高效液相色譜系統(tǒng)ppt

1、高壓泵進(jìn)樣器檢測器色譜工作站色譜柱儲(chǔ)液瓶一個(gè)存放流動(dòng)相的容器。其結(jié)構(gòu)材料必須對流動(dòng)相是化學(xué)惰性的，常用的溶劑儲(chǔ)液瓶的材料應(yīng)耐腐蝕，可為玻璃、不銹鋼、氟塑料、特種塑料聚醚醚酮(PEEK)或聚四氟乙烯襯里不銹鋼容器等，貯液罐容積一般為0.52 L 儲(chǔ)液瓶儲(chǔ)液瓶輸液系統(tǒng)功能：輸液系統(tǒng)功能：溶劑輸送溶劑輸送目標(biāo)：目標(biāo)：穩(wěn)定穩(wěn)定準(zhǔn)確準(zhǔn)確重要指標(biāo)：重要指標(biāo)：耐壓能力耐壓能力壓力脈動(dòng)壓力脈動(dòng)流量精密度流量精密度流量準(zhǔn)確性流量準(zhǔn)確性高壓輸液泵高壓輸液泵柱柱雙柱塞往復(fù)式并聯(lián)泵雙柱塞往復(fù)式并聯(lián)泵柱柱雙柱塞往復(fù)式串聯(lián)泵雙柱塞往復(fù)式串聯(lián)泵項(xiàng)目Waters 515型Agilent 1100型LC-10ATvp型Elit

2、e P200 II型LC-5500型檢定要求流速范圍0.001100.001100.0019.9990.014.990.014.99調(diào)節(jié)精度0.0010.0010.0010.010.01流量精密度RSD 0.1%0.15%（0.3%）0.3%0.5%0.5%1.5%流量準(zhǔn)確度1.0%1.0%2.0%5.0%1.0%2.0%最高壓力4000 Psi40 MPa39.2 MPa40.0 MPa40MPa 隔膜進(jìn)樣 停留進(jìn)樣 閥進(jìn)樣 自動(dòng)進(jìn)樣 對進(jìn)樣器的要求 密封性好 死體積小 重復(fù)性好 保證中心進(jìn)樣 進(jìn)樣時(shí)對色譜系統(tǒng)的壓力、流量影響小 一般HPLC分析常用六通進(jìn)樣閥（以美國Rheodyne公司的7

3、725和7725i型最常見），其關(guān)鍵部件由圓形密封墊（轉(zhuǎn)子）和固定底座（定子）組成。耐高壓（3540MPa），進(jìn)樣量準(zhǔn)確，重復(fù)性好，操作方便 分離系統(tǒng)分離系統(tǒng)功能：功能：組分分離組分分離目標(biāo)：目標(biāo)：分辨力強(qiáng)分辨力強(qiáng)效率高效率高色譜柱液相色譜柱液相色譜柱是高效液相色譜儀的核心部分，是分析好壞、成敗的關(guān)鍵 鍵合相: 反相: 70%; C18, 65%; C8, 15%; 苯基柱 5%, 正相: 20%; 硅膠、 -NH2、 -CN、-OH 其它 (手性柱, 離子交換柱): 10% 反相色譜是目前應(yīng)用得最為廣泛的高效液相色譜方法。 C18 和 C8 在反相色譜中應(yīng)用得最為廣泛。檢測器檢測器功能功能：

4、檢測組分濃度檢測組分濃度目標(biāo)：目標(biāo)：準(zhǔn)確準(zhǔn)確檢出限檢出限低低重要指標(biāo)：重要指標(biāo)：噪聲、漂移、線性、檢出限噪聲、漂移、線性、檢出限 紫外檢測器（包括二極紫外檢測器（包括二極管陣列檢測器）管陣列檢測器） 熒光檢測器熒光檢測器 示差折光檢測器示差折光檢測器 電導(dǎo)檢測器電導(dǎo)檢測器 蒸發(fā)光散射檢測器蒸發(fā)光散射檢測器v原理：基于被分析組分對特定波長紫外光原理：基于被分析組分對特定波長紫外光的選擇性吸收的選擇性吸收v定量基礎(chǔ)：朗伯定量基礎(chǔ)：朗伯-比耳定律，比耳定律，AKCLv優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)： 1）靈敏度高）靈敏度高 2）對溫度和流速不敏感）對溫度和流速不敏感 3）可用于梯度洗提）可用于梯度洗提v缺點(diǎn)：僅適用于測

5、定有紫外吸收的物質(zhì)缺點(diǎn)：僅適用于測定有紫外吸收的物質(zhì)樣品池樣品池二極管陣列二極管陣列光柵光柵D2 / W 燈燈每一組分可在每一波每一組分可在每一波長處得到一吸光度值長處得到一吸光度值二極管陣列檢測器二極管陣列檢測器二極管陣列檢測器二極管陣列檢測器1）采集三維譜圖）采集三維譜圖2）峰純度檢驗(yàn)）峰純度檢驗(yàn)3）光譜庫檢索）光譜庫檢索4）可以發(fā)現(xiàn)單波長檢測時(shí)未測到的峰）可以發(fā)現(xiàn)單波長檢測時(shí)未測到的峰大多數(shù)有機(jī)化合物有一定程度的吸光度，所以大多數(shù)有機(jī)化合物有一定程度的吸光度，所以紫紫外外-可見檢測器可見檢測器可以測定大多數(shù)的化合物，是目可以測定大多數(shù)的化合物，是目前實(shí)驗(yàn)室中使用最多的檢測器前實(shí)驗(yàn)室中使用

6、最多的檢測器 -多數(shù)公司售出的檢測器中多數(shù)公司售出的檢測器中75%以上是吸以上是吸光度檢測器（其中光度檢測器（其中50%以上是紫外以上是紫外-可見檢可見檢測器，測器，25%是是PDA）v原理：連續(xù)測定流通池中溶液折射率來測定試原理：連續(xù)測定流通池中溶液折射率來測定試樣中各組分濃度。樣中各組分濃度。v優(yōu)點(diǎn)：通用型檢測器，優(yōu)點(diǎn)：通用型檢測器，v缺點(diǎn)：缺點(diǎn)：1）對溫度變化敏感）對溫度變化敏感2）對溶劑組成變化敏感，不能用于梯度檢測）對溶劑組成變化敏感，不能用于梯度檢測3）屬于中等靈敏度的檢測器）屬于中等靈敏度的檢測器v原理：根據(jù)物質(zhì)在某些介質(zhì)中電離后所產(chǎn)生的原理：根據(jù)物質(zhì)在某些介質(zhì)中電離后所產(chǎn)生的電

7、導(dǎo)變化來測定電離物質(zhì)含量。廣泛應(yīng)用于離電導(dǎo)變化來測定電離物質(zhì)含量。廣泛應(yīng)用于離子色譜法子色譜法v優(yōu)點(diǎn)：對流動(dòng)相流速和壓力的改變不敏感，可優(yōu)點(diǎn)：對流動(dòng)相流速和壓力的改變不敏感，可用于梯度洗脫用于梯度洗脫v缺點(diǎn)：對溫度變化敏感（每升高缺點(diǎn)：對溫度變化敏感（每升高1度，電導(dǎo)率度，電導(dǎo)率增加增加2%-2.5%)v主要用于離子色譜檢測水溶性無機(jī)和有機(jī)離子主要用于離子色譜檢測水溶性無機(jī)和有機(jī)離子 通用型檢測器（適合通用型檢測器（適合于揮發(fā)性比流動(dòng)相低于揮發(fā)性比流動(dòng)相低的任何組分）；響應(yīng)的任何組分）；響應(yīng)值與組分質(zhì)量有關(guān)；值與組分質(zhì)量有關(guān)；可用于梯度洗脫可用于梯度洗脫HPLC柱柱噴霧氣體噴霧氣體蒸發(fā)漂移管蒸

8、發(fā)漂移管激光光源激光光源樣品液滴樣品液滴光二極管檢測器光二極管檢測器散射室散射室工作站工作站數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)功能功能：采集處理數(shù)據(jù)采集處理數(shù)據(jù)目標(biāo)：目標(biāo)：使用便捷使用便捷功能完善功能完善HPLC有等強(qiáng)度(isocratic)和梯度(gradient)洗脫兩種方式 等度洗脫是在同一分析周期內(nèi)流動(dòng)相組成保持恒定，適合于組分?jǐn)?shù)目較少，性質(zhì)差別不大的樣品 梯度洗脫是在一個(gè)分析周期內(nèi)程序控制流動(dòng)相的組成，如溶劑的極性、離子強(qiáng)度和pH值等，用于分析組分?jǐn)?shù)目多、性質(zhì)差異較大的復(fù)雜樣品 比例閥檢測器進(jìn)樣器ABCD色譜柱色譜柱高壓輸液泵低壓梯度 阻尼器 混合器高壓輸液泵檢測器進(jìn)樣器色譜柱色譜柱梯度混合器

9、高壓輸液泵高壓梯度 優(yōu)點(diǎn) 縮短分析時(shí)間 增加分離能力 提高檢測靈敏度 缺點(diǎn) 儀器設(shè)備要求高 不適合某些檢測方式(RI) 柱需再生平衡 定量分析的重復(fù)性較低 注意溶劑的互溶性，不相混溶的溶劑不能用作梯度洗脫的流動(dòng)相 所用的溶劑純度要求高 所用的溶劑要徹底脫氣，防止混合時(shí)產(chǎn)生氣泡 混合溶劑的黏度常隨組成而變化，因而在梯度洗脫時(shí)常出現(xiàn)壓力變化 每次梯度洗脫后必須對色譜柱進(jìn)行再生處理，使其恢復(fù)初始狀態(tài) 管路與連接件 脫氣裝置：在線脫氣機(jī)或超聲波清洗器 過濾器：溶劑過濾器和針筒式過濾器 進(jìn)樣器：平頭進(jìn)樣器 不銹鋼管：耐腐蝕性好，有精密的同軸度，一般用于高壓部分 聚合物管：用在液相色譜系統(tǒng)中從儲(chǔ)液瓶到泵、

10、檢測器出口以后和進(jìn)樣器排液口等低壓部分 PEEK（聚醚醚酮）管：是一種耐高溫、高性能的工程塑料，具有良好的惰性，適宜于生物樣品的分離分析 連接件也稱接頭 一般可分為兩種：高壓接頭和低壓接頭 高壓接頭采用不銹鋼材質(zhì) 低壓接頭采用高聚物材質(zhì) 連接件主要有卡套和空心螺釘超聲波清洗器 通過超聲波作用使流動(dòng)相中的氣泡排除，超聲脫氣效率只有2030左右在線脫氣機(jī) 脫氣效果好，脫氣效率大于70，在線脫氣機(jī)使用方便、省事，尤其是在作梯度洗脫時(shí)最好用在線脫氣機(jī)。溶劑過濾器 為了除去流動(dòng)相中的雜質(zhì)，對流動(dòng)相進(jìn)行過濾 溶劑過濾器要配濾膜（有機(jī)系和水系，規(guī)格0.45m或更小孔徑的濾膜）針筒式過濾器 樣品溶液在進(jìn)入色譜

11、系統(tǒng)前必須經(jīng)過針筒式過濾器 針筒式過濾器也分為有機(jī)系和水系，規(guī)格0.45m或更小孔徑的 液相色譜的進(jìn)樣器必須是平頭進(jìn)樣器 常配的進(jìn)樣器規(guī)格為10、25、50、100 L 最常使用的為50 L和100 L的進(jìn)樣器 P-101型高壓液相平流泵由泵體、過濾器、緩沖器、步進(jìn)電機(jī)、步進(jìn)電機(jī)驅(qū)動(dòng)器、控制電路板、鍵盤以及液晶顯示器等部件構(gòu)成 技術(shù)指標(biāo)技術(shù)指標(biāo)1 流量精密度： 0.5 壓力脈動(dòng)： 1主要特點(diǎn)主要特點(diǎn) 采用雙柱塞交替輸液吸液，特殊設(shè)計(jì)的非圓凸輪運(yùn)動(dòng)曲線，保證輸出液體流速穩(wěn)定 精密電機(jī)及電路設(shè)計(jì)，實(shí)現(xiàn)流量控制和流速的穩(wěn)定性 壓力傳感器避免了過壓對色譜柱和泵的意外損害 性能良好的阻尼器有效消除了輸液

12、脈沖 采用LCD帶背光的顯示屏來顯示泵的設(shè)置參數(shù)和運(yùn)行參數(shù)。 梯度洗脫流量程序智能化，流量準(zhǔn)確主機(jī)包括兩部分：主機(jī)包括兩部分：技術(shù)指標(biāo)：技術(shù)指標(biāo)： 溫度控制范圍：室溫1080 溫度控制精度：1功能特點(diǎn)：功能特點(diǎn)： 控溫精度準(zhǔn)確 更換色譜柱方便 分析結(jié)果重現(xiàn)性好 保證檢測穩(wěn)定性技術(shù)指標(biāo)：技術(shù)指標(biāo)： 波長范圍：190650nm 波長精度: 2nm 波長重復(fù)性:優(yōu)于2nm 基線噪聲：110-4AU 基線漂移：510-4AU/h 光譜帶寬：8nm 流通池體積：5ul 最小檢測濃度：410-8g/mL (萘的甲醇溶液) 功能特點(diǎn)：功能特點(diǎn)： 使用波長范圍寬 波長精度準(zhǔn)確 能夠?qū)崿F(xiàn)多波長測定功能特點(diǎn)：功能

13、特點(diǎn)： 具有儀器控制系統(tǒng)、數(shù)據(jù)采集和處理系統(tǒng)； 可進(jìn)行波長程序控制 可設(shè)定柱溫 可對兩臺(tái)泵進(jìn)行程序控制，進(jìn)行梯度洗脫 在線脫氣機(jī)主要由真空泵、脫氣膜管、傳感器、控制電路、真空腔等組成 在線脫氣機(jī)的主要目的是脫除流動(dòng)相中的氣泡技術(shù)指標(biāo)技術(shù)指標(biāo)1 流量精密度： 0.5 壓力脈動(dòng)： 1主要特點(diǎn)主要特點(diǎn) 采用雙柱塞交替輸液吸液，特殊設(shè)計(jì)的非圓凸輪運(yùn)動(dòng)曲線，保證輸出液體流速穩(wěn)定 精密電機(jī)及電路設(shè)計(jì)，實(shí)現(xiàn)流量控制和流速的穩(wěn)定性 壓力傳感器避免了過壓對色譜柱和泵的意外損害 性能良好的阻尼器有效消除了輸液脈沖 采用LCD帶背光的顯示屏來顯示泵的設(shè)置參數(shù)和運(yùn)行參數(shù)。 梯度洗脫流量程序智能化，流量準(zhǔn)確技術(shù)指標(biāo)：技術(shù)指標(biāo)： 溫度控制范圍：580 溫度控制精度：0.2 溫度設(shè)定值誤差： 0.5功能特點(diǎn)： 控溫精度準(zhǔn)確 分析結(jié)果重現(xiàn)性好 保證檢測穩(wěn)定性 采用LCD帶背光的顯示屏來顯示柱溫的設(shè)置和運(yùn)行溫度 既可升溫也可降溫，能滿足一些特殊用戶的需求技術(shù)指標(biāo)： 波長范圍：190650nm 波長精度: 0.2nm 波長重復(fù)性:優(yōu)于0.2nm 基線噪聲：610-5A