白血病分子生物學(xué)朱勇梅3

1、白血病分子生物學(xué)白血病分子生物學(xué)白血病分子生物學(xué)白血病分子生物學(xué)白血病的分子機(jī)制白血病的分子機(jī)制白血病的分子檢測(cè)白血病的分子檢測(cè)白血病分子檢測(cè)的臨床應(yīng)用白血病分子檢測(cè)的臨床應(yīng)用白血病的分子機(jī)制白血病的分子機(jī)制基因基因(gene)：合成有功能的蛋白質(zhì)多肽鏈或合成有功能的蛋白質(zhì)多肽鏈或RNA所所必需的全部核酸序列。必需的全部核酸序列。癌基因癌基因(oncogene)：細(xì)胞或病毒中存在的，能誘導(dǎo)細(xì)胞或病毒中存在的，能誘導(dǎo)正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化并使之獲得新生物特征的基因。正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化并使之獲得新生物特征的基因。癌基因活化的方式：癌基因活化的方式： 點(diǎn)突變點(diǎn)突變 染色體重排染色體重排 基因擴(kuò)增基因擴(kuò)增抑癌基因抑癌

2、基因(tumor suppressor genes)：指一類基因，指一類基因，其產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞生長增殖起負(fù)調(diào)控的作用，并能潛在抑其產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞生長增殖起負(fù)調(diào)控的作用，并能潛在抑制細(xì)胞的惡變。制細(xì)胞的惡變。 白血病的分子機(jī)制白血病的分子機(jī)制白血病的分子機(jī)制白血病的分子機(jī)制增殖增殖過度過度分化分化阻斷阻斷凋亡凋亡受抑受抑“二次打擊二次打擊”學(xué)說學(xué)說D.Gary Gilliland Best Practice & Research Clinical Haematology.2003;16:409-417白血病的分子檢測(cè)白血病的分子檢測(cè)Southern blotNorthern blotWester

3、n blotFISHPCR測(cè)序測(cè)序芯片芯片白血病的分子檢測(cè)白血病的分子檢測(cè)PCR反應(yīng)原理反應(yīng)原理N = N0 x (1+E)n N：擴(kuò)增子數(shù)量擴(kuò)增子數(shù)量N0：起始模板數(shù)量起始模板數(shù)量E：擴(kuò)增效率擴(kuò)增效率n：循環(huán)數(shù)循環(huán)數(shù)白血病的分子檢測(cè)白血病的分子檢測(cè)PCR理論方程理論方程白血病的分子檢測(cè)白血病的分子檢測(cè)PCR方法優(yōu)點(diǎn)方法優(yōu)點(diǎn) 快速快速 靈敏靈敏 特異特異PCR方法缺點(diǎn)方法缺點(diǎn) 假陽性假陽性 假陰性假陰性白血病的分子檢測(cè)白血病的分子檢測(cè)PCR：僅適用于染色體斷裂點(diǎn)叢集于相對(duì)小僅適用于染色體斷裂點(diǎn)叢集于相對(duì)小的范圍內(nèi)（的范圍內(nèi)（22kbkb），），如如T-ALL中中SIL-TAL1。 RT-PCR

4、：可用于染色體可用于染色體斷裂點(diǎn)跨越很大的斷裂點(diǎn)跨越很大的區(qū)域的融合基因。區(qū)域的融合基因。 巢式巢式RT-PCR：可顯著提高反應(yīng)的特異性，可顯著提高反應(yīng)的特異性，增加擴(kuò)增效率。增加擴(kuò)增效率。RQ-PCR：可定量擴(kuò)增產(chǎn)物?？啥繑U(kuò)增產(chǎn)物。白血病的分子檢測(cè)白血病的分子檢測(cè)RQ-PCR（Real-time Quantitative PCR） 熒光標(biāo)記擴(kuò)增產(chǎn)物熒光標(biāo)記擴(kuò)增產(chǎn)物 熒光標(biāo)記熒光標(biāo)記引物引物 特異性熒光標(biāo)記特異性熒光標(biāo)記探針探針 TaqMan探針、分子信標(biāo)、雜交雙探針探針、分子信標(biāo)、雜交雙探針 熒光染料直接結(jié)合熒光染料直接結(jié)合擴(kuò)增產(chǎn)物擴(kuò)增產(chǎn)物 SYBR Green I與與DNA雙鏈結(jié)合雙鏈結(jié)

5、合 動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)熒光信號(hào)變化動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)熒光信號(hào)變化TaqMan探針法探針法特異性高特異性高多重基因定量多重基因定量成本較高成本較高SYBR Green I 法法成本低成本低最適合初步篩查最適合初步篩查熔解曲線功能熔解曲線功能無法多重檢測(cè)無法多重檢測(cè)無模板特異性無模板特異性靈敏度低靈敏度低白血病的分子檢測(cè)白血病的分子檢測(cè)CT值：熒光信號(hào)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義顯著增長值：熒光信號(hào)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義顯著增長（穿過閾值線）時(shí)的循環(huán)次數(shù)（穿過閾值線）時(shí)的循環(huán)次數(shù)CT值與起始模板量成反比值與起始模板量成反比白血病的分子檢測(cè)白血病的分子檢測(cè)RQ-PCR的檢測(cè)系統(tǒng)：的檢測(cè)系統(tǒng)：該系統(tǒng)內(nèi)置了該系統(tǒng)內(nèi)置了96孔孔PCR儀，且在每個(gè)反應(yīng)

6、孔上儀，且在每個(gè)反應(yīng)孔上均有一個(gè)監(jiān)測(cè)探頭用于檢測(cè)均有一個(gè)監(jiān)測(cè)探頭用于檢測(cè)PCR反應(yīng)管中的熒反應(yīng)管中的熒光強(qiáng)度。平均每光強(qiáng)度。平均每8-12秒就檢測(cè)一次，以達(dá)到實(shí)秒就檢測(cè)一次，以達(dá)到實(shí)時(shí)檢測(cè)的目的。時(shí)檢測(cè)的目的。系統(tǒng)中的電腦系統(tǒng)同時(shí)不斷地分析來自檢測(cè)系系統(tǒng)中的電腦系統(tǒng)同時(shí)不斷地分析來自檢測(cè)系統(tǒng)的信息，不斷計(jì)算每個(gè)反應(yīng)管中的熒光強(qiáng)度，統(tǒng)的信息，不斷計(jì)算每個(gè)反應(yīng)管中的熒光強(qiáng)度，并最終得到并最終得到CT值。值。該系統(tǒng)可以根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的該系統(tǒng)可以根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的CT值和拷貝數(shù)自動(dòng)繪值和拷貝數(shù)自動(dòng)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計(jì)算未知樣品中的目的基因拷制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計(jì)算未知樣品中的目的基因拷貝數(shù)。貝數(shù)。白血病的分子檢測(cè)白血病

7、的分子檢測(cè)RQ-PCR方法優(yōu)點(diǎn)：方法優(yōu)點(diǎn)： 靈敏而特異靈敏而特異 起點(diǎn)定量起點(diǎn)定量 閉管化學(xué)（污染的風(fēng)險(xiǎn)低）閉管化學(xué)（污染的風(fēng)險(xiǎn)低） 沒有沒有PCR后處理（無需走膠，拍照等）后處理（無需走膠，拍照等） 高度自動(dòng)化高度自動(dòng)化 定性：單數(shù)據(jù)點(diǎn)測(cè)定定性：單數(shù)據(jù)點(diǎn)測(cè)定 定量：多數(shù)據(jù)點(diǎn)測(cè)定定量：多數(shù)據(jù)點(diǎn)測(cè)定 能做基因分型及能做基因分型及SNP鑒定鑒定RQ-PCR的操作流程的操作流程從細(xì)胞或組織中抽提從細(xì)胞或組織中抽提DNA或或RNA用用PCR或或RT-PCR擴(kuò)增特異片段擴(kuò)增特異片段 將將PCR產(chǎn)物克隆到合適的載體上產(chǎn)物克隆到合適的載體上純化，定量和系列稀釋質(zhì)粒純化，定量和系列稀釋質(zhì)粒DNA或或RNA 體

8、外轉(zhuǎn)錄成體外轉(zhuǎn)錄成RNA片段（僅用于片段（僅用于RNA樣品）樣品）構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線（構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線（CT lgcopy）樣品的定量檢測(cè)樣品的定量檢測(cè)校正樣品基因拷貝數(shù)校正樣品基因拷貝數(shù)白血病分子檢測(cè)的臨床應(yīng)用白血病分子檢測(cè)的臨床應(yīng)用白血病的分子生物學(xué)檢查對(duì)白血病診斷分白血病的分子生物學(xué)檢查對(duì)白血病診斷分型及預(yù)后判斷有以下幾方面意義：型及預(yù)后判斷有以下幾方面意義： 補(bǔ)充補(bǔ)充MIC檢查的不足檢查的不足 發(fā)現(xiàn)新的亞型發(fā)現(xiàn)新的亞型 監(jiān)測(cè)白血病的微小殘留病灶（監(jiān)測(cè)白血病的微小殘留病灶（MRD） 為研究白血病的發(fā)病機(jī)制打下基礎(chǔ)為研究白血病的發(fā)病機(jī)制打下基礎(chǔ) 白血病分子檢測(cè)的臨床應(yīng)用白血病分子檢測(cè)的臨床應(yīng)用 PC

9、R方法檢測(cè)方法檢測(cè)MRD常用的分子標(biāo)志常用的分子標(biāo)志 AML1-ETOt(8;21)(q22;q22) 68%原發(fā)性原發(fā)性AML，在在M2中的陽性率為中的陽性率為2040%，在，在M2b中陽性率為中陽性率為90% 少見于少見于M4和和M1，極少見于極少見于MDS和骨髓增生綜和骨髓增生綜合癥合癥 AML1-ETO+白血病細(xì)胞有一定程度的分化能白血病細(xì)胞有一定程度的分化能力，能分化至較成熟的嗜中性粒細(xì)胞和嗜酸性力，能分化至較成熟的嗜中性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞，且對(duì)化療反應(yīng)較敏感粒細(xì)胞，且對(duì)化療反應(yīng)較敏感 AML1-ETO+患者對(duì)大劑量阿糖胞苷治療效果患者對(duì)大劑量阿糖胞苷治療效果好，具有較高的緩解率，

10、無病生存期長，預(yù)后好，具有較高的緩解率，無病生存期長，預(yù)后較其他較其他AML亞型（亞型（M3除外）好除外）好 AML1-ETO對(duì)初發(fā)患者進(jìn)行對(duì)初發(fā)患者進(jìn)行t(8;21)和和AML1-ETO融融合基因的檢測(cè)對(duì)其預(yù)后判斷及治療方案合基因的檢測(cè)對(duì)其預(yù)后判斷及治療方案的制定相當(dāng)重要的制定相當(dāng)重要 AML1-ETO定性結(jié)果不能用于評(píng)價(jià)患者定性結(jié)果不能用于評(píng)價(jià)患者M(jìn)RD情況情況 RQ-PCR能實(shí)時(shí)反映體內(nèi)能實(shí)時(shí)反映體內(nèi)AML1-ETO水水平。連續(xù)定量平。連續(xù)定量AML1-ETO轉(zhuǎn)錄本水平可轉(zhuǎn)錄本水平可判定有高復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)的患者，以便及早治判定有高復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)的患者，以便及早治療干預(yù)以防血液學(xué)復(fù)發(fā)療干預(yù)以防血液學(xué)復(fù)

11、發(fā) AML1- 陰性陰性 ETO+C-KIT基因突變基因突變C-KIT為為III型受體酪氨酸激酶家族（還包括型受體酪氨酸激酶家族（還包括c-FMS，PDGFR和和c-KIT）成員之一成員之一AML1-ETO可誘導(dǎo)性表達(dá)的轉(zhuǎn)基因小鼠，并不可誘導(dǎo)性表達(dá)的轉(zhuǎn)基因小鼠，并不導(dǎo)致白血病發(fā)生導(dǎo)致白血病發(fā)生C-KIT突變可見于伴突變可見于伴inv(16)的的M4以及伴以及伴t(8;21)的的M2患者患者26/54例例(48.1%) M2b患者中檢測(cè)到患者中檢測(cè)到C-KIT基因基因突變突變57例不伴例不伴t(8;21)的其他類型血液腫瘤患者均未的其他類型血液腫瘤患者均未檢測(cè)到檢測(cè)到C-KIT基因突變基因突變以

12、上結(jié)果提示以上結(jié)果提示C-KIT突變與突變與M2b密切相關(guān)密切相關(guān)(R=0.94, P0.01)C-KIT基因突變基因突變C-KIT基因結(jié)構(gòu)基因結(jié)構(gòu)JMC-KIT基因突變基因突變外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)C-KIT基因突變基因突變生存曲線生存曲線PML-RARt(15;17)(q22;q21) 98%M3患者患者繼繼t(15;17)之后，又先后發(fā)現(xiàn)之后，又先后發(fā)現(xiàn)4種種M3特異的累及特異的累及RAR的變異性染色體易位：的變異性染色體易位：t(11;17)(q23;q21)，t(5;17)(q35;q21)，t(11;17)(q13;q21)以及以及dup(17)(q21.3;q23)，分

13、別產(chǎn)生分別產(chǎn)生PLZF-RAR，NPM-RAR，NuMA-RAR和和STAT5b-RAR融融合基因合基因臨床上，具有臨床上，具有PLZF-RAR或或STAT5b-RAR融融合基因患者對(duì)合基因患者對(duì)ATRA治療不敏感，其余三種染治療不敏感，其余三種染色體易位患者經(jīng)色體易位患者經(jīng)ATRA治療可獲完全緩解治療可獲完全緩解 PML-RARAPL累及的累及的RAR基因及其伙伴基因結(jié)構(gòu)示意圖基因及其伙伴基因結(jié)構(gòu)示意圖 PML-RAR由于由于PML基因斷裂點(diǎn)基因斷裂點(diǎn)不同產(chǎn)生不同產(chǎn)生3種不同的種不同的PML-RAR異構(gòu)體異構(gòu)體 約約55%的的M3患者為患者為L型，型，40%為為S型，型，5%為為V型，且每位

14、患者只表達(dá)一種型，且每位患者只表達(dá)一種PML-RAR融合蛋白融合蛋白形態(tài)學(xué)上形態(tài)學(xué)上S型白血病細(xì)胞常為低分化的并型白血病細(xì)胞常為低分化的并且這些患者可見繼發(fā)細(xì)胞遺傳學(xué)異常，且這些患者可見繼發(fā)細(xì)胞遺傳學(xué)異常，V型型APL患者的白血病細(xì)胞體外對(duì)患者的白血病細(xì)胞體外對(duì)ATRA的的敏感度低敏感度低 PML-RARRT-PCR檢測(cè)檢測(cè)PML-RAR是敏感且特異的是敏感且特異的APL診斷方法，還能用于治療后診斷方法，還能用于治療后MRD監(jiān)監(jiān)測(cè)。測(cè)。PML-RAR陽性提示的分子復(fù)發(fā)常陽性提示的分子復(fù)發(fā)常早于臨床復(fù)發(fā)早于臨床復(fù)發(fā)3-63-6個(gè)月，為臨床采取進(jìn)一個(gè)月，為臨床采取進(jìn)一步治療措施提供了保障步治療措施

15、提供了保障 RQ-PCR能有效反映患者在發(fā)病、治療、能有效反映患者在發(fā)病、治療、緩解、復(fù)發(fā)整個(gè)過程的白血病細(xì)胞負(fù)荷，緩解、復(fù)發(fā)整個(gè)過程的白血病細(xì)胞負(fù)荷，在在MRD監(jiān)測(cè)中比監(jiān)測(cè)中比RT-PCR具有更高價(jià)值具有更高價(jià)值 L+ 陰性陰性 S+FLT3基因突變基因突變Fms-related tyrosine kinase 3FLT3為為III型受體酪氨酸激酶家族（還包括型受體酪氨酸激酶家族（還包括c-FMS，PDGFR和和c-KIT）成員之一，該類受成員之一，該類受體因在造血過程中造血細(xì)胞的增殖和存活中發(fā)體因在造血過程中造血細(xì)胞的增殖和存活中發(fā)揮重要調(diào)控作用揮重要調(diào)控作用綜合國外各研究報(bào)道，綜合國外各

16、研究報(bào)道， FLT3-ITD和和D835突變突變?cè)谠贏ML中陽性率分別為中陽性率分別為24%(385/1585)和和7%(30/429)，總陽性率超過，總陽性率超過30%，使其成為，使其成為AML中最普遍發(fā)生突變的靶基因中最普遍發(fā)生突變的靶基因許多臨床研究發(fā)現(xiàn)，許多臨床研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)LT3突變還與臨床預(yù)后突變還與臨床預(yù)后密切相關(guān)，尤對(duì)密切相關(guān)，尤對(duì)60歲以下的歲以下的AML患者，患者，F(xiàn)LT3突變患者預(yù)后較差，且可獨(dú)立于核型之外突變患者預(yù)后較差，且可獨(dú)立于核型之外FLT3基因突變基因突變FLT3基因突變基因突變FLT3基因主要突變類型基因主要突變類型FLT3基因突變基因突變mut-FLT3信號(hào)通

17、路信號(hào)通路FLT3基因突變基因突變外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)020406080100120140160 FLT3-ITD- FLT3-ITD+APL患者初發(fā)時(shí)外周血WBC計(jì)數(shù)(x109)CBF-MYH11inv(16)(p13;q22)及及t(16;16)(p13;q22) 主要見于主要見于M4Eo，10%不伴異常嗜酸細(xì)胞不伴異常嗜酸細(xì)胞M4，少見于少見于M2CBF-MYH11融合蛋白通過干擾核心結(jié)融合蛋白通過干擾核心結(jié)合因子（合因子（core binding factor,CBFcore binding factor,CBF）的的轉(zhuǎn)錄激活作用而致病轉(zhuǎn)錄激活作用而致病 具有具有CBF-M

18、YH11的患者對(duì)化療敏感，的患者對(duì)化療敏感，預(yù)后較好，故提高檢測(cè)率尤具臨床意義預(yù)后較好，故提高檢測(cè)率尤具臨床意義 CBF-MYH11CBF-MYH11具有多種變異型，其中最具有多種變異型，其中最常見的為常見的為A型，占型，占80%RT-PCR檢測(cè)檢測(cè)CBF-MYH11進(jìn)行進(jìn)行MRD監(jiān)監(jiān)測(cè)顯示，大部分患者在完全緩解時(shí)測(cè)顯示，大部分患者在完全緩解時(shí)PCR轉(zhuǎn)陰，但仍有小部分長期存活者轉(zhuǎn)陰，但仍有小部分長期存活者PCR仍仍為陽性為陽性最新研究采用最新研究采用RQ-PCR檢測(cè)檢測(cè)CBF-MYH11轉(zhuǎn)錄本水平來評(píng)價(jià)轉(zhuǎn)錄本水平來評(píng)價(jià)M4Eo患者患者M(jìn)RD情況，預(yù)示復(fù)發(fā)情況，預(yù)示復(fù)發(fā) NPM基因突變基因突變N

19、ucleophosmin，為核為核-漿穿梭蛋白，調(diào)控漿穿梭蛋白，調(diào)控p53-ARF通路通路見于見于50%核型正常的核型正常的AML患者，而在伴低?；颊撸诎榈臀?高危核型患者中極少見高危核型患者中極少見主要見于主要見于M4/M5中中第第12號(hào)外顯子的插入號(hào)外顯子的插入/缺失缺失伴此突變患者伴此突變患者WBC計(jì)數(shù)高計(jì)數(shù)高目前，此突變的預(yù)后價(jià)值各研究組報(bào)道不一，目前，此突變的預(yù)后價(jià)值各研究組報(bào)道不一，尚待進(jìn)一步證實(shí)尚待進(jìn)一步證實(shí)DEK-CANt(6;9)(p23;q34) 主要見于主要見于M2或或M4，也見于，也見于M1，MDS- -RAEB伴伴DEK-CAN的患者年齡一般較輕，且預(yù)后較的患者年

20、齡一般較輕，且預(yù)后較差差此類患者進(jìn)行分子監(jiān)測(cè)有助于判斷患者預(yù)后，此類患者進(jìn)行分子監(jiān)測(cè)有助于判斷患者預(yù)后，調(diào)整治療方案調(diào)整治療方案 N-RAS基因突變基因突變?yōu)闉镽AS基因家族成員之一，染色體定位于基因家族成員之一，染色體定位于1p32.2。具有具有GTP/GDP結(jié)合和結(jié)合和GTPase活性，活性，調(diào)控正常細(xì)胞的生長調(diào)控正常細(xì)胞的生長此基因突變存在于此基因突變存在于11-30%AML突變熱點(diǎn)位于突變熱點(diǎn)位于codon12,13和和61在在inv(16)/t(16;16),inv(3)/t(3;3)中突變率較高，中突變率較高，而在而在t(15;17)中低中低伴此突變患者外周血伴此突變患者外周血WB

21、C計(jì)數(shù)低計(jì)數(shù)低該突變預(yù)后意義尚不明該突變預(yù)后意義尚不明WT-1基因高表達(dá)基因高表達(dá)Wilms tumor 1是無特異分子異常的急性白血病患者理是無特異分子異常的急性白血病患者理想的想的MRD檢測(cè)指標(biāo)檢測(cè)指標(biāo)伴此基因高表達(dá)者預(yù)后差，且表達(dá)程度伴此基因高表達(dá)者預(yù)后差，且表達(dá)程度與預(yù)后相關(guān)與預(yù)后相關(guān)BCR-ABLt(9;22)(q34;q11) 1530%成人成人ALL及及35%兒童兒童ALL 9號(hào)染色體的斷裂點(diǎn)與號(hào)染色體的斷裂點(diǎn)與CML相同，但相同，但22號(hào)染色號(hào)染色體斷裂點(diǎn)具有異質(zhì)性體斷裂點(diǎn)具有異質(zhì)性 此融合蛋白此融合蛋白p190刺激細(xì)胞增殖的能力比刺激細(xì)胞增殖的能力比p210要要強(qiáng)。在轉(zhuǎn)基因試

22、驗(yàn)中觀察到強(qiáng)。在轉(zhuǎn)基因試驗(yàn)中觀察到p190誘發(fā)的白血病誘發(fā)的白血病具有起病早、發(fā)展快和惡性程度高的特點(diǎn)具有起病早、發(fā)展快和惡性程度高的特點(diǎn)BCR-ABL+ALL患者預(yù)后差，患者預(yù)后差，5年存活率年存活率20%，因此這些患者在緩解后需進(jìn)行骨髓移植治療因此這些患者在緩解后需進(jìn)行骨髓移植治療 BCR-ABL對(duì)于自體或異體移植對(duì)于自體或異體移植ALL患者，移植前患者，移植前后后BCR-ABL的有無以及的有無以及BCR-ABL的轉(zhuǎn)錄的轉(zhuǎn)錄本類型與預(yù)后有關(guān)本類型與預(yù)后有關(guān) e1a2+ 陰性陰性E2A-PBX1t(1;19)(q23;p13) 56%兒童兒童ALL和和3%成人成人ALL 此類患者具有高的白細(xì)

23、胞計(jì)數(shù)，高的血清乳酸此類患者具有高的白細(xì)胞計(jì)數(shù)，高的血清乳酸脫氫酶及中樞神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，預(yù)后差，平均無脫氫酶及中樞神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，預(yù)后差，平均無病生存期（病生存期（DFS）僅僅6個(gè)月，個(gè)月，3年年DFS為為20%，需給予這些患者強(qiáng)化治療才能獲得較好的預(yù)后需給予這些患者強(qiáng)化治療才能獲得較好的預(yù)后核型和核型和E2A-PBX1檢測(cè)對(duì)此類患者的診斷和治檢測(cè)對(duì)此類患者的診斷和治療方案的選擇至關(guān)重要療方案的選擇至關(guān)重要E2A-PBX1的預(yù)后價(jià)值需更多的臨床研究證實(shí)的預(yù)后價(jià)值需更多的臨床研究證實(shí) TEL-AML1t(12;21)(p13;q22) 25%兒童兒童ALL，是兒童是兒童ALL中最常見的分子異中最常見

24、的分子異常常 目前為止尚未在目前為止尚未在T-ALL，AML或或NHL中發(fā)現(xiàn)中發(fā)現(xiàn)t(12;21)，在嬰兒白血病中極少報(bào)道，在成人在嬰兒白血病中極少報(bào)道，在成人白血病患者中頻率很低（白血病患者中頻率很低（2%）此類患者發(fā)病年齡?。ù祟惢颊甙l(fā)病年齡小（2歲歲10歲），歲），WBC計(jì)計(jì)數(shù)低（數(shù)低（50 000/L），），免疫表型為前免疫表型為前B-ALL此類患者對(duì)治療反應(yīng)佳，完全緩解時(shí)間長，預(yù)此類患者對(duì)治療反應(yīng)佳，完全緩解時(shí)間長，預(yù)后好后好 TEL-AML1由于由于12p和和21q末端在常規(guī)顯帶中很相似，末端在常規(guī)顯帶中很相似，因此常規(guī)細(xì)胞遺傳學(xué)方法檢出率僅因此常規(guī)細(xì)胞遺傳學(xué)方法檢出率僅0.05%

25、，需應(yīng)用需應(yīng)用FISH或或RT-PCR方法提高檢測(cè)陽方法提高檢測(cè)陽性率性率TEL基因重排是獨(dú)立預(yù)后因素，基因重排是獨(dú)立預(yù)后因素，RT-PCR檢測(cè)檢測(cè)TEL-AML1融合基因能將低危險(xiǎn)度融合基因能將低危險(xiǎn)度與高危險(xiǎn)度的與高危險(xiǎn)度的ALL患者區(qū)分開來。因此患者區(qū)分開來。因此早期檢測(cè)早期檢測(cè)TEL-AML1融合基因?qū)εR床預(yù)融合基因?qū)εR床預(yù)后，確定合適的治療方案都有重要意義后，確定合適的治療方案都有重要意義 MLL相關(guān)融合基因相關(guān)融合基因 累及累及MLL基因的分子異常見于基因的分子異常見于5.2%AML，22%ALL和混合性白血病及某些淋巴瘤，還可和混合性白血病及某些淋巴瘤，還可見于治療相關(guān)白血病，尤

26、接受見于治療相關(guān)白血病，尤接受topoisomerase II抑制劑治療的患者抑制劑治療的患者 MLL基因涉及五十余種染色體易位，產(chǎn)生不同基因涉及五十余種染色體易位，產(chǎn)生不同的融合蛋白，且每種融合蛋白都與特定的白血的融合蛋白，且每種融合蛋白都與特定的白血病表型相關(guān)。最常見的有：病表型相關(guān)。最常見的有： t(4;11)(q21;q23) MLL-AF4融合基因融合基因 ALL t(9;11)(p22;q23) MLL-AF9融合基因融合基因 AML t(11;19)(p13;q23) MLL-ENL融合基因融合基因 AML及及ALLMLL相關(guān)融合基因相關(guān)融合基因至今，至今，MLL相關(guān)融合蛋白的致

27、病性還不相關(guān)融合蛋白的致病性還不清楚，推測(cè)其可能具有雙重作用：清楚，推測(cè)其可能具有雙重作用： 融合蛋白可能獲得新的功能，促使融合蛋白可能獲得新的功能，促使細(xì)胞轉(zhuǎn)化細(xì)胞轉(zhuǎn)化 MLL發(fā)生斷裂后，缺失鋅指結(jié)構(gòu)域發(fā)生斷裂后，缺失鋅指結(jié)構(gòu)域的的MLL不能與不能與DNA結(jié)合，失去其轉(zhuǎn)錄活結(jié)合，失去其轉(zhuǎn)錄活化功能，使受化功能，使受MLL調(diào)節(jié)的靶基因（調(diào)節(jié)的靶基因（HOX基因）表達(dá)異常，也影響造血細(xì)胞的發(fā)基因）表達(dá)異常，也影響造血細(xì)胞的發(fā)育育 MLL-AF4t(4;11)(q21;q23)t(4;11)的發(fā)生率在不同年齡段是不同的，在嬰的發(fā)生率在不同年齡段是不同的，在嬰兒兒ALL中最多見，為中最多見，為507

28、0%，而在兒童和成，而在兒童和成人中較低，分別為人中較低，分別為2%和和36%此類患者發(fā)病年齡低（通常此類患者發(fā)病年齡低（通常 90% CML患者患者BCR-ABL融合蛋白（融合蛋白（p210）的酪氨酸蛋白激的酪氨酸蛋白激酶活性較正常酶活性較正常ABL高，可能是高，可能是BCR對(duì)對(duì)ABL激酶激酶活性調(diào)節(jié)區(qū)的作用所致活性調(diào)節(jié)區(qū)的作用所致由于由于5%CML患者為隱匿性患者為隱匿性Ph染色體，因此染色體，因此無無Ph染色體染色體CML患者還需使用更靈敏的分子患者還需使用更靈敏的分子檢測(cè)手段如檢測(cè)手段如FISH或或RT-PCR檢測(cè)檢測(cè)BCR-ABL融合融合基因基因RT-PCR還能區(qū)分還能區(qū)分e1-a2

29、和和b2-a2/b3-a2二種二種BCR-ABL轉(zhuǎn)錄本，從而區(qū)分轉(zhuǎn)錄本，從而區(qū)分ALL患者與患者與CML急淋急淋變患者，進(jìn)而分別對(duì)兩種不同患者采用不同的變患者，進(jìn)而分別對(duì)兩種不同患者采用不同的治療方案治療方案BCR-ABL巢式巢式RT-PCR檢測(cè)檢測(cè)BCR-ABL融合基因用融合基因用于于CML移植患者移植后移植患者移植后MRD監(jiān)測(cè)?？稍诒O(jiān)測(cè)。可在患者血液學(xué)復(fù)發(fā)前的患者血液學(xué)復(fù)發(fā)前的624個(gè)月骨髓檢測(cè)個(gè)月骨髓檢測(cè)就呈陽性。就呈陽性。 RQ-PCR還能動(dòng)態(tài)觀察患者治療后還能動(dòng)態(tài)觀察患者治療后BCR-ABL轉(zhuǎn)錄本水平變化情況，反映療效。轉(zhuǎn)錄本水平變化情況，反映療效。 b3a2+ b2a2+ 陰性陰性GATA2基因突變基因突變調(diào)控早期造血干細(xì)胞增殖分化的轉(zhuǎn)錄因子，維調(diào)控早期造血干細(xì)胞增殖分化的轉(zhuǎn)錄因子，維持造血干祖細(xì)胞的增殖和自我更新能力持造血干祖細(xì)胞的增殖和自我更新能力CML急變患者中新發(fā)現(xiàn)急變患者中新發(fā)現(xiàn)GATA2基因突變，基因突變， 而而CML慢性期、加速期，慢性期、加速期，AML（M1-M7），），MDS，ALL，CLL，淋巴瘤和骨髓瘤患者，淋巴瘤和骨髓瘤患者，以及