預(yù)培養(yǎng)那些事

1、“預(yù)培養(yǎng)”那些事微生物研究院作者 半知菌目編輯中侖原創(chuàng)版權(quán)，請(qǐng)勿轉(zhuǎn)載一、預(yù)培養(yǎng)的由來(lái)中國(guó)藥典自2010年版起，在藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則中第一次提出：用于環(huán)境監(jiān)控的培養(yǎng)基須特別防護(hù)，最好要雙層包裝和終端滅菌，如果不能采用終端滅菌的培養(yǎng)基，那么在使用前應(yīng)進(jìn)行100%的預(yù)培養(yǎng)，以防止外來(lái)的污染物帶到環(huán)境中及避免出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。2015年版中國(guó)藥典出版后，在四部“9203藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則”中，這句話再次出現(xiàn)。必須說(shuō)明的是，中國(guó)藥典這段關(guān)于環(huán)境監(jiān)測(cè)培養(yǎng)基的要求，是出自：USP1117 MICROBIOLOGICAL BEST LABORATORY PRACTICES Speci

2、al care should be taken with media that is used in sterility tests (seeSterility Tests71for requirements) and in environmental monitoring studies. Media used for environmental monitoring of critical areas should preferably be double-wrapped and terminally sterilized. If terminal sterilization is not

3、 performed, media should be subjected to 100% pre-incubation and inspection before use within a critical area. NOTEGrowth-promotion testing for this media must be performed after the preincubation stage. This will prevent extraneous contamination from being carried into controlled environments and w

4、ill prevent false-positive results.二、預(yù)培養(yǎng)的目的之所以對(duì)環(huán)境微生物監(jiān)測(cè)培養(yǎng)基，特別是對(duì)關(guān)鍵區(qū)域環(huán)境監(jiān)測(cè)培養(yǎng)基提出特別的要求，特別是對(duì)關(guān)鍵區(qū)域環(huán)境監(jiān)測(cè)培養(yǎng)基提出特別的要求，其主要目的就是要避免環(huán)境微生物監(jiān)測(cè)的培養(yǎng)基及培養(yǎng)基的傳遞過(guò)程對(duì)關(guān)鍵區(qū)域，主要是A級(jí)、B級(jí)潔凈區(qū)造成污染或交叉污染，從風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的角度講，就是要避免環(huán)境微生物監(jiān)測(cè)出現(xiàn)假陰性或假陽(yáng)性的結(jié)果。藥企實(shí)驗(yàn)室為環(huán)境微生物監(jiān)測(cè)自行配制的培養(yǎng)基，在配制過(guò)程中可能會(huì)有個(gè)別培養(yǎng)基平板受到污染而染菌，所以就采用了“預(yù)培養(yǎng)”，期望通過(guò)“預(yù)培養(yǎng)”后發(fā)現(xiàn)的菌落，最終剔除部分染菌的培養(yǎng)基平板。風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估整個(gè)預(yù)培養(yǎng)的過(guò)程，就

5、會(huì)發(fā)現(xiàn)如下兩個(gè)風(fēng)險(xiǎn)：1.預(yù)培養(yǎng)所設(shè)定的培養(yǎng)條件，培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間適合污染菌的生長(zhǎng)嗎？2.污染的微生物可以通過(guò)目視而被挑選出來(lái)嗎？答案當(dāng)然是否定的。在不了解污染菌的情況下，設(shè)定一個(gè)培養(yǎng)條件，試圖發(fā)現(xiàn)制備培養(yǎng)基過(guò)程的污染菌是不現(xiàn)實(shí)的。而對(duì)于生長(zhǎng)緩慢的微生物，或者菌落沒(méi)有超過(guò)肉眼分辨率的個(gè)別污染菌，試圖通過(guò)目檢也是無(wú)法判斷培養(yǎng)基是否染菌的。三、預(yù)培養(yǎng)的風(fēng)險(xiǎn)分析從中國(guó)藥典和USP對(duì)環(huán)境監(jiān)測(cè)培養(yǎng)基的質(zhì)量控制中明顯看得出，中國(guó)藥典之環(huán)境微生物監(jiān)測(cè)培養(yǎng)基的要求基本是翻譯了USP的章節(jié)。但是有一個(gè)很大的差別，USP文中有關(guān)鍵的一句NOTE：Growth-Promotion testing for this

6、media must be performed after the pre-incubation stage.（預(yù)培養(yǎng)之后的培養(yǎng)基必須做促生長(zhǎng)試驗(yàn)），中國(guó)藥典沒(méi)有。這樣在環(huán)境微生物監(jiān)測(cè)培養(yǎng)基，可能會(huì)留下來(lái)一個(gè)潛在的隱患：假陰性結(jié)果。也就是說(shuō)，中國(guó)藥典在環(huán)境監(jiān)測(cè)的培養(yǎng)基的質(zhì)量控制方面，忽略了預(yù)培養(yǎng)過(guò)程對(duì)培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)成分，水分等損耗給培養(yǎng)基帶來(lái)的質(zhì)量隱患，給環(huán)境微生物監(jiān)測(cè)結(jié)果帶來(lái)的“假陰性”的可能。假陰性，這一微生物檢驗(yàn)中最大的風(fēng)險(xiǎn)，沒(méi)有提及。再分析一下，假陽(yáng)性可以預(yù)防嗎？目前國(guó)內(nèi)企業(yè)環(huán)境監(jiān)測(cè)培養(yǎng)基通常的做法是，實(shí)驗(yàn)室自己配制培養(yǎng)基，倒平板，預(yù)培養(yǎng)，挑選后冷藏保存，直至使用。仔細(xì)考量這個(gè)環(huán)節(jié)，存在諸多的風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)：第一：預(yù)培養(yǎng)的條件如何確定？第二：挑選這一過(guò)程不可能發(fā)現(xiàn)所有長(zhǎng)菌的平板。第三：挑選平板的過(guò)程，也存在污染或交叉污染的可能。如發(fā)現(xiàn)已污染的培養(yǎng)基平板，GMP的要求是走偏差或OOS的流程，而不是僅僅去除染菌的，剩下的繼續(xù)使用。第四：預(yù)培養(yǎng)過(guò)程，對(duì)培養(yǎng)基而言就是一個(gè)營(yíng)養(yǎng)消耗的過(guò)程，預(yù)培養(yǎng)后，在沒(méi)有確認(rèn)培養(yǎng)基的促生長(zhǎng)性能之前就使用，存