北京豐臺家教網(wǎng)北京豐臺輔導(dǎo)網(wǎng)_圖文

1、在北京找家教老師，首選尚才家教網(wǎng)，品牌家教，正確選擇！ 尚才家教網(wǎng)介紹 尚才家教網(wǎng)是北京一對一家教權(quán)威品牌！ 北京最佳十大家教機(jī)構(gòu)！ 北京一對一上門家教 領(lǐng)航！ 上萬師資，服務(wù)全北京！ 尚才家教網(wǎng)依托清華、北大、北師大等高校優(yōu)秀大學(xué)生及海淀、東城、西城各區(qū)重點(diǎn)一 線名師，以優(yōu)質(zhì)的家教信息服務(wù)、強(qiáng)大的師資陣容、領(lǐng)先的教師認(rèn)證管理系統(tǒng)，面向北京廣 大學(xué)生和家長，力爭打造北京家教行業(yè)最權(quán)威、最專業(yè)、最貼心、最值得信賴的一對一家教 品牌！本著誠實(shí)、守信、全心全意服務(wù)于廣大學(xué)員和教員的精神，以獨(dú)特的品牌文化內(nèi)涵、 多樣化教育思路，制定一對一個性化教學(xué)計(jì)劃，激發(fā)學(xué)生潛能，引導(dǎo)學(xué)生獨(dú)特的創(chuàng)造力，靈 活而快速

2、的提高成績， 以正確心態(tài)輕松面對小升初、 中高考， 贏得了家長和學(xué)生的一致認(rèn)可。 授課特點(diǎn) 以點(diǎn)撥和激發(fā)學(xué)生的創(chuàng)造性思維和學(xué)習(xí)積極性為授課特點(diǎn)， 依據(jù)學(xué)生的自身特點(diǎn)， 為學(xué) 生“量身打造”一種切合自身的學(xué)習(xí)方法。讓學(xué)生由“要我學(xué)”變?yōu)椤拔乙獙W(xué)”，變枯燥為興趣， 激發(fā)學(xué)習(xí)動力，提高學(xué)習(xí)成績。 雄厚師資 北京市重點(diǎn)中學(xué)一線教師，清華、北大、北師大等名牌大學(xué)生。數(shù)萬師資，服務(wù) 全北京！ 授課方式 一對一上門家教 授課目的 鞏固基礎(chǔ)知識、激發(fā)孩子學(xué)習(xí)興趣，強(qiáng)化解題思路，掌握學(xué)習(xí)方法，拔高學(xué)習(xí)成績。 一對一上門家教的優(yōu)勢 1） 省時。節(jié)省學(xué)生路途時間，學(xué)生時間比較緊張，上門家教最大限度地為學(xué)生節(jié)省時 間

3、 2） 省錢。課時費(fèi)用低，無辦公場所成本，無豪華宣傳單成本，為家長節(jié)省資金。 3） 安全。避免學(xué)生在外上課的一切安全隱患。 4） 有效監(jiān)督。家長可隨時在教學(xué)現(xiàn)場監(jiān)督整個教學(xué)過程，避免個別教師糊弄孩子。 5） 針對性強(qiáng)，可及時查缺補(bǔ)漏。學(xué)習(xí)更具互動性，學(xué)生和老師隨時進(jìn)行交流，學(xué)生有 任何問題都可以及時向老師反饋并及時聽老師解答， 學(xué)習(xí)效率自然會大大提高。 上課時間更 為靈活，可根據(jù)具體情況適度調(diào)整上課時間，一對一教學(xué)時間的可調(diào)性，受到學(xué)生的歡迎。 家教課時費(fèi)參考標(biāo)準(zhǔn) 語/數(shù)/英/理/化/生 （每小時） 小學(xué) 初中 高中 普通高校大學(xué)生/研究生 重點(diǎn)高校大學(xué)生/研究生 星級教員（大學(xué)生或研究生）

4、離/退/進(jìn)修/專職家教 在職教師 重點(diǎn)中學(xué)教師 星級教員（在職老師） 周末及寒暑假陪讀 藝術(shù)體育類（每小時） 35 元40 元 40 元50 元 45 元50 元 60 元100 元 80 元100 元 100 元120 元 40 元45 元 45 元50 元 50 元60 元 45 元50 元 55 元60 元 60 元80 元 80 元100 元 100 元120 元 100120 元 120150 元 150 元180 元 180 元200 元 120 元150 元 150 元200 元 200 元300 元 按月、天結(jié)算或按照次數(shù)結(jié)算 樂器類 美術(shù) 體育 專業(yè)大學(xué)生 星級教員（大學(xué)生）

5、 專業(yè)教師/教練 80 元100 元 100 元120 元 120150 元 80 元 100 元 60 元80 元 70 元100 元 100 元120 元 80 元120 元 高等數(shù)學(xué)/計(jì)算機(jī)操作/網(wǎng)頁設(shè)計(jì)/圖像處理/程序設(shè)計(jì) （每小時） 專業(yè)大學(xué)生 專業(yè)教師/專業(yè)人士 語言類 （每小時） 成人英語 60 元80 元 80 元100 元 日/法/德/意/韓 一般大學(xué)生/研究生 星級教員（大學(xué)生） 專業(yè)教師/專業(yè)人士 海外歸國人員 外籍人士 備注： 50 元 60 元70 元 100 元120 元 100 元150 元 200 元 50 元60 元 60 元80 元 100 元150 元 1

6、20 元200 元 200 元300 元 1.尚才家教提供價(jià)格為客觀家教市場的行情價(jià)位。 具體價(jià)格會根據(jù)路程遠(yuǎn)近、 課程的難易程 度、家教時間等客觀因素會有所浮動。但不會有太大變化。 2.一般家教課時費(fèi)里面包含交通費(fèi)。 但如果學(xué)員地理位置過于偏僻或離教員過于遙遠(yuǎn)。 學(xué)員 要為教員支付交通費(fèi)。 在北京找家教老師，首選尚才家教網(wǎng)，品牌家教，正確選擇！ 尚才家教網(wǎng)介紹 尚才家教網(wǎng)是北京一對一家教權(quán)威品牌！ 北京最佳十大家教機(jī)構(gòu)！ 北京一對一上門家教 領(lǐng)航！ 上萬師資，服務(wù)全北京！ 尚才家教網(wǎng)依托清華、北大、北師大等高校優(yōu)秀大學(xué)生及海淀、東城、西城各區(qū)重點(diǎn)一 線名師，以優(yōu)質(zhì)的家教信息服務(wù)、強(qiáng)大的師資陣

7、容、領(lǐng)先的教師認(rèn)證管理系統(tǒng)，面向北京廣 大學(xué)生和家長，力爭打造北京家教行業(yè)最權(quán)威、最專業(yè)、最貼心、最值得信賴的一對一家教 品牌！本著誠實(shí)、守信、全心全意服務(wù)于廣大學(xué)員和教員的精神，以獨(dú)特的品牌文化內(nèi)涵、 多樣化教育思路，制定一對一個性化教學(xué)計(jì)劃，激發(fā)學(xué)生潛能，引導(dǎo)學(xué)生獨(dú)特的創(chuàng)造力，靈 活而快速的提高成績， 以正確心態(tài)輕松面對小升初、 中高考， 贏得了家長和學(xué)生的一致認(rèn)可。 授課特點(diǎn) 以點(diǎn)撥和激發(fā)學(xué)生的創(chuàng)造性思維和學(xué)習(xí)積極性為授課特點(diǎn)， 依據(jù)學(xué)生的自身特點(diǎn)， 為學(xué) 生“量身打造”一種切合自身的學(xué)習(xí)方法。讓學(xué)生由“要我學(xué)”變?yōu)椤拔乙獙W(xué)”，變枯燥為興趣， 激發(fā)學(xué)習(xí)動力，提高學(xué)習(xí)成績。 雄厚師資 北京

8、市重點(diǎn)中學(xué)一線教師，清華、北大、北師大等名牌大學(xué)生。數(shù)萬師資，服務(wù) 全北京！ 授課方式 一對一上門家教 授課目的 鞏固基礎(chǔ)知識、激發(fā)孩子學(xué)習(xí)興趣，強(qiáng)化解題思路，掌握學(xué)習(xí)方法，拔高學(xué)習(xí)成績。 一對一上門家教的優(yōu)勢 1） 省時。節(jié)省學(xué)生路途時間，學(xué)生時間比較緊張，上門家教最大限度地為學(xué)生節(jié)省時 間 2） 省錢。課時費(fèi)用低，無辦公場所成本，無豪華宣傳單成本，為家長節(jié)省資金。 3） 安全。避免學(xué)生在外上課的一切安全隱患。 4） 有效監(jiān)督。家長可隨時在教學(xué)現(xiàn)場監(jiān)督整個教學(xué)過程，避免個別教師糊弄孩子。 5） 針對性強(qiáng)，可及時查缺補(bǔ)漏。學(xué)習(xí)更具互動性，學(xué)生和老師隨時進(jìn)行交流，學(xué)生有 任何問題都可以及時向老師

9、反饋并及時聽老師解答， 學(xué)習(xí)效率自然會大大提高。 上課時間更 為靈活，可根據(jù)具體情況適度調(diào)整上課時間，一對一教學(xué)時間的可調(diào)性，受到學(xué)生的歡迎。 家教課時費(fèi)參考標(biāo)準(zhǔn) 語/數(shù)/英/理/化/生 （每小時） 小學(xué) 初中 高中 普通高校大學(xué)生/研究生 重點(diǎn)高校大學(xué)生/研究生 星級教員（大學(xué)生或研究生） 離/退/進(jìn)修/專職家教 在職教師 重點(diǎn)中學(xué)教師 星級教員（在職老師） 周末及寒暑假陪讀 藝術(shù)體育類（每小時） 35 元40 元 40 元50 元 45 元50 元 60 元100 元 80 元100 元 100 元120 元 40 元45 元 45 元50 元 50 元60 元 45 元50 元 55 元

10、60 元 60 元80 元 80 元100 元 100 元120 元 100120 元 120150 元 150 元180 元 180 元200 元 120 元150 元 150 元200 元 200 元300 元 按月、天結(jié)算或按照次數(shù)結(jié)算 樂器類 美術(shù) 體育 專業(yè)大學(xué)生 星級教員（大學(xué)生） 專業(yè)教師/教練 80 元100 元 100 元120 元 120150 元 80 元 100 元 60 元80 元 70 元100 元 100 元120 元 80 元120 元 高等數(shù)學(xué)/計(jì)算機(jī)操作/網(wǎng)頁設(shè)計(jì)/圖像處理/程序設(shè)計(jì) （每小時） 專業(yè)大學(xué)生 專業(yè)教師/專業(yè)人士 語言類 （每小時） 成人英語

11、60 元80 元 80 元100 元 日/法/德/意/韓 一般大學(xué)生/研究生 星級教員（大學(xué)生） 專業(yè)教師/專業(yè)人士 海外歸國人員 外籍人士 備注： 50 元 60 元70 元 100 元120 元 100 元150 元 200 元 50 元60 元 60 元80 元 100 元150 元 120 元200 元 200 元300 元 1.尚才家教提供價(jià)格為客觀家教市場的行情價(jià)位。 具體價(jià)格會根據(jù)路程遠(yuǎn)近、 課程的難易程 度、家教時間等客觀因素會有所浮動。但不會有太大變化。 2.一般家教課時費(fèi)里面包含交通費(fèi)。 但如果學(xué)員地理位置過于偏僻或離教員過于遙遠(yuǎn)。 學(xué)員 要為教員支付交通費(fèi)。 麥類作物學(xué)報(bào)

12、 2007 ,27 ( 6 :1143 - 1149 Jo urnal of Triticeae Crop s 小麥貯藏蛋白分子結(jié)構(gòu)及其研究技術(shù)進(jìn)展 3 董艷敏 , 李小輝 ,晏月明 ( 首都師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院遺傳與生物工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 , 北京 100037 : 小麥貯藏蛋白不僅是人類植物蛋白的重要來源 ,也是面粉加工品質(zhì)的決定因素 。盡管人們對面 摘 要 團(tuán)中二硫鍵的形成模式有了初步的認(rèn)識 ,但仍無法完整 、 準(zhǔn)確 、 系統(tǒng)地闡述面團(tuán)的產(chǎn)生機(jī)制 。為了給相關(guān)研究 提供參考 ,筆者介紹了蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)研究的主要技術(shù) , 如圓二色光譜技術(shù) 、 傅立葉2紅外光譜技術(shù) 、 掃描隧 道顯微鏡檢測技術(shù)

13、 、 原子力顯微鏡 、 核磁共振波譜技術(shù)和差示掃描量熱技術(shù)的原理及其特點(diǎn) ,綜述了近年來這 些技術(shù)應(yīng)用于小麥貯藏蛋白分子結(jié)構(gòu)研究方面的進(jìn)展 ,并討論了存在問題及其發(fā)展前景 。 關(guān)鍵詞 : 小麥 ; 貯藏蛋白 ; 核磁共振波譜 ; 圓二色譜 ; 掃描隧道顯微鏡 ; 原子力顯微鏡技術(shù) 中圖分類號 : S512. 1 ; S331 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 : A 文章編號 :100921041 ( 2007 0621143207 Advances in the Studies on the Molecular Structures of Wheat Storage Proteins and Related Re

14、search Technology DONG Yan2min , L I Xiao2hui , YAN Yue2ming ( College of Life Science , Capital Normal Universtt y , Beijing 100037 , China p hide band is discovered p rimarily , t he knowledge o n t he st ruct ure of do ugh is still limited. The mo2 lecular st ruct ural st udies for wheat storage

15、p roteins are helpf ul to investigate t he formatio n mechanism of do ugh and t hus p rovide t heoretical base for imp roving t he p ropert y of do ugh. So , t he molecular st ruct ural st udies for wheat storage p roteins are a major topic of st ruct ural biology in t he wo rld. This paper int ro d

16、uced t he p rincipals and character s of main techniques for p rotein st ruct ural st udies , such ar magnetic reso nance and differential scanning t hermal analysis , and so o n. The recent advances o n tages and p ro spect s were discussed. 的籽粒 。小麥?zhǔn)侵饕坦阮愖魑镏?, 占世界糧 食總產(chǎn)量的 30 % ,約一半的世界人口以小麥為主 食 。小麥胚

17、乳含有 10 % 15 %的蛋白質(zhì) , 因此是 人類重要的蛋白來源 。在所有禾谷類作物中小麥 as circular dichorism , fo urier t ransform inf rared spect ro met ry , scanning t unneling micro scope , nucle2 t hese techniques used for t he st udies of wheat storage p roteins were summarized , and t heir disadvan2 neling micro scope ; Ato mic forc

18、e micro scope Key words : Wheat ; Storage p roteins ; Nuclear magnetic reso nance ; Circular dichorism ; Scanning t un2 so t he key co mpo nent s in bread2making qualit y of flo ur . Alt ho ugh t he formatio n mechanism of disul2 Abstract : Wheat storage p roteins are not o nly t he important so urc

19、e of plant p rotein fo r people , but al2 人類食用的 70 % 的蛋白質(zhì)來源于糧食作物 面粉具有獨(dú)特的特性 , 即和面后能形成具有粘彈 性的面團(tuán) , 進(jìn)而可以制作面包 、 面條 、 饅頭以及各 種糕點(diǎn)等專用食品 。這種面粉品質(zhì)特性主要取決 于胚乳中貯藏蛋白 ( 主要包括醇溶蛋白和谷蛋白 的組成和含量 。醇溶蛋白由單體蛋白組成 , 多態(tài) 3 收稿日期 :2007205217 修回日期 :2007207225 基金項(xiàng)目 : 國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目 (30571154 ; 國家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目 (2006AA10Z186 。 作者簡介 : 董艷敏 (19

20、83 - ,女 ,在讀碩士 ,主要從事小麥蛋白質(zhì)組學(xué)研究 。 通訊作者 : 晏月明 (1960 - ,男 ,教授 ,博士生導(dǎo)師 ,主要從事小麥分子遺傳與蛋白質(zhì)組學(xué)研究 。 1144 麥 27 卷 類 作 物 學(xué) 報(bào) 第 性很高 ,分為、 、 四種不同類型 , 由 Gli21 位 點(diǎn)編碼 ,主要決定面團(tuán)的延展性 。谷蛋白由高 、 低 分子量谷蛋白亞基組成 , 具有廣泛的等位基因變 異 ,分別由 Glu21 和 Glu23 位點(diǎn)編碼 ,它們主要決 定面團(tuán)的彈性 。谷蛋白和醇溶蛋白通過分子間和 分子內(nèi)二硫鍵形成大聚合體和網(wǎng)狀結(jié)構(gòu) , 從而決 定不同的加工品質(zhì) 。麥貯藏蛋白多聚體被認(rèn)為是 自然界最大的

21、蛋白分子 , 其分子量可高達(dá)數(shù)千萬 道爾頓 1 。由于小麥貯藏蛋白組成的復(fù)雜性 , 目 前還沒有獲得直接的三維結(jié)構(gòu)信息 , 對其分子結(jié) 構(gòu)的了解主要根據(jù)不同亞基編碼基因推導(dǎo)的蛋白 質(zhì)序列特征來預(yù)測谷蛋白的多聚體結(jié)構(gòu) , 至今較 為廣泛接受的貯藏蛋白分子結(jié)構(gòu)模型由澳大利亞 Appels 教授建立 1 。 自 20 世紀(jì) 50 年代以來 , 蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)研 究就受到物理學(xué)家 、 化學(xué)家 、 生物學(xué)家的高度重 視 ,并取得了豐碩成果 。隨著新的實(shí)驗(yàn)技術(shù)的建 立和發(fā)展 ,蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)解析的數(shù)量呈指數(shù)增 長 ,目前已有上萬種蛋白的晶體結(jié)構(gòu)測定達(dá)到了 很高的分辨率 ,其中包括許多重要的蛋白或蛋白 復(fù)合

22、物 。 同時 , 這些技術(shù)也促進(jìn)了小麥貯藏蛋白 分子結(jié)構(gòu)研究的不斷深入 。本文擬就近年來蛋白 質(zhì)分子結(jié)構(gòu)研究技術(shù)的發(fā)展及其在小麥貯藏蛋白 方面的研究進(jìn)展作一綜述 , 目的是為相關(guān)研究提 供參考 。 比較嚴(yán)格 : 提取后要用相應(yīng)的酶除去核酸 ,純度應(yīng) 達(dá)到 95 %以上 , 并且不能含有非溶解物 3 , 溶劑 最好選用在蛋白有特定吸光值的波長處無吸收的 為佳 ,如在麥谷蛋白的檢測中一般選 p H 7. 5 的 磷酸緩沖液作為溶劑 , 且應(yīng)對不同的蛋白設(shè)定合 適的參數(shù) 。一般情況下蛋白質(zhì)分子的濃度對 CD 圖譜無顯著影響 , 濃度達(dá)到毫克級的前提下盡量 選擇較稀的 ,改變這個參數(shù)所得數(shù)據(jù)變化不大

23、,升 溫一般會降低蛋白質(zhì)在遠(yuǎn)紫外的吸收 , 也就是二 級結(jié)構(gòu)有所減少 47 ;p H 值則對 CD 圖譜有顯著 的影響 ,降低 p H 值一般會增加二級結(jié)構(gòu)單元 ,主 要為 2螺旋 , 而穩(wěn)定性也相應(yīng)的降低 8 , 但具生 物活性的除外 , 如一些酶類物質(zhì)有其最適值 。小 麥半乳糖醛酸酶抑制蛋白 ( P GIP 的活性受 p H 值和溫度影響降低時 , 二級結(jié)構(gòu)單元 折疊相應(yīng) 減少 9 。 小麥屬植物的氨基酸組成中 1B 型 醇溶蛋 白比 1D 型 醇溶蛋白含有較多的谷氨酰氨 , 而 脯氨酸的含量則相反 。DuPo nt 等利用圓二色譜 儀比較了小麥 B 型和 D 型兩種類型 醇溶蛋白 的二級

24、結(jié)構(gòu) 10 ,除在 200 nm 處 1D 型比 1B 型的 負(fù)吸收強(qiáng)度大一些之外 , 并無 顯著 差異 。比較 Bx7 亞基與 Bx20 亞基的基因序列 , 最大的差異 在 N2末端 ,Bx7 亞基為二半胱氨酸 ,而 Bx20 亞基 為酪氨酸 ,圓二色譜圖表明兩個亞基具有極為相 和 C2端后 ,再裂解對 CD 圖譜無影響 12 。直接的 ( 如利用超聲波 對蛋白質(zhì)分子進(jìn)行裂解 , CD 的 吸收會隨著裂解程度的加深而逐漸強(qiáng)烈 , 這主要 由于超聲波使蛋白質(zhì)分子中的二硫鍵斷開 , 而后 隨著分子折疊形成新鍵 , 即形成另外一種多聚 體 13 。Van Dijk 等 6 利用圓二色譜儀對干燥狀

25、態(tài)下的蛋白質(zhì)樣品進(jìn)行測定 , 發(fā)現(xiàn)在參數(shù)合適的 情況下 ,干燥狀態(tài) 1Bx6 比溶液中的吸收峰有所 增強(qiáng) ,并且呈右移狀態(tài) 。 1 圓二色光譜技術(shù) 目前 ,確定蛋白質(zhì)構(gòu)象最準(zhǔn)確的方法是 X2射 線晶體衍射 ,但很多蛋白質(zhì)因其結(jié)構(gòu)復(fù)雜 、 柔性較 大的特點(diǎn)使晶體結(jié)構(gòu)研究極為困難 。二維 、 多維 Greenfield 最早用 CD 光譜數(shù)據(jù)估計(jì)了蛋白質(zhì)的 構(gòu)象 。近年來用遠(yuǎn)紫外圓二色 ( Far2UV CD 數(shù)據(jù) 核磁共振技術(shù)能測出溶液狀態(tài)下較小蛋白質(zhì)的構(gòu) 象 ,可是對于分子量較大的蛋白質(zhì)的計(jì)算處理非 常復(fù) 雜 2 。相 比 之 下 , 圓 二 色 ( Circular dicho2 rism

26、, CD 光譜技術(shù)是研究稀溶液中蛋白質(zhì)構(gòu)象 的一 種 快 速 、 單 、 準(zhǔn) 確 的 方 法 。1969 年 , 簡 較 分析蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu) , 得到了更精確的數(shù)據(jù) 庫 2 。CD 光譜技術(shù)可以有效地檢測溶液狀態(tài)下 蛋白質(zhì)或多肽的構(gòu)象 , 遠(yuǎn)紫外 CD 數(shù)據(jù)快速的計(jì) 算稀溶液中蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu) 、 確定三級結(jié)構(gòu)的 類型 ,近紫外 CD 光譜可靈敏的反應(yīng)出芳香族氨 基酸殘基 、 二硫鍵的微變化 。 圓二色譜儀研究蛋白質(zhì)的構(gòu)象對樣品的要求 似的二級結(jié)構(gòu) ,同時改變尿素的濃度對蛋白質(zhì)溶 液在遠(yuǎn)紫外區(qū)的吸收無明顯影響 11 , 但在 1Dx5 亞基的研究中也發(fā)現(xiàn)尿素可以促進(jìn)多聚脯氨酸類 似結(jié)構(gòu)的形成

27、 ,并且增強(qiáng)其在遠(yuǎn)紫外區(qū)的吸收 4 。 切除對蛋白質(zhì)分子二級結(jié)構(gòu)起關(guān)鍵作用的 N2端 2 傅立葉2紅外光譜技術(shù) 1950 年 Elliot t 和 Ambro se 根據(jù)模型多肽的 結(jié)果提出了紅外酰氨 1 660 1 650 cm - 1 的 帶 峰屬于螺旋結(jié)構(gòu) , 1 6401 630 cm - 1 的峰屬于 第 6 期 董艷敏等 : 小麥貯藏蛋白分子結(jié)構(gòu)及其研究技術(shù)進(jìn)展 1145 折疊構(gòu)象的假設(shè) 14 , 成為當(dāng)時定性估計(jì)蛋白結(jié) 構(gòu)的主要方法 ,70 年代中期又發(fā)展了若干半定量 計(jì)算蛋白質(zhì)構(gòu)象的方法 。1983 年 Susi 和 Byler 首先將 F TI T 的二階導(dǎo)數(shù)理論應(yīng)用于蛋白質(zhì)

28、結(jié)構(gòu) 研究 ,1986 他們又將卷積法應(yīng)用于二級結(jié)構(gòu)分 析 , 使紅外分析蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)進(jìn)入定量化階 段。 由于水在酰氨 帶有一定的紅外吸收 , 在實(shí) 驗(yàn)中 一 般 采 用 重 水 體 系 進(jìn) 行 測 定 。Do ng 和 Caughey 等 15 對水溶液中酰氨 帶頻率進(jìn)行了 辨認(rèn) ,為研究水溶液中蛋白的構(gòu)象提供了依據(jù) 。 Belto n 等 利 用 傅 立 葉 紅 外 光 譜 ( Fo urier t ransform inf rared spect ro met ry , F T2IR 轉(zhuǎn)換儀 研究了小麥高分子量谷蛋白亞基 1Bx20 在不同 水化水平下的構(gòu)象 16 , 發(fā)現(xiàn)隨著水化水平

29、的提 高 , 2折疊及其擴(kuò)展結(jié)構(gòu)的數(shù)量呈增加趨勢 , 而在 乙醇溶解與干燥狀態(tài)下都比水合條件下少 , 所以 認(rèn)為谷蛋白的運(yùn)動性需要 2折疊 。 同時酰氨側(cè)鏈 介導(dǎo)的分子間的互作對于 2折疊起到穩(wěn)定作用 , 而且非烷基化蛋白分子間的二硫鍵能夠促進(jìn)環(huán)狀 結(jié)構(gòu)的增多 ,這些互作可能在決定麥谷蛋白的加 工特性 ( 如面包口感 、 面條韌性等 方面起決定作 用 。Shewry 等 11 比較了 1Bx7 和 1Bx20 兩個高 分子量谷蛋白亞基 , 二者在傅立葉紅外轉(zhuǎn)換儀上 所得圖譜極為相似 , 尿素的濃度對它們的影響都 不顯著 。Gilbert 等 4 也證明水合狀態(tài)下的 1Dx5 谷蛋白亞基比干燥狀

30、態(tài)下的富含更多的 2折疊 , 和鏈內(nèi)氫鍵 。同時推測 N2端和 C2端的非重復(fù)區(qū) 在 2折疊的形成過程中起重要作用 。 傅立 葉 變 換2離 子 回 旋 共 振 質(zhì) 譜 法 ( F T/ ICRMS 是離子回旋共振波譜法與現(xiàn)代計(jì)算機(jī)技 進(jìn)行了準(zhǔn)確定位 。 傅立葉2紅外光譜技術(shù) ( F T2IR 不受分子量 大小和光散射的影響 , 可以研究生理狀態(tài)下的蛋 白質(zhì)結(jié)構(gòu) ,與拉曼光譜一樣 ,紅外光譜也是振動光 譜 ,它們是研究分子間能級躍遷的兩種互補(bǔ)方法 。 拉曼光譜則主要體現(xiàn)了分子極化率的變化 , 而紅 外光譜則研究的是分子振動中偶極距的變化情 況 ,二者反映了蛋白質(zhì)和多肽中不同側(cè)面的信息 。 3

31、掃描隧道顯微鏡檢測技術(shù) 1982 年 , IBM Zurich 實(shí) 驗(yàn) 室 的 Binning 和 Ro hcer 研制 出 世 界 上 第 一 臺 掃 描 隧 道 顯 微 鏡 ( Scanning t unneling micro scope , S TM , 這標(biāo)志 著一種具有原子分辨率級別的空間成像技術(shù)的誕 生 20 。掃描隧道顯微鏡結(jié)束了間接驗(yàn)證蛋白質(zhì) 結(jié)構(gòu)的時代 ,可以真實(shí)了解蛋白質(zhì)表面在原子尺 度上的局域電子結(jié)構(gòu) 表面原子的排列圖像 。 利用 S TM 對蛋白質(zhì)進(jìn)行觀察時 , 首先要將 蛋白樣品滴在石墨基層上 。采用該技術(shù)對小麥高 分子量谷蛋白亞基 1Bx20 的早期研究發(fā)現(xiàn) 21

32、 ,其 厚度為 1. 2 nm , 在預(yù)測值 1. 95 nm 的 1/ 3 1/ 2 的范圍內(nèi) ,之所以比預(yù)測值小可能是由于蛋白質(zhì) 分子不是良好的導(dǎo)電子的緣故 , 因而介于合掃描 隧道顯微鏡鑒定技術(shù)在研究生物大分子的誤差范 圍 。根據(jù)光譜學(xué)和流體動力學(xué)的研究結(jié)果 , 高分 子量谷蛋白亞基中的螺旋狀超二級結(jié)構(gòu)的形成是 基于反向 2轉(zhuǎn)角的存在 , 這種螺旋狀超二級結(jié)構(gòu) 與彈性蛋白序列中重復(fù)出現(xiàn)的合成多聚五肽構(gòu)成 2螺旋的結(jié)構(gòu)極為相似 22 , 但谷蛋白高分子量亞 基中的這種結(jié)構(gòu)特征與彈性蛋白的彈性是否相關(guān) 聯(lián)還未能確定 。 S TM 能在較高的分辨率水平上觀察樣品在 不同環(huán)境下的三維結(jié)構(gòu) ,相對

33、于電鏡和 X2射線衍 射的樣品制作來說操作簡便易行 , 所需的樣品量 少 ,且成本較低 。 利用石墨為基層觀察蛋白質(zhì)的 表面特征 ,并不能得到蛋白本身的確切信息 ,而是 反映了蛋白質(zhì)與石墨基層結(jié)合后在其表面作為一 種導(dǎo)電體的面貌 。而且由于石墨層的特殊分子性 質(zhì)、 周期性 、 碎片及波紋類型以及穿過蛋白質(zhì)分子 表面緩慢而彎曲的流動特征 ,都表明在利用 S TM 研究生物分子的特征中 , 石墨不再是一種理想的 基層 23 。一種更能反映蛋白質(zhì)等樣品本身特性 的新型基層的開發(fā)是當(dāng)今掃描隧道顯微鏡研究的 熱點(diǎn)和難點(diǎn) 。 術(shù)結(jié)合的產(chǎn)物 17 ,此方法可以較準(zhǔn)確地測定蛋白 質(zhì)分 子 的 質(zhì) 量 及 氨

34、基 酸 序 列 , 應(yīng) 用 ESI/ F T/ ICRMS 和紅外多光子解離 ( IR multip hoto n dis2 sociatio n , IRM PD 可對一種糖激酶進(jìn)行分子量 和肽的一級結(jié)構(gòu)的精確測定 18 。此外 ,在蛋白質(zhì) 的翻譯后修飾的研究中也有廣泛的應(yīng)用 。Hasel2 mann 等 19 以外部累積的 ECD 技術(shù)成功地對 60 個氨基酸殘基中的 6 個 GalNAC ( N 乙酸半乳糖 氨 ,25 個氨基酸殘基中 5 個唾液酸和 6 個 O2連 接的 GalNAC 及 11 個氨基酸殘基中的硫酸基團(tuán) 4 原子力顯微鏡檢測技術(shù) 原子 力 顯 微 鏡 ( Ato mic

35、 force micro scope , A FM 是由 IBM 公司的 Binning 與斯坦福大學(xué)的 1146 麥 27 卷 類 作 物 學(xué) 報(bào) 第 Quate 于 1985 年發(fā)明的 。A FM 與 S TM 最大的 差別在于并非利用電子隧道效應(yīng) , 而是利用原子 間的范德華力 ( Van der waal s force 作用來呈現(xiàn) 樣品的表面特性 , 使非導(dǎo)體也可以采用掃描探針 顯微鏡 ( SPM 進(jìn)行觀測 。A FM 的系統(tǒng)結(jié)構(gòu)可以 分為三個部分 : 范德華力檢測部分 、 位置檢測部分 和反饋系統(tǒng) 。三部分交互作用將樣品的表面特性 以影像的方式呈現(xiàn)出來 24 ,25 , 其最大的優(yōu)

36、點(diǎn)是蛋 白質(zhì)晶體的形成過程可以不受外界干擾而被記錄 下來 ,對于研究大分子晶體的生長機(jī)制及其變化 現(xiàn)象十分有利 。 輕敲模式 ( Tapping mode , TM 成像技術(shù)在 用 A FM 觀察柔軟 、 、 粘連 易碎的樣品方面是一個 關(guān)鍵性進(jìn)步 。利用 TM 對麥谷蛋白進(jìn)行觀察發(fā) 現(xiàn) ,小麥中的蛋白質(zhì)表面形態(tài)對于粘彈性的變化 是極為敏感的 26 ,并且成功地獲得了醇溶谷蛋白 在云母表面的圖像 。一般情況下由于樣品處理過 程中的影響 , 可能導(dǎo)致蛋白表面的圖像呈現(xiàn)一致 方向 ,這可能是積壓造成的 ,而不是蛋白真實(shí)結(jié)構(gòu) 的體現(xiàn) ,需要進(jìn)一步的觀察 。觀測發(fā)現(xiàn)圖譜上出 現(xiàn)微波紋狀明暗相間的形狀

37、,表明 和 兩種蛋 白質(zhì)對于懸臂振蕩的影響上表現(xiàn)出不同的特性 , 雖然這兩種蛋白具有相似的彈性系數(shù) , 但表面粘 性的差異導(dǎo)致分子機(jī)制各異 。 同時 , 利用原子力 顯微鏡證實(shí)了早期的結(jié)論 ,即 谷蛋白比 谷蛋 白含有較多的親水性殘基 26 。 而且 ,用 A FM 對 和 兩種蛋白質(zhì)混合后進(jìn)行觀測 ,發(fā)現(xiàn)以適當(dāng)?shù)?比例混合能大大優(yōu)化蛋白間的互作 , 并能增加其 粘彈性 ,這就有可能通過提高或減弱面團(tuán)的粘性 和彈性以改進(jìn)食物的口感 。 早期的研究發(fā)現(xiàn) , 玉 米醇溶蛋白為棒狀或扁長橢球體結(jié)構(gòu) , 分子軸徑 比為 28 或 7 27 。 1 1 雖然它的精細(xì)結(jié)構(gòu)還有 待進(jìn)一步的觀察與研究 , 但

38、已為玉米醇溶蛋白的 工業(yè)利用奠定了很好的理論基礎(chǔ) , 提供了可能的 發(fā)展方向 28 。 5 核磁共振波譜技術(shù) 核磁共振波譜 ( Nuclear magnetic reso nance , NM R 成像術(shù)又叫磁共振成像術(shù) ,簡稱核磁共振 、 磁共振或核磁 ,它的全稱是核磁共振電子計(jì)算機(jī) 斷層掃描術(shù) ( 簡稱 M RI T 或者 M RI 。 C 核磁共 振是一種物理現(xiàn)象 ,早在 1946 年就被美國的布勞 克和相塞爾等人分別發(fā)現(xiàn) , 作為一種分析手段廣 泛應(yīng)用于物理 、 化學(xué)等領(lǐng)域 ,用作研究物質(zhì)的分子 結(jié)構(gòu) 。 核磁共振技術(shù)可以分析液態(tài)下的肽鏈結(jié) 構(gòu) , 這種方法繞過了結(jié)晶 、 2射線衍射成

39、像分析 X 等難點(diǎn) ,直接分析自然狀態(tài)下的蛋白質(zhì)的分子結(jié) 構(gòu) 29 。 Van Dijk 等 5 ,6 利用核磁共振方法研究了小 麥高分子量谷蛋白亞基中心重復(fù)區(qū)的結(jié)構(gòu)和特 征 ,發(fā)現(xiàn) 11 肽2 GYYP TSPQQ GA2由于含有 2 個 不具有酰氨質(zhì)子的脯氨酸 , 且在波譜中顯現(xiàn)出 9 個峰 ,暗示了該多肽存在兩種構(gòu)象 ,同時解釋了相 關(guān)的較寬的酰氨 30 。在該 11 肽中檢測到脯 帶 期的光譜學(xué)研究表明該亞基在烷基化與非烷基化 這兩種狀態(tài)下的運(yùn)動型具有顯著差別 , 即非烷基 化的蛋白分子呈緊密地球狀結(jié)構(gòu) , 而烷基化的則 為 線 性 排 列 , 并 且 容 易 形 成 一 長 股 16

40、 。而 在1 H T1 298 K 時 , 二樣品表現(xiàn)出很大的相似性 , 該結(jié)果在質(zhì)量上和數(shù)量上與大麥醇溶蛋白相似 , 而谷類蛋白與多糖原質(zhì)在13 C2NM R 的測定比較 發(fā)現(xiàn) , 高水化水平下多糖原質(zhì)表現(xiàn)出較高的運(yùn)動 性 ,可能是由于多糖原質(zhì)這種分枝狀的鏈狀結(jié)構(gòu) 使分子成一暢通結(jié)構(gòu) ,不易成聚集狀 16 。 利用核磁共振波譜技術(shù)得到小麥貯藏蛋白的 晶體結(jié)構(gòu)的想法還沒有實(shí)現(xiàn) , 因?yàn)楝F(xiàn)在核磁共振 波譜測定蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)大部分分子量范圍為 1 萬 3 萬 Da ,而小麥貯藏蛋白的低分子量亞基就達(dá) 4 萬多 Da , 高分子量甚至達(dá)到 8 萬多 Da ,并且結(jié)構(gòu) 比較復(fù)雜 , 較難形成晶體 , 進(jìn)一

41、步增加了研究難 度。 氨酸的兩種異構(gòu)體的典型振幅不同 , 在另一個多 肽中檢測到的典型振幅也不同 , 所以譜峰的重疊 次數(shù)是不能類推到其他肽段中去的 。Belto n 等利 用1 H2NM R 方法研究了小麥谷蛋白亞基 1Bx20 烷基化與非烷基化在水合狀態(tài)下的運(yùn)動性 31 ,早 6 差示掃描量熱技術(shù) 待測物質(zhì)和參比物質(zhì)置于等同的溫度條件下 , 建 立二者之間無溫差條件所需供給的能量對時間或 溫度記錄的一種方法 32 , 用 DSC 技術(shù)可測定熱 力學(xué)意義上的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性參數(shù) , 并可用熱力學(xué)的 標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證生物大分子的結(jié)構(gòu)模型 33 。球蛋白的 峰面積直接與峰寬有關(guān) , 吸熱峰的高度明顯地隨 蛋白

42、質(zhì)熱穩(wěn)定性的提高而增高 , 可以推斷在天然 和變性的球蛋白之間存在不穩(wěn)定的中間態(tài) , 這是 差示掃描量熱法 ( Differential scanning calo2 rimet ry , DSC 是指在可調(diào)節(jié)的升降溫環(huán)境中把 第 6 期 董艷敏等 : 小麥貯藏蛋白分子結(jié)構(gòu)及其研究技術(shù)進(jìn)展 1147 p hy 球蛋 白 最 基 本 的 性 質(zhì) 34 。 Ro bert so n 和 Mur2 35 認(rèn)為該方法是研究蛋白質(zhì)熱去折疊過程中 穩(wěn)定 中 間 態(tài) 存 在 及 其 特 征 信 息 的 最 佳 方 法 ; 時間與濕度對于面包的熱機(jī)品質(zhì)的影響 。 Vodovitz 36 等在 1996 年就利

43、用 DSC 技術(shù)研究了 酸環(huán)化酶的分子機(jī)制 。中國科學(xué)家在研究中利用 X 射線衍射技術(shù)也取得了顯著的成果 , Liu 42 等 首次揭示了菠菜光合系統(tǒng) 的主要設(shè)光復(fù)合體在 原子水平上的晶體結(jié)構(gòu) , 在 2. 72 。 分辨率下是由 A 7 其它技術(shù)的應(yīng)用 蛋白脂質(zhì)體排列而成的二十面體 , 從而證明了膜 蛋白是可以晶體化的 ;2005 年 Sun 43 等首次報(bào)道 了豬心線粒體呼吸膜蛋白復(fù)合體 的晶體結(jié)構(gòu) , 包括 2 個親水蛋白 ( 黃素蛋白和鐵硫蛋白 和 2 個 跨膜蛋白 ( CybL 和 CybS , 分辨率為 2. 4 。 以及 A 熒光探針技術(shù) ( Fluorescent p ro b

44、e 蛋白質(zhì)的 熒光分析能夠提供較多的參數(shù) , 從各個角度反映 蛋白分子的發(fā)光特性 。通過對這些參數(shù)的分析 , 不但可以進(jìn)行一般的定量測定 , 而且可以了解蛋 白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系 。蛋白質(zhì)翻譯后修飾 ( P T2 Ms 是目前蛋白質(zhì)組學(xué)的研究熱點(diǎn) , 在小麥蛋白 。 3. 5 A 分辨率下的帶有兩個抑制子的復(fù)雜結(jié)構(gòu) ,兩 個抑制子為 32硝基丙酸鹽 、 22噻吩甲酰三氟丙酮 。 提供了一個在原子水平上研究復(fù)合體 的線粒體 呼吸系統(tǒng)和泛醌還原機(jī)制較好的模式 。 近年來 , 國際上同步輻射光源發(fā)展很快 , 第 是將光子鑷和激光拉曼技術(shù)結(jié)合起來 , 應(yīng)用光子 鑷固定活細(xì)胞 ,同時應(yīng)用激光拉曼技術(shù)對活細(xì)

45、胞 進(jìn)行測定以研究細(xì)胞與細(xì)胞器中核酸 、 蛋白質(zhì)或 多糖類的含量與結(jié)構(gòu)變化 。 的研究中也不例外 , 利用蛋白質(zhì)的外源熒光 熒 光染料使麥貯藏蛋白被標(biāo)記 , 可研究其中是否存 在磷酸化 、 糖基化等翻譯后修飾 37 。 7. 1 激光拉曼光譜( Raman spectrometry 1928 年印度物理學(xué)家拉曼 ( Raman 發(fā)現(xiàn)該 發(fā)射光譜 ,每一種物質(zhì) ( 分子 都有自己特征的拉 曼光譜 ,利用拉曼光譜表征研究對象成為研究物 質(zhì)結(jié)構(gòu)的重要手段之一 38 。從麥貯藏蛋白的拉 曼光譜人們不但能夠得到它的氨基酸組成信息 , 還能進(jìn)一步了解某些二級結(jié)構(gòu) 、 主鏈 、 側(cè)鏈的構(gòu) 象 ,鏈內(nèi)基團(tuán)及共

46、價(jià)鍵的構(gòu)象變化 。當(dāng)對麥貯藏 蛋白進(jìn)行多種物理化學(xué)處理后 , 從其拉曼光譜可 以得知發(fā)生變化的基團(tuán) 、 相互作用的位點(diǎn)與模式 等 。所以在麥貯藏蛋白翻譯后修飾的研究中 , 拉 曼光譜法有可能發(fā)揮重要作用 。 X ray diffraction 2 7. 2 同步輻射 X 射線衍射技術(shù) ( Synchronization 1998 年 ,Mackinno n 等 26 首次得到膜蛋白離 子通道的結(jié)構(gòu) , 解出一種稱為 K + 通道的原子結(jié) 構(gòu) ,分辨率為 3. 2 。 Abrahams 等 39 用同步輻 。 A 。 射 X 射線衍射技術(shù) ,得到分辨率為 2. 80 A 的 F12 A TPas

47、e 晶體的三維結(jié)構(gòu) 。Larbright 40 等報(bào) 道 。 了分辨率為 2. 0 A 的異三聚體 G 蛋白結(jié)構(gòu)模型 , 研究表明 亞基中 3 個開關(guān)區(qū)在活化和鈍化狀態(tài) 時呈現(xiàn)的不同構(gòu)象 。J iang 41 等測定了腺苷酸化 酶復(fù)合物的 2. 3 。 分辨率的晶體結(jié)構(gòu) , 該結(jié)果第 A 一次給出了有關(guān)兩個信號蛋白分子在質(zhì)膜上相互 作用的三維圖像 ,并提出 G 蛋白 亞基激活腺苷 一、 第二代同步輻射光源穩(wěn)定運(yùn)行并不斷改進(jìn) ,第 三代同步輻射光源已經(jīng)投入運(yùn)行和使用 , 而三代 同步輻射光源都建有多條專用于生物大分子晶體 學(xué)結(jié)構(gòu)研究的光束線和實(shí)驗(yàn)站 , 結(jié)構(gòu)生物學(xué)已經(jīng) 成為同步輻射應(yīng)用中最重要的

48、研究領(lǐng)域之一 44 。 7. 3 激光光鑷技術(shù)( Optical t weezers , OT 光鑷 ( Optical t weezers 是用光捕陷阱 ( Opti2 cal t rap s 的手段來控制介質(zhì)顆粒的運(yùn)動 。對于 光鑷的研究已經(jīng)有二十多年的歷史 , 它是從光壓 引伸而來的 ,光壓概念的提出可以追溯到開普勒 和牛頓時代 ,但是光壓的存在和麥克斯韋對于輻 射壓力的理論預(yù)言在 20 世紀(jì)初葉才被實(shí)驗(yàn)所證 實(shí) 45 。 目前 ,光鑷技術(shù)主要應(yīng)用于研究生物大分子 的靜態(tài)力學(xué)特性 ,生物大分子的動力學(xué)特性 ,對生 物大分子進(jìn)行精細(xì)操作 , 分子水平上的特異性識 別和生命過程的調(diào)控以及納米

49、生物器件的組裝 。 此項(xiàng)技術(shù)在麥貯藏蛋白的研究中應(yīng)用還較少 , 有 待進(jìn)一步開發(fā)利用 。 單細(xì)胞光鑷?yán)庾V技術(shù)就 8 問題與展望 以上技術(shù)與方法是研究蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)與功 能最基本的手段 ,它們都有各自的長處和局限性 。 因而要全面深入地研究生物大分子 , 必須依賴于 1148 麥 27 卷 類 作 物 學(xué) 報(bào) 第 Protein exp ression and purification , 1994 , 5 :357 - 363. 8 Van Dijk A A , Swieten E , Kruize I T , et al . Physical charac2 ence , 1998 ,

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57、308. properties of HMW subunit 1Bx20 f ro m pasta wheat ( T ritic2 um d urum which is associated whit poor end use p roperties 多類儀器的綜合使用 46 ,47 。 各種光譜技術(shù)雖能顯 示麥貯藏蛋白多肽有用的結(jié)構(gòu)信息 ,但不夠直觀 ; X2射線方法和 NM R 技術(shù)雖能展示蛋白復(fù)合物的 三維圖像 ,但相變過程中的能量變化卻不能夠識 別 ,而差示掃描量熱技術(shù)可測得樣品在變溫環(huán)境 中的行為如玻璃化 、 聚合以及各種相變溫度和相 變熱等 ,對蛋白結(jié)合常數(shù)和焓變及熵變量有所評 估 ,因而 DSC 技術(shù)也是蛋白研究中不可或缺的手 段 。與以上間接研究手段相比較 , 新興的高分辨 率原子力顯微鏡和激光光鑷技術(shù)則顯現(xiàn)出明顯的 優(yōu)越性 ,可對蛋白分子進(jìn)行直接的探測和研究 ,能 給出直觀的蛋白圖像 ; 對單個蛋白分子的監(jiān)測可 以得到分子水平上許多有用的信息 , 可以觀察到 一些蛋白的肽鏈間微弱相互作用力的細(xì)節(jié) , 并能 動態(tài)追蹤分子的動力學(xué)過程 , 這代表了分子生物 學(xué)研究的發(fā)展方向 45 ,46 ,48 。盡管小麥貯藏蛋白分 子結(jié)構(gòu)研究在過去 10 多年取得了顯著進(jìn)展