組織培養(yǎng)實驗器材

1、植物組織培養(yǎng)設(shè)備1、 高壓消毒鍋：用于培養(yǎng)基、蒸餾水和接種器械的滅菌消毒。2、 超凈工作臺：用于培養(yǎng)物的無菌操作。3、 接種工具：包括雙筒實體顯微鏡、鑷子、剪刀、解剖刀、酒精燈或接種滅菌器（電熱消毒器）等。4、 培養(yǎng)設(shè)備：包括空調(diào)機、定時器、溫度控制器、增濕機或去濕機、培養(yǎng)架、搖床、恒溫培養(yǎng)箱、人工培養(yǎng)箱等。5、 化學實驗及分析設(shè)備：包括分析天平,天平、酸度計、蒸餾水器、烘箱或玻璃儀器烘干器、電爐、藥品柜、冰箱、晾干架等。6、 封口膜，培養(yǎng)瓶，試管，培養(yǎng)皿，專用記號筆，托盤，手術(shù)接種剪，直鑷，槍型接種鑷，手術(shù)刀柄，超凈工作臺，接種滅菌器，不銹鋼接種盤，組織培養(yǎng)架，光照培養(yǎng)箱，人工氣候箱，生化培

2、養(yǎng)箱，恒溫恒濕箱，照度計，PH 計，酸度計，電導率儀，干濕溫度計，玻璃棒溫度計，電子天平，精密電子秤，磁力攪拌器，生物顯微鏡，高壓滅菌鍋，純水器，組培推車，三角燒瓶，燒杯，量筒，試管架，試管刷，容量瓶，酒精燈，干燥器，吸球及移液管（0.5、 1.0、 2.0、 5.0、 10.0、 20ML） ，容量瓶，試劑瓶（含棕色試劑瓶）。組培試劑類：6.1. 植物生長調(diào)節(jié)劑類Plant growth regulator ：6-芐氨基嘌呤（6-BA） 6-Benzylaminopurine ；6-糠氨基嘌呤（KT ；激動素）6-Furfurylaminopurine（Kinetin） ；腺嘌呤（腺素）Ad

3、enine；氯吡苯脲（KT-30 ； CPPU）Forchlorfenuron ；反玉米素Trans-zeatin ；塞苯?。═DZ）Thidiazuron ；生物素Biotin ；a -蔡乙酸（NAA）I-Naphthylacetic acid ；3-吲哚乙酸 （IAA） 3-Indole acetic acid ；3-吲哚丁酸 （IBA） 3-Indole butyric acid ；2， 4-二氯苯氧乙酸（2， 4-D）2,4-Dichlorophenoxyacetic acid ；赤霉素 GA3 Gibberellic acid ；奈乙酰胺（NAD ） 2-（ 1-Naphthyl ）

4、 acetamide；B -奈氧乙酸 B -Naphthoxyacetic acid ；對氯苯氧乙酸（防落素 ）4-Chlorphenoxyacetic acid ；對溴苯氧乙酸4-Bromophenoxyacetic acid ；對碘苯氧乙酸4-Iodophenoxyacetic acid ；24-表油菜素內(nèi)脂24-Epibrassinolide ；蕓苔素內(nèi)酯Brassinolide ；赤霉素GA4+7（GA4:GA7=1:2）Gibberellin A4+7；青鮮素Maleic hydrazide ；丁酰肼（比久）Daminozide ；吲哚-3-丙酸Indole-3-propanoic

5、acid；吲哚-3-丙烯酸3-Indole-propenoic acid ；吲哚-3-甲醇3-Indole-methanol ；吲哚-3-甲醛Indole-3-carboxylic acid；吲哚-3-甲酸Indole-3-carboxylic acid；三十烷醇Triacontanol ；多效唑（PP333）Paclobutrazol ；2， 4-D 鈉鹽；縮節(jié)胺Mepiquat chloride ；矮壯素Chlormequat ；乙烯利Ethephon 。6.2. 有機物類Organic matter ：煙酸Nicotinic acid ；肌醇myo-Inositol ；鹽酸硫胺(VB1

6、) Thiamine HCL,VB1 ；鹽酸吡哆辛(VB6 ) Pyridoxin HCL,VB6 ；甘氨酸 Glycine ；葉酸 Folic acid ；核黃素(VB2)Riboflavin,VB2 ；抗壞血酸(VC)Ascorbic acid,VC ；正丁酸n-Butyric acid ；檸檬酸Citric acid monohydrate；蔗糖Sucrose；DL- 精氨酸DL-Arginine ；腺嘌呤硫酸鹽Adenine sulfate ；葡萄糖Glucose(Dextrose) ；蛋白胨Peptone；水解酪蛋白Casein acid hydrolysate ；水解乳蛋白Lact

7、oalbumin hydrolysate 。6.3. 無機物類：硫酸鐵 Ferric sulfate ；乙二胺四乙酸二鈉鹽Ethylenediamine tetraacetic acid disodium salt ；乙二胺四乙酸鐵鈉鹽Ethylenediamine tetraacetic acid monosodium ferric salt硼酸 Boric acid ；氯化鈷Cobalt Chloride ；碘化鉀Potassium lodide；鉬酸鈉Sodium molybdate；無水氯化鈣Calciumcholorideanhydrous ；二水氯化鈣Calciumcholorid

8、e；干燥氯化鈣Calciumcholoride( for drying)；硝酸鈣Calcium nitrate ；D-泛酸鈣 Calcium D-pantothenate ；磷酸三鈣Tri-Calcium phosphate ；硫酸銅Cupric sulfate ；硝酸胺Ammonium Nitrate；硝酸鉀Potassium Nitrate ；結(jié)晶硫酸鎂Magnesium sulfate ；硫酸亞鐵Ferrous Sulfate；磷酸二氫鉀Potassium dihydrogen phosphate ；硫酸錳Manganese Sulfate ；硫酸鋅Zinc sulfate ；磷酸二氫鈉

9、Sodium phosphate monobasic ；三氧化鉬Molybdenum Trioxide ；氯化鉀 Potassium chloride ；氫氧化鉀 Potassium hydroxide ；硫酸鏤 Ammonium sulfate ；二氧化鈦 Titanium dioxide。6.4. 日用耗材 Consumptive material of daily expenses :瓊脂粉Agar；冷凝月旨 Fungible Agar ；活性炭粉 Carbon Activated ；超細活性炭粉 Wispy Carbon Activated 。消毒試劑類：甲醛（福爾馬林溶液）Forma

10、lin ；高鎰酸鉀 Potassium permanganate；新基爾滅（苯扎澳鏤溶液）Benzalkonium Bromide Solution ；安替福民（次氯酸鈉溶液）；過氧化氫 30%（雙氧水）Hydrogen Peroxide氯化汞。一、實驗室設(shè)計7、 準備室：（1）進行藥品的保存、配置、消毒、分裝等。（2）器具的洗滌、干燥、消毒。（3）生理生化指標的測定等。8、 接種室：進行材料的接種，內(nèi)置超凈工作臺或接種箱。外設(shè)緩沖間-放置拖鞋、工作服、工作帽等。9、 培養(yǎng)室：植物材料的無菌培養(yǎng)，室內(nèi)主要有培養(yǎng)架和控制溫度及光照的設(shè)備。10、 胞學觀察實驗室：進行培養(yǎng)材料的組織學、細胞學、觀察

11、照相等。二、玻璃器皿的選擇和清洗1 .玻璃器皿的選擇* 試管-適合于用少量培養(yǎng)基及試驗各種不同配方時選用。* 三角錐瓶-適用于各種培養(yǎng)（如固體培養(yǎng)、液體培養(yǎng)、大規(guī)模培養(yǎng)或一般培養(yǎng)）。* L形管和T形管-為專用的旋轉(zhuǎn)式液體培養(yǎng)試管。* 培養(yǎng)皿-適于作單細胞的固體平板培養(yǎng)、胚和花藥培養(yǎng)和無菌發(fā)芽。* 角形培養(yǎng)瓶和圓形培養(yǎng)瓶-適用于液體培養(yǎng)用，如單細胞和原生質(zhì)體的淺層培養(yǎng)。* 果醬瓶-常用作試管苗大量繁殖用的培養(yǎng)瓶。藥品試劑：MS培養(yǎng)基 的配制步驟這樣每次使用時，取其總量的1/20（50 mL）或1/200（5 mL）,加水稀釋，制成培養(yǎng)液?，F(xiàn)將制備培養(yǎng)基母液所需的各類物質(zhì)的量列出，供配制時使用。大

12、量元素（母液I ） mg/LNH4NO333000KNO 338000CaC12 2H2O8800MgS04 7H2O7400KH2PO43400微量元素（母液H ）KI166H3BO31 240MnS04 4H2O4 460ZnS04 7H201 720Na2M00 4 2H2050CuS04 5H205C0CI2 6H205鐵鹽（母液m ）FeS04 7H205 560Na2-EDTA 2H 207 460有機成分（母液IV ）IVA 肌醇20 000IVB煙酸100鹽酸叱哆醇（維生素B6）100鹽酸硫胺素（維生素B1）100甘氨酸400以上各種營養(yǎng)成分的用量，除了母液I為20倍濃縮液外，

13、其余的均為 200倍濃縮液。上述幾種母液都要單獨配成1L的貯備液。其中，母液I、母液R及母液IV的配制方法是：每種母液中的幾種成分稱量完畢后，分別用少量的蒸儲水徹底溶解，然后再將它們混溶，最后定容到1 Lo母液田的配制方法是：將稱好的 FeS04 7H2O和Na2-EDTA 2H20分別放到450 mL蒸儲水中，邊加熱邊不斷攪拌使它們?nèi)芙猓缓髮煞N溶液混合，并將pH調(diào)至5?5,最后定容到1 L,保存在棕色玻璃瓶中。各種母液配完后，分別用玻璃瓶貯存， 并且貼上標簽，注明母液號、配制倍數(shù)、日期等，保存在冰箱的冷藏室中。MS培養(yǎng)基中還需要加入：2, 4-二氯苯氧乙酸(2, 4-D)、蔡乙酸(NAA

14、)、6-甲基喋吟(6-BA)等植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)，并且分別配成母液(0?1 mg/mL)。其配制方法是：分別稱取這3種物質(zhì)各10 mg,將2, 4-D和NAA用少量(1 mL)無水乙醇預溶，將 6-BA 用少量(1 mL)的物質(zhì)的量濃度為 0.1 mol/L的NaOH溶液溶解，溶解過程需要水浴加 熱，最后分別定容至 100 mL ,即得質(zhì)量濃度為 0?1 mg/mL的母液。配制培養(yǎng)液 用量筒或移液管從各種母液中分別取出所需的用量：母液I為50mL,母液H、田、IV A和IV B各5 mL。再取 2, 4?D 5 mL、NAA 1 mL ,與各種母液 一起放入燒杯中。MS培養(yǎng)基配制培養(yǎng)液時的注意事

15、項配制培養(yǎng)液時應(yīng)注意：在使用提前配制的母液時，應(yīng)在量取各種母液之前，輕輕搖動盛放母液的瓶 子，如果發(fā)現(xiàn)瓶中有沉淀、懸浮物或被微生物污染，應(yīng)立即淘汰這種母液，重新進行 配制；用量筒或移液管量取培養(yǎng)基母液之前，必須用所量取的母液將量筒或移液管潤 洗2次；量取母液時，最好將各種母液按將要量取的順序?qū)懺诩埳希咳?種，劃掉1種，以免出錯。溶化瓊脂用粗天平分別稱取瓊脂9 g、蔗糖30 g,放入1 000 mL的搪瓷量杯中，再加入 蒸儲水750 mL,用電爐加熱，邊加熱邊用玻璃棒攪拌，直到液體 呈半透明狀。然后再將配好的混合培養(yǎng)液加入到煮沸的瓊脂中，最后加蒸儲水定容至 1 000 mL ,攪拌均勻。需要注

16、意的是，在加熱瓊脂、制備培養(yǎng)基的過程中，操作者千萬不能離開，否則沸騰的瓊脂外溢,就需要重新稱量、制備。止匕外，如果沒有搪瓷量杯，可用大燒杯代替。但要注意大燒杯底的外表面不能沾水，否則加熱時燒杯 容易炸裂，使溶液外溢，造成燙傷。調(diào)pH用滴管吸取物質(zhì)的量濃度為1 mol/L的NaOH溶液，逐滴滴入溶化的培養(yǎng)基中，邊滴邊攪拌，并隨時用精密的 pH試紙（5.47.0）測培養(yǎng)基的pH, 一直到 培養(yǎng)基的pH為5.8為止（培養(yǎng)基的pH必須嚴格控制在 5.8） O 培養(yǎng)基的分裝溶化的培 養(yǎng)基應(yīng)該趁熱分裝。分裝時，先將培養(yǎng)基倒入燒杯中，然后將燒杯中的培養(yǎng)基倒入錐 形瓶（50 mL或100 mL）中。注意不要讓

17、培養(yǎng)基沾到瓶口和瓶壁上。錐形瓶中培養(yǎng)基的量約為錐形瓶容量的 1/51/4。每1 000 mL培養(yǎng)基，可分裝 2530瓶。培養(yǎng)基分裝 完畢后，應(yīng)及時封蓋瓶口。用2塊硫酸紙（每塊大小約為9 cmX9 cm）中間夾1層薄牛皮紙封蓋瓶口，并用線繩捆扎。最后在錐形瓶外壁貼上標簽。B5培養(yǎng)基配方成分使用濃度（mg/L）大里兀系硝酸鉀 KNO32500MgSO4 7H2O250CaCl2 2H2O150(NH4)2SO4134微量元素KI0.75H3BO43.0MnSO4 4H2O10ZnSO47H2O2.0Na2MoO4 2H2O0.25CoCl2 6H2O0.025鐵鹽CuSO45H2O0.025Na2

18、-EDTA37.3FeSO47H2O27.8有機成分肌醇100煙酸1.0鹽酸叱哆醇1.0鹽酸硫錢10MS培養(yǎng)基配方：?W?吩子量？?使用濃度（mg/L）?KNO3? 101.11? 1900?酸？NH4NO3? 80.04? 1650?大量元素？?磷酸二氫鉀KH2PO4? 136.09? 170?就?鎂 MgSO4.7H2O? 246.47? 370?W?鈣 CaCl2.2H2O? 147.02? 440?O 甲KI? 166.01? 0.83?軸酸？ H3BO3? 61.83? 6.2?«甄 MnSO4.4H2O? 223.01? 22.3?微量元素？?？?硫酸鋅 ZnSO4.7 H2O? 287.54? 8.6?O 內(nèi)Na2MoO4.2 H2O? 241.95? 0.25?同CuSO4.5 H2O? 249.68? 0.025?W?鉆 CoCl2.62? 237.93? 0.025?鹽？?？?乙二胺四乙酸二鈉Na2.EDTA? 372.25? 37.3?硫酸？鐵FeSO24.7H2O? 278.03? 27.8?？?？ 100?甘氨酸? ? 2?有機成分?鹽酸硫胺素VB1? 0.1?鹽酸吡哆醇 ?VB6? 0.5 ?煙酸 ? VB5 或 VPP? 0.5?蔗糖? sucrose?