酶解法制備葡萄糖酸鈣

1、酶法制備葡萄糖酸鈣酶法制備葡萄糖酸鈣 月餅小分隊：白朋綱月餅小分隊：白朋綱 楊夢雪楊夢雪 姜昌熊姜昌熊 張雪冰張雪冰鈣是體內(nèi)含量最大的無機物，為維持鈣是體內(nèi)含量最大的無機物，為維持人體神經(jīng)，肌肉，骨骼系統(tǒng)，細胞膜人體神經(jīng)，肌肉，骨骼系統(tǒng)，細胞膜和毛細血管通透性正常功能所必需。和毛細血管通透性正常功能所必需。 葡萄糖酸鈣在中國和許多國家的藥典里都有葡萄糖酸鈣在中國和許多國家的藥典里都有收藏，是一種我們比較熟悉的的藥物，葡萄收藏，是一種我們比較熟悉的的藥物，葡萄糖酸鈣常常被用來做補鈣劑。它有利于人體糖酸鈣常常被用來做補鈣劑。它有利于人體骨質(zhì)的形成，對青少年骨骼發(fā)育有促進作用骨質(zhì)的形成，對青少年骨骼

2、發(fā)育有促進作用,同時由于它是一種抗過敏溶解度高，生理活同時由于它是一種抗過敏溶解度高，生理活性大的鈣營養(yǎng)藥，可以治療生理性缺鈣癥和性大的鈣營養(yǎng)藥，可以治療生理性缺鈣癥和血鈣引起的手足抽搐、痙攣等癥，以及治療血鈣引起的手足抽搐、痙攣等癥，以及治療軟骨、佝僂等缺鈣癥。軟骨、佝僂等缺鈣癥。發(fā)酵法：營養(yǎng)鹽和黑霉菌種子營養(yǎng)液，發(fā)酵法：營養(yǎng)鹽和黑霉菌種子營養(yǎng)液，進行發(fā)酵。發(fā)酵液加石灰乳中和，過濾，進行發(fā)酵。發(fā)酵液加石灰乳中和，過濾，濾液減壓濃縮，結(jié)晶得到粗品，經(jīng)精制濾液減壓濃縮，結(jié)晶得到粗品，經(jīng)精制得到葡萄糖酸鈣。得到葡萄糖酸鈣。（生產(chǎn)成本較高，純化工藝較復(fù)雜生產(chǎn)成本較高，純化工藝較復(fù)雜 ） 試驗原理（1

3、 1）- -淀粉酶淀粉酶(EC (EC 3.2.1.1)3.2.1.1)又稱液化型又稱液化型淀粉酶，它作用于淀淀粉酶，它作用于淀粉時，隨機的從淀粉粉時，隨機的從淀粉分子內(nèi)部切開分子內(nèi)部切開-1,4-1,4糖苷鍵，使淀粉水解糖苷鍵，使淀粉水解成糊精和一些還原糖。成糊精和一些還原糖。（2 2）糖化酶（）糖化酶（EC 3.2.1.3EC 3.2.1.3）又）又稱葡萄糖淀粉酶，它作用于淀稱葡萄糖淀粉酶，它作用于淀粉時，從淀粉分子的非還原端粉時，從淀粉分子的非還原端開始逐個地水解開始逐個地水解-1,4-1,4糖苷鍵，糖苷鍵，生成葡萄糖和一些低聚糖，且生成葡萄糖和一些低聚糖，且糖化酶還有一定的水解糖化酶還

4、有一定的水解-1,6-1,6糖苷鍵和糖苷鍵和-1,3-1,3糖苷鍵的能力糖苷鍵的能力(C6H10O5)n +nH2OnC6H10O6-淀粉酶淀粉酶糖化酶糖化酶 試驗原理（3 3）葡萄糖氧化酶（）葡萄糖氧化酶（EC 1.1.3.4EC 1.1.3.4）是）是一種糖蛋白，它能夠特異性的氧化一種糖蛋白，它能夠特異性的氧化- -D-D-葡萄糖生成中間產(chǎn)物葡萄糖生成中間產(chǎn)物D-D-葡萄糖酸葡萄糖酸- - - -內(nèi)酯和過氧化氫，并發(fā)生非酶促反應(yīng)內(nèi)酯和過氧化氫，并發(fā)生非酶促反應(yīng)水解為葡糖酸。水解為葡糖酸。（4 4）過氧化氫酶）過氧化氫酶（EC1.1.1.1.6EC1.1.1.1.6）它以過氧化氫作它以過氧化

5、氫作為專一的底物，為專一的底物，催化過氧化氫分催化過氧化氫分解為水和氧氣保解為水和氧氣保護酶受到過氧化護酶受到過氧化氫的毒害。氫的毒害。4C6H12O6+3O2+2H2O4C6H12O7+2H2O2葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶2C6H12O7+CaCO3Ca(C6H11O7)2+CO2+H2O2H2O22H2O+O2過氧化氫酶過氧化氫酶500ML燒杯燒杯， PH試紙試紙， 玻玻璃棒璃棒， 水浴水浴鍋鍋， 電爐電爐， 石棉網(wǎng)石棉網(wǎng)， 溫溫度計度計， 濾紙濾紙， 漏斗漏斗， 電子電子天平天平， 量筒量筒等常用試驗用等常用試驗用器材器材實驗器材實驗器材淀粉，淀粉， a-淀粉淀粉酶酶， 糖化酶糖化酶 ，

6、葡萄糖氧化葡萄糖氧化酶酶 ， 過氧化過氧化氫酶氫酶 ， NaOH Na2CO3 ，CaCO3， CaCl2， 碘液碘液 ，活性，活性炭等等炭等等試驗試劑試驗試劑 操作步驟操作步驟一，葡萄糖標準曲線一，葡萄糖標準曲線配置配置5個梯度個梯度濃度的濃度的葡萄糖葡萄糖標準溶液標準溶液各取各取1mL分裝分裝于五支試管中于五支試管中設(shè)置一個空白設(shè)置一個空白組組分別加入分別加入2mL DNS試劑試劑沸水浴中沸水浴中2min后取出后取出加加蒸餾水至蒸餾水至15mL測定吸光值，測定吸光值，獲得標準曲線獲得標準曲線 操作步驟操作步驟 45g淀粉淀粉+150ml水水?dāng)嚢钄嚢?Na2CO3調(diào)調(diào)節(jié)節(jié)pH=6-6.4 加

7、入加入a-淀粉淀粉酶，酶，72加加熱攪拌熱攪拌15min 再加熱至再加熱至9030min 淀粉糊化淀粉糊化加加熱熱到到沸騰沸騰10min，酶酶失活失活二，液化二，液化冷卻至冷卻至55-60加入糖加入糖化酶化酶調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)ph=4.5于于60-65恒恒溫水浴溫水浴糖化糖化3-4h加入活加入活性炭，性炭，在在80攪拌攪拌30min抽濾抽濾，得到透得到透明糖液明糖液測量葡測量葡萄糖含萄糖含量量三，糖化三，糖化 操作步驟操作步驟四，四，雙酶氧化雙酶氧化葡萄糖+CaCO3 (過量) 加過氧化氫酶和葡萄糖氧化酶35攪拌反應(yīng)，通過pH判斷反應(yīng)進行的程度反應(yīng)結(jié)束，加活性炭脫色獲得葡萄糖酸鈣溶液 操作步驟操作步驟 試驗結(jié)果試驗結(jié)果吸光值吸光值1.4142.6822.8912.9583