霉菌酵母菌檢驗(yàn)

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上檢 驗(yàn) 原 始 記 錄編號(hào)：報(bào)告類別：微生物共 頁(yè) 項(xiàng)目：霉菌mould 酵母菌yeast檢驗(yàn)地點(diǎn)：樣品名稱： 樣品編號(hào)： 樣品狀態(tài)： 符合檢驗(yàn)要求； 其他 環(huán)境條件： 實(shí)驗(yàn)依據(jù)及步驟GB4789.15-2016樣品稀釋 固體和半固體樣品：稱取25g樣品置盛有225ml生理鹽水或磷酸鹽緩沖液的無(wú)菌均質(zhì)容器內(nèi)均質(zhì)，或放入盛有225ml稀釋液的無(wú)菌均質(zhì)袋中拍擊式均質(zhì)器拍打，制成為1:10樣品勻液。依次進(jìn)行10倍遞增稀釋。 液體樣品：以無(wú)菌吸管吸取25ml樣品置盛有225ml無(wú)菌稀釋液（蒸餾水或磷酸鹽緩沖液或生理鹽水）的無(wú)菌錐形瓶（瓶?jī)?nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無(wú)菌玻璃珠）中混勻，為1

2、:10樣品勻液。用滅菌吸量管吸取110稀釋液10mL，注入試管中，另用帶橡皮乳頭的1mL滅菌吸量管反復(fù)吹吸50次，使霉菌孢子充分散開。 取1mL110稀釋液注入含有9mL滅菌水的試管中，另?yè)Q一支1mL滅菌吸量管吹吸5次，此液為1100稀釋液。 按上述操作順序做10倍遞增稀釋液，每稀釋一次，換用一支1mL滅菌吸量管。 液體樣品：直接吸取樣品原液進(jìn)行檢驗(yàn)。傾注平板選擇2-3個(gè)適宜稀釋度樣液，各吸取1ml分別加到兩個(gè)平皿內(nèi)，同時(shí)分別吸取1ml空白稀釋液加入兩個(gè)平皿作空白對(duì)照。及時(shí)用適量（2025ml）46±1的馬鈴薯葡萄糖瓊脂或孟加拉紅瓊脂傾注平皿，轉(zhuǎn)動(dòng)平皿混合均勻。瓊脂凝固，正置平板。培

3、養(yǎng)樣品28±1培養(yǎng)培養(yǎng)起止時(shí)間起： 培養(yǎng)至第五天止： 數(shù)據(jù)分析與結(jié)果一、菌落計(jì)數(shù)1） 選取菌落數(shù)在10CFU150CFU之間，根據(jù)菌落形態(tài)分別計(jì)數(shù)霉菌和酵母菌。霉菌蔓延生長(zhǎng)覆蓋整個(gè)平板的可記錄為菌落蔓延。2）計(jì)算同一稀釋度的兩個(gè)平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。3）所有稀釋度菌落計(jì)數(shù)都不在區(qū)間如均大于150CFU，則取最高稀釋度的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。如均小于10CFU，則以最低稀釋度的平均菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)報(bào)告之。如菌落數(shù)有的大于150CFU，有的又小于10CFU，但均不在10150CFU之間，則應(yīng)以最接近150CFU或10CFU的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。

4、如所有稀釋度（包括液體樣品原液）均無(wú)菌落生長(zhǎng)，則應(yīng)按小于1乘以最低稀釋倍數(shù)報(bào)告。4）若空白對(duì)照上有菌落生長(zhǎng)，則此次檢測(cè)結(jié)果無(wú)效。5）作平皿內(nèi)菌落計(jì)數(shù)時(shí)，可用肉眼觀察，必要時(shí)用放大鏡檢查，以防遺漏。二、平皿菌落總數(shù)計(jì)算CFU/g（ml）（1） 若有兩個(gè)連續(xù)稀釋度的平板菌落總數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍（10CFU150CFU）內(nèi)時(shí)，按式（）計(jì)算： N= C/(n1+0.1n2)d （）式中： N樣品中菌落總數(shù)； C平板（含適宜范圍菌落總數(shù)的平板）菌落數(shù)之和； n1第一個(gè)適宜稀釋度平板數(shù)；n2第二個(gè)適宜稀釋度平板數(shù)； d稀釋因子（第一稀釋度）（2） 按“四舍五入”原則，以整數(shù)報(bào)告。菌落數(shù)在10以內(nèi)時(shí)，采用第一

5、位有效數(shù)字報(bào)告；菌落數(shù)在10100之間時(shí)，采用兩位有效數(shù)字報(bào)告。（3） 如大于或等于100時(shí)，則報(bào)告前面兩位有效數(shù)字，第三位數(shù)按四舍五入計(jì)算。（4） 稱重檢樣以克CFU/g為單位報(bào)告，體積取樣以毫升CFU/ml為單位報(bào)告三、霉菌直接鏡檢計(jì)數(shù)法（1） 流程 取樣稱樣稀釋調(diào)節(jié)視野涂片觀察記錄計(jì)算 4步驟 （2） 檢樣制備 取定量檢樣，加蒸餾水稀釋至折光指數(shù)為1.3441.3460（即濃度為7.98.8）。用糖度計(jì)或折光儀測(cè)定折光指數(shù)或濃度，如果折光指數(shù)過(guò)大或過(guò)小，須加水或樣品，直至配成標(biāo)準(zhǔn)樣液，才能進(jìn)行檢驗(yàn)。 （3） 標(biāo)準(zhǔn)視野的調(diào)節(jié) 霉菌計(jì)測(cè)用的顯微鏡，要求物鏡放大倍數(shù)為90125倍，其視野直徑的

6、實(shí)際長(zhǎng)度為1.382mm，則該視野為標(biāo)準(zhǔn)視野。 檢查標(biāo)準(zhǔn)視野：將載玻片放在載物臺(tái)上，配片置于目鏡的光欄孔上，然后觀察。標(biāo)準(zhǔn)視野要具備兩個(gè)條件：載玻片上相距1.382mm的兩條平行線與視野相切；配片（測(cè)微器）的大方格四邊也與視野相切。如果發(fā)現(xiàn)上述兩個(gè)條件，其中有一條不符合，須經(jīng)校正后再使用。 （4） 涂片 檢查玻片 首先用擦鏡紙或綢布沾酒精將載玻片和蓋玻片擦凈。檢查是否擦干凈，可將蓋蓋玻片置于載玻片的兩條突肩上觀察蓋玻片與載玻片突肩的接觸處是否產(chǎn)生牛頓環(huán)，如果沒有產(chǎn)生牛頓環(huán)，表明沒有擦凈，必須重新擦，直至產(chǎn)生牛頓環(huán)，方可使用。 （5） 加樣 用滴管或玻棒取一大滴混合均勻的樣液，均勻地?cái)偛加谳d玻片

7、中央的平坦面上，蓋上蓋玻片（蓋玻片可直接蓋上去，也可以從突肩邊沿處吻合切入）。 如果發(fā)現(xiàn)樣液涂布不均勻、有氣泡、或樣液流入溝內(nèi)、從蓋玻片與突肩處流出、蓋玻片與載玻片的突肩處不產(chǎn)生牛頓環(huán)等，應(yīng)棄去不用，重新制作。 （6）觀察記錄 觀察視野數(shù)及分布 對(duì)一般樣品，每個(gè)涂片均檢查50個(gè)視野，所檢查的50個(gè)視野要均勻地分布在計(jì)測(cè)室上，可用顯微鏡載物臺(tái)上帶有標(biāo)尺的推進(jìn)器來(lái)控制，從上到下，或從左到右一行行有規(guī)律地進(jìn)行觀察。（7） 記錄結(jié)果 陽(yáng)性視野與陰性視野的判斷：在標(biāo)準(zhǔn)視野下，上下調(diào)節(jié)焦距發(fā)現(xiàn)有霉菌菌絲，其長(zhǎng)度超過(guò)標(biāo)準(zhǔn)視野直徑（1.382mm）的1/6（即一個(gè)小方格的邊長(zhǎng)）或三根菌絲總長(zhǎng)度超過(guò)標(biāo)準(zhǔn)視野直徑

8、的1/6，這個(gè)視野稱為陽(yáng)性視野，否則稱為陰性視野。有時(shí)在標(biāo)準(zhǔn)視野中出現(xiàn)極細(xì)的菌絲叢或小菌落，則以其直徑來(lái)計(jì)算，超過(guò)視野直徑1/6為陽(yáng)性視野，否則為陰性視野。陽(yáng)性視野用“”表示；陰性視野用“”表示之。 對(duì)初次學(xué)習(xí)菌計(jì)測(cè)法者，作記錄前，先在記錄紙上劃出計(jì)測(cè)室上50視野均勻分布的小格，觀察一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)視野，立即在相應(yīng)的方格內(nèi)作“”或“”的記錄，或“”以空格表示之。如果一個(gè)樣品做兩個(gè)片子，觀察結(jié)果誤差較大（超過(guò)6），則另取樣涂片，觀察測(cè)定至誤差6時(shí)為止。 （8） 結(jié)果計(jì)算 霉菌數(shù)，用百分比表示。其含義如下： 將0.15mm3標(biāo)準(zhǔn)樣液，均勻地?cái)偛汲珊?.1mm，直徑為1.382mm，其面積為1.5mm2的標(biāo)

9、準(zhǔn)視野，在顯微鏡下檢查。按100個(gè)視野數(shù)計(jì)算，其中發(fā)現(xiàn)有霉菌菌絲存在的視野數(shù)（即陽(yáng)性視野數(shù)）。 霉菌數(shù)（） ×100 舉例：記錄的陽(yáng)性視野數(shù)，片1為15，片2為16，則樣品的霉菌數(shù)為： 樣品霉菌數(shù)（） ×1/2×10031 （9）注意事項(xiàng) 部頒標(biāo)準(zhǔn)為陽(yáng)性視野不超過(guò)40，在國(guó)際貿(mào)易中，合同上無(wú)要求時(shí)按部頒標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行，合同上有要求時(shí)按合同執(zhí)行;每抽取一罐樣品制兩個(gè)片子，每片觀察50個(gè)視野，如果超過(guò)標(biāo)準(zhǔn)指標(biāo)，應(yīng)該繼續(xù)制片，但片子數(shù)量不得少于3片即150個(gè)視野，如果計(jì)測(cè)結(jié)果相近時(shí)，可取其平均值;如對(duì)抽樣結(jié)果有異議，應(yīng)加倍抽樣。全部合格，作為合格處理，其中有一罐不合格，該批作

10、為不合格處理。 附：磷酸鹽緩沖液：磷酸二氫鉀 34.0g 蒸餾水500ml （稀釋液需要1000ml）貯存液：將34.0g磷酸二氫鉀溶于500ml蒸餾水中，用大約175ml的1mol/l氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)ph至7.2，用蒸餾水稀釋至1000ml后貯存冰箱。稀釋液： 取貯存液1.25ml用蒸餾水稀釋至1000ml分裝于適宜容器，121高壓滅菌15min。生理鹽水：氯化鈉 8.5g 蒸餾水1000ml 將稱取好的氯化鈉溶于1000ml蒸餾水中，121高壓滅菌15min。檢測(cè)記錄：校對(duì)：檢測(cè)日期：霉菌檢樣原始記錄產(chǎn)品名稱日期班次觀察結(jié)果日期時(shí)間分析物編號(hào)（稀釋度）平均值菌落計(jì)數(shù)產(chǎn)品名稱日期班次觀察結(jié)果日期時(shí)間分析物編號(hào)（稀釋度）平均值菌落計(jì)數(shù)產(chǎn)品名稱日期班次觀察結(jié)果日期時(shí)間分析物編號(hào)（稀釋度）平均值菌落計(jì)數(shù)根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，報(bào)告檢測(cè)結(jié)果試樣中