大腸菌群檢測(cè)作業(yè)標(biāo)準(zhǔn)書(shū)ok

1、文件名稱(chēng)大腸菌群檢測(cè)作業(yè)標(biāo)準(zhǔn)書(shū)頁(yè)次1/4文件編號(hào)YSMD/ZJ/ZY-01版次A/01.目的:為保證原、輔料以及產(chǎn)品中的微生物指標(biāo)之大腸菌群符合公司生產(chǎn)、客戶(hù)以及國(guó)家的標(biāo)準(zhǔn)，確保產(chǎn)品不會(huì)對(duì)消費(fèi)者健康造成影響；特制定本標(biāo)準(zhǔn)書(shū)。2 .范圍本標(biāo)準(zhǔn)書(shū)適用于對(duì)原、輔料以及半成品、成品的大腸菌群的檢驗(yàn)3 .權(quán)責(zé)檢驗(yàn)員負(fù)責(zé)實(shí)驗(yàn)的全過(guò)程的操作4 .術(shù)語(yǔ)大腸菌群系指一群能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無(wú)芽胞桿菌。該菌主要來(lái)源于人畜糞便，故以此作為糞便污染指標(biāo)來(lái)評(píng)價(jià)食品的衛(wèi)生質(zhì)量，推斷食品中有否污染腸道致病菌的可能。食品中大腸菌群數(shù)系以100mL（g）檢樣內(nèi)大腸菌群最可能數(shù)（MPN）表示。5 .操

2、作方法5.1 儀器：5.1.1 冰箱：0C-4c5.1.2 恒溫培養(yǎng)箱：36c±1C5.1.3 架盤(pán)藥物天平：0g500g,精確至0.5g5.1.4 顯微鏡：10X-10055.1.5 滅菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）5.1.6 滅菌錐形瓶：500mL5.1.7 滅菌培養(yǎng)皿：直徑90mm5.1.8 滅菌試管：16m訴160mm5.1.9 滅菌刀、剪子、鐐子、載玻片、酒精燈、試管架等。5.2 藥品5.2.1 乳糖膽鹽發(fā)酵管：按GB4789.28-2003中4.9規(guī)定。文件名稱(chēng)大腸菌群檢測(cè)作業(yè)標(biāo)準(zhǔn)書(shū)頁(yè)次2/4文件編號(hào)YSMD/ZJ/ZY-01版次A/0

3、5.2.2 伊紅美藍(lán)瓊脂平板：按GB4789.28-2003中4.25瀝規(guī)定5.2.3 乳糖發(fā)酵管：按GB4789.28-2003中4.10規(guī)定。5.2.4 EC肉湯：按GB4789.28-2003中4.11規(guī)定。5.2.5 磷酸鹽緩沖稀釋液：按GB4789.28-2003中3.22規(guī)定。5.2.6 0.85%生理鹽水。5.2.7 革蘭氏染色液：按GB4789.28-2003中2.2規(guī)定。5.3 檢驗(yàn)程序大腸菌群檢驗(yàn)程序如下：檢樣乳糖膽鹽發(fā)酵管.36土/24口.11不廣q%大腸菌群在性伊紅美藍(lán)瓊脂平板336由C：18-24h報(bào)告1.1.II.-1 操作步驟文件名稱(chēng)大腸菌群檢測(cè)作業(yè)標(biāo)準(zhǔn)書(shū)頁(yè)次3/

4、4文件編號(hào)YSMD/ZJ/ZY-01版次A/0檢樣稀釋以無(wú)菌操作將檢樣25mL像g）放于含有225mL滅菌生理鹽水滅菌玻璃瓶?jī)?nèi)，經(jīng)充分振搖或研磨做成1：10的均勻稀釋液。固體檢樣最好用均質(zhì)器，以800010000r/min的速度處理1min,做成1：10的均勻稀釋液。用1mL滅菌吸管吸取1：10稀釋液1mL注入含有9mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內(nèi)，振搖試管混勻，做成1：100的稀釋液。另取1mL滅菌吸管，按上條操作依次做10倍遞增稀釋液，每遞增稀釋一次，換用1支1mL滅菌吸管。根據(jù)食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求或?qū)z樣污染情況的估計(jì)，選擇三個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度接種3管。乳糖發(fā)酵試驗(yàn)將待檢樣品接種于乳糖

5、膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，接種量在1mL以上者，用雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管，1mL及1mL以下者，用單料乳糖膽鹽發(fā)酵管。每一稀釋度接種3管，置36士1C溫箱內(nèi)，培養(yǎng)24±2h,如所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)氣，則可報(bào)告為大腸菌群陰性，如有產(chǎn)氣者，則按下列程序進(jìn)行。分離培養(yǎng)將產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種在伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，置36±1C溫箱內(nèi)，培養(yǎng)1824h,然后取出，觀(guān)察菌落形態(tài)，并做革蘭氏染色和證實(shí)試驗(yàn)。證實(shí)試驗(yàn)在上述平板上，挑取可疑大腸菌群菌落12個(gè)進(jìn)行革蘭氏染色，同時(shí)接種乳糖發(fā)酵管，置36±1C溫箱內(nèi)培養(yǎng)24±2h,觀(guān)察產(chǎn)氣情況。凡乳糖管產(chǎn)氣、革蘭氏染色為陰性的無(wú)芽胞桿菌，即可

6、報(bào)告為大腸菌群陽(yáng)性。報(bào)告根據(jù)證實(shí)為大腸菌群陽(yáng)性的管數(shù)，查MPN僉索表，報(bào)告每100mL（g）大腸菌群的MPI值。1.2.II.-1 糞大腸菌群（faecalcoliform）用接種環(huán)將所有產(chǎn)氣的乳糖膽鹽發(fā)酵管培養(yǎng)物（見(jiàn)7.2條）轉(zhuǎn)種于EC肉湯管內(nèi)，置44.5D2C水浴箱內(nèi)（水浴箱內(nèi)的水面應(yīng)高于EC肉湯液面），培養(yǎng)24i2h,經(jīng)培養(yǎng)后，如所有EC肉湯管均不產(chǎn)氣，則可報(bào)告為陰性；如有產(chǎn)氣者，則將所有產(chǎn)氣的EC肉湯管分別轉(zhuǎn)種于伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，置36蟲(chóng)C培養(yǎng)1824h,凡文件名稱(chēng)大腸菌群檢測(cè)作業(yè)標(biāo)準(zhǔn)書(shū)頁(yè)次4/4文件編號(hào)YSMD/ZJ/ZY-01版次A/0平板上有典型菌落者，則證實(shí)為糞大腸菌群陽(yáng)性。

7、根據(jù)證實(shí)為糞大腸菌群的陽(yáng)性管數(shù),查MPN檢索表，報(bào)告每100mL(g)糞大腸菌群的MPN值，結(jié)果報(bào)告表1大腸菌群最可能數(shù)(MPN)檢索表1.3.II.-1 檢驗(yàn)過(guò)程嚴(yán)格按照進(jìn)行無(wú)菌操作，并注意安全1.4.II.-1 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后作好實(shí)驗(yàn)室的衛(wèi)生清潔以及及時(shí)、準(zhǔn)確的填寫(xiě)相應(yīng)的記錄.相關(guān)文件成品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)GB/T4789.3-2003.相關(guān)記錄產(chǎn)品檢驗(yàn)報(bào)告原輔料檢驗(yàn)單微生物檢測(cè)原始記錄表1陽(yáng)性管教MPN100Ml(g)95%T信限1Ml(g)*30.1Ml(g)*30.01Ml(g)*3下限上限000<30<59000130002600039001030<51300116001290

8、01312002060021900221200231600309003113003216003319010040<520010170102101021101031501107010230111110303601121501131901201103036012115012220012324013016013120013224013329020090103602011403037020220020326021015030440211200708902122702133402202104047022128010015002223502234202302902313602324402335303002304012003013907013003026401503800303950310430702100311750140230031212003003800313160032093015038003211500300440032221003504700323290033024003601300033146007102400033211000150048000333>240003.2.7注：本表采用