大鼠尿皮質(zhì)素2UCN2試劑盒ELISA

1、大鼠尿皮質(zhì)素 2（UCN2）試劑盒（ ELISA）使用說明書本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、 組織、細胞上清及相關(guān)液體樣本中大鼠尿皮質(zhì)素 2（ UCN2）的含量。有效期： 6個月保存條件： 2- 8本試劑盒僅供體外研究使用，不用于臨床診斷實驗原理試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ ELISA）。往預(yù)先包被大鼠尿皮質(zhì)素 2 （UCN2）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、 HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物 TMB顯色， TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠尿皮質(zhì)素 2（UCN2）呈正相關(guān)。用酶標儀在

2、450nm 波長下測定吸光度（ OD 值），計算樣品濃度。樣本處理及要求1. 血清：全血標本請于室溫放置 2小時或 4過夜后于 1000g離心 20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)吮痉庞?-20或 -80保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。2. 血漿：可用 EDTA 或肝素作為抗凝劑，標本采集后 30分鐘內(nèi)于 2 - 8 C°1000g離心 20分鐘，或?qū)吮痉庞?-20或 -80保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。3. 組織勻漿 ：用預(yù)冷的 PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結(jié)果），稱重后將組織剪碎。 將剪碎的組織與對應(yīng)體積的 PBS（一般按 1:9的重

3、量體積比，比如 1g的組織樣品對應(yīng) 9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在 PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復(fù)凍融。最后將勻漿液于 5000×g離心 510分鐘，取上清檢測。4. 細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本 ：1000g離心 20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)吮痉庞?-20 或-80保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。注：標本溶血會影響最后檢測結(jié)果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。Address: Kenneth G. Howell , 748 Nickel Road , San Fran

4、cisco(415) , CA 94104Telephone: 標本處理1. 本公司只對試劑盒本身負責(zé)，不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負責(zé)，請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量，預(yù)留充足的樣本。2. 實驗前應(yīng)預(yù)測標本含量，如果標本濃度過高，應(yīng)對標本進行稀釋，使稀釋后的標本符合試劑盒的檢測范圍 ，計 算時 再乘以 相應(yīng) 的稀 釋倍數(shù) 。 標本使用 0.01mol/L 的 PBS稀 釋(PH=7.0-7.2)。3. 若所檢樣本不包含在說明書所列樣本之中，建議進行預(yù)實驗驗證其有效性，并注意留存樣本。4. 使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細胞提取液可能會由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致 ELISA 實

5、驗結(jié)果偏差。5. 若樣本為細胞培養(yǎng)上清，因該類樣本干擾因素較多，如：細胞狀態(tài)、細胞數(shù)量、采樣時間等，所以可能存在檢測不出的情況。6. 某些天然蛋白或重組蛋白，包括原核及真核重組蛋白，可能因為與本產(chǎn)品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配，而不被檢測出。7. 建議使用新鮮樣本，保存時間過長可能會存在蛋白降解或變性導(dǎo)致實驗結(jié)果偏差。需要而未提供的試劑和器材1. 酶標儀（ 450nm）2. 高精度加樣器及槍頭： 0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、 200-1000uL3. 37恒溫箱4. 蒸餾水或去離子水試劑盒組成名稱96 孔配置48 孔配置備注微孔酶標板8 孔×12 條8孔&#

6、215;6條無標準品0.3mL*6 管0.3mL*6 管無樣本稀釋液6mL3mL無檢測抗體 -HRP10mL5mL無20×洗滌緩沖液25mL15mL按說明書進行稀釋底物 A6mL3mL無底物 B6mL3mL無終止液6mL3mL無封板膜2 張2 張無說明書1 份1 份無自封袋1 個1 個無備注：1. 標準品濃度依次為： 32、16、8、4、2、0 ng/mL2. 經(jīng)過大量正常標本檢驗，標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi)，實驗過程中直接取 50L樣本上樣即可。當(dāng)有部分樣本值超過最大標準品濃度時，可用樣本稀釋液將標本進行適當(dāng)稀釋后再進行實驗。Address: Kenneth G.

7、Howell , 748 Nickel Road , San Francisco(415) , CA 94104Telephone: 注意事項1. 嚴格按照規(guī)定的時間和溫度進行溫育以保證準確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達到室溫 20-25。使用后立即冷藏保存試劑。2. 洗板不正確可以導(dǎo)致不準確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。3.消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD 值。4. 底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍的底物液不能使用。5. 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果。6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射。7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水

8、滴凝聚在冷板條上。8. 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。9. 不能使用過期產(chǎn)品。10. 如果可能傳播疾病，所有的樣品都應(yīng)管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。試劑準備試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1： 20稀釋，即 1份20×洗滌緩沖液加 19份蒸餾水。操作步驟1.從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4。2.設(shè)置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50L；3. 樣本孔中加入待測樣本 50L；空白孔不加。4

9、. 除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100L，用封板膜封住反應(yīng)孔， 37水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（ 350L），靜置 1min ，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板 5 次（也可用洗板機洗板） 。6. 每孔加入底物 A 、B 各 50L，37避光孵育 15min。7. 每孔加入終止液 50L， 15min 內(nèi)，在 450nm 波長處測定各孔的 OD 值。實驗結(jié)果計算以所測標準品的 OD值為橫坐標， 標準品的濃度值為縱坐標， 在坐標紙上或用相關(guān)軟件繪制標準曲線，并得到直線回歸方程，將樣品的 OD值

10、代入方程，計算出樣品的濃度。試劑盒性能1. 檢測范圍： 1 ng/mL 32 ng/mL。2. 靈敏度：最低檢測濃度小于 0.1 ng/mL。3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。4. 重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)小于 10% ，板間變異系數(shù)小于 15% 。Address: Kenneth G. Howell , 748 Nickel Road , San Francisco(415) , CA 94104Telephone: 說明1. 由于現(xiàn)有條件及科學(xué)技術(shù)水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進行全面的鑒定與分析，本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風(fēng)險。2. 最終的實驗結(jié)果與試劑的有效性、實驗者

11、的相關(guān)操作以及當(dāng)時的實驗環(huán)境密切相關(guān)，請務(wù)必準備充足的標本備份。3. 不同批次的同一產(chǎn)品可能會有少許差別，如：檢測限、靈敏度以及顯色時間等，請依據(jù)試劑盒內(nèi)說明書進行實驗操作，網(wǎng)站電子版說明書僅作參考。4. 只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測效果，不能混用其他制造商的產(chǎn)品。只有嚴格遵守本試劑盒的實驗說明才會得到最佳的檢測結(jié)果。問題解答若實驗效果不好，請及時對顯色結(jié)果拍照，保留所用板條及未使用試劑，并妥善保存，然后聯(lián)系我公司技術(shù)支持為您解決問題。同時您也可以參考以下資料：問題可能原因解決方案標準曲吸取及洗滌不充分充分的吸取及洗滌線差移液不精確檢查和校正移液器洗滌不充分按說明書要求充分洗滌和浸泡精密度混勻不充分和吸取試劑不足充分混勻和吸取試劑低重復(fù)利用吸頭、容器和覆膜使用加樣器要更換新的吸頭、使用新的容器和覆膜加樣不精確檢查和校正移液器每孔加的試劑量不精確校正移液器，精確加入試劑溫育時間不正確保證充足的溫育時間O.D 值溫育溫度不正確試劑要平衡至室溫并保證準確的溫育溫度低酶標記物或底物失效通過混合酶標記物和底物，顏色應(yīng)迅速顯現(xiàn)來檢查沒有加入終止液按照說明書實驗操作步驟加入終止液超出讀