豆奶粉中蛋白質(zhì)含量的測定

1、豆奶粉中蛋白質(zhì)含量的測定A凱式定氮法原理蛋白質(zhì)是含氮的有機(jī)化合物。食品與硫酸和硫酸銅、硫酸鉀一同加熱消化，使蛋白質(zhì)分解，碳和氫被氧化為二氧化碳和水逸出，分解的氨與硫酸結(jié)合生成硫酸銨。然后堿化蒸餾使氨游離，用硼酸吸收后以硫酸或鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定，根據(jù)酸的消耗量乘以換算系數(shù)，即為蛋白質(zhì)的量。 原理1.有機(jī)物中的胺根在強(qiáng)熱和有機(jī)物中的胺根在強(qiáng)熱和CuSO4，濃，濃H2SO4 作用下，硝化生成（作用下，硝化生成（NH4）2SO4。 （其中（其中CuSO4做催化劑）做催化劑）2.在凱氏定氮器中與堿作用，通過蒸餾釋放出在凱氏定氮器中與堿作用，通過蒸餾釋放出NH3 ，收集于，收集于H3BO3 溶液中溶液中 。3.

2、 用已知濃度的用已知濃度的H2SO4（或（或HCI）標(biāo)準(zhǔn)溶液滴）標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，根據(jù)定，根據(jù)HCI消耗的量計(jì)算出氮的含量，然后消耗的量計(jì)算出氮的含量，然后乘以相應(yīng)的換算因子，既得蛋白質(zhì)的含量乘以相應(yīng)的換算因子，既得蛋白質(zhì)的含量 。1、硫酸鉀、硫酸鉀 作為增溫劑，提高溶液沸點(diǎn)，純硫酸沸點(diǎn)作為增溫劑，提高溶液沸點(diǎn)，純硫酸沸點(diǎn) 340，加入硫酸鉀之后可以提高至，加入硫酸鉀之后可以提高至400以上。也可加以上。也可加入硫酸鈉，氯化鉀等提高沸點(diǎn)，但效果不如硫酸鉀。沸入硫酸鈉，氯化鉀等提高沸點(diǎn)，但效果不如硫酸鉀。沸點(diǎn)提高加速了反應(yīng)過程。點(diǎn)提高加速了反應(yīng)過程。2、硫酸銅、硫酸銅 作為催化劑。還可以作消化終點(diǎn)指

3、示劑（做作為催化劑。還可以作消化終點(diǎn)指示劑（做蒸餾時(shí)堿性指示劑）。蒸餾時(shí)堿性指示劑）。 3、鹽酸（、鹽酸（mol/L）4、2硼酸溶液硼酸溶液5、40氫氧化鈉溶液氫氧化鈉溶液6、混合指示劑：把溶解于、混合指示劑：把溶解于95乙醇的乙醇的0.l溴甲酚綠溶液溴甲酚綠溶液10毫升和溶于毫升和溶于95乙醇的乙醇的0.l甲基紅溶液甲基紅溶液2毫升混合而成。毫升混合而成。 7、0.05NHCl標(biāo)準(zhǔn)溶液或標(biāo)準(zhǔn)溶液或005N硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。 凱式定氮瓶 鐵架臺、電爐、通風(fēng)櫥 容量瓶長頸圓底燒瓶、回流裝置、冷凝管、錐形瓶鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的配制鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的配制一、實(shí)驗(yàn)步驟一、實(shí)驗(yàn)步驟：1、配制0.

4、5mol/L的鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液：量取45mL鹽酸，加水定容至1000mL，搖勻備用。2、標(biāo)定鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液：準(zhǔn)確稱取0.8g在270300攝氏度下干燥至恒重的的基準(zhǔn)無水碳酸鈉，加50mL水使之溶解，再加10滴溴甲酚綠-甲基紅混合指示劑。用本溶液滴定0.05mol/L的鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液，至其由綠色轉(zhuǎn)變成紫紅色，煮沸2min，冷卻至室溫，繼續(xù)滴定至溶液有綠色變?yōu)榘底仙?。?個(gè)平行樣品，同時(shí)做試劑空白實(shí)驗(yàn)校正結(jié)果。二、計(jì)算公式：二、計(jì)算公式：0530. 0*(）空樣VVmc式中：c-鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的實(shí)際濃度，mol/L m-基準(zhǔn)無水碳酸鈉的質(zhì)量，mg 0.0530-的毫摩質(zhì)量，g/mmol注意事

5、項(xiàng)！注意事項(xiàng)！ 本實(shí)驗(yàn)要求的鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液為本實(shí)驗(yàn)要求的鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液為0.05mol/L，由，由于標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的濃度太小，如果直接配制會導(dǎo)致誤于標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的濃度太小，如果直接配制會導(dǎo)致誤差過大，最終影響實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。因此，我們在配制標(biāo)差過大，最終影響實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。因此，我們在配制標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液時(shí)選用了稀釋法。首先配制準(zhǔn)滴定溶液時(shí)選用了稀釋法。首先配制0.5mo/L的鹽的鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液，然后用無水碳酸鈉標(biāo)定此溶液，最酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液，然后用無水碳酸鈉標(biāo)定此溶液，最后將標(biāo)定得出的數(shù)據(jù)除以后將標(biāo)定得出的數(shù)據(jù)除以10，得出的最終結(jié)果為實(shí)驗(yàn)，得出的最終結(jié)果為實(shí)驗(yàn)所需鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的濃度。所需鹽酸標(biāo)準(zhǔn)

6、滴定溶液的濃度。 本實(shí)驗(yàn)所用的鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液，是用我們配制本實(shí)驗(yàn)所用的鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液，是用我們配制的的0.5mol/L的鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定液稀釋的鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定液稀釋10倍所配成的。倍所配成的。蛋白質(zhì)測定的分析步驟：蛋白質(zhì)測定的分析步驟： 1、 樣品處理：樣品處理：精密稱精密稱取取2g樣品移入干燥的樣品移入干燥的500ml定氮瓶中，加入定氮瓶中，加入0.2g硫酸硫酸 銅，銅，6g硫酸鉀及硫酸鉀及20毫升硫毫升硫酸，稍搖勻后放入消化爐中酸，稍搖勻后放入消化爐中消化，至液體呈藍(lán)綠色澄清消化，至液體呈藍(lán)綠色澄清透明后，再繼續(xù)加熱透明后，再繼續(xù)加熱0.5小小時(shí)。取下放冷，小心加時(shí)。取下放冷，小心加20ml

7、水，放冷后，移入水，放冷后，移入100ml容量瓶中，并用少量容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混勻瓶中，再加水至刻度，混勻備用。取與處理樣品相同量備用。取與處理樣品相同量的硫酸銅、硫酸鉀、硫酸銨的硫酸銅、硫酸鉀、硫酸銨同一方法做試劑空白試驗(yàn)。同一方法做試劑空白試驗(yàn)。樣品消化樣品消化蒸餾蒸餾滴定滴定2、安裝好定氮裝置、安裝好定氮裝置：于水蒸氣發(fā)生器內(nèi)裝水：于水蒸氣發(fā)生器內(nèi)裝水約約2/3處加甲基紅指示劑數(shù)滴及數(shù)毫升硫酸，處加甲基紅指示劑數(shù)滴及數(shù)毫升硫酸，以保持水呈酸性以保持水呈酸性，加入數(shù)粒玻璃珠以防暴沸，加入數(shù)粒玻璃珠以防暴沸，用調(diào)壓器控制，加

8、熱煮沸水蒸氣發(fā)生瓶內(nèi)的水。用調(diào)壓器控制，加熱煮沸水蒸氣發(fā)生瓶內(nèi)的水。3、蒸餾：、蒸餾： 想接收瓶內(nèi)加入想接收瓶內(nèi)加入10ml 2%硼酸溶液硼酸溶液及混合指示劑及混合指示劑1滴，并使冷凝管的下端插入液滴，并使冷凝管的下端插入液面下，吸取面下，吸取10.0ml樣品消化液由小玻璃杯流入樣品消化液由小玻璃杯流入反應(yīng)室，并以反應(yīng)室，并以10ml水洗滌小燒杯使流入反應(yīng)室水洗滌小燒杯使流入反應(yīng)室內(nèi)，塞緊小玻璃杯的棒狀玻璃塞。將內(nèi)，塞緊小玻璃杯的棒狀玻璃塞。將10ml 40%氫氧化鈉溶液倒入小玻璃杯，提起玻璃塞氫氧化鈉溶液倒入小玻璃杯，提起玻璃塞使其緩慢流入反應(yīng)室，立即將玻璃蓋塞緊，并使其緩慢流入反應(yīng)室，立即

9、將玻璃蓋塞緊，并加水于小玻璃杯以防漏氣。夾緊螺旋夾，開始加水于小玻璃杯以防漏氣。夾緊螺旋夾，開始蒸餾，蒸氣通入反應(yīng)室使氨通過冷凝管而進(jìn)入蒸餾，蒸氣通入反應(yīng)室使氨通過冷凝管而進(jìn)入接收瓶內(nèi)，蒸餾接收瓶內(nèi)，蒸餾5min。然后。然后移動接收瓶，使移動接收瓶，使冷凝管下端離開液皿，再蒸餾冷凝管下端離開液皿，再蒸餾1min，然后用，然后用少量水沖洗冷凝管下端外部。少量水沖洗冷凝管下端外部。取下接收瓶，以取下接收瓶，以0.05mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液定至鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液定至灰色或藍(lán)紫色灰色或藍(lán)紫色為為終點(diǎn)。終點(diǎn)。同時(shí)吸取同時(shí)吸取10.0ml試劑空白消化液按試劑空白消化液按3操作。操作?；亓餮b置020103實(shí)驗(yàn)過程

10、視頻結(jié)果計(jì)算100100100140. 0)(21FmcVVX式中：式中：X：樣品中蛋白質(zhì)的含量，：樣品中蛋白質(zhì)的含量，g；V1：樣品消耗硫酸或鹽酸標(biāo)準(zhǔn)液的體積，：樣品消耗硫酸或鹽酸標(biāo)準(zhǔn)液的體積，ml；V2：試劑空白消耗硫酸或鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，：試劑空白消耗硫酸或鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，ml；N：硫酸或鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的當(dāng)量濃度；：硫酸或鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的當(dāng)量濃度；0.014：1N硫酸或鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液硫酸或鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液1ml相當(dāng)于氮克數(shù)；相當(dāng)于氮克數(shù)；m：樣品的質(zhì)量（體積），：樣品的質(zhì)量（體積），g（ml）；）；F：氮換算為蛋白質(zhì)的系數(shù)。：氮換算為蛋白質(zhì)的系數(shù)。蛋白質(zhì)結(jié)果分析蛋白質(zhì)結(jié)果分析（1）QB/T

11、2132-2008規(guī)定植物蛋白飲料豆奶（豆?jié){）和豆奶飲規(guī)定植物蛋白飲料豆奶（豆?jié){）和豆奶飲料中蛋白質(zhì)的含量應(yīng)大于或等于料中蛋白質(zhì)的含量應(yīng)大于或等于2.0/100ml，而我們測得的結(jié)果為，而我們測得的結(jié)果為2.09g/100ml。符合標(biāo)準(zhǔn)要求，為合格品。符合標(biāo)準(zhǔn)要求，為合格品。（2）本次實(shí)驗(yàn)的只有兩個(gè)樣品消化成功，為了減少誤差，我們用）本次實(shí)驗(yàn)的只有兩個(gè)樣品消化成功，為了減少誤差，我們用一個(gè)成功樣品做了一個(gè)成功樣品做了3次平行實(shí)驗(yàn)。次平行實(shí)驗(yàn)。注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)（1）硝化時(shí)如不容易呈透明溶液，可將定氮瓶放冷后，慢慢加）硝化時(shí)如不容易呈透明溶液，可將定氮瓶放冷后，慢慢加入入30%過氧化氫（過氧化氫（

12、H2O2）2-3ml，促使氧化。，促使氧化。 （2） 在整個(gè)消化過程中，不要用強(qiáng)火在整個(gè)消化過程中，不要用強(qiáng)火。保持和緩的沸騰，使火。保持和緩的沸騰，使火力集中在凱氏瓶底部，以免附在壁上的蛋白質(zhì)在無硫酸存在的情力集中在凱氏瓶底部，以免附在壁上的蛋白質(zhì)在無硫酸存在的情況下，使氮有損失。況下，使氮有損失。消化時(shí)應(yīng)注意不時(shí)轉(zhuǎn)動凱氏燒瓶，以便利用消化時(shí)應(yīng)注意不時(shí)轉(zhuǎn)動凱氏燒瓶，以便利用冷凝酸液將附在瓶壁上的固體殘?jiān)聪?，促進(jìn)其消化完全冷凝酸液將附在瓶壁上的固體殘?jiān)聪?，促進(jìn)其消化完全。 （3） 如硫酸缺少，過多的硫酸鉀會引起氨的損失，這樣會形成如硫酸缺少，過多的硫酸鉀會引起氨的損失，這樣會形成硫酸氫鉀，而不與氨作用。因此，當(dāng)硫酸過多的被消耗或樣品中硫酸氫鉀，而不與氨作用。因此，當(dāng)硫酸過多的被消耗或樣品中脂肪含量過高時(shí)，要增加硫酸的量。脂肪含量過高時(shí)，要增加硫酸的量。 （4） 向蒸餾瓶中加入濃堿時(shí)，往往出現(xiàn)褐色沉淀物，這是由于分向蒸餾瓶中加入濃堿時(shí)，往往出現(xiàn)褐色沉淀物，這是由于分解促進(jìn)堿與加入的硫酸銅反應(yīng)，生成氫氧化銅，經(jīng)加熱后又分解生解促進(jìn)堿與加入的硫酸銅反應(yīng)，生成氫氧化銅，經(jīng)加熱后又分解生成氧化銅的沉淀。有時(shí)銅離子與氨作用，生成深成氧化銅的沉淀。有時(shí)銅離子與氨作用，生成深l藍(lán)色的結(jié)合物藍(lán)色的結(jié)合物Cu(NH3)42+. （5）蒸餾完畢后，應(yīng)先