殼聚糖對(duì)大鼠胃損傷時(shí)黏膜的保護(hù)作用

1、殼聚糖對(duì)大鼠胃損傷時(shí)黏膜的保護(hù)作用周晚霞1,楊慧2,俞紅2,周南進(jìn)2(1.南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院,2.江西省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所,江西南昌330006摘要:目的研究殼聚糖對(duì)大鼠急性損傷時(shí)胃黏膜的保護(hù)作用。方法采用幽門(mén)結(jié)扎法建立大鼠損傷模型,然后收集胃液、胃損傷指數(shù)計(jì)分及SP 免疫組化法實(shí)驗(yàn)。結(jié)果與對(duì)照組比較,實(shí)驗(yàn)組黏膜損傷指數(shù)顯著下降(P <0.001;胃內(nèi)游離酸和總酸度顯著降低(P <0.05;誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS 表達(dá)顯著升高(P <0.01。結(jié)論殼聚糖處理可明顯減輕大鼠幽門(mén)結(jié)扎所致的胃黏膜損傷,對(duì)胃黏膜具有很好的保護(hù)作用。關(guān)鍵詞:殼聚糖;胃黏膜;保護(hù)中圖分類(lèi)號(hào):R962

2、文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 文章編號(hào):100521678(20090520326202Protection of chitosan on gastric mucosal acute injury in ratsZH OU Wan 2xia 1,Y ANG Hui 2,Y U H ong 2,ZH OU Nan 2jin 2(1.The No.2Hospital Affiliated to Nanchang Univer sity ;2.The Medical Institute o f Jiangxi ,Nanchang 330006,China K ey w ords :chitosan ;gastri

3、c mucosa ;protection收稿日期:2009204203基金項(xiàng)目:江西省衛(wèi)生廳資助(N o.02229作者簡(jiǎn)介:周晚霞(19612,女,江西南昌人,主管技師;周南進(jìn)(19592,男,通信作者,研究員,E 2mail :jxznj 。殼聚糖具有促進(jìn)傷口愈合作用,在臨床上已用作為創(chuàng)口促愈劑及應(yīng)用于人工皮膚,也有用于皮膚潰瘍的治療。實(shí)驗(yàn)證實(shí),殼聚糖還具有抑制胃酸、抗胃潰瘍的作用122。我們的研究發(fā)現(xiàn)殼聚糖處理可明顯減輕急性胃黏膜損傷,對(duì)胃黏膜具有保護(hù)作用324,但其機(jī)理尚不清楚,為此我們進(jìn)一步研究了殼聚糖對(duì)急性損傷時(shí)的誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS 含量及對(duì)胃黏膜的炎癥反應(yīng)的影響,以探討

4、殼聚糖抗胃黏膜損傷的機(jī)理。1材料普通級(jí)S D 大鼠16只,雌雄各半,體重200250g ,南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物科學(xué)部,動(dòng)物合格證號(hào):醫(yī)字第021/962002號(hào)。88.5%脫乙酰度殼聚糖,上海其勝生物制品有限公司產(chǎn)品;抗誘導(dǎo)型iNOS 多克隆抗體,美國(guó)Santa Cruz Biotechnology Inc.產(chǎn)品。2方法2.1動(dòng)物分組與給藥按隨機(jī)表格法將S D 大鼠分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組,每組8只。對(duì)照組為5%的阿拉伯樹(shù)膠(為藥物賦形劑;實(shí)驗(yàn)組為88.5%脫乙酰度殼聚糖500mg/kg d ,用5%阿拉伯樹(shù)膠配成混懸液。每只大鼠灌胃3m L ,2次/d ,連續(xù)給藥5d 。2.2損傷模型建立取對(duì)照組和

5、實(shí)驗(yàn)組大鼠,末次灌藥后禁食(不禁水24h 后,再分別給予殼聚糖或阿拉伯樹(shù)膠1次,1h 后,在3%異戊巴比妥100mg/kg 腹腔麻醉下剖腹,623中國(guó)生化藥物雜志Chinese Journal of Biochemical Pharmaceutics 2009年第30卷第5期結(jié)扎幽門(mén),關(guān)腹。9h后,處死大鼠,拆線(xiàn)開(kāi)腹,結(jié)扎賁門(mén),摘取全胃。首先收集胃液,記錄胃液量,再以1500r/min離心10min,取上清液備用;然后解剖胃,測(cè)定損傷指數(shù)5。2.3胃黏膜損傷指數(shù)測(cè)定胃取出后沿大彎側(cè)剪開(kāi),沖洗,展平,用卡尺(精確度0.02mm測(cè)量損傷情況,損傷指數(shù)的計(jì)分參考G uth等6標(biāo)準(zhǔn),以局限于胃上皮的點(diǎn)

6、狀糜爛、潰瘍、出血灶的長(zhǎng)度累積計(jì)分:正常為0分,損傷1mm 為1分,>1mm、2mm為2分,依此類(lèi)推,損傷寬度>2mm者,指數(shù)加倍。2.4胃液游離酸和總酸度測(cè)定取上清胃液2m L,以1%酚酞為指示劑,0.1 m ol/L氫氧化鈉溶液滴定到pH為7.0的終點(diǎn),所耗的0.1m ol/L氫氧化鈉溶液量×10即為胃液中所含的游離鹽酸量,再繼續(xù)滴加到出現(xiàn)酚酞色所耗用的氫氧化鈉總量即為總酸度7。2.5iNOS的測(cè)定采用SP免疫組化法測(cè)定,結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn):分別觀察細(xì)胞染色強(qiáng)度及陽(yáng)性細(xì)胞比例。采用定量積分法,每張切片至少觀察10個(gè)高倍(×400視野共1000個(gè)細(xì)胞,計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞百

7、分比,并根據(jù)每張切片的著色深淺計(jì)分:無(wú)著色為0分(陰性,淺黃色為1分(弱陽(yáng)性,棕黃色為2分(陽(yáng)性,棕褐色為3分(強(qiáng)陽(yáng)性,然后由計(jì)算機(jī)處理應(yīng)用圖像分析軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。2.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有數(shù)據(jù)均表達(dá)為(x±s,兩組間均數(shù)比較采用t檢驗(yàn),用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件包處理,P<0.05表示差異有顯著意義。3結(jié)果3.1胃黏膜損傷情況在幽門(mén)結(jié)扎損傷模型中,實(shí)驗(yàn)組的黏膜損傷指數(shù)為(6.25±2.25,顯著低于對(duì)照組的(18.14±4.82(P<0.001。3.2對(duì)胃酸的影響實(shí)驗(yàn)組胃內(nèi)游離酸為(42.90±15.89mm ol/L,低于對(duì)照組的(61.13

8、±15.11mm ol/L(P<0.05;實(shí)驗(yàn)組胃內(nèi)總酸度為(48.25±16.31mm ol/L,低于對(duì)照組的(75.28±23.69mm ol/L(P<0.05。3.3胃黏膜內(nèi)iNOS表達(dá)實(shí)驗(yàn)組的iNOS表達(dá)為(98.25±17.67,顯著高于對(duì)照組的(72.50±16.99(P<0.01。4討論本研究發(fā)現(xiàn)殼聚糖處理可明顯減輕幽門(mén)結(jié)扎所致的急性胃黏膜損傷,黏膜損傷指數(shù)降低,黏膜的炎癥反應(yīng)減小,殼聚糖抗胃酸在此起了一定的作用。胃酸是胃黏膜的重要的攻擊因素,減少胃酸分泌是抗胃黏膜損傷的重要方面。本研究發(fā)現(xiàn)殼聚糖可降低胃液中游離

9、酸、總酸度。殼聚糖中大量的NH2為堿性功能基,可中和體液和胃內(nèi)過(guò)量的酸性物質(zhì),具有抗酸作用1。因此殼聚糖降低胃酸的機(jī)制是中和胃酸和抑制胃酸分泌綜合作用的結(jié)果。另一方面,殼聚糖能與胃酸作用生成膠,附著在胃壁上形成一層保護(hù)膜,阻止胃酸和胃蛋白酶對(duì)潰瘍面的刺激和腐蝕,維持黏膜的完整性,對(duì)胃黏膜起到直接保護(hù)作用。殼聚糖預(yù)處理大鼠胃黏膜內(nèi)iNOS的表達(dá)顯著高于對(duì)照組。iNOS的產(chǎn)物NO在胃黏膜保護(hù)中起重要作用。NO可擴(kuò)張血管,增加胃黏膜血流量,抑制胃黏膜微循環(huán)內(nèi)的血小板凝集,減輕中性粒細(xì)胞浸潤(rùn),抑制白細(xì)胞及肥大細(xì)胞興奮,清除超氧化物,促進(jìn)胃黏液分泌,促進(jìn)胃黏膜上皮修復(fù),增加胃黏膜的保護(hù)功能及完整性8。因

10、此,在本研究中殼聚糖可能通過(guò)上調(diào)iNOS的表達(dá),增加胃黏膜內(nèi)NO含量,來(lái)發(fā)揮胃黏膜保護(hù)作用。殼聚糖對(duì)急性胃黏膜損傷的保護(hù)作用機(jī)制較復(fù)雜,是通過(guò)多途徑完成的。既有減少胃酸抗過(guò)氧化作用,又有增強(qiáng)黏膜屏障和細(xì)胞保護(hù)等多種作用,本研究結(jié)果對(duì)于殼聚糖防治胃黏膜損傷及探討正常胃腸道細(xì)胞保護(hù)作用有一定意義。參考文獻(xiàn):1Ito M,Ban A,Ishihara M.Anti2ulcer effects of chitin and chition,heal2thy foods,in ratsJ.Jpn J Pharmacol,2000,(82:2182225.2呂實(shí)波,顏燕,孫成璽,等.殼聚糖保護(hù)胃黏膜作用的實(shí)

11、驗(yàn)研究J.預(yù)防醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)信息,2002,(8:4292430.3周南進(jìn),謝勇,郭曉白,等.殼聚糖對(duì)乙醇急性損傷時(shí)大鼠胃壁細(xì)胞的影響J.中國(guó)藥理學(xué)通報(bào),2005,21(5:616.4周南進(jìn),謝勇,郭曉白,等.殼聚糖對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性潰瘍愈合的影響J.中國(guó)生化藥物雜志,2005,26(1:35237.5裴德凱.消化系統(tǒng)常見(jiàn)疾病實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭苽浞∕/徐淑云,卞6G uth P H,Aures D,Pauslsen G.T opical aspirin plus HCl gastric le2sions in the ratJ.G astroenterology,1979,76(1:88296.7彭寧,曾衍霖.消化系統(tǒng)運(yùn)動(dòng)及分泌實(shí)驗(yàn)法M/徐淑云,卞如8M annick E E,Braro L E,Z arama G,et al.Inducible nitric oxide syn2thase nitrotyrosine and