豬細(xì)小病毒病毒樣顆粒疫苗研究進(jìn)展.docx

1、河南農(nóng)業(yè)科學(xué),2015,44(10)：12-16JournalofHenanAgriculturalSciences豬細(xì)小病毒病毒樣顆粒疫苗研究進(jìn)展劉運(yùn)超I,陳玉梅堆，姬鵬超I,趙寶磊3,王聚財3,鄧瑞廣I,張改平(1.河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院河南省動物免疫學(xué)虞點實臉室/農(nóng)業(yè)部動物免疫學(xué)重點實驗室，河南鄭州450002；2.鄭州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，河南鄭州4500()1；3.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)工程學(xué)院，河南鄭州450002)摘要：豬細(xì)小病毒(PPV)感染可導(dǎo)致母豬繁殖障礙、斷奶仔豬多系統(tǒng)衰弱綜合征和腸炎性腹瀉等疾病，給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。臨床防控以接種疫苗為主，常用的疫苗有弱毒疫苗和滅活疫苗。隨著生物

2、技術(shù)的發(fā)展，新型PPV疫苗的研完工作成績顯著。VP2蛋白是PPV主要的衣殼蛋白，對研究新型PPV疫苗至關(guān)重要，綜述了豬細(xì)小病毒VP2蛋白及病毒樣顆粒疫苗的研究進(jìn)展，以期為新型PPV疫苗的研究提供參考。關(guān)鍵詞：豬；豬細(xì)小病毒；VLP；疫苗；VP2蛋白中圖分類號：S852.65文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號：1004-3268(2015)10-0012-05ResearchProgressofVirusLikeParticlesVaccineAgainstPPVLIUYunchao',CHENYumei1,2,JIPengchao',ZHAOBaoIei3,WANGJucai3,DENGR

3、uiguang1,ZHANGGaiping1,3-(1.HenanProvincialKeylaboratoryofAnimalImmunology,HenanAcademyofAgriculturalSciences/KeyLaboratoryofAnimalImmunologyoftheMinistryofAgriculture,Zhengzhou450002.China；2.CollegeofBasicMedicalScience,ZhengzhouUniversity,Zhengzhou450001,China;3.CollegeofAnimalScienceandVeterinary

4、Medicine,HenanAgriculturalUniversity,Zhengzhou450002tChina)Abstract:Porcineparvovirus(PPV)isthemajorcausativeagentinswine,whichusuallycausesreproductivefailure,weanedpigletsmultiplesystemweaksyndrome,inflammatorydiarrheaandotherdiseasescausingseriouseconomiclossesintheswineindustry.Thevaccinationist

5、hemosteffectivemethodforpreventingPPVinfectionanditscomplications,whichincludingattenuatedvaccineandinactivatedvaccine.Withthedevelopmentofgeneticengineering,theresearchworkofthenovelvaccineagainstPPVhasaremarkableprogress.TheVP2proteinisamaintargetforneutralizingantibodies,whichisveryimportantforth

6、enovelvaccineagainstPPV.ThispaperreviewedtheresearchprogressofparvovirusVP2proteinandviruslikeparticlesvaccineagainstPPV,whichwouldbehelpfulforthenovelvaccineagainstPPV.Keywords；swine；porcineparvovirus；VLP；vaccine；VP2豬傳染病對我國養(yǎng)豬業(yè)危害嚴(yán)童，防治豬傳染病對養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展至關(guān)重要。豬細(xì)小病毒(porcineparvovirus,PPV)是一種極為常見的病原體，常引起豬的繁殖障礙，懷

7、孕母豬的死胎和“木乃伊胎”、斷奶仔豬多系統(tǒng)衰弱綜合征等。PPV屬于細(xì)小病毒科細(xì)小病毒屬，無囊膜病毒，平均直徑20-26nm,分子質(zhì)量為5.3Xi。、ku,是目前動物病毒中最小的一類單鏈線狀DNA病毒。PPV流行極為廣泛，95%的豬場檢測為病毒陽性，給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失"。PPV可在病豬心臟、肺臟、脾臟和性腺中復(fù)制，但其主要靶器官是母豬子宮，子宮內(nèi)病毒含量最高可達(dá)10”拷貝/mL°PPV在母豬和仔豬體內(nèi)的致收稿日期：2015-05-21基金項目：中國博上后科學(xué)基金(2013M541980)；河南省柬大科技專項(141100110100)；河南省基礎(chǔ)前瞻類項目(20141

8、644)作者簡介：劉運(yùn)超(1982-),辨，河南周口人，助理研究員，博士，主要從事動物疫病與疫苗研究。E-mail:yunchaoliu2012*通訊作者：張改平(I960-),男，河南內(nèi)黃人，研究員.博士，主要從事動物疫病免疫機(jī)制亍疫苗研究。E-mail:zhanggaiping2OO3病位置略有差異，主要感染母豬的繁殖器官.同時也破壞肺臟等呼吸器官和脾臟等免疫器官；而對仔豬的損傷主要是破壞脾臟和性腺等生理功能，同時破壞心臟等中樞器官，從而造成死亡刁。Bachmann等'研究表明,PPV感染妊娠55(I以下的母豬可引起死胎41是感染妊娠72<1以后的母豬卻不影響胎兒正常分娩與存

9、活。1豬細(xì)小病毒基因組結(jié)構(gòu)特點1967年Cartwright在流產(chǎn)母豬體內(nèi)首次分肉到PPV,該病毒屆于細(xì)小病毒科，成熟的PPV病毒慕因組大小約5kb.3,-端仃折登形成Y形結(jié)構(gòu)的102bp的回文序列.5'-端有一個折格形成U形結(jié)構(gòu)的127bp的Ml文序列43o研究"顯示，PPV基因組包括2個開放閱讀框(openreadingfragment,ORF),ORF1編碼非結(jié)構(gòu)蛋白NS-LNS-2和NS-3；ORF2主要編碼結(jié)構(gòu)蛋白VP1、VP2和VP3；另外PPV基因組還包含一個小的ORF,編碼非結(jié)構(gòu)卜白SAT-。PPV的NS序列在進(jìn)化上相對保守.其編碼的非結(jié)構(gòu)蛋白在調(diào)控PPVDN

10、A復(fù)制方面發(fā)揮作用。PPV結(jié)構(gòu)蛋白經(jīng)過規(guī)則的排列組裝形成病毒衣殼蛋門，能夠包爆病存DNA入侵宿主細(xì)胞。Molitor等9采用SDS-PAGE方法整定rPPV的3個結(jié)構(gòu)蚩白VP1、"和VP3,且證實這3種蛋門質(zhì)均能誘導(dǎo)兔,產(chǎn)生抑制紅細(xì)胞凝集抗體，VPI蛋白C-端敏基酸與VP2N-端基域酸序列用!£而：占，該區(qū)域仃含堿性基基酸殘堪.能增強(qiáng)PPV與宿主DNA的結(jié)合,穩(wěn)定病毒的單鏈基因組【)NA,在病毒侵染細(xì)胞過程中起爪要作用0”。VP3nr能是VP2翻譯后加匚的產(chǎn)物.只出現(xiàn)在衣殼裝配和病毒基因組包裝后m。VP2蛋n是構(gòu)成病毒衣殼的主要:成分.約占病毒衣殼蛋白總量的80%,包含PP

11、V主要的B細(xì)胞和T細(xì)胞抗原喪位°目前，發(fā)現(xiàn)'P2上有9個線性B細(xì)胞表位，在其N末端區(qū)域發(fā)現(xiàn)石病毒中和表位,，J，'5oSedlik等16研究發(fā)位，VP2蛋白C末端的完整性對于病毒衣殼的形成是必不可少的。重組表達(dá)的PPVVP2蛋白能自我裝配成病莓樣顆粒(virus-likeparitcles,VLP)(圖I).是應(yīng)好的免疫原，能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生高滴度抗PPV抗體，保護(hù)機(jī)體免遭病毒的攻擊，7o同時.PPVVLP能夠在VLP表面展示其他病毒來源的抗面展向，也是良好的抗原轉(zhuǎn)運(yùn)載體”。因此.研究VP2蛋白和VLP的形成對發(fā)展PPV新型疫苗具有很高的價值圖1PPVVP2及其形成的V

12、LP的結(jié)構(gòu)2豬細(xì)小病毒傳統(tǒng)疫苗PPV的傳統(tǒng)疫苗主要以弱毒苗和滅活|Y|為主。些早用于臨床的PPV疫苗是NADL-2弱毒株疫苗,Paul等"將PPV強(qiáng)毒株經(jīng)過50次的細(xì)胞連續(xù)傳代.獲得可用作疫苗的PPV弱毒株。但進(jìn)一步的研究結(jié)果顯示，在對母豬經(jīng)口邸接種PPV致弱苗后，致弱的PPV不能經(jīng)胎盤感染胎兒，但當(dāng)在子宮內(nèi)接種PPV致弱苗后，致弱苗可以感染胎兒其至導(dǎo)致胎兒死亡，因此,PPV弱毒苗應(yīng)限于非懷孕母豬使用，安全性有待提高。國內(nèi)研究者對PPV弱毒疫苗也進(jìn)行了一些研究。廣西獸醫(yī)研究所蔣正雯等201分離到1株自然弱毒株(PPV-N株)，并于2006年用PPV-N株弱卷疫苗進(jìn)行區(qū)域試驗，結(jié)果顯示

13、,PPV-N株弱荏疫苗能有效抵抗PPV強(qiáng)能攻擊，在豬場應(yīng)用取得了明顯的經(jīng)濟(jì)和社會效益由于PPV弱毒疫苗有毒力返強(qiáng)的危險，各國研究者開始采用更為安全的滅活疫苗。20世電80年代,PPV滅活苗在美國、澳大利亞以及法國等國家得到r普遍的應(yīng)用。在中國，從國產(chǎn)再用生物制品的批簽發(fā)數(shù)據(jù)來看，目前使用的PPV疫苗主要是滅活疫苗，包括WH-1株、CP-99株和BJ-2株3種毒株。PPV疫苗的應(yīng)用大大降低了因PPV感染引起的母豬繁育失敗，目前仍是預(yù)防豬細(xì)小病毒感染的主要手段。PPV疫苗經(jīng)歷了弱毒苗到滅活苗的發(fā)展過程，安全性有了很大提高。但是，滅活疫苗存在滅活不徹底和散毒的可能，而弱毒疫苗存在毒力返強(qiáng)及重組的危險

14、，故研制一種安全、高效的新型PPV疫苗迫在眉睫。豬細(xì)小病毒結(jié)構(gòu)蛋白VP2由于其良好的免疫原性及其可自行裝配成病毒樣顆粒(VLP)的特性，給PPV的免疫預(yù)防帶來了廣闊的應(yīng)用前景。3豬細(xì)小病毒VLP疫苗的研究3.1PPVVP2形成的VLP疫苗Marlinez等(將PPVVP2基因成功克隆到桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)中，利用VP2蛋白自我組裝的特性，成功地制備了PPV類病毒粒子(VLP),試驗結(jié)果顯示，其免疫效果與商品化的PPV疫苗相當(dāng)。Antonis等;”'應(yīng)用桿狀病毒表達(dá)載體系統(tǒng)成功制備出PPV類病毒粒子，并對豚鼠、仔豬和懷孕母豬進(jìn)行r免疫試驗。該研究小組利用桿狀病毒表達(dá)的PPVVP2蛋白能自行裝

15、配成VLP,電鏡下呈球形顆粒，直徑2()3()nm,形狀大小與PPV病毒粒子相似網(wǎng)。該研究以多種佐劑混合PPVVLP后免疫豚鼠，每只免疫0.2|ig,在免疫后28d和49d分別采用血凝抑制試驗(hemagglutinationinhibitionassays,HI)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)和病毒中和試驗檢測豚鼠抗體變化。檢測結(jié)果顯示，VLP免疫的豚鼠產(chǎn)生較高的特異性抗體和中和抗體.未免疫組沒有產(chǎn)生抗體，且PPVVLP免疫組豚鼠,產(chǎn)生的中和抗體顯若高于商品化滅活疫苗免疫組。研究者在懷孕的母豬中進(jìn)行了類似的試驗.未免疫的陰性母

16、豬沒右.抗休反應(yīng)。在免疫的各組中,PPVVLP免疫后28dPPV抗體的HI效價在10'在免疫后49dHI效價可以達(dá)到10"。滅活疫苗免疫組產(chǎn)生的PPV特異性抗體滴度和H1滴度與VLP免疫組相當(dāng)，但是中和抗體效價顯著低于VLP免疫蛆。這一結(jié)果與豚鼠試驗結(jié)果-致，表明VLP疫苗在刺激機(jī)體產(chǎn)生中和抗體方面比PPV滅活疫苗更有優(yōu)勢。進(jìn)一步的攻毒保護(hù)試我驗證了這種VLP疫苗的免疫保護(hù)效力。試驗分為VLP免疫組和未免疫組0PPVVLP免疫組16頭母豬，每頭免疫劑雖0.7牌.免疫28d后HI平均效價達(dá)到10"以上.免疫后77dHI均效價達(dá)到10以上，未免疫組10頭母豬未檢測到II

17、I效價。免疫后77d進(jìn)行PPV攻毒試驗，觀察2組母豬產(chǎn)仔的情況。免疫組有10頭母豬產(chǎn)仔，平均每頭產(chǎn)仔質(zhì)為518頭，對照組有7頭母豬生產(chǎn)69頭仔豬。在未免疫組生產(chǎn)的69頭仔豬中，HA檢測為PPV病毒陽性的仔豬有54頭，占總數(shù)的78%；ELSIA檢測為PPV陽性的仔豬有69頭，占總數(shù)的91%。但是，采用同樣的檢測方法.免疫組母豬生產(chǎn)的仔豬中均未檢出PPV病毒。這表明PPVVLP疫麻具有很好的免疫保護(hù)效力，能夠保護(hù)懷孕母豬和仔豬免受PPV病毒侵襲。隨后，乂有多位研究者將PPVVP2基因克隆到桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)中進(jìn)行蛋白質(zhì)表達(dá)，成功獲得了PPV類病毒粒子，且能在豚鼠和豬體內(nèi)誘導(dǎo)高滴度的抗體產(chǎn)生l24&#

18、39;25Jo另有研究者在酵母表達(dá)系統(tǒng)中將PPVVP2蛋白進(jìn)行成功表達(dá)，并在體外裝配形成VLP,且具有良好免疫效果，誘導(dǎo)動物體產(chǎn)生高滴度的抗體26271o以上研究表明，真核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)的PPVVP2能夠形成PPVVLP,并且能夠在豚鼠和豬體內(nèi)誘發(fā)B細(xì)胞免疫反應(yīng)，產(chǎn)生高滴度的針對PPV的抗體。桿狀病毒表達(dá)的PPVVLP疫苗的免疫效果在試驗中得到肯定，但是受制于桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)的高昂成本，這種疫苗的推廣具有很大的難度。原核表達(dá)系統(tǒng)產(chǎn)量高、成本低、技術(shù)難度較低，具有明顯的成本優(yōu)勢。司艷紅等】利用PCR方法將擴(kuò)增的PPVVP2完整基因克隆到原核表達(dá)載體pET-32a中,在大腸桿萌中成功表達(dá)了VP2與T

19、rx-His-tag的融合蛋白.但是重組蛋白以包涵體形式表達(dá).經(jīng)過復(fù)性處理后未能得到VLP。試騎結(jié)果顯示，PPVVP2包涵體雖然能夠引起針對PPV的免疫反應(yīng)，但是沒有證據(jù)顯示這種免疫反應(yīng)具有足夠的保護(hù)力，而PPV-VLP疫苗能夠誘發(fā)足夠的免疫保護(hù)抵抗PPV的感染。不同表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)的VP2蛋白在組裝VLP和免疫活性上的差異與VP2蛋白的結(jié)構(gòu)有更要關(guān)系。上述研究結(jié)果顯示，桿狀病毒表達(dá)的PPVVP2蛋白能夠組裝成VLP并誘發(fā)足夠的免疫反應(yīng)，但是大腸桿菌表達(dá)的VP2蛋白不能蛆裝VLP,免疫效果不佳。這表明PPVVLP的形成與免疫保護(hù)效果密切相關(guān)，進(jìn)而受到蛋白質(zhì)來源的影響。另外，Qi等“應(yīng)用pET-32

20、a載體系統(tǒng)利用大腸桿ftRosetta菌株成功表達(dá)了可溶性的PPVVP2重組蛋白，提示原核表達(dá)的VP2蛋白也有形成VLP的可能性。PPVVLP疫苗與傳統(tǒng)滅活疫苗相比有幾個顯著的優(yōu)點：其構(gòu)象表位更類似于病毒，易產(chǎn)生類似于病毒的抗體反應(yīng)或免疫系統(tǒng)反應(yīng)；由于VLP疫苗不包含病毒基因組.不含布潛在的病毒致病基因，因此能誘導(dǎo)抗體應(yīng)答而無感染危險性，安全性較高;lh于VLP制備的產(chǎn)率比豬細(xì)小病毒組織培養(yǎng)要高得多，其生產(chǎn)成本明顯較低，這可以提供一種更為經(jīng)濟(jì)右效的疫苗。3.2基于PPVVP2形成的VLP嵌合疫苗Sedlik等研究發(fā)現(xiàn)，在PPVVP2N端引入脊懈灰質(zhì)炎病毒的T、B細(xì)胞表位并不影響VLP結(jié)構(gòu)的形成

21、，旦引入的T細(xì)胞表位能夠在體內(nèi)誘導(dǎo)T細(xì)胞免疫應(yīng)答，同時引入的B細(xì)胞表位多肽并沒有引起相應(yīng)特異性抗體產(chǎn)生。隨后，該課題蛆乂將淋巴細(xì)胞性脈絡(luò)叢腦膜炎病毒(lymphocyticchoriomeningitisvirus,LCMV)的CD8*T細(xì)胞表位引入PPVVP2N端制備成嵌合VLP疫苗，免疫注射或鼻內(nèi)給藥途徑免疫豬，結(jié)果顯示，嵌合VLP疫苗能夠引起機(jī)體產(chǎn)生高滴度的抗PPV的抗體，同時界內(nèi)免疫也引起了強(qiáng)烈的肽特異性細(xì)胞毒性T細(xì)胞(cylotoxicTcelLCTL)的免疫應(yīng)答f29)oMoron等【抻：將雞卵清白蛋白(chickeneggovalbumin,OVA)的257264表位多肽插入側(cè)翼

22、序列(LEQLESIINFEKLTE)，并引入到PPVVP2N末端，用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)并制備成嵌合VLP疫苗PPV-VLP-OVA,結(jié)果表明PPV-VLP-OVA可以經(jīng)由樹突狀細(xì)胞呈遞給CD8'T細(xì)胞，引起相應(yīng)的免疫應(yīng)答。隨后Rueda等研究了引入僅僅插入OVA表位肽及引入不同側(cè)翼序列的外源OVA表位肽制備成不同類型的嵌合疫苗，結(jié)果顯示，側(cè)翼序列的正確插入有助于MHCI對PPV-VLP-OVA的遞呈。Rodriguez等”將瘧原蟲蟲株環(huán)子弛子蛋白(circumsporozoiteprotein,CSP)的CD84Tcell表位多肽(SYVPSAEQI)引入PPVVP2N末端，用桿狀

23、病毒表達(dá)系統(tǒng)表達(dá).制備成嵌合疫苗PPV-PYCSVLP并免疫動物，結(jié)果表明，嵌合PPV-PYCSVLP可以明顯增強(qiáng)CD8，T細(xì)胞的免疫應(yīng)答。有研究者將合成的4拷貝的生長抑素(Somatostatin)多肽(SS4)引入PPVVP2N末端用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)，制備成嵌合疫苗PPV-VLPs-SS4并免疫動物，結(jié)果表明該疫苗效果同滅活苗一樣，均能夠引起機(jī)體產(chǎn)生高滴度抗PPVVP2的抗體，同時也能產(chǎn)生特異性中和抗體，另外，該嵌合苗也刺激機(jī)體產(chǎn)生了抗SS抗體叫。上述研究結(jié)果顯示，PPVVP2蛋白、端引入部分敏基酸并不影響其VLP的形成，也不影響該嵌合VLP引起機(jī)體PPV抗體的產(chǎn)生；且經(jīng)引入T細(xì)胞表位

24、多肽序列，可引起相應(yīng)的T細(xì)胞免疫應(yīng)答反應(yīng)，增強(qiáng)VLP疫苗的T細(xì)胞免疫應(yīng)答效果。這些研究成果為PPV疫苗的研制提供了新思路，為PPVVLP疫苗及多價疫苗的研制提供了理論基礎(chǔ)。4展望PPV在我國豬場廣泛流行，造成養(yǎng)豬業(yè)巨大的經(jīng)濟(jì)損失。PPV的防控主要依靠接種PPV疫苗，因此，疫苗的質(zhì)量與效果對PPV的防控有著重要的影響。PPV疫苗經(jīng)歷了弱毒疫苗到滅活疫苗的發(fā)展過程，但是由于病毒滅活不徹底、弱毒株毒力返強(qiáng)和病常基因重組等危險的存在，傳統(tǒng)PPV疫苗在應(yīng)用中暴露出越來越嚴(yán)重的問題。因此，研制一種安全、高效的新型PPV疫苗對PPV的防治至關(guān)重要。PPVVLP疫苗具有高效的免疫原性，而且不存在散毒和基因重組

25、的威脅，給PPV的免疫防控帶來了新的希望，成為各國研究的焦點。隨著對PPV新型疫苗研究的深入.PPVVLP疫苗必將在PPV防治中發(fā)揮重要作用。參考文獻(xiàn)：I蔡群德.劉建設(shè).豬細(xì)小病毒的流行特點及防控J.畜牧獸醫(yī)雜志.2012,3(6)：】02.2OraveerakulK,ChoiCS,MolitorTW.TissuetropismsofporcineparvovirusinswineJ,.ArchivesofVirology,1993,130(3/4)：377-389.3BachmannPA,ShefTyBE,VauhanJT.Experimentalinuteroinfectionoffeta

26、lpigswithaporcineparvovirusJ.InfectionandImmunity,1975,12(3)：455-460.4JDaiX¥,WangQJJiangSJ,eral.CompletegenomesequenceofanovelporcineparvovirusinChina|J.JournalofVirology,2012,86(24)：13867._5CheungAK,WuC,WangD,etal.IdentiGcationandmolecularcloningofanovelporcineparvovirus.J|.ArchivesofVirology,

27、2()10,155(5)：8()1-806.6WangLQ,WangY,ChenLB.efal.CompletegenomesequenceofaporcinepanovirusstrainisolatedincentralchinaLJJ.GenomeAnnouncements,2014,2(I):<01247-13.7,CuiJ.WangX,RenY,efal.GenomesequenceofChineseporcinepanovirusstrainPPV2010J'.JournalofVirology,2012,86(4)：2379.8CadarD,DanA,Tombacz

28、K,etal.PhylogenyandevolutionarygeneticsofporcineparvovirusinwildboarsJ.infeclGenetEvo).2012,12(6)：1163-1171.,9_MolitorTW.JooIIS,CollettMS.Porcineparvovirus:Viruspurificatioiiandstructuralandantigenicpropertiesofvirionpolypeptides'J.JournalofVirology.1983.45(2):842-854.(2)J48-152.(101StreckAF,Bon

29、attoSL,HomeierT,etal.Highrateof24ZhouH,YaoG,CuiS.ProductionandpurificationofviralevolutioninthecapsidproteinofporcinepanovirusVP2proteinofporcineparvovirusexpressedinaninsect-J.TheJournalofgeneralvirology,2011,92(Pt11)：baculoviruscellsystemJ.VirologyJournal,2010,2628-2636.7：366.11XieHL,WangZ,CuiSJ,e

30、tal.TheepitopeoftheVPI'25ChenY,CuoW,XuZ,etal.Anovelrecombinantpseud-proteinofporcineparvovirusJ.VirologyJournal,orabiesvirusexpressingparvovirusVP2gene：Immuno2OIO,7：161.genicityandprotectiveefficacyinswineJ.Virology12ZimmermannP,RitzmannM,SelbitzHJ,elal.VPIseJournal.2011,8：307.quencesofGermanpor

31、cineparvovirusisolatesdefinetwo26TamosiunasPL,Petraityte-BurneikieneR,LasickienegeneticlineagesJ.TheJournalofGeneralVirology,R,etal.Generationofrecombinantporcineparvovirus2006,87(Pt2)：295-301.virus-likeparticlesinSaccharomycescerevisiaeandde【13KamstrupS,LangeveldJ,BotnerA,etal.Mappingthevelopmentof

32、virus-specificmonoclonalantibodiesJ.antigenicstructureofporcineparvovirusatthelevelofJournalofImmunologyResearch,2014,doi:1().1155/peptides；J'.VirusResearch,1998,53(2)：163-173.2014/573531.14LopezdeTurisoJA,CortesE,RanzA,elal.Finemap：27GuoC,ZhongZ,HuangY.Productionandimmunogenicipingofcanineparvo

33、virusBcellepitopesJ.TheJourtyofVB2proteinofporcinepanovirusexpressedinnalofGeneralVirology,199,72(Pt10)：2445-2456.PichiapaslorisJJ.ArchivesofVirology,2014,159(5):15SimpsonAA,HebertB,SullivanGM,e£al.Thestruc963-970.tureofporcineparvovirus:Comparisonwithrelatedviru28QiT,CuiS.Expressionofporcinepa

34、n-ovirusVP2genesesJ.JournalofMolecularbiology,2002,315(5)：requirescodonoptimizedE.colicellsJ.VirusGenes,1189-1198.2009,39(2)：217-222.16SedlikC,SarrasecaJ,RuedaP,e£al.Innnunogenicityof29SedlikC,SaronMF,SarrasecaJ,etal.RecombinantpoliovirusBandTcellepitopespresentedbyhybridporparvovirus-likeparti

35、clesasanantigencarrier:AnovelcineparvovirusparticlesJJ.TheJournalofGeneralVinonreplicativeexogenousantigentoelicitprotectiveantirology,1995,76(Pt9)：2361-2368.viralcytotoxicTcellsJ1.ProceedingsoftheNational17MartinezC,DalsgaardK,lx>pezdeTurisoJAal.ProAcademyofSciences,1997,94(14)：7503-7508.ductionofporcineparvovirusemptycapsidswithhigh30MoronG,RuedaP,CasalI,etal.CD8alpha-CDl1b*immunugenicactivityJ.Vaccine.1992,1()(10):dendriticcellspresentexogenousvirus-likeparticlesto684-690.CD8*TcellsandsubsequentlyexpressCD8alphaand18RenX,TaoY,CuiJ,etal.PhylogenyandevolutionofCD205moleculesJ.TheJour