第四章抗菌藥物敏感試驗(yàn)下

1、第四章抗菌藥物敏感試驗(yàn)下單藥紙片搭橋法單藥紙片搭橋法2.棋盤稀釋法棋盤稀釋法定量試驗(yàn)定量試驗(yàn)（1）原理）原理 將甲乙兩藥的各種稀釋度加以將甲乙兩藥的各種稀釋度加以組合，組成聯(lián)合藥敏管。同時(shí)兩種藥物組合，組成聯(lián)合藥敏管。同時(shí)兩種藥物每一稀釋度都有一只加單一藥物的單獨(dú)每一稀釋度都有一只加單一藥物的單獨(dú)藥敏管。根據(jù)單一藥物對被檢菌的藥敏管。根據(jù)單一藥物對被檢菌的MIC和聯(lián)合藥敏管中的抑菌情況，可精確測和聯(lián)合藥敏管中的抑菌情況，可精確測定兩藥在適當(dāng)濃度比例下所產(chǎn)生的相互定兩藥在適當(dāng)濃度比例下所產(chǎn)生的相互作用。作用。（2）試驗(yàn)步驟）試驗(yàn)步驟1）確定單藥的）確定單藥的MIC2）確定聯(lián)合藥敏的藥物稀釋度）確

2、定聯(lián)合藥敏的藥物稀釋度n每一稀釋度濃度為聯(lián)合藥敏管內(nèi)所需單藥終濃度每一稀釋度濃度為聯(lián)合藥敏管內(nèi)所需單藥終濃度的的2倍倍n用用MH液體培養(yǎng)基將甲乙兩藥稀釋液體培養(yǎng)基將甲乙兩藥稀釋68個(gè)稀釋度個(gè)稀釋度3）棋盤狀排列無菌試管）棋盤狀排列無菌試管n排列排列6排無菌試管，每排排無菌試管，每排6支支4）加甲、乙兩藥（分別從橫、豎排加入）加甲、乙兩藥（分別從橫、豎排加入）n每管各每管各1ml，橫排和縱排的第一管為無藥，橫排和縱排的第一管為無藥對照，第一排為單藥對照管對照，第一排為單藥對照管5）加待測菌液）加待測菌液 n各管加入被檢菌液各管加入被檢菌液0.01mln菌液終濃度：菌液終濃度：105CFU/ml3

3、2/032/0.532/132/232/432/816/016/0.516/116/216/416/88/08/0.58/18/28/48/84/04/0.54/14/24/44/82/02/0.52/12/22/42/80/00/0.50/10/20/40/8甲藥稀釋甲藥稀釋乙藥稀釋乙藥稀釋例：甲藥例：甲藥MIC單獨(dú)單獨(dú)16 mg/L 乙藥乙藥MIC單獨(dú)單獨(dú)4mg/Ln結(jié)果判讀結(jié)果判讀 FIC：部分抑菌濃度指數(shù)：部分抑菌濃度指數(shù) 甲藥聯(lián)合時(shí)甲藥聯(lián)合時(shí)MIC 乙藥聯(lián)合時(shí)乙藥聯(lián)合時(shí)MICFIC= + 甲藥單獨(dú)時(shí)甲藥單獨(dú)時(shí)MIC 乙藥單獨(dú)時(shí)乙藥單獨(dú)時(shí)MICFIC 2 拮抗作用拮抗作用 -+-+-+

4、-+-32 16 8 4 2 0甲藥濃度甲藥濃度 0 0.5 1 2 4 8 乙藥乙藥FIC =8/16+4/4=1.5-+-+-+-+-+-FIC =4/32+2/8=0.375FIC=8/32+1/8=0.37532168420甲藥甲藥 0 0.5 1 2 4 8 乙藥乙藥第五章第五章 細(xì)菌的分類與命名細(xì)菌的分類與命名第一節(jié)第一節(jié) 概述概述一、基本概念一、基本概念1.分類分類（1）人為分類法：以形態(tài)、生理生化特征為依據(jù)）人為分類法：以形態(tài)、生理生化特征為依據(jù)（2）系統(tǒng)分類法：以細(xì)菌大分子物質(zhì)結(jié)構(gòu)的同源）系統(tǒng)分類法：以細(xì)菌大分子物質(zhì)結(jié)構(gòu)的同源程度分類程度分類2.命名命名3.鑒定鑒定二、分類等

5、級二、分類等級細(xì)菌的分類層次細(xì)菌的分類層次 界、門、綱、目、科、屬、種界、門、綱、目、科、屬、種 1. 種種(species)是細(xì)菌分類的基本單位。是細(xì)菌分類的基本單位。生物學(xué)性狀基本相同的細(xì)菌群體構(gòu)成一生物學(xué)性狀基本相同的細(xì)菌群體構(gòu)成一個(gè)菌種；個(gè)菌種；2. 菌屬：性狀相近關(guān)系密切的若干菌種組菌屬：性狀相近關(guān)系密切的若干菌種組成一個(gè)菌屬（成一個(gè)菌屬（genus） 3. 亞種和型：同一菌種的各個(gè)細(xì)菌，雖性亞種和型：同一菌種的各個(gè)細(xì)菌，雖性狀基本相同，但在某些方面仍有一定差狀基本相同，但在某些方面仍有一定差異，差異較明顯的稱亞種異，差異較明顯的稱亞種(subspecies, subsp.)，差異小

6、的則為型，差異小的則為型(type)。n血清型：依據(jù)抗原結(jié)構(gòu)的差異血清型：依據(jù)抗原結(jié)構(gòu)的差異 n噬菌體型：噬菌體的敏感性噬菌體型：噬菌體的敏感性n生物型：生化反應(yīng)和生物學(xué)性狀生物型：生化反應(yīng)和生物學(xué)性狀4. 菌株：對不同來源的同一菌種的細(xì)菌菌株：對不同來源的同一菌種的細(xì)菌稱為該菌的不同菌株稱為該菌的不同菌株(strain)。n標(biāo)準(zhǔn)菌株標(biāo)準(zhǔn)菌株(standard strain)或模式菌株或模式菌株(type strain）：具有某種細(xì)菌典型特征的）：具有某種細(xì)菌典型特征的菌株。菌株。三、細(xì)菌的命名法三、細(xì)菌的命名法拉丁雙名法拉丁雙名法 Escherichia coli （E. coli） 屬名屬

7、名 種名種名中文：中文： 大腸埃希菌大腸埃希菌 種名種名 屬名屬名 第二節(jié)第二節(jié) 細(xì)菌的分類方法細(xì)菌的分類方法一、生物學(xué)特性分類法一、生物學(xué)特性分類法傳統(tǒng)分類法、數(shù)值分類法傳統(tǒng)分類法、數(shù)值分類法二、遺傳學(xué)分類法二、遺傳學(xué)分類法-系統(tǒng)分類法系統(tǒng)分類法nDNA 堿基比例的測定堿基比例的測定nDNA 堿基比例指堿基比例指DNA分子中分子中G、C所占的摩所占的摩爾百分比值，反映細(xì)菌間爾百分比值，反映細(xì)菌間DNA分子同源程度分子同源程度n核酸分子雜交法核酸分子雜交法nrRNA寡核苷酸分析寡核苷酸分析第三十五章第三十五章細(xì)菌耐藥性檢測細(xì)菌耐藥性檢測第一節(jié)第一節(jié) 抗菌藥物種類及作用機(jī)制抗菌藥物種類及作用機(jī)制

8、1.1.抗菌藥物（抗菌藥物（antibacterial agentsantibacterial agents） 指對病原菌具有抑制或殺滅作用、用于預(yù)防和治療細(xì)菌性感染指對病原菌具有抑制或殺滅作用、用于預(yù)防和治療細(xì)菌性感染的藥物，包括抗生素（的藥物，包括抗生素（antibioticsantibiotics）和化學(xué)合成的藥物。）和化學(xué)合成的藥物。2.2.抗生素（抗生素（antibiotic agentsantibiotic agents）：）： 微生物在其代謝過程中產(chǎn)生的能殺滅或抑制其它特異病微生物在其代謝過程中產(chǎn)生的能殺滅或抑制其它特異病原微生物的產(chǎn)物。抗生素分子量小，低濃度就能發(fā)揮其原微生物的

9、產(chǎn)物?？股胤肿恿啃?，低濃度就能發(fā)揮其生物活性，有天然和人工半合成兩類生物活性，有天然和人工半合成兩類 抗菌藥物的種類抗菌藥物的種類分類分類代表藥物代表藥物-內(nèi)酰胺類內(nèi)酰胺類大環(huán)內(nèi)酯類大環(huán)內(nèi)酯類氨基糖苷類氨基糖苷類四環(huán)素類四環(huán)素類氯霉素類氯霉素類化學(xué)合成藥物化學(xué)合成藥物抗結(jié)核藥物抗結(jié)核藥物多肽類抗生素多肽類抗生素青霉素類、頭孢霉素類等青霉素類、頭孢霉素類等紅霉素、螺旋霉素等紅霉素、螺旋霉素等鏈霉素、慶大霉素等鏈霉素、慶大霉素等四環(huán)素、多西環(huán)素等四環(huán)素、多西環(huán)素等氯霉素、甲砜霉素等氯霉素、甲砜霉素等喹諾酮類（氟哌酸、環(huán)丙沙星）喹諾酮類（氟哌酸、環(huán)丙沙星）利福平、異煙肼利福平、異煙肼多粘菌素類、萬

10、古霉素多粘菌素類、萬古霉素按化學(xué)結(jié)構(gòu)和性質(zhì)按化學(xué)結(jié)構(gòu)和性質(zhì)青霉素的母核青霉素的母核阿阿莫西林、莫西林、替卡西林、派拉西林替卡西林、派拉西林種類種類 作用機(jī)制作用機(jī)制與青霉素結(jié)合蛋白（與青霉素結(jié)合蛋白（PBP）結(jié)合，抑制肽聚糖）結(jié)合，抑制肽聚糖合成中所需的轉(zhuǎn)肽酶，阻止肽聚糖鏈的交叉連合成中所需的轉(zhuǎn)肽酶，阻止肽聚糖鏈的交叉連接，干擾細(xì)胞壁合成。接，干擾細(xì)胞壁合成。n繁殖期殺菌藥繁殖期殺菌藥肽聚糖合成過程中的關(guān)鍵步驟肽聚糖合成過程中的關(guān)鍵步驟n細(xì)胞漿內(nèi)：合成細(xì)胞漿內(nèi)：合成N-乙酰胞壁酸乙酰胞壁酸-五肽五肽n細(xì)胞膜上：合成細(xì)胞膜上：合成N-乙酰葡萄糖胺乙酰葡萄糖胺- N-乙酰乙酰胞壁酸胞壁酸-五肽五肽

11、-磷脂磷脂n細(xì)胞膜外：完成肽聚糖的交叉連接細(xì)胞膜外：完成肽聚糖的交叉連接肽聚糖合成過程中需要的酶（肽聚糖合成過程中需要的酶（PBP）n轉(zhuǎn)糖基酶：催化轉(zhuǎn)糖基酶：催化-1，4糖苷鍵形成糖苷鍵形成n轉(zhuǎn)肽酶：使轉(zhuǎn)肽酶：使N-乙酰胞壁酸乙酰胞壁酸-五肽脫去末端的五肽脫去末端的D-丙氨酸，與另丙氨酸，與另一條肽鏈的肽橋（五肽交聯(lián)橋）交聯(lián)，形成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)一條肽鏈的肽橋（五肽交聯(lián)橋）交聯(lián)，形成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)n羧肽酶：催化五肽末端羧肽酶：催化五肽末端D-丙氨酸水解丙氨酸水解n內(nèi)肽酶：催化水解已合成肽聚糖上的肽鍵內(nèi)肽酶：催化水解已合成肽聚糖上的肽鍵n細(xì)菌生存必需的是轉(zhuǎn)肽酶和轉(zhuǎn)糖基酶細(xì)菌生存必需的是轉(zhuǎn)肽酶和轉(zhuǎn)糖基酶

12、二、氨基糖苷類二、氨基糖苷類1.種類種類n鏈霉素、慶大霉素、卡那霉素、妥布霉素、鏈霉素、慶大霉素、卡那霉素、妥布霉素、阿米卡星、丁胺卡那霉素等阿米卡星、丁胺卡那霉素等2.作用機(jī)制作用機(jī)制n選擇性地與核糖體選擇性地與核糖體30S小亞基結(jié)合，影響蛋小亞基結(jié)合，影響蛋白質(zhì)合成的全過程。白質(zhì)合成的全過程。n靜止期殺菌藥靜止期殺菌藥三、喹諾酮類三、喹諾酮類1.種類種類n吡哌酸、氟哌酸、環(huán)丙沙星、氧氟沙星、左吡哌酸、氟哌酸、環(huán)丙沙星、氧氟沙星、左氧氟沙星、羅美沙星、諾氟沙星等氧氟沙星、羅美沙星、諾氟沙星等2.作用機(jī)制作用機(jī)制n作用于細(xì)菌的作用于細(xì)菌的DNA旋轉(zhuǎn)酶，干擾旋轉(zhuǎn)酶，干擾DNA合成合成四、大環(huán)內(nèi)酯

13、類四、大環(huán)內(nèi)酯類1.種類種類n紅霉素、羅紅霉素、螺旋霉素、吉他霉素、紅霉素、羅紅霉素、螺旋霉素、吉他霉素、麥迪霉素、阿齊霉素等麥迪霉素、阿齊霉素等2.作用機(jī)制作用機(jī)制n與細(xì)菌核糖體與細(xì)菌核糖體50S亞基結(jié)合，抑制轉(zhuǎn)肽作用，亞基結(jié)合，抑制轉(zhuǎn)肽作用，影響核蛋白位移，從而抑制蛋白質(zhì)合成。影響核蛋白位移，從而抑制蛋白質(zhì)合成。五、磺胺類五、磺胺類1.種類種類n磺胺嘧啶、甲氧芐胺嘧啶、復(fù)方新諾明等磺胺嘧啶、甲氧芐胺嘧啶、復(fù)方新諾明等2.作用機(jī)制作用機(jī)制n影響核酸合成，抑制細(xì)菌生長繁殖影響核酸合成，抑制細(xì)菌生長繁殖六、其他抗生素六、其他抗生素1.四環(huán)素類四環(huán)素類n種類：四環(huán)素、土霉素、多西環(huán)素（強(qiáng)力）種類：

14、四環(huán)素、土霉素、多西環(huán)素（強(qiáng)力）n作用機(jī)制：與細(xì)菌作用機(jī)制：與細(xì)菌30S亞基結(jié)合，抑制蛋亞基結(jié)合，抑制蛋 白質(zhì)合成白質(zhì)合成2.氯霉素類氯霉素類n種類：氯霉素、甲砜霉素種類：氯霉素、甲砜霉素n作用機(jī)制：與細(xì)菌作用機(jī)制：與細(xì)菌50S亞基結(jié)合，抑制蛋白亞基結(jié)合，抑制蛋白質(zhì)合成質(zhì)合成3.硝基呋喃類硝基呋喃類n種類：呋喃妥因、呋喃唑酮（痢特靈）種類：呋喃妥因、呋喃唑酮（痢特靈）n作用機(jī)制：干擾細(xì)菌體內(nèi)氧化還原酶系統(tǒng)作用機(jī)制：干擾細(xì)菌體內(nèi)氧化還原酶系統(tǒng)4.硝基咪唑類硝基咪唑類n種類：甲硝唑、替硝唑種類：甲硝唑、替硝唑n作用機(jī)制：阻斷細(xì)菌作用機(jī)制：阻斷細(xì)菌DNA合成合成抗菌藥物的作用機(jī)制抗菌藥物的作用機(jī)制喹

15、諾酮類喹諾酮類林可霉素類林可霉素類氨基糖苷類氨基糖苷類酮康唑酮康唑環(huán)絲氨酸環(huán)絲氨酸利福平利福平紅霉素紅霉素制霉菌素制霉菌素桿菌肽桿菌肽甲氧芐胺嘧啶甲氧芐胺嘧啶四環(huán)素類四環(huán)素類兩性霉素兩性霉素B萬古霉素萬古霉素磺胺藥磺胺藥氯霉素氯霉素多粘菌素類多粘菌素類-內(nèi)酰胺類內(nèi)酰胺類抑制核酸合成抑制核酸合成核糖體核糖體細(xì)胞膜細(xì)胞膜細(xì)胞壁細(xì)胞壁第二節(jié)第二節(jié) 細(xì)菌的耐藥性和產(chǎn)生機(jī)制細(xì)菌的耐藥性和產(chǎn)生機(jī)制n細(xì)菌的耐藥性：對某種藥物敏感細(xì)菌變成細(xì)菌的耐藥性：對某種藥物敏感細(xì)菌變成對該藥物耐受對該藥物耐受n機(jī)制機(jī)制n產(chǎn)生耐藥酶：水解酶、鈍化酶等產(chǎn)生耐藥酶：水解酶、鈍化酶等n藥物作用的靶位點(diǎn)改變藥物作用的靶位點(diǎn)改變n細(xì)

16、胞膜的通透性改變細(xì)胞膜的通透性改變n細(xì)菌主動外排細(xì)菌主動外排 一、產(chǎn)生藥物滅活酶一、產(chǎn)生藥物滅活酶（一）（一） 水解酶水解酶-內(nèi)酰胺酶內(nèi)酰胺酶n是以是以-內(nèi)酰胺類抗菌藥物為水解底物的多種內(nèi)酰胺類抗菌藥物為水解底物的多種同類型的降解酶。包括廣譜內(nèi)酰胺酶、超廣譜同類型的降解酶。包括廣譜內(nèi)酰胺酶、超廣譜酶酶-內(nèi)酰胺（內(nèi)酰胺（ESBLs）、金屬酶、）、金屬酶、AmpC酶等酶等n細(xì)菌產(chǎn)生的細(xì)菌產(chǎn)生的-內(nèi)酰胺酶可特異性打開內(nèi)酰胺酶可特異性打開-內(nèi)酰內(nèi)酰胺環(huán)，使其完全失去抗菌活性。胺環(huán)，使其完全失去抗菌活性。nESBLs陽性菌：對所有陽性菌：對所有-內(nèi)酰胺類藥物耐藥內(nèi)酰胺類藥物耐藥（二）鈍化酶產(chǎn)生（二）鈍化

17、酶產(chǎn)生1.氨基糖苷類鈍化酶氨基糖苷類鈍化酶2.氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶3.紅霉素和其他滅活酶紅霉素和其他滅活酶（三）修飾酶（三）修飾酶1.乙酰轉(zhuǎn)移酶乙酰轉(zhuǎn)移酶AAC2.核苷轉(zhuǎn)移酶核苷轉(zhuǎn)移酶ANT3.磷酸轉(zhuǎn)移酶磷酸轉(zhuǎn)移酶APH1.青霉素結(jié)合蛋白改變青霉素結(jié)合蛋白改變2.DNA解旋酶改變解旋酶改變?nèi)?、抗菌藥物滲透障礙三、抗菌藥物滲透障礙外膜蛋白減少外膜蛋白減少四、藥物的主動轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)四、藥物的主動轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)外排作用外排作用二、藥物作用靶位的改變二、藥物作用靶位的改變第三節(jié)第三節(jié) 細(xì)菌耐藥性檢查方法細(xì)菌耐藥性檢查方法常用方法常用方法n耐甲氧西林葡萄球菌檢測耐甲氧西林葡萄球菌檢測n克林霉素誘導(dǎo)耐藥

18、試驗(yàn)克林霉素誘導(dǎo)耐藥試驗(yàn) n腸球菌高水平氨基糖苷類耐藥腸球菌高水平氨基糖苷類耐藥 n內(nèi)酰胺酶檢測內(nèi)酰胺酶檢測n超廣譜超廣譜內(nèi)酰胺酶紙片法檢測內(nèi)酰胺酶紙片法檢測 一、一、- -內(nèi)酰胺酶檢測內(nèi)酰胺酶檢測n原理：原理： - -內(nèi)酰胺酶是一類水解青霉素、內(nèi)酰胺酶是一類水解青霉素、頭孢菌素類抗生素的滅活酶；該酶位于頭孢菌素類抗生素的滅活酶；該酶位于G+球菌菌體外，球菌菌體外，G-桿菌周漿間隙。桿菌周漿間隙。n檢測方法：常用頭孢硝噻吩紙片法檢測方法：常用頭孢硝噻吩紙片法頭孢硝塞吩紙片法（頭孢硝塞吩紙片法（nitrocefin test）頭孢硝塞吩的內(nèi)酰胺環(huán)被頭孢硝塞吩的內(nèi)酰胺環(huán)被 -內(nèi)酰胺酶打開，內(nèi)酰胺酶打開，基質(zhì)由黃色變?yōu)榧t色?；|(zhì)由黃色變?yōu)榧t色。nG+菌直接取培養(yǎng)物菌直接取培養(yǎng)物nG-菌取細(xì)菌裂解液菌取細(xì)菌裂解液二、二、 ESBLs檢測檢測ESBLs：擴(kuò)大了原來的底物譜，可以水解青：擴(kuò)大了原來的底物譜，可以水解青霉素和一、二、三代頭孢菌素以及單環(huán)類抗霉素和一、二、三代頭孢菌素以及單環(huán)類抗生素。生素。1.紙片法檢測紙片法檢測 雙相紙片試驗(yàn)雙相紙片試驗(yàn)2.液體稀釋法檢測液體稀釋法檢測篩選試驗(yàn)：頭孢泊肟、頭孢他啶