植物中，分子量為1X105左右的、由246-574 個(gè)核甘酸組成的單鏈環(huán)狀RNA的寄生物。（1）類病毒不同于病毒的主要特性a.耐熱性。要使類病毒失活需要高于100c的溫度。b.高度侵染活性。50100分子的類病毒可以引起成功的侵染，而病毒需要106個(gè)粒體以上。c.局限的存在部位。類病毒至今僅僅發(fā)現(xiàn)于細(xì)胞核中，其核酸在體外翻譯體系和寄主體內(nèi) 都沒(méi)有翻譯產(chǎn)物的存在

9、，因?yàn)槠浜怂岱肿由蠜](méi)有翻譯起始密碼子。d.核酸組成的相近性。G/C比相近，55%58%;有人對(duì)比了 3種類病毒的核甘酸序列，發(fā)現(xiàn)其在很大程度上的同源性，個(gè)別核甘酸或者局部片段發(fā)生了變化，成為不同的病原， 或者不同的株系。研究表明幾個(gè)甚至一個(gè)核甘酸的不同，就會(huì)導(dǎo)致致病力的明顯變化。e.不顯性感染。植物帶有類病毒但不表現(xiàn)癥狀的現(xiàn)象極為普遍。經(jīng)測(cè)試36個(gè)科的232種植物對(duì)馬鈴薯紡錘塊莖類病毒的感病性，發(fā)現(xiàn)有 11個(gè)科的138種植物是感染的，但只有茄科 和菊科的12種植物表現(xiàn)癥狀，即 90%以上的寄主都是不顯癥感染，而且潛育期很長(zhǎng)，有的 幾個(gè)月，有的甚至幾年。f.傳播方式簡(jiǎn)單。類病毒主要通過(guò)農(nóng)具、嫁接

10、刀具等傳播，大部分可以通過(guò)種子傳播（有的可在種子中存活 20年）；僅僅有危害馬鈴薯和番茄的二種類病毒被證明有節(jié)肢動(dòng)物介體傳 播。（2）相同點(diǎn)：都含有核酸，都是專性寄生物，不能單獨(dú)進(jìn)行復(fù)制、增殖。11 .略述植物病毒癥狀學(xué)在病毒診斷上的意義意義：1）根據(jù)典型癥狀，排除常規(guī)病毒病害。2）對(duì)一些具有特征性癥狀的病毒病，只要掌握其特有癥狀，便可以準(zhǔn)確做出診斷。3） 對(duì)一些不具有特征性癥狀的病害，可以將病毒的致病反應(yīng)和非侵染性致病因子加以比 較，做出初步的判斷。4）在田間一旦被確認(rèn)為病毒病，便可以按照病害的主要癥狀特征結(jié)合傳染方式加以識(shí)別。5）病毒病雖然沒(méi)有真菌、 細(xì)菌病害那樣的特征， 但往往具有自己的

11、特有的癥狀，便于直接判別，如明脈、斑駁、花葉、脈腫、耳突、蝕紋、環(huán)斑、脈帶、條紋、線條和條點(diǎn)等， 我們可以進(jìn)一步根據(jù)其形狀、大小、色澤加以判斷。6）病毒病的癥狀具有相對(duì)的穩(wěn)定性，不同病毒有不同的癥狀類型，學(xué)會(huì)區(qū)別并準(zhǔn)確描述它們，對(duì)病害診斷很有用處。12.植物病毒病的外部癥狀主要有哪些類型，其對(duì)應(yīng)寄主植物的組織病變分別是？1）花葉類型：明脈，斑駁，花葉，沿脈變色，塊斑，條紋，褪綠斑2） 環(huán)斑類型：環(huán)斑，環(huán)紋，線紋3）畸形生長(zhǎng)：線葉，蕨葉，帶花，卷葉，皰斑，皺縮，耳突，畸葉，小葉，叢枝，叢簇, 扁枝，腫枝，莖溝，腫脹，花變?nèi)~，拐節(jié)，矮化，矮縮，畸果，小果4）變色：主要是葉片的局部或者全部顏色改變。

12、5） 壞死與變質(zhì)：環(huán)死斑，壞死環(huán)，壞死紋，壞死條紋，沿脈壞死，葉脈壞死，頂尖壞死, 星裂。13.植物病毒病的復(fù)雜性體現(xiàn)在哪些方面？1） 病毒引起的外部癥狀類型：花葉，環(huán)斑，畸形，變色，壞死，2）外部癥狀的復(fù)雜性： 植物受病毒侵染后， 所呈現(xiàn)的癥狀往往有個(gè)發(fā)展過(guò)程，一種病毒病可能觀察到幾種癥狀或無(wú)癥狀過(guò)程，幾種病毒病在同一植物上也可能出現(xiàn)相似的癥狀。3）無(wú)癥帶毒：有些病毒侵染寄主后不產(chǎn)生可見(jiàn)的癥狀。4） 隱癥：有些病毒形成癥狀后在特定的環(huán)境條件下可暫時(shí)隱去癥狀。5）復(fù)合癥狀：寄主植物被兩種以上病毒侵染時(shí)，特別是同時(shí)侵染時(shí)出現(xiàn)復(fù)合癥狀大部分是加重。14 .某地稻田發(fā)生大面積黃化，有人說(shuō)病毒引起，有

13、人說(shuō)是生理現(xiàn)象,你應(yīng)根據(jù)哪些原則加以判斷？（病毒病與生理病的區(qū)別）可以根據(jù)“五性”原則加以判斷a.分散性病毒病后走的發(fā)病中心，后修有事生理病成片成塊發(fā)生.病情蛟一致b.系統(tǒng)性病害全株性' 再現(xiàn)性. 不可恢復(fù)批？生理病不具全株性、再現(xiàn)性環(huán)墻改善，可以康髻病毒病分枝發(fā)病.至悚相同 新茅.新葉再現(xiàn)捌癥 甲克改善下可再恢宜c.傳染性韋1禽從就喜生生有明血的曠底蔓延過(guò)程生埋病病株分布均勻，為向時(shí)間致d.鮮明性牛理病老植、老葉更為日月回病壬病南枝、嫩口 1史為明顯e.特征性15 .在診斷植物病毒病的過(guò)程中，應(yīng)如何靈活應(yīng)用柯赫法則？柯赫法則：病原必須總是和某種病害聯(lián)系在一起；這種必須從寄主上分離到并

14、進(jìn)行體 外培養(yǎng)；將這種病原純培養(yǎng)物接種到健康植物上時(shí)，能表現(xiàn)出和原來(lái)一樣的癥狀；從試驗(yàn)植物上分離到同樣的病原。柯赫法則常用于侵染性病害的診斷和鑒定，特別是新病害的鑒定。非專性寄生物，如絕大多數(shù)植物病原菌物和細(xì)菌所引致的病害，可以很方便地應(yīng)用柯赫法則來(lái)進(jìn)行診斷和鑒定。在診斷植物病毒病的過(guò)程中，在進(jìn)行人工接種時(shí)，直接從病株組織上取，或采用帶病毒或菌原體的汁液、枝條、 昆蟲(chóng)等進(jìn)行接種。但病毒和菌原體的接種需要搞清傳播途徑。當(dāng)接 種株發(fā)病后，再?gòu)脑摬≈晟先【€，或采用帶病毒或菌原體的汁液、枝條、昆蟲(chóng)等，用同樣方法再進(jìn)行接種，當(dāng)?shù)玫酵瑯咏Y(jié)果后才可證實(shí)該病的病原為這種菌物、或這種病毒。 因此，所 有侵染性病

15、害的診斷與病原物的鑒定都必須按照柯赫法則來(lái)驗(yàn)證。16 .在田間應(yīng)如何區(qū)分植物病毒病與其他侵染性病害？怎樣判斷植物病毒病和非侵染性病害？植物病毒病與其它侵染性病害的主要區(qū)別是：（1）病毒病害在植物表面絕對(duì)沒(méi)有病征，而區(qū)別于線蟲(chóng)蟲(chóng)體、細(xì)菌菌膿、真菌的子實(shí)體等病癥的出現(xiàn)；（2）系統(tǒng)侵染病毒病的癥狀在新展幼葉上更重，而其他病害則大多在老葉上癥狀更明顯。植物病毒病與非侵染性病害的區(qū)別是：（1）病毒病有發(fā)病中心或中心病株，病情有輕有重，早期病株點(diǎn)片分布，而非侵染性病害大多同時(shí)大面積發(fā)生，病情較一致；（2）發(fā)生病毒病的植株多為系統(tǒng)感染，癥狀分布不均一，新葉新梢上癥狀最明顯， 而生理性病害大多比較均一，老葉、

16、老枝更為明顯；（3）病毒病有傳染性，非傳染性病害沒(méi)有傳染擴(kuò)散的過(guò)程；（4）病毒病害癥狀往往表現(xiàn)為花葉、黃化、矮縮、叢生等，少數(shù)有脈帶、環(huán)斑、耳突、 斑駁、蝕紋等特征性癥狀。此外，隨著氣溫的變化，特別是在高溫條件下，植物病毒病時(shí)常 發(fā)生隱癥現(xiàn)象。（5）生理性病害不具全株性、再現(xiàn)性，環(huán)境改善，可以康復(fù)；病毒病害分 枝發(fā)病，全株相同，新芽、新葉再現(xiàn)病癥，環(huán)境改善不可再恢復(fù)。17 .如何利用常用的生物學(xué)方法區(qū)分 TMV/CMV、PVX/PVY ?1). TMV/CMV 的區(qū)另 k病是普通煙心葉煙黃瓜TMV系統(tǒng)花葉局部枯斑小感染CMV系統(tǒng)花葉系統(tǒng)心葉系統(tǒng)花葉（1 ） TMV和CMV在普通煙上都產(chǎn)生系統(tǒng)花

17、葉，但TMV在心葉煙上產(chǎn)生枯斑， CMV在心葉煙上則還是系統(tǒng)花葉，這樣我們就可以用心葉煙來(lái)分離TMV。（2） CMV在黃瓜上產(chǎn)生系統(tǒng)花葉癥狀，而黃瓜對(duì) TMV免疫，這樣，我們可以利用黃瓜 將CMV從上述兩種混合病毒混合侵染的病株中分離出來(lái)。（3） TMV朗蟲(chóng)不傳，CMV助蟲(chóng)能傳，通過(guò)助蟲(chóng)接種，分離獲得TMV。2）. PVX/PVY的區(qū)別：（1） pvx能侵染曼陀羅，pvy不能侵染曼陀羅。（2） pvx朗蟲(chóng)不傳，pvy助蟲(chóng)能傳。（3） pvx在千日紅上呈現(xiàn)紅色邊緣的壞死斑，普通煙感染pvy后呈現(xiàn)沿脈及葉脈壞死癥。18.枯斑寄主、指示寄主、鑒別寄主的主要區(qū)別？枯斑寄主：有些病毒侵染寄主植物后，會(huì)誘

18、導(dǎo)寄主產(chǎn)生過(guò)敏反應(yīng)，出現(xiàn)局部枯斑而不擴(kuò)展成系統(tǒng)侵染。指示寄主：指的是對(duì)那些潛育期特長(zhǎng)，癥狀出現(xiàn)很慢的病毒（如果樹(shù)中的病毒），為了 及時(shí)做出診斷，將其轉(zhuǎn)移（接種）到癥狀出現(xiàn)很快的寄主上，這種寄主就成指示植物，故其 性質(zhì)與鑒別寄主不同，主要是用來(lái)檢測(cè)病原生物的存在。鑒別寄主：指用來(lái)鑒定對(duì)某一病毒或株系具有特定反應(yīng)的植物。 凡是病毒侵染后能產(chǎn)生 快而穩(wěn)定、并具有特征性癥狀等的植物都可以作為鑒別寄主。鑒別寄主包括單一鑒別寄主和鑒別寄主譜。鑒別寄主和枯斑寄主的區(qū)別：(1)癥狀類型：枯斑只是特征性反應(yīng)的一種癥狀類型，鑒別寄主的特征性反應(yīng) 除了枯斑，還有其他類型的癥狀反應(yīng)，比如：紅葉癥。(2)范圍不同：鑒別

19、寄主包括單一的鑒別寄主和鑒別寄主譜，枯斑寄主一般是 單一的植物寄主。鑒別寄主和指示植物的區(qū)別：(1)用途不同：鑒別寄主主要用于鑒別、分離病毒和病毒的定量，指示植物主 要用于檢測(cè)病原物的存在。(2)范圍不同：鑒別寄主包括單一的鑒別寄主和 鑒別寄主譜。19 .如何鑒定病毒與類病毒？簡(jiǎn)述其依據(jù)的原理和方法。(結(jié)合第10題)類病毒與真病毒的區(qū)別：病原以無(wú)衣殼包被的RNA式存在于植 物體內(nèi)；不能從病組織中檢測(cè)出類似病毒的粒體；侵染性RNA的分子含量特低，且在病細(xì)胞中照樣能自主復(fù)制；侵染性 RNA僅由一種分子所組成。病毒鑒定采用生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，病株汁液體外性狀測(cè)定，血清學(xué)實(shí)驗(yàn)，電子顯微鏡技術(shù)，分子生物學(xué)技術(shù)。

20、 類病毒無(wú)法用血清學(xué)和電鏡診斷，一般采用生物鑒定、凝膠電泳、互補(bǔ)脫氧核糖核酸雜交。20 .植物病毒病常見(jiàn)的實(shí)驗(yàn)診斷方法有哪些，任選其中一種簡(jiǎn)述其原理及步驟。1、(1)枯斑寄主：枯斑寄主受到某種病毒感染后只產(chǎn)生局部枯斑，一個(gè)局部枯斑就是一 個(gè)侵染點(diǎn)，單個(gè)枯斑中的病毒比較純一。分離后接回自然發(fā)病寄主的健苗上，產(chǎn)生和原來(lái)完全相同的癥狀，而不混有其他的癥狀，多次反復(fù)分離，即可獲得純一的致病病毒。(2)過(guò)濾寄主：利用寄主對(duì) 不同病毒的抗性差異 將病毒分離開(kāi)來(lái)。凡某種寄主對(duì)一種病毒 是免疫的，而對(duì)另一種病毒是感染的， 或?qū)σ环N病毒是感染的， 而對(duì)其他幾種病毒是免疫的。(3)?；轶w：專化介體是 利用介體種

21、間對(duì)病毒親和力和傳毒特性的差異來(lái)分離病毒。一定的介體只能傳染一定的病毒。2、ELISA原理：(1)抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體 表面，是蛋白質(zhì)和 聚苯乙烯表面間的疏水性 部分相互吸附，并保持其免疫學(xué)活性；(2)抗原或抗體可通過(guò)共價(jià)鍵與酶連接形成酶結(jié)合物，而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性；(3)酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后，可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng) 來(lái)判定是否有免疫反應(yīng)的存在，而且顏色反應(yīng)的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的，因此，可以按底物顯色的程度顯示試驗(yàn)結(jié)果。 步驟：0 0包被特異性抗愫想入含有抗原的待那群品愜1»標(biāo)記特異性抗體現(xiàn)底物顯色3、核酸分子雜交

22、：核酸分子雜交技術(shù)則是通過(guò)DNA- RNAi基互補(bǔ)關(guān)系檢測(cè)病毒核酸 來(lái)證實(shí)病毒的存在，原理:步驟：制備探針、同位素標(biāo)記探針、點(diǎn)雜交檢測(cè)病毒。21. PCR的中文全稱，并試述PCR的原理及其在植物正單鏈 RNA病毒（如：馬鈴薯Y病毒）檢測(cè)中應(yīng)用。1、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。2、原理：在DN朦合酶催化下，以母鏈 DN的模板，以特定引物為延伸起點(diǎn)，通過(guò)變性、退 火、延伸等步驟哦，體外復(fù)制出與母鏈模板DNA：補(bǔ)的子鏈DNA勺過(guò)程。3、步驟：變性、退火、延伸先從純化病毒中提取RNA在反轉(zhuǎn)錄酶的作用下，合成cRNA在dna聚合酶的作用下形成平整 末端的ds-cDNA,接下來(lái)就可以進(jìn)行常規(guī)的 PCRE應(yīng)，具體操作如

23、下： 模板DNA勺變性：模板DN席加熱至93 c左右一定時(shí)間后， 使模板DNAZ鏈或經(jīng)PCRT增形成 的雙鏈DNA軍離，使之成為單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備；模板DNAf引物的退火（復(fù)性）：模板DNAS加熱變性成單鏈后， 溫度降至55c左右，引物與模板DNAI鏈的互 補(bǔ)序列配對(duì)結(jié)合；引物的延伸：DNAI板-引物結(jié)合物在TaqDN麋合酶的作用下，以dNTP為反應(yīng)原料，靶序列為模板，按堿基配對(duì)與半保留復(fù)制原理，合成一條新的與模板DNA鏈互補(bǔ)的半保留復(fù)制鏈。22 .試述酶聯(lián)免疫吸附反應(yīng)（ELISA）間接法的主要實(shí)驗(yàn)流程。間接法的主要實(shí)驗(yàn)流程：先用待測(cè)病毒標(biāo)樣包被酶聯(lián)板， 使病毒抗原吸附在

24、微皿孔壁上； 洗去多余抗原及雜質(zhì)，加入特異性兔抗血清IgG;培育后洗去除未和抗原結(jié)合的多余抗體，再加上酶標(biāo)記羊抗兔 IgG;最后加入底物。如有顏色反應(yīng)，證明抗原一特異抗體一酶標(biāo)抗抗體復(fù)合物的存在，從而確定病毒的存在。23 .試述植物病毒在循回增殖型的傳毒觀蟲(chóng)中的大致循回增殖過(guò)程。通過(guò)電鏡觀察，發(fā)現(xiàn)助蟲(chóng)的食道、唾腺、脂肪體、腦和含菌體的細(xì)胞中均有病毒存在。人們?cè)O(shè)想的循環(huán)增殖的大致過(guò)程為： 病毒從口針吸入進(jìn)中腸， 穿透腸壁達(dá)血淋巴， 然后轉(zhuǎn)入 脂肪體細(xì)胞內(nèi)增殖， 再將病毒轉(zhuǎn)運(yùn)到唾腺的唾液中， 最后病毒隨唾液返回口針， 助蟲(chóng)為害取 食是就傳染到植物細(xì)胞內(nèi)了。24 .抗原、半抗原、抗原決定簇及抗體的各

25、自定義?？乖╝ntigen, Ag）,是指能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生（特異性）免疫應(yīng)答，并能與免疫應(yīng)答產(chǎn) 物抗體和致敏淋巴細(xì)胞在體外結(jié)合，發(fā)生免疫效應(yīng)（特異性反應(yīng)）的物質(zhì)。不完全抗原，即半抗原（hapten）是只具有免疫反應(yīng)性，而無(wú)免疫原性的物質(zhì)，故又稱 不完全抗原。半抗原與蛋白質(zhì)載體結(jié)合后，就獲得了免疫原性，如：絕大多數(shù)多糖和所有的類脂等?？乖砦唬╡pitope）,又稱抗原決定簇（antigenic determinant , AD）,指抗原分子中決 定抗原特異性的特殊化學(xué)基團(tuán)?？贵w（antibody）:機(jī)體在抗原物質(zhì)刺激下，由B細(xì)胞分化成的漿細(xì)胞所產(chǎn)生的、可與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)的免疫球蛋

26、白。25 .如何根據(jù)植物病毒的傳播方式和傳毒特點(diǎn)制定病毒病害控制方案？植物病毒的傳播 方式：機(jī)械傳染，嫁接傳染，菟絲子傳染，種子傳染，介體傳染傳毒特點(diǎn)：非循回型（非持久性病毒）多為口針傳毒循回型：增值型（持久性傳毒）和非增值型（持久性和非持久性傳毒）方案：以CMV；染的普通煙為例1） .檢疫措施：綜合治理，防治為主，對(duì)煙草種子種苗的檢疫，防治病毒的傳入。2） .無(wú)病種子及無(wú)性繁殖材料：建立無(wú)病留種田，清除田間的雜草，去除越冬的朗蟲(chóng)；種苗消毒與熱處理，煙草種子中的 CM通過(guò)360c熱處理3-4周可達(dá)到防治的目的；莖尖和原生質(zhì) 體的脫病毒培養(yǎng)。3） .農(nóng)業(yè)防治：合理布局，不要在煙區(qū)四周種植蔬菜，桃樹(shù)等，減少朗蟲(chóng)的危害；選用抗病品種和耐病品種，選擇助蟲(chóng)不易生長(zhǎng)的品種如云煙87,云煙85等；注意田間管理，及時(shí)清理田間雜草，翻耕滅茬；利用地上覆蓋物避助防病，使用黃板誘財(cái)測(cè)報(bào)， 如銀灰色塑?；蛘咄该魉芰系啬た梢杂行У谋茇?cái)防病；加強(qiáng)水肥的管理，適期適量灌水和排水，合理施肥；適期播種和合理密植，低溫不適合朗蟲(chóng)的生長(zhǎng)，早播，早