冷鏈食品生產(chǎn)經(jīng)營常用消毒劑及使用方法

1、冷鏈食品生產(chǎn)經(jīng)營常用消毒劑及使用方消毒劑種類有效成分應用范圍使用方法醇類消毒劑乙醇含量為70%- 80%(v/v )，含醇 手消毒劑60%(v/v )，復配 產(chǎn)品可依據(jù)產(chǎn) 品說明書。主要用于手和皮膚 消毒，較小物體表面 的消毒。衛(wèi)生手消毒：均勻噴霧手部或涂擦 揉搓手部 12 遍，作用 1mi n。擦 拭物體表面 2 遍，作用 3min。含氯消毒劑以有效氯計，含 量以 mg/L 或%表 示，漂白粉 20%二氯異氰 尿酸鈉55%84 消毒液依據(jù) 產(chǎn)品說明書，常 見為2%- 5%適用于物體表面、果蔬和食飲具的消毒。次氯酸消毒劑還可 用于空氣、手、皮膚 和黏膜的消毒。1. 物體表面消毒時：使用濃度50

2、0mg/L;疫源地消毒時，物體表 面使用濃度 1000 mg/L，有明顯 污染物時，使用濃度 10000mg/L; 空氣等具他消毒時，依據(jù)產(chǎn)品說明 書。2. 低溫冷藏物體表面消毒：使用濃 度1000mg/L;疫源地消毒時，物 體表面使用濃度 2000 mg/L，有 明顯污染物時，使用濃度 20000mg/L。3. 冷凍物體表面消毒：應采用降低 冰點的方法，確保消毒劑不結冰，且須進行消毒效果確認。過氧化物類消毒 劑過氧化氫消毒劑：過氧化氫(以 H2Q 計)質(zhì)量分數(shù) 3%- 6%過氧乙酸消毒劑：過氧乙酸適用于物體表面、空氣的消毒。1. 物體表面：0.1%0.2%過氧乙酸或 3%S 氧化氫，噴灑或浸

3、泡消毒 作用時間 30min,然后用清水沖洗 去除殘?zhí)锵緞?. 空氣消毒：0.2%過氧乙酸或 3% 過氧化氫，用氣溶膠噴霧方法，用 量按10mL/n320mL/n3 計算，消 毒作用60min 后通風換氣：也可使（以 C2H4O3計）質(zhì)量分數(shù) 15%21%用 15%S 氧乙酸加熱熏7mL/n3 計算，熏蒸作用通風換氣。3. 低溫冷藏物體表面消0.4%過氧乙酸或 6%寸灑或浸泡消毒作用時間后用清水沖洗去除殘留4. 冷凍物體表面消毒：冰點的方法，確保消毒且須進行消毒效果確認季銨鹽類消毒劑依據(jù)產(chǎn)品說明 書。 適用于物體表面的 消毒。1. 物體表面消毒：無明時，使用濃度 1000mg污染物時，使用

4、濃度2. 低溫冷藏物體表面消污染物時，使用濃度 有明顯污染物時，使用4000mg/L。3. 冷凍物體表面消毒：冰點的方法，確保消毒且須進行消毒效果確認1保健食品應符合食品安全國家標準保健食品（GB 16740）的各項要求和檢驗方法規(guī)定。對于不同配方、不同形態(tài)、不同工藝的產(chǎn)品，申請人應同時制定符合要求的理化、 功效成分/標志性成分、微生物等指標對產(chǎn)品質(zhì)量進行有效控制。2. 直接接觸保健食品的包裝材料應符合相應食品安全國家標準及相關規(guī)定。3. 普通食品形態(tài)產(chǎn)品應檢測并制定凈含量及允許負偏差指標，指標應符合定量包裝商品凈含量計量檢驗規(guī)則（JJF 1070 規(guī)定。膠囊等非普通食品形態(tài)產(chǎn)品應制定裝量或重

5、量差異指標。裝量或凈含量只檢測內(nèi)容物，不包括隔離材料。4. 最小服用單元含有惰性隔離材料填充的產(chǎn)品，如膠囊，其功效成分或者指標成分、農(nóng)藥殘留、灰分、水分等指標以去除隔離材料（膠囊殼）的內(nèi)容物為檢測單元，對于非法添 加藥物、重金屬、鉻、色素（如材料帶顏色）等則需要進行整體檢測，或者檢測結果明確標 識相關檢測部位。5. 本指導原則第二部分提供的檢測方法為推薦方法，注冊申請人在對產(chǎn)品進行功效成分/標志性成分檢測時，應選擇適合相應產(chǎn)品的檢測方法。申請注冊檢驗時，應提供該產(chǎn)品 的配方、工藝、產(chǎn)品技術要求及功效成分/標志性成分檢測方法以及檢測方法的適用性、重現(xiàn)性等方法學研究材料。 檢測方法應科學、適用、重

6、現(xiàn)。注冊檢驗機構對所附材料進行審核， 必要時進行有關驗證和方法確認， 如申報單位提供的方法不適合送檢的樣品時， 注冊檢驗機 構不得擅自修改， 應將有關情況反饋申報單位， 由其進行研究并提供方法后， 再對送檢樣品 進行試驗， 確保試驗方法與送檢產(chǎn)品技術要求中規(guī)定的方法一致。 復核檢驗機構應按照申報 單位提交的檢驗方法進行檢驗并出具復核檢驗報告。6. 注冊申請人應當自行開展或委托具備法定資質(zhì)的注冊檢驗機構，按照國家相關規(guī)定 和標準等要求，根據(jù)樣品具體情況，合理地進行穩(wěn)定性試驗設計和研究。通過穩(wěn)定性試驗，考察樣品在不同環(huán)境條件下（如溫度、相對濕度等）的化學、物理及生物學特征隨時間增加 其變化程度和規(guī)

7、律， 從而判斷樣品包裝、 貯存條件和保質(zhì)期內(nèi)的穩(wěn)定性。 產(chǎn)品穩(wěn)定性重點考 察指標，主要包括感官、微生物、崩解時限（溶散時限、溶化性等） 、水分、 pH 值、酸價、 過氧化值、 列入理化指標中的特征成分等隨儲存條件和儲存時間容易發(fā)生變化的指標。 產(chǎn)品 非穩(wěn)定性重點考察指標， 主要包括鑒別、 灰分、污染物（如鉛、 總砷、 總汞等）、真菌毒素、 農(nóng)殘（如六六六、滴滴涕等） 、國家相關標準及現(xiàn)行規(guī)定有用量限制的合成色素和甜味劑等 隨儲存條件和儲存時間不易發(fā)生變化的指標， 以及國家相關標準及現(xiàn)行規(guī)定有用量限制的抗 氧化劑指標。穩(wěn)定性試驗為注冊申請人自行開展的， 組織實施的檢驗質(zhì)量控制、 報告編制、 樣品

8、和檔 案管理等工作以及出具的報告格式內(nèi)容， 應當符合有關規(guī)定。 穩(wěn)定性試驗為注冊申請人委托 檢驗的，被委托單位應當為具有法定資質(zhì)的食品檢驗機構。7. 標準規(guī)定不得檢出的項目結果，檢測結果在方法定量限以上時，按照具體檢出值報 送結果；檢測結果在方法檢出限以下時，注明 “未檢出，檢出限值 ”；檢測結果在方法檢出限 以上、定量限以下時，注明 “檢出且小于定量限，定量限值，檢出限值 ”。8. 保健食品中原料和輔料應符合保健食品原輔料質(zhì)量要求的有關規(guī)定，有適用的國家 相關標準、地方標準、行業(yè)標準等的，其質(zhì)量應符合相關規(guī)定。原輔料質(zhì)量要求內(nèi)容有缺項 難以或無需制定的， 應說明原因。 原料若為植物提取物或者

9、原料及輔料加工過程中使用、 間 接引入有機溶劑時， 涉及的有機溶劑應符合 食品安全國家標準 食品添加劑使用標準 （GB 2760）附錄 C 中食品工業(yè)用加工助劑使用名單規(guī)定， 或有關規(guī)定。 企業(yè)可根據(jù)產(chǎn)品質(zhì)量控制 需要，采用本指導原則中第三部分溶劑殘留的測定方法將溶劑殘留檢測列入原料或產(chǎn)品的技 術要求。9. 違禁成分的檢測作為相應保健功能類別產(chǎn)品的功能試驗樣品注冊檢驗要求， 應當符 合本指導原則第四部分的規(guī)定。第二部分功效成分/標志性成分檢驗方法、保健食品中紅景天苷和酪醇的測定1范圍本方法規(guī)定了以紅景天為主要原料的保健食品中紅景天苷和酪醇的液相色譜測定方法。 本方法適用于保健食品中紅景天苷和酪

10、醇的測定。2原理試樣經(jīng)甲醇超聲提取， 以 0.01mol/L 乙酸銨-甲醇為流動相（80+20），采用高效液相色譜法，紫外檢測器檢測，根據(jù)保留時間定性，外標法定量。3試劑和材料注：除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682 規(guī)定的一級水。3.1試劑3.1.1乙酸銨（CHsCOONHO。3.1.2甲醇（CH3OH）:色譜純。3.1.3甲醇（CH3OH）。3.2標準品紅景天苷、酪醇標準樣品的分子式、相對分子量、C A S登 錄 號 見 表1 , 純 度 9 8 % 或 經(jīng)國家認證并授予標準物質(zhì)證書的標準物質(zhì)。表 1 紅景天苷、酪醇標準樣品的中文名稱、英文名稱、CAS 登錄號、分

11、子式、相對分子量中文名稱英文名稱CAS 登錄號分子式相對分子量紅景天苷Salidroside10338-51-9G4H20O7300.30酪醇Tyrosol501-94-0C8H10O2138.163.3 標準溶液配制3.3.1紅景天苷標準儲備液 （2.0mg/mL ）:準確稱取紅景天苷標準品20mg （精確至 0.01mg）于 10mL 容量瓶中，用甲醇（3.1.2）溶解并定容至刻度，搖勻。3.3.2紅景天苷標準工作液：將紅景天苷標準儲備液（3.3.1）用甲醇（3.1.2）稀釋制備一系歹 U 標準溶液，標準系列濃度為 0.00mg/mL、0.01mg/mL、0.02mg/mL、0.05mg/

12、mL、0.20mg/mL、0.50mg/mL，臨用時配制。3.3.3酪醇標準儲備液（2.0mg/mL ）:準確稱取酪醇標準品 20mg（精確至 0.01mg ）于 10mL 容量瓶中，用甲醇（3.1.2）溶解并定容至刻度，搖勻。3.3.4酪醇標準工作液：將酪醇標準儲備液（3.3.3）用甲醇（3.1.2）稀釋制備一系列標準溶液，標準系列濃度為 0.00mg/mL、0.01mg/mL、0.02mg/mL、0.05mg/mL、0.10mg/mL、0.20mg/mL , 臨用時配制。3.3.5系統(tǒng)適用性溶液：量取紅景天苷標準儲備液（3.3.1）和酪醇標準儲備液（3.3.3）各0.5mL 于 10mL

13、容量瓶中，用甲醇（3.1.2）稀釋至刻度，搖勻。3.4 試劑配制乙酸銨溶液（0.01mol/L ）：稱取 0.77g 乙酸銨，加入適量水溶解并定容至1000mL，經(jīng)0.45 艸濾膜（3.5.1）過濾后備用。3.5材料3.5.1水相微孔濾膜：0.45 小3.5.2有機相微孔濾膜：0.45 帆4儀器和設備4.1 高效液相色譜儀：配有紫外檢測器（UV）。4.2 超聲波清洗器。4.3分析天平：感量為 O.OImg 和 O.OOOIg。5分析步驟5.1 試樣制備5.1.1 固體樣品：準確稱取已粉碎混合均勻的固體待測試樣適量（約含紅景天苷5mg ）于25mL 容量瓶中，力口入甲醇（3.1.3）約 20mL

14、,超聲提取 30min，放冷至室溫，用甲醇（3.1.3） 定容至刻度?；靹蚝蠼?jīng) 0.45 叩濾膜（3.5.2）過濾，供液相色譜分析用。5.1.2液體樣品：準確吸取搖勻后的待測試樣適量（約含紅景天苷5mg）,置于蒸發(fā)皿內(nèi)，水浴蒸干，用甲醇溶解并（3.1.3）轉移至 25mL 容量瓶中并定容至刻度?；靹蚝蠼?jīng)0.45 艸濾膜（3.5.2）過濾，供液相色譜分析用。5.2 儀器參考條件5.2.1色譜柱：C18柱，250mmx4.6mm ,5 卩叫 或同等性能色譜柱；5.2.2流動相：乙酸銨溶液（0.01mol/L ）-甲醇（80+20）;5.2.3流速：1.0mL/min ;5.2.4柱溫：25C;5.

15、2.5檢測波長：215nm ;5.2.6進樣量：10 L。5.2.7系統(tǒng)適用性試驗：取系統(tǒng)適用性溶液（3.3.5） 10 L,注入液相色譜儀，記錄色譜圖，紅景天苷峰與酪醇峰的分離度應大于1.5。5.3 標準曲線的制作將紅景天苷標準系列工作液 （3.3.2）或酪醇標準系列工作液 （3.3.4）分別注入高效液相 色譜儀中，測定相應的色譜峰高或峰面積，以標準工作液的濃度為橫坐標，以峰面積或峰高為縱坐標，繪制標準曲線（標準溶液液相色譜圖見附錄A 中圖 A.1）。5.4 試樣溶液的測定將試樣待測液（5.1.1 或 5.1.2）注入液相色譜儀中，以保留時間定性，測得峰面積或峰高，根據(jù)標準曲線得到待測液紅景

16、天苷或酪醇的濃度（樣品溶液液相色譜圖見附錄A 中圖A.2 ）。6結果計算試樣中紅景天苷或酪醇含量按下式計算:式中：X試樣中紅景天苷或酪醇的含量，單位為毫克每克或毫克每毫升（mg/g 或 mg/mL）;C由標準曲線查得待測樣液中紅景天苷或酪醇的濃度，單位為毫克每毫升（mg/mL ）;V樣品的定容體積，單位為毫升（ mL）;m樣品量，單位為克或毫升（g 或 mL）。計算結果以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示，保留兩位有效數(shù)字。10%。7精密度 在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的標準溶液和試樣溶液典型液相色譜圖圖 A.1 紅景天苷和酪醇標準溶液(0.

17、1mg/mL )色譜圖圖 A.2 含有紅景天苷和酪醇的試樣溶液色譜圖附錄ASOBQ1001?O14Q16013Q_HEinn_ _ _J_|_|? ?ss 3000r/mino5分析步驟5.1 試樣制備5.1.1 固體試樣稱取已粉碎混合均勻的待測試樣適量（約含蘆薈苷4mg，精確到 0.001g）,置具塞錐形瓶中，加入 50.0mL 流動相（5.2.2）,稱重，超聲處理 20min，放冷，用流動相補足減失的重 量，搖勻，經(jīng)微孔濾膜（3.4）過濾，濾液待測。必要時可進行適當稀釋。5.1.2 含油基質(zhì)試樣稱取已粉碎混合均勻的待測試樣適量（約含蘆薈苷4mg，精確到 0.001g）,置具塞錐形瓶中，加入

18、 25.0mL 石油醚（3.1.2）,渦旋使充分混勻，過濾，棄去石油醚液，再用少量石油 醚洗滌錐形瓶及濾紙，揮干，將濾紙和殘渣置于原具塞錐形瓶中，加入 50.0mL 流動相（5.2.2），稱重，超聲處理 20min，放冷，用流動相補足減失的重量，搖勻，經(jīng)微孔濾膜（3.4）過濾，濾液待測。必要時可進行適當稀釋。5.1.3 水性液體試樣吸取待測試樣，必要時以流動相（5.2.2）適當稀釋，離心，取上清液經(jīng)微孔濾膜（3.4）過濾。5.2 儀器參考條件5.2.1 色譜柱：Ci8柱，250mmx 4.6mm, 5 卩叫 或性能相當者。5.2.2 流動相：甲醇（3.1.1） +水,（55+45, v/v ）

19、。5.2.3 流速：1.0mL/min。5.2.4 柱溫：40C。5.2.5 檢測波長：293nm。5.2.6 進樣量：10 譏5.3 標準曲線的制作將標準系列工作液（3.3.2）分別按液相色譜參考條件（5.2 ）進行測定，得到相應的蘆 薈苷標準溶液的色譜峰面積，以標準工作液的濃度為橫坐標，以色譜峰的峰面積為縱坐標， 繪制標準曲線。5.4 試樣溶液的測定將試樣溶液（5.1）按液相色譜參考條件（5.2）進行測定，得到相應的樣品溶液蘆薈苷 的色譜峰面積，根據(jù)標準曲線得到待測液中蘆薈苷的濃度，平行測定次數(shù)不少于兩次。蘆薈苷的標準液相色譜圖參見附錄A 的圖 A.1。6結果計算試樣中蘆薈苷含量按下式計算

20、：C V 100 Xm 1000式中：X試樣中蘆薈苷的含量，單位為克每百克（g/100g）或克每百毫升（g/100mL ）;C由標準曲線得出的樣液中蘆薈苷的濃度，單位為毫克每毫升（mg/mL ）;V試樣的最終定容體積，單位為毫升（mL）;m試樣取樣量，單位為克（g）或毫升（mL）;100單位轉換；1000 單位轉換。計算結果以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示，保留三位有效數(shù)字。7精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的10%。附錄A蘆薈苷的高效液相色譜圖圖 A.1 蘆薈苷標準溶液色譜圖X四、保健食品中左旋肉堿的測定1范圍本方法規(guī)定了保健食品中左

21、旋肉堿的液相色譜測定方法。本方法適用于以左旋肉堿為主要原料的保健食品中肉堿的含量測定。2原理試樣中的左旋肉堿以 0.50mmol/L 的鹽酸溶液經(jīng)超聲提取，反相色譜分離，以保留時間 定性，外標法定量。3試劑和材料注：除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682 規(guī)定的一級水。3.1 試劑3.1.1 磷酸氫二鉀（K2HPO4）。3.1.2 辛烷磺酸鈉（QH17NaO3S）。3.1.3 鹽酸（HCI）:含量：36%38%。3.1.4 磷酸（H3PQ）。3.1.5 硅藻土（ SiC2）:粒徑范圍：0.2-0.8mm。3.1.6 乙腈（CH3CN）:色譜純。3.2 標準品左旋肉堿標準

22、樣品的分子式、相對分子量、CAS 登錄號見表 1，純度98%或經(jīng)國家認證并授予標準物質(zhì)證書的標準物質(zhì)。表 1 左旋肉堿標準樣品的中文名稱、英文名稱、C A S 登 錄 號 、 分 子 式 、 相 對 分 子 量中文名稱英文名稱CAS 登錄號分子式相對分子量左旋肉堿L-Carnitine541-15-1C7H15NO:1161.203.3 標準溶液配制3.3.1 左旋肉堿標準儲備液：稱取25mg （準確至 0.01mg）左旋肉堿標準品（3.2）于 25mL容量瓶中，用鹽酸溶液（3.4）溶解并定容至刻度，搖勻。此溶液濃度為1.0mg/mL。3.3.2 左旋肉堿標準系列工作液：分別準確吸取左旋肉堿標

23、準儲備液（3.3.1） 0.50mL、1.0mL、2.0mL、 3.0mL、 4.0mL、 5.0mL于5mL容量瓶中， 用鹽酸溶液 （3.4） 稀釋至刻度， 得濃度分 別為 0.10mg/mL、0.20mg/mL、0.40mg/mL、0.60mg/mL、0.80mg/mL、1.00mg/mL 的標準系 列工作液。臨用時配制。3.4 鹽酸溶液（0.5mmol/L ）:準確吸取 4.2mL 鹽酸（3.1.3）,用水定容至 100mL。搖勻后， 再吸取上述溶液 1.0mL,用水定容至 1L。3.5 緩沖鹽溶液：分別準確稱取 3.4g 磷酸氫二鉀（3.1.1 ）和 0.4325g 辛烷磺酸鈉（3.1

24、.2）, 用水溶解并定容至 1L,搖勻，用磷酸（3.1.4）調(diào)至 pH=2.5,經(jīng)微孔濾膜（3.6）過濾，待用。3.6 微孔濾膜：0.45 帆水相。4儀器和設備4.1 高效液相色譜儀：配有紫外（UV）檢測器或二極管陣列（DAD）檢測器。4.2 分析天平：感量分別為 0.01mg、0.0001g 和 0.001g。4.3 超聲波提取器：功率 250W，頻率 33kHz。5分析步驟5.1 試樣制備5.1.1 試樣提取5.1.1.1 固體試樣準確稱取粉碎并混合均勻的試樣 0.1g2g（準確至 O.OOOIg，含待測組分約 5mg50mg）, 于50mL 容量瓶中，加入鹽酸溶液（3.4）約 35mL，

25、超聲提取 10min，放至室溫，用鹽酸溶 液（3.4）稀釋至刻度，搖勻，過濾，棄初濾液，收集續(xù)濾液，再經(jīng)微孔濾膜（3.6）過濾，續(xù)濾液進液相色譜儀分析。5.1.1.2 軟膠囊試樣取軟膠囊剪開，擠出內(nèi)容物并混勻，準確稱取2g （準確至 O.OOOIg），準確加入等量硅藻土（3.1.5 ），研至分散均勻，準確稱取其中部分（準確至 O.OOOIg，含待測組分約 5mg50mg），轉移至 25OmL 具塞三角瓶中，吸取鹽酸溶液（3.4）5O.OmL，并入三角瓶中，稱重（準確至O.OO1g），加塞超聲提取 1Omin，放至室溫，用鹽酸溶液（3.4 ）補足重量，搖勻，過濾，棄 初濾液，收集續(xù)濾液，再經(jīng)微孔

26、濾膜（3.6）過濾，續(xù)濾液進液相色譜儀分析。5.1.1.3 液體試樣準確吸取混勻后的試樣1.OmL5.OmL （含待測組分約 5mg5Omg），于 5OmL 容量瓶中，加入鹽酸溶液（3.4）約 35mL，超聲提取 1Omin，放至室溫，用鹽酸溶液（3.4）稀釋至刻度， 搖勻，過濾，棄初濾液，收集續(xù)濾液，再經(jīng)微孔濾膜（3.6）過濾，續(xù)濾液進液相色譜儀分析。5.1.2 試樣溶液稀釋必要時，根據(jù)試樣溶液中左旋肉堿含量，用鹽酸溶液（3.4 ）進行適當?shù)南♂專ㄏ♂尡稊?shù) F），使待測溶液中左旋肉堿的濃度在O.1Omg/mL1.OOmg/mL 范圍內(nèi)。5.2 儀器參考條件5.2.1 色譜柱：C18柱：25O

27、mmX 4.6mm, 5m或同等性能的色譜柱。5.2.2 流動相：緩沖鹽溶液（3.5） + 乙腈（3.1.6）, （9O+1O, v/v）。5.2.3 流速：O.8mL/min。5.2.4 檢測波長：21Onm。5.2.5 進樣量：2O 譏5.3 標準曲線的制作將左旋肉堿標準系列工作液（ 3.3.2）分別按液相色譜參考條件（5.2 ）進行測定，得到 相應的左旋肉堿標準溶液的色譜峰面積。以標準工作液的濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。5.4 待測溶液的測定將待測溶液（5.1）按液相色譜參考條件（5.2）進行測定，得到相應的待測溶液左旋肉 堿的色譜峰面積，根據(jù)標準曲線得到待測溶液中左旋

28、肉堿的濃度，平行測定次數(shù)不少于兩次。左旋肉堿的標準液相色譜圖參見附錄A 的圖 A.1。6結果計算試樣中左旋肉堿含量按下式計算:C V F 1OO1000式中:XX試樣中左旋肉堿的含量，固體和軟膠囊試樣的單位為克每百克（g/100g ）,液體試樣的單位為克每百毫升（ g/100mL）；C根據(jù)標準曲線計算待測溶液中左旋肉堿的濃度，單位為毫克每毫升（mg/mL）；V試樣提取時的定容體積，單位為毫升（mL）;m 試樣稱取的質(zhì)量，單位為克（g）；或液體試樣吸取的體積，單位為毫升（ mL）;F稀釋倍數(shù)；100單位轉換； 1000單位轉換。計算結果以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示，結果保

29、留三位有效數(shù)字。7精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不超過算術平均值的10%。左旋肉堿的高效液相色譜圖mV22.520.0 17.515.012.5_10.0_7.5-5.0_2.50.0-II|I1111114 11 11|匸11|匸1 1|I0.02.55.07.510.012.515.017.520.022.525.027.5 min圖 A.1 左旋肉堿的高效液相色譜圖附錄AIU五、保健食品中a亞麻酸、Y亞麻酸的測定1范圍本方法規(guī)定了保健食品中a及丫亞麻酸的測定方法。本方法適用于油脂類保健食品中a及Y亞麻酸含量的測定。2原理將油脂試樣（或試樣提取的脂肪），經(jīng)氫氧化鉀皂化

30、，在三氟化硼存在下甲醇酯化，然 后用氣相色譜儀分析，采用外標法定量。3試劑和材料注：除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682 規(guī)定的一級水。3.1 試劑3.1.1 正己烷（C6Hi4）。3.1.2 氫氧化鉀（KOH）。3.1.3 三氟化硼甲醇溶液：濃度為15%。3.1.4 甲醇（CH3OH）:色譜純。3.1.5 氯化鈉（NaCI）。3.2 標準品a、丫亞麻酸甲酯標準樣品的分子式、相對分子量、CAS 登錄號見表 1，純度99.0%或經(jīng)國家認證并授予標準物質(zhì)證書的標準物質(zhì)。表 1a、Y亞麻酸甲酯標準樣品的中文名稱、英文名稱、CAS 登錄號、分子式、相對分子量中文名稱英文名稱C

31、AS 登錄號分子式相對分子量a亞麻酸甲酯Methya-linolenate301-00-8C19H32O2292.46Y亞麻酸甲酯Methy羊linolenate16326-32-2C19H32O2292.463.3 標準溶液配制3.3.1 標準儲備液：稱取a亞麻酸甲酯、丫亞麻酸甲酯標準品（3.2）各 25.0mg（精確至 0.01mg）, 分別置 25mL 容量瓶中，用正己烷（3.1.1）溶解并定容至刻度，溶液濃度為1.0mg/mL。貯存于-18C冰箱中。3.3.2 標準工作液：吸取a亞麻酸甲酯和Y亞麻酸甲酯標準儲備液，稀釋成含量分別為 0.10mg/mL、0.20mg/mL、0.40mg/

32、mL、0.50mg/mL 的混合標準系列工作液。臨用時配制。3.4 氫氧化鉀甲醇溶液 （0.5mol/L ） ： 稱取氫氧化鉀 （3.1.2）2.8g， 用甲醇 （3.1.4） 溶解并定 容至 100mL，混勻。3.5 飽和氯化鈉溶液：稱取氯化鈉（3.1.5） 360g，溶解于 1.0L 水中，攪拌溶解，澄清備用。4儀器和設備4.1 氣相色譜儀：配有氫火焰（FID）檢測器。4.2 分析天平：感量分別為0.0001g 和 0.001g。4.3 加熱式磁力攪拌器。4.4 標準磨口燒瓶（50mL ）和直形冷凝管。5分析步驟5.1 試樣制備5.1.1 脂肪的提取 按 GB 5009.6 中規(guī)定的方法提

33、取。5.1.2 皂化稱取 0.100g 油脂（或脂肪）和磁力攪拌子一并放入 50mL 磨口燒瓶中（見圖 1）加入 4mL 0.5mol/L氫氧化鉀甲醇溶液，上部連接回流冷凝管，并固定于磁力攪拌器上，由冷凝管上口 向溶液中導入氮氣，使反應瓶中始終充滿氮氣。開啟磁力攪拌器，并加熱使反應液保持655,攪拌回流約 15mi n （至無油滴為止）。5.1.3 甲酯化從冷凝管上部加入 4mL 三氟化硼甲醇溶液，攪拌（655C）,回流約 2min，冷至室溫， 從冷凝管上部加入 5mL 正己烷繼續(xù)攪拌 5min，移去冷凝管，加入5mL 飽和氯化鈉水溶液，搖動數(shù)分鐘，轉移至 25mL 分液漏斗中分離水與有機相，

34、再加3mL 正己烷洗水相，分離，棄水相，合并有機相并用正己烷定容至10.0mL （濃度低時吹氮濃縮至1.0mL）,供測定用。5.2 儀器參考條件5.2.1 色譜柱：FFAP（改性聚乙二醇 20M , 30mX0.25mm i.d.0.25）m5.2.2 柱箱溫度：215C。5.2.3 進樣口溫度：250C。5.2.4 檢測器溫度：260C。5.2.5 氮氣：1.5mL/min，載氣：50mL/min。5.3 定性分析在上述儀器條件下，分別取標準儲備液和試樣測定液1.0 H 注入氣相色譜儀，以保留時間來確定a及丫亞麻酸甲酯。5.4 定量分析試樣中a亞麻酸甲酯或 丫亞麻酸甲酯色譜峰面積或峰高與標準

35、的比較定量。標準樣品溶液和試樣溶液液相色譜圖參見附錄A 的圖 A.1 和圖 A.2。6結果計算a亞麻酸甲酯或Y亞麻酸含量（以脂肪計）按下式計算：式中：Xa亞麻酸或Y亞麻酸含量（以脂肪計），g/100g ；A1試樣待測液中a亞麻酸甲酯或 丫亞麻酸甲酯色譜峰面積或峰高；A2標準使用液色譜峰面積或峰高；P標準使用液濃度，mg/mL ;v正己烷定容體積， mL;m試樣質(zhì)量，g;0.952亞麻酸換算系數(shù)。計算結果以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示，結果保留三位有效數(shù)字。m 10000.952 1007精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的10%。圖 1

36、 皂化酯化裝置圖附錄A標準溶液和試樣溶液典型液相色譜圖圖 A.1a亞麻酸甲酯、Y亞麻酸甲酯標準溶液色譜圖3030 -iia-rt-1 _ | 1 1 、5101&圖 A.2 試樣溶液色譜圖六、保健食品中人參皂苷的測定1范圍本方法規(guī)定了保健食品中人參皂苷的高效液相色譜測定方法。本方法適用于以人參及其加工品為主要原料的保健食品中人參皂苷Re Rg、Rbi、Rc、Rb2、Rd 含量的測定。2原理將試樣中的人參皂苷溶解、提取，經(jīng)凈化處理后，使用梯度洗脫反相高效液相色譜進行分離，紫外檢測器檢測（或蒸發(fā)光散射檢測器），根據(jù)色譜峰的保留時間定性，外標法定量。3試劑和材料注：水為 GB/T 6682 規(guī)定的一

37、級水。3.1 試劑3.1.1 乙腈（CHsCN）:色譜純。3.1.2 甲醇（CH3OH）:色譜純。3.1.3 D101大孔吸附樹脂（粒徑：I.D $ 15*L150m）3.2標準品人參皂苷 Re、Rgi、Rb1、Rc、Rb2、Rd 標準品的分子式、相對分子量、CAS 登錄號見表1,純度98%或經(jīng)國家認證并授予標準物質(zhì)證書的標準物質(zhì)。表 1 人參皂苷標準樣品的中文名稱、英文名稱、C A S 登 錄 號 、 分 子 式 、 相 對 分 子 量中文名稱英文名稱CAS 登錄號分子式相對分子量人參皂苷 ReGinsenoside Re52286-59-6C48H82O18947.15人參皂苷 RgiGi

38、nsenoside Rgi22427-39-0C42H72O14801.01人參皂苷 Rb1Ginsenoside Rbi41753-43-9C54H92O231109.29人參皂苷 RcGinsenoside Rc11021-14-0C53H90O221079.27人參皂苷 Rb2Ginsenoside Rb211021-13-9C53H90O221079.27人參皂苷 RdGinsenoside Rd52705-93-8CI8H82O18947.153.3 標準溶液配制3.3.1 人參皂苷 ReRg、Rb1、RcRb2、Rd 標準儲備液：分別稱取人參皂苷ReRgi、Rb1、Rc、Rb2、R

39、d 標準樣品（3.2） 100mg 于 6 個 10mL 容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，搖 勻，溶液濃度為 10mg/mL。3.3.2 人參皂苷 Re Rgi、Rb1、Rc、Rb2、Rd 混合標準系列工作液：分別精密吸取不同體積 的標準儲備液（3.3.1）于同一 10mL 容量瓶中，用甲醇將其稀釋成人參皂苷Re、Rg、Rb1、Rc、Rb2、Rd 含量分別為 0.10mg/mL、0.20mg/mL、0.40mg/mL、0.80mg/mL、1.00mg/mL 的 混合標準系列工作液。4儀器和設備4.1 高效液相色譜儀：配有紫外檢測器或蒸發(fā)光散射檢測器。4.2 超聲波清洗器4.3 離心機。4.4

40、 水浴鍋。5分析步驟5.1 試樣制備5.1.1 固體試樣取試樣研成粉末，并過 20 目篩。稱取該粉末樣適量（相當于含總人參皂苷約75mg,精確至 O.OOIg），于 50mL 容量瓶中，加水 45mL 于超聲波清洗器中超聲提取30 分鐘，取出，待放至室溫后，加水定容至刻度，搖勻，濾過，準確吸取續(xù)濾液10mL，通過 Dioi大孔吸附樹脂凈化柱（3.1.3）（大孔吸附樹脂使用前先經(jīng)甲醇浸泡，水洗，裝成 10cm 長，直徑 11.5cm的小柱），小柱先用 10mL 水沖洗，棄去水液之后，用70%甲醇 25mL 洗脫皂苷，收集甲醇溶液，水浴上蒸干，殘渣以甲醇（3.1.2）溶解并定容至 5.0mL,該樣

41、液離心后過 0.45 叩 尼龍濾膜，濾液進液相色譜儀分析。5.1.2 液體試樣取一定量的試樣（相當于含總人參皂苷約75mg）,旋轉蒸發(fā)至干，殘渣以50mL 水超聲提取 30 分鐘，余下步驟與 5.1.1 相同。5.1.3 軟膠囊試樣稱取混合均勻的待測試樣內(nèi)容物適量（相當于含總人參皂苷約75mg，精確至 0.001g ）,余下步驟與 5.1.1 相同。5.2 色譜參考條件5.2.1 色譜柱：C18柱，250mmK4.6mm,5（im,或同等性能的色譜柱。5.2.2 流動相：A 相為乙腈（3.1.1）, B 相為水，梯度洗脫條件見表2。表 2 梯度洗脫條件時間（min）A 相/ %B 相/ %01

42、6842018825540606540606610007110007216848516845.2.3 流速：1.0mL/min。5.2.4 柱溫：35 。5.2.5 進樣量：5L5.2.6 紫外檢測器條件：檢測波長：203nm。5.2.7 蒸發(fā)光散射檢測器條件：蒸發(fā)溫度：105 ;漂移管溫度：60 ;氣流速：1.6L/min。5.3 標準曲線的制作將混合標準系列工作液（3.3.2）分別按液相色譜參考條件（5.2 ）進行測定，得到相應 的峰面積，以標準工作液的濃度（或濃度對數(shù)）為橫坐標，以峰面積（或峰面積對數(shù)）為縱 坐標，繪制標準曲線。10%。5.4 試樣溶液的測定將試樣溶液（5.1）按液相色譜

43、參考條件（5.2）進行測定，以保留時間定性，測得峰面 積，根據(jù)標準曲線得到試樣溶液中人參皂苷Re、Rg、Rbi、Rc、Rb2、Rd 的濃度。標準溶液和試樣溶液的高效液相色譜圖參見附錄A （紫外檢測器）和附錄 B （蒸發(fā)光散射檢測器）。6結果計算試樣中各人參皂苷的含量按下式計算:式中：X試樣中各人參皂苷的含量，單位為克每百克或克每百毫升（g/l00g 或 g/l00mL）；C-由標準曲線查得測定樣液中各人參皂苷的濃度，單位為毫克每毫升（mg/mL）；V被測定樣液的最終定容體積，單位為毫升（mL）;F-被測定樣液的稀釋倍數(shù)；m- 試樣的取樣量，單位為克或毫升（g 或 mL）；100單位轉換；100

44、0單位轉換。試樣中總人參皂苷的含量按式（2）計算：X 總=XRe+ XRg1+ XRb1+ XRc+ XRb2+ XRd.（2 ）式中：X 總一試樣中總人參皂苷的含量，單位為克每百克或克每百毫升（g/100g 或 g/100mL）;X試樣中各人參皂苷（Xi包括人參皂苷ReRgi、Rb1、Rc、Rb2、Rd）的含量，單位為克每百克或克每百毫升（g/100g 或 g/100mL）。計算結果以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示，保留三位有效數(shù)字。XiCiV F 100m 10007精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不超過算術平均值的附錄A標準溶液和試樣溶液典型液相色

45、譜圖（紫外檢測器）Q1&QOBaia Re Rbi、Rc、Rb、Rd 的標準溶液色譜圖圖 A.2 人參皂苷 Rgi、Re Rbi、Rc、Rb2、Rd 的試樣溶液色譜圖附錄B標準溶液和試樣溶液典型液相色譜圖（蒸發(fā)光散射檢測器）ELS1 A. ELSD SignalmV7060；50：40-30；20 :T110-I11n3-11- H-u!IIrin201301 1401v50miri圖 B.1 人參皂苷 Rgi、Re Rbi、Rc、Rb2、Rd 的標準溶液色譜圖ELSl A, ELSD S兩rwlfflV -j70RblflF II JI I1IIIl f VI FlI IIVIfVI llD

46、諂20M4050mb圖 B.2 人參皂苷 Rgi、Re Rbi、Rc、Rb2、Rd 的試樣溶液色譜圖七、保健食品中前花青素的測定1范圍本方法規(guī)定了保健食品中前花青素的測定方法。本方法適用于保健食品中前花青素的含量測定。2原理前花青素是含有兒茶素和表兒茶素單元的聚合物。前花青素本身無色，但經(jīng)過熱酸處理后，可以生成深紅色的花青素離子。本法用分光光度法測定前花青素在水解過程中生成的花青素離子。計算試樣中前花青素含量。3試劑和材料注：除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682 規(guī)定的一級水。3.1 試劑3.1.1 甲醇（CH30H）。3.1.2 正丁醇（CH3（CH2）3OH）。3

47、.1.3 鹽酸（HCI）。3.1.4 硫酸鐵銨（NH4Fe（SO）242H2O）3.2 試劑配制3.2.1 鹽酸（2mol/L ）:取鹽酸 90mL，加水適量使成 500mL，搖勻。3.2.2 硫酸鐵銨溶液：稱取 10g 硫酸鐵銨，用 2mol/L 鹽酸溶解并定容至 500mL，混勻，此溶 液中硫酸鐵銨濃度為 2% （w/v ）。3.3 標準品前花青素（葡萄籽來源）標準樣品的分子式、相對分子量、CAS 登錄號見表 1，純度95% 或經(jīng)國家認證并授予標準物質(zhì)證書的標準物質(zhì)。表 1 前花青素（葡萄籽來源）標準樣品的中文名稱、英文名稱、CAS 登錄號、分子式、相對分子量中文名稱英文名稱CAS 登錄號

48、分子式相對分子量前花青素（葡萄 籽來源）Proanthocyanidins4852-22-6C30H26O13594.52說明：因為前花青素本身是一類物質(zhì)（一般指24 分子的聚合物），所以此標準樣品為推薦使用。3.4 標準品溶液的配制前花青素標準儲備液（1.0mg/mL ）:稱取 10mg （精確至 0.1mg）前花青素標準品于 10mL 容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，搖勻。4儀器和設備4.1 分析天平：感量為 0.1mg 和 0.001g。4.2 分光光度計。4.3 離心機：轉速 4000r/mino4.4 超聲儀。4.5 回流裝置。5分析步驟5.1 試樣制備5.1.1 固體試樣：稱取已

49、粉碎混合均勻的待測試樣50mg100mg （精確至 O.lmg）,置于 50mL容量瓶中，加入 30mL 甲醇，超聲處理 20min，放冷至室溫后，加甲醇至刻度，搖勻，離心 或放置至澄清后取上清液備用。5.1.2 含油試樣：稱取混合均勻的待測試樣50mg （精確至 O.lmg）,置于小燒杯中，用 2030mL 甲醇分數(shù)次攪拌，將提取液轉移至50mL 容量瓶中，直至甲醇提取液無色，加甲醇至刻度，搖勻。5.1.3 液體試樣：吸取不超過 1mL 的待測試樣，置于 50mL 容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。5.2 試樣測定將正丁醇與鹽酸按 95:5 的體積比混合后，取出 6.0mL 置于具塞錐形瓶中，再

50、加入 0.2mL硫酸鐵銨溶液和 1.0mL 試樣溶液，混勻，置沸水浴回流，精確加熱 40min 后，立即置冰水中 冷卻，在加熱完畢 15min 后，于 546nm 波長處測吸光度，由標準曲線計算試樣中前花青素 的含量。顯色在 1 小時內(nèi)穩(wěn)定。5.3 標準曲線制備分別吸取前花青素標準儲備液O.OOmL、0.10mL、0.25mL、0.50mL、1.00mL、1.50mL 置于 10mL 容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。各吸取1.0mL 測定，與試樣測定方法相同。繪制前花青素濃度與吸光度關系的標準曲線。6結果計算試樣中前花青素測定結果按下式計算式中：X試樣中前花青素的含量，g/100g ;0 由標準

51、曲線上查出待測試樣中前花青素的濃度，卩 g/mLV待測試樣定容總體積，mL;m試樣質(zhì)量，g。計算結果以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示，保留三位有效數(shù)字。7精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不超過算術平均值的10%。C V 1000m 1000 1000100八、保健食品中核苷酸的測定第一法1范圍本方法規(guī)定了保健食品中核苷酸的超高效液相色譜 本方法適用于保健食品中核苷酸的測定。2原理將試樣溶解、去除蛋白后，經(jīng)超高效液相色譜（ 峰面積定量。3試劑注：除特殊說明，所用試劑均為分析純，實驗用水符合GB/T 6682 級水要求。3.1 乙腈（CH3CN）:優(yōu)級純。3

52、.2乙酸（C2H4O2）： 36%37% （g/g ）。3.3磷酸（HsPQ）。3.4磷酸氫二鈉（Na2HPO4）。3.5 標準品核苷酸標準樣品的分子式、相對分子量、CAS 登錄號見表 1,純度97%或經(jīng)國家認證并授予標準物質(zhì)證書的標準物質(zhì)。表 1:各核苷酸標準品的分子式、相對分子量、CAS 登錄號名稱英文名CAS分子式相對分子量鳥嘌呤核苷酸Guanine nucleotide (GMP)85-32-5C10H14N5O8P363.22腺嘌呤核苷酸Adenine nucleotide (AMP)61-19-8G0H14O7N5P347.22次黃嘌呤核苷酸Hypoxanthine nucleot

53、ide (IMP)131-99-7C10H13N4O8P348.21胞嘧啶核苷酸Cytosine nucleotide (CMP)63-37-6C9H14N3O8P323.20尿嘧啶核苷酸Uracil nucleotide (UMP)58-97-9C9H13N2O9P324.183.6 標準溶液配制3.6.1 核苷酸標準儲備液：稱取經(jīng) 100C干燥 4h 處理的核苷酸標準品（3.5）各 50mg（精確 至 0.1mg） ，用水溶解，并轉移至 100mL 容量瓶中，定容至刻度，此溶液濃度為0.5mg/mL。3.6.2 核苷酸標準系列工作液： 分別準確吸取不同體積的標準儲備液（3.6.1）,用水將

54、其稀釋成核苷酸含量分別為 10.0 卩 g/mL 20.0 卩 g/mL 40.0 卩 g/mL 80.0 卩 g/mL 100 卩 g/mL 的標準系 列工作液。臨用時配制。4儀器和設備4.1 超高效液相色譜儀（UPLC :配有二極管陣列檢測器或紫外檢測器。4.2 分析天平：感量分別為0.1mg 和 0.001g。5分析步驟5.1 試樣制備UPLC 測定方法。UPLC 分離，以相對保留時間定性,5.1.1 不含蛋白試樣稱取試樣適量于 100mL 棕色容量瓶中，加入約50C的熱水 80mL，徹底混勻，超聲 30分鐘，冷卻至室溫后用水定容至刻度。過濾，濾液過 0.22ym針孔濾膜，超液相色譜儀測

55、定。5.1.2 含蛋白試樣稱取試樣適量于 100mL 棕色容量瓶中，加入約 50C的熱水 80mL,加入乙酸（3.2） 100 譏 徹底混勻，超聲 30 分鐘，冷卻至室溫后用水定容至刻度。 過濾，濾液過 0.22ym針孔濾膜， 超高效液相色譜儀測定。5.2 儀器參考條件色譜柱：BEH Amide 柱，2.1mnK100mm , 1.7ym,或性能相當者。流動相：A:乙腈、B： 10mmol/L NazHPO 水溶液、C:0.1%H3PO 水溶液，梯度洗脫。梯度表如下：時間A%B%C%0.088.07.05.06.080.017.52.58.077.022.01.09.065.035.00.01

56、0.755.045.00.010.888.07.05.013.088.07.05.0流速：0.5mL/min。柱溫：50C。檢測波長：254nm。進樣量：1yL5.3 標準曲線的制作將標準系列工作液（3.6.2）分別按液相色譜參考條件（5.2 ）進行測定，得到相應的核 苷酸標準溶液的色譜峰面積，以標準工作液的濃度為橫坐標，以色譜峰的峰面積為縱坐標， 繪制標準曲線。5.4 試樣溶液的測定將試樣溶液（5.1）按液相色譜參考條件（5.2）進行測定。6結果計算試樣中核苷酸測定結果按下式計算：X式中：X試樣中核苷酸的含量，mg/g ;C由標準曲線得出的試樣溶液中核苷酸的濃度，yg/mLV試樣定容體積，m

57、L;m試樣稱取的質(zhì)量，g;試樣中總核苷酸的含量為胞嘧啶核苷（CMP）、尿嘧啶核苷（UMP）、腺嘌呤核苷（AMP）、C Vm 1000鳥嘌呤核苷（GMP）、次黃嘌呤核苷（IMP）含量之和。計算結果以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示，結果保留三位有效數(shù)字。7 精密度 在重復性條件下獲得的兩次測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的10%。第二法1范圍本方法規(guī)定了保健食品中核苷酸的高效液相色譜（HPLC 測定方法。本方法適用于保健食品中核苷酸的測定。2原理 將試樣溶解、去除蛋白后，經(jīng)高效液相色譜分離，以相對保留時間定性，峰面積定量。3試劑注：除特殊說明，所用試劑均為分析純，實驗用水符

58、合 GB/T 6682-2008 一級水要求。3.1 乙腈（CH3CN）:優(yōu)級純。3.2 乙酸（C2H4O2）: 36%37% （g/g ）。3.3 磷酸（ H3PO4）。3.4 標準品同方法一。3.5 標準溶液配制3.5.1 核苷酸標準儲備液：稱取經(jīng) 100C干燥 4h 處理的核苷酸標準品（3.4）各 50mg （精確 至 O.lmg），用水溶解，并轉移至 100mL 容量瓶中，定容至刻度，此溶液濃度為 0.5mg/mL。3.5.2 核苷酸標準系列工作液: 分別準確吸取不同體積的標準儲備液（ 3.5.1），用水將其稀釋成核苷酸含量分別為 10.0 卩 g/mL 20.0 卩 g/mL 40.

59、0 卩 g/mL 80.0 卩 g/mL 100 卩 g/mL 的標準系 列工作液。臨用時配制。4儀器和設備4.1 液相色譜儀:配有二極管陣列檢測器或紫外檢測器。4.2 分析天平:感量分別為 0.1mg 和 0.001g。5分析步驟5.1 試樣制備5.1.1 不含蛋白試樣稱取試樣適量于 100mL 棕色容量瓶中，加入約50C的熱水 80mL，徹底混勻，超聲 30分鐘，冷卻至室溫后用水定容至刻度。過濾，濾液過0.45ym針孔濾膜，液相色譜儀測定。5.1.2 含蛋白試樣稱取試樣適量于 100mL 棕色容量瓶中，加入約 50C的熱水 80mL,加入乙酸（3.2） 100 譏 徹底混勻，超聲 30 分

60、鐘，冷卻至室溫后用水定容至刻度。 過濾，濾液過 0.45ym針孔濾膜， 液相色譜儀測定。5.2儀器參考條件5.2.1 高效液相色譜 色譜柱：Ci8柱，250mmX 4.6mm, 5ym,或性能相當者。流動相：乙腈：0.2%H3PO4水溶液=97:3（V/V）。流速：1mL/min。 柱溫：35C。檢測波長：254nm。進樣量：10L5.3 標準曲線的制作將標準系列工作液（3.5.2）分別按液相色譜參考條件（5.2 ）進行測定，得到相應的核 苷酸標準溶液的色譜峰面積，以標準工作液的濃度為橫坐標，以色譜峰的峰面積為縱坐標， 繪制標準曲線。5.4 試樣溶液的測定將試樣溶液（5.1）按液相色譜參考條件