乳酸菌的篩選及應(yīng)用

1、乳酸菌的乳酸菌的分離分離篩選篩選2012年4月16日Page 2n乳酸菌的分類n乳酸菌的篩選n乳酸菌的應(yīng)用Page 3第一部分、乳酸菌的分類第一部分、乳酸菌的分類運(yùn)動(dòng)性運(yùn)動(dòng)性：通常不運(yùn)動(dòng)，有的能 夠運(yùn)動(dòng),具有周生鞭毛。營養(yǎng)類型營養(yǎng)類型：化能異氧型需氧情況需氧情況：微好氧性1 1、乳桿菌屬（、乳桿菌屬（Lactobacillus）形態(tài)：形態(tài)：細(xì)胞呈長或細(xì)長桿狀、彎曲形短桿狀,一 般成鏈狀排列Page 4 形態(tài)形態(tài)：細(xì)胞呈球形或卵圓形，成對(duì)或成鏈排列 運(yùn)動(dòng)性運(yùn)動(dòng)性：一般不遠(yuǎn)動(dòng) 營養(yǎng)類型營養(yǎng)類型：化能異養(yǎng)型 需氧情況需氧情況：兼性厭氧型2、鏈球菌屬（鏈球菌屬（Streptococcus）Page 5

2、 形態(tài)：形態(tài)：細(xì)胞球形或豆?fàn)?，?對(duì)或成鏈排列 運(yùn)行性：運(yùn)行性：不運(yùn)動(dòng) 營養(yǎng)類型：營養(yǎng)類型：化能異養(yǎng)型 需氧情況：需氧情況：兼性厭氧型3 3、明串珠菌屬（、明串珠菌屬（Leuconostoc）Page 6形態(tài)：形態(tài)：細(xì)胞呈多樣形態(tài)：Y字形、 V字形、彎曲狀、勺形，典 形形態(tài)為分叉桿菌運(yùn)行性：運(yùn)行性：不運(yùn)動(dòng)營養(yǎng)類型：營養(yǎng)類型：化能異養(yǎng)型需氧情況：需氧情況：專性厭氧4 4、雙歧桿菌屬（、雙歧桿菌屬（Bifidobacterium ）Page 7 形態(tài)：形態(tài)：細(xì)胞球形，成對(duì)或四聯(lián)狀 排列 運(yùn)行性：運(yùn)行性：不運(yùn)動(dòng) 營養(yǎng)類型：營養(yǎng)類型：化能異養(yǎng)型 需氧情況：需氧情況：兼性厭氧5 5、片球菌屬（、片球菌屬

3、（Pediococcus）Page 8第二部分、乳酸菌的篩選 乳酸菌絕大多數(shù)都是厭氧菌或兼性厭氧的化能營養(yǎng)菌。生長繁殖于厭氧或微好氧、礦物質(zhì)和有機(jī)營養(yǎng)物豐富的環(huán)境中。具體如下： （1）與動(dòng)物相關(guān)分布：乳汁、消化道、糞便等； （2）與植物相關(guān)分布：花蜜、樹液、植物殘骸、果實(shí)損傷部位等； （3）發(fā)酵食品：泡菜、醬油、發(fā)酵肉制品等； （4）乳酸飲料：酸奶等。 一、乳酸菌的分布一、乳酸菌的分布Page 9 （一）溶鈣圈法（一）溶鈣圈法 利用一些產(chǎn)酸類細(xì)菌在含CaCO3的培養(yǎng)基上產(chǎn)生CaCO3溶解圈，從而篩選出這些產(chǎn)酸類細(xì)菌，可用于乳酸菌的篩選。 其中培養(yǎng)基中加入CaCO3的作用是： 鑒別能產(chǎn)生酸的細(xì)菌

4、； 中和產(chǎn)生的酸，以維持培養(yǎng)基的PH。二、篩選方法二、篩選方法Page 10 1 1、乳酸菌篩選培養(yǎng)基（、乳酸菌篩選培養(yǎng)基（MRS培養(yǎng)基）培養(yǎng)基） 配方（1L）: 蛋白胨 10.0g，牛肉膏 10.0g，酵母提取物 5.0g，K2HPO4 2.0g，檸檬酸三銨 2.0g，乙酸鈉 5.0g，葡萄糖 20.0g，吐溫80 1.0mL，MgSO47H2O 0.5g，MnSO44H2O 0.25g配制：1.調(diào)PH至6.26.4；2.稱取20g CaCO3加入到100mL蒸餾水中，制成CaCO3乳濁液；3.將MRS培養(yǎng)基和CaCO3乳濁液分開滅菌；4.倒平板前，待培養(yǎng)基融化冷卻后，平板上加入一定量的Ca

5、CO3乳濁液，晾干了以后再接種。Page 11 樣品預(yù)處理梯度稀釋至10-6選擇合適的稀釋度涂布37培養(yǎng)48h挑選產(chǎn)生溶鈣圈的菌落反復(fù)在MRS培養(yǎng)基上劃線挑起單菌落染色，經(jīng)鏡檢確認(rèn)為純種挑選革蘭氏陽性單菌落試管穿刺4冰箱保存。2、篩選過程、篩選過程Page 12（二）溴甲酚綠指示劑法（二）溴甲酚綠指示劑法1 1、培養(yǎng)基：、培養(yǎng)基：MRS培養(yǎng)基（含溴甲酚綠酒精溶液）2 2、篩選過程、篩選過程：同上，不同之處是稀釋涂布后長出菌落，挑取使溴甲酚綠變色的菌落。Page 13（三）幾種乳酸菌篩選舉例（三）幾種乳酸菌篩選舉例 樣品來源：市售酸奶 培養(yǎng)基： M17改良培養(yǎng)基 培養(yǎng)溫度：42 需氧情況：兼性厭

6、氧 篩選方法：常規(guī)的稀釋涂布 和劃線分離1、嗜熱鏈球菌、嗜熱鏈球菌Page 142、 保加利亞乳桿菌保加利亞乳桿菌 樣品來源：市售酸奶 培養(yǎng)基：牛肉浸膏 1.5，酵母浸膏 0.5，葡萄糖 3.0，檸檬酸三銨 0.2，七水硫酸鎂 0.02，瓊脂 1.5，pH 5.1。 培養(yǎng)溫度：42 需氧情況：兼性厭氧 篩選方法：常規(guī)的稀釋涂布和劃線分離法Page 15 樣品來源：嬰兒新鮮糞便 培養(yǎng)基：MRS培養(yǎng)基、NPNL培養(yǎng)基 、TYP培養(yǎng)基、 PTYG培養(yǎng)基 培養(yǎng)溫度：37 需氧情況：嚴(yán)格厭氧 篩選方法：常規(guī)的稀釋涂布和劃線分離法3、 雙歧桿菌雙歧桿菌Page 16第三部分、第三部分、乳酸菌的應(yīng)用乳酸菌的

7、應(yīng)用 1、乳酸菌在食品、飲料中的應(yīng)用 （1）酸奶；（2）乳酸飲料；（3）釀造調(diào)味品中的應(yīng)用；（4）功能性食品的開發(fā)；（5）防腐、保鮮；（6）肉制品加工；（7）腌漬物等。Page 172、乳酸菌在醫(yī)藥中的應(yīng)用（1）乳酸菌素；（2）-氨基丁酸(GABA)Page 183、開發(fā)可降解的聚乳酸塑料Page 19 （1）聚乳酸（PLA）簡介 聚乳酸是以微生物發(fā)酵產(chǎn)物乳酸為單體用化學(xué)合成方法聚合而成的一種高分子材料，它無毒、無刺激性。 聚乳酸制品廢棄后在土壤或水中，30天內(nèi)會(huì)在微生物、水、酸和堿的作用下徹底分解成CO2和H2O，不會(huì)對(duì)環(huán)境產(chǎn)生污染，因而是一種完全可生物降解的材料。Page 20目前聚乳酸的

8、生產(chǎn)和制備主要有： （2）聚乳酸的生產(chǎn)過程直接聚合法；間接法；聚合法。Page 21（3）聚乳酸的應(yīng)用醫(yī)用領(lǐng)域：如生產(chǎn)一次性輸液用具、免拆型手術(shù)縫合線、骨科用固定件及手術(shù)器件、醫(yī)用支架、生物導(dǎo)管等；包裝材料：目前，各種包裝材料是聚乳酸最大、最有潛力的應(yīng)用市場(chǎng)。適合于加工一次性飯盒以及其他食品、飲料等外包裝材料等；纖維：聚乳酸纖維是由聚乳酸經(jīng)常規(guī)紡絲工藝制得的生物合成纖維，可制成復(fù)絲、單絲、短纖維、針織物、非織造布等，還可用作建筑材料、農(nóng)業(yè)用材等。 Page 22 PLA作為一個(gè)新型的醫(yī)用、生物可降解塑料在我國有廣闊的市場(chǎng)發(fā)展前景。生物降解塑料大多數(shù)是天然高分子與常用塑料復(fù)合體系，或基于天然高分子(主要是淀粉、纖維素)的改性。 PLA合成直鏈脂肪族聚酯，在醫(yī)用領(lǐng)域是