新型傳染性法氏囊病疫苗研究進(jìn)展.docx

1、新燹俳酷餐騷灸奈嘉巍蜀張文通I,魏鳳2,沈志強(qiáng)（1.山東綠都生物科技有限公司，山東濱州256600；、f2.山東省濱州富牧獸醫(yī)研究院，山東濱卅256600）摘要：傳染性法氏食?。↖BD）病毒變異株及超強(qiáng)毒株的頻頗出現(xiàn)使IBD常規(guī)疫苗的免疫失敗不斷發(fā)生。因此，發(fā)展更為有效、安全的新型疫苗己成為迫切需要。本丈就近年來新型傳染性法氏囊病疫苗研究進(jìn)展作以綜述。關(guān)鍵詞：傳染姓法氏食病病毒；新型疫苗中圖分類號(hào):S858.31243文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：AIBD（InfectiousBursalDisease,IBD）是目前危害世界養(yǎng)禽業(yè)的三大主要傳染病之一，免疫接種是主要的防治措施，傳統(tǒng)預(yù)防措施主要是使用弱毒苗和滅

2、活苗來控制病毒感染。雖然傳統(tǒng)疫苗在控制該病的流行方面發(fā)揮了很大作用，但由于變異毒株和超強(qiáng)毒株的出現(xiàn)，分子結(jié)構(gòu)改變導(dǎo)致病毒致病力的改變以及宿主對(duì)疫苗免疫應(yīng)答的改變，經(jīng)常導(dǎo)致免疫失敗，現(xiàn)有疫苗不能提供保護(hù)，這就促使人們研制新型疫苗。本文就對(duì)近年來新型傳染性法氏囊病疫苗研究進(jìn)展作以綜述。1重組亞單位疫苗基因工程亞單位疫苗是用DNA重組技術(shù)，將編碼病原微生物保護(hù)性抗原的基因?qū)胧荏w菌或細(xì)胞，使其在受體細(xì)胞中高效表達(dá).分泌保護(hù)性抗原肽鏈。提取保護(hù)性抗原肽鏈.加入佐劑即可制成基因工程亞單位疫苗。收槁日期：2014-02-22*項(xiàng)目及名號(hào)：山東*現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)像系家禽創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目.SDAIT-13-01i

3、-09d作者簡介：張文通（1979-）,男，漢族，助理研究員，主要從事噌用生物制品研究，hzndzwt°*通訊作者。文章編號(hào):1673-1085（2014）03-0050-05二I世紀(jì)80年代中期至90年代初，澳大利亞科學(xué)家克隆了1BDV（InfectiousBursalDiseaseVirus,宿主保護(hù)性抗原及前體如何徵白的cDNA片段，并在大腸桿菌中表達(dá)，在體外獲得了大量純化的VP2和VP3產(chǎn)物，從而開創(chuàng)了研究IBD基因工程疫苗的先河"'oVakharia等所用桿狀病毒表達(dá)了1BDV變異株GLS的大片段VP2/4/3,表達(dá)產(chǎn)物可以正確加工產(chǎn)生VP2或VP3,且能

4、與中和單克隆抗體結(jié)合，具有正確的構(gòu)型。Snyder等問將標(biāo)準(zhǔn)毒株D78的中和性抗原決定簇的編碼區(qū)插入到變異株GIS的VP2編碼區(qū)，形成的嵌合基因克隆入桿狀病毒載體，與桿狀病毒重組后，除表達(dá)B69外，GIS株VP2和VP3的抗原決定簇均可正常表達(dá)。姜平等用pCYTEXPI表達(dá)質(zhì)粒在大腸桿菌表達(dá)了南京IBDV野毒株VP2cDNA片段，并證明表達(dá)產(chǎn)物可與IBDV陽性血清結(jié)合，但對(duì)雞的免疫保護(hù)性尚待于進(jìn)一步研究。于漣等m在克隆了IBDVHZ96株VP2基因的基礎(chǔ)上，首次利用家蠶桿狀病毒（BmNPV）表達(dá)系統(tǒng)在家蠶細(xì)胞和幼蟲中高效表達(dá)了VP2蛋白，動(dòng)物試驗(yàn)初步證實(shí)用含有重組病毒的蠶血淋巴注射或口服可保護(hù)

5、IBDV強(qiáng)毒株對(duì)非免疫雞的攻擊。WangMY.KuoYY等同在桿狀病扉表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)VP2區(qū)得到度組VP2（rVP2）蛋白，經(jīng)純化后免疫可使機(jī)體獲得抗IBDV的保護(hù)性抗體；王笑梅等用酵母表達(dá)IBDVVP2免疫SPF雞后.能夠產(chǎn)生特異性抗休，并在一定程度上抵抗超強(qiáng)毒的致死性攻擊，但還不能保護(hù)法氏囊組織完全不受侵害和損傷，免疫效果尚不如常規(guī)滅活疫苗；高玉龍等在桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)雞IBDVVP2基因,Westernblot顯示獲得正確表達(dá)，攻扇試我表明，免疫3周齡SPF雞，初次免疫后14d對(duì)IBDV超強(qiáng)毒株的攻擊保護(hù)率為75%,2次免疫后14<1對(duì)其的攻擊保護(hù)率為100%。到目前為止，國內(nèi)

6、外市場上經(jīng)銷著兩種商業(yè)化重組亞單位疫苗。以色列雅貝克（Abie）公司現(xiàn)在經(jīng)銷一種滅活的夏合疫苗（NDV+IBDV）,其中含有酵母表達(dá)的vvlBDVVP2蛋白質(zhì)；中國青島易邦生物工程有限公司也在經(jīng)銷一種傳染性法氏囊病油乳劑亞氓位疫苗，疫苗含有大腸桿菌表達(dá)的IBDVVP2蛋白質(zhì)。2重組活載體疫苗基因工程重組活載體疫苗是用基因工程技術(shù)將保護(hù)性抗原基因（目的基因）轉(zhuǎn)移到載體中使之表達(dá)的活疫苗，具有亞單位疫苗的安全性和減毒活疫苗的高效性c將1BDV相關(guān)抗原基因更組到其它禽病毒中，所構(gòu)建的重組活載體病毒可以誘導(dǎo)抗載體與1BDV雙重免疫應(yīng)答。BoyleDB等叩用禽痘病毒（FPV）與IBDVVP2構(gòu)成重組體的

7、rFPV-VP2,接種雞對(duì)澳大利亞分離株002/73有保護(hù)作用，俱這種保護(hù)性與免疫劑垃和途徑有關(guān)0Darteil等商曾以重組火雞瘡疹病毒（HVT）為表達(dá)系統(tǒng)表IB0V的宿主保護(hù)性抗原VP2,對(duì)vvlBDV（veryvirulentInfectiousBursalDiseaseVirus,vvlBDV）起到60%的保護(hù)作用。Tsukamoto等網(wǎng)構(gòu)建了表達(dá)VP2的重:組馬立克氏活病毒（MDV）,構(gòu)建二聯(lián)苗，對(duì)同種vvMDV和vvlBDV攻擊的SPF雞的保護(hù)率分別為100%和55%。Tsukamoto等網(wǎng)還以重組馬立克氏病毒（rMDV）和重組雞痘病毒（rFPV）作為雙載體系統(tǒng)制成1BI）重組活載體

8、疫苗對(duì)雞群進(jìn)行免疫，結(jié)果表明雙載體系統(tǒng)重組疫苗更加穩(wěn)定有效，可誘導(dǎo)對(duì)超強(qiáng)毒株的攻擊保護(hù)。ShawI等網(wǎng)以禽痘病毒為表達(dá)系統(tǒng)表IBDV的宿主保護(hù)性抗原VP2,并進(jìn)行保護(hù)實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示其保護(hù)作用很訶能是由于細(xì)胞介導(dǎo)的免疫作用所致，而旦保護(hù)作用與品種有關(guān)。劉小軍等用間接免疫熒光證明重組雞痘病毒町以再感染的雞胚成纖維細(xì)胞中表達(dá)VP2蛋白；金寧一等網(wǎng)在重組雞痘病毒中表達(dá)IBDVVP2與VP2/4/3基因，實(shí)騎證明構(gòu)建的兩個(gè)重組質(zhì)粒在雞胚成纖維細(xì)胞（CEF）中得到高效表達(dá)，但重組疫茁的保護(hù)率低于常規(guī)疫苗；Sheppanl等四在禽腺病毒（FAV-10）表達(dá)IBDVVP2基因，重組疫苗免疫SPF雞，可以誘

9、導(dǎo)產(chǎn)生抗VP2抗體，并可抵抗IBDV的攻擊；Phenix等問以西門利克森林病毒（SFV）為表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)IBDV的VP2和多聚蛋白VP0,免疫后可誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性抗體，但在部分雞只中產(chǎn)生中和性抗體；程太平等構(gòu)建了以禽多殺性巴氏桿菌弱準(zhǔn)株G190E40載體表達(dá)1BDVVP2基因的活載體疫苗，攻毒試驗(yàn)表明該疫苗對(duì)IBDV標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)毒BC6/85攻擊免疫保護(hù)率為75%；總金英等閔構(gòu)建了以新城疫病毒載體表達(dá)IBDV超強(qiáng)毒株VP2基因的活載體疫苗，攻毒試驗(yàn)表明該疫苗對(duì)IBDV超強(qiáng)毒株攻擊免疫保護(hù)率達(dá)90%以上。3基因缺失疫苗基因缺失疫苗是用基因工程技術(shù)將強(qiáng)毒株毒力相關(guān)基因切除構(gòu)建的活疫苗.該疫苗安全性好、不易返

10、祖，尤其適于局部接種.誘導(dǎo)產(chǎn)生粘膜免疫力，其免疫力堅(jiān)實(shí)，免疫期長。德國的Mundt等«2"己研制生產(chǎn)出不再表達(dá)VP5病毒蛋白的IBDV毒株°這些基因工程IBDV毒株是有活性的，但是作為活疫苗使用目前尚存在一定的局限性，因?yàn)閂P5基因的缺失，毒株的生產(chǎn)速度嚴(yán)重減慢，這就意味著這些毒株已高度致弱，即使使用非常大的劑量也僅能保護(hù)SPF雞抵御致死性感染。4病毒樣顆粒（VLPs）Ecmandez-Arias等1221用痘苗病毒載體表達(dá)VP2/VP4/VP3時(shí)，首次發(fā)現(xiàn)表達(dá)產(chǎn)物町自動(dòng)的切并裝配為VLPs,這種VLPs不僅為IBDV抗體特異識(shí)別，與天然IBDV粒子也非常相象。R

11、ogel等將IBDVA片段置于大腸桿菌表達(dá)載體中.WesternblotW檢測到所表達(dá)的病*蛋白，免疫電鏡可以觀測到vlp,純化的蛋白可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗體，并m抵抗IBDVGep5毒株的攻擊。Kibenge與Hu兇等也分別用桿狀病毒表達(dá)了IBDVA片段cDNA全長，表達(dá)產(chǎn)物同樣可以fl動(dòng)裝配為VLPs,并有免疫反應(yīng)性。Hu等進(jìn)一步使VLPs上的VP2換成另一毒株的VP2從而產(chǎn)生嵌合VLPs,嵌合VLPs上的VP2C端還連上5個(gè)His使之通過固定金屬離子親和層析(IMAC)而被純化。如前所述，理論上VLPs的免疫原性更佳，但作為疫苗的效果有待驗(yàn)證。Lee等同用桿狀病毒表達(dá)的VP2蛋白可以自發(fā)形成V

12、LP,經(jīng)過硫酸鉉鹽析、親和層析等方法獲得結(jié)晶體。5高壓力失活疫苗田少敏等網(wǎng)研究了IBDV在高壓力下的感染力和免疫原性.在溫度不變F(0r),lBDV感染性隨壓力升高和壓力作用時(shí)間增加而下降,180MPa作用3h、240MPa作用2h可使1BDV完全喪失感染力。經(jīng)高壓力處理過的IBDV免疫雞，攻毒后無一發(fā)病，而非免疫對(duì)照蛆全部發(fā)病，顯示處理的失活I(lǐng)BDV具有很強(qiáng)的免疫原性。熒光學(xué)研究顯示隨壓力升高IBDV內(nèi)源熒光光譜的峰位發(fā)生紅移，而內(nèi)源熒光偏振和散射光則下降，最可能的解釋是發(fā)生了蛋白質(zhì)亞基的解離。電鏡觀察高壓力處理前后1BDV形態(tài)發(fā)生了明顯變化.病毒粒子破裂、變形。6DNA疫苗DNA疫苗主要通

13、過在體外直接注射(或用基因槍表擊)含抗原基因的特定質(zhì)粒使機(jī)體產(chǎn)生高效體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答，其興起稱為“第三次疫苗革命”。DNA疫苗的出現(xiàn)，開拓了IBD疫苗研究的新紀(jì)元。DNA疫苗能同時(shí)誘導(dǎo)體液免疫和細(xì)胞免疫，對(duì)不同血清亞型毒株具有交叉保護(hù)，還具有嵌合免疫、多重免疫及聯(lián)合免疫等優(yōu)點(diǎn)網(wǎng)。匈牙利學(xué)者Fodor等回首次構(gòu)建了IBDV-D78株和GP40株的VP2基因及D78株的VP2/VP4/VP3真核表達(dá)質(zhì)粒，裸質(zhì)粒直接以肌肉和腹腔兩條途徑接種SPF雞，2周后加強(qiáng)免疫，結(jié)果發(fā)現(xiàn)含VP2基因的質(zhì)粒DNA免疫組未能檢測到特異性的中和抗體，攻毒不產(chǎn)生保護(hù)力；但編碼VP2/VP4/VP3質(zhì)粒能誘導(dǎo)產(chǎn)生免疫反應(yīng)

14、，僅有55%的免疫雞產(chǎn)生中和抗體，而攻擊強(qiáng)毒的保護(hù)率僅達(dá)36%,而且需要大劑世的DNA疫苗(800ug/H)維持免疫反應(yīng)。劉毅等團(tuán)構(gòu)建的以VP2和VP2/VP4/VP3為目的基因的DNA疫苗保護(hù)率低于常規(guī)的中強(qiáng)毒二價(jià)活苗，且被免疫雞的法氏囊組織存在IBDV；步志高等1311以D78株制備的DNA疫苗免疫SPF雞，結(jié)果表明該疫苗可誘導(dǎo)SPF雞產(chǎn)生中和抗體，并形成對(duì)IBDV超強(qiáng)毒株致死的免疫保護(hù)，并有可能減緩法氏囊病理損傷程度；姜平等國構(gòu)建的2種以VP2、VP3為目的基因的DNA疫苗對(duì)雞產(chǎn)生的保護(hù)率為90%和10%；陳創(chuàng)夫等閔制備以VP2目的基因DNA疫苗免疫雛雞，20d后在體內(nèi)苗檢測到特異性抗體

15、。王小泉兇將以VP2目的基因DNA疫苗及弱岸苗免疫雞，結(jié)果顯示兩種疫苗聯(lián)合免疫明顯較用一種DNA疫苗高；2001年，李建榮等閔制備ZJ2000和JDI株的8種DNA疫苗，得出了使用ZJ2000株的以VP2/VP4/VP3制備的DNA疫苗免疫效果最好；于漣等閏研究表明灼IL-2質(zhì)粒能增強(qiáng)IBDV多聚蛋白DNA疫苗誘導(dǎo)的病毒血清中和抗體效價(jià)；Hulse等印似STC株的VP2基因制備DNA疫苗免疫2周齡錐焰，結(jié)果顯示肌肉組織中表達(dá)了VP2蛋白及胸腺、脾臟和法氏囊中能擴(kuò)增到VP2基因。參考文獻(xiàn)：1 AzadAA,MckemNM,macreadieIG,etal.Physicochemicalandim

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