液相基本術(shù)語及操作

1、液相色譜檢測1儀器的基本常識及術(shù)語儀器結(jié)構(gòu)：液相色譜儀主要包括泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器；儀器分類：液相色譜儀屬于精密儀器中的色譜儀器；按照分為離機(jī)制，吸附、分配、離子交換、親和色譜，體積排阻色譜；按照流動相與固定相的極性，分為正相色譜法和反相色譜法；1.2.2高效液相色譜法的應(yīng)用范圍：高效液相色譜法適用于高沸點(diǎn)不易揮發(fā)、受熱不穩(wěn)定易分解、分子量大的，不同極性的有機(jī)化合物，生物活性物質(zhì)和多種天然產(chǎn)物，合成的和天然的高分子化合物等。儀器檢定：液相色譜儀檢定周期為1年，在兩次檢定間期內(nèi)進(jìn)行一次期間核查，也可以根據(jù)情況增加核查次數(shù)；維護(hù)保養(yǎng)：對于液相維護(hù)方式主要是周維護(hù)和日維護(hù)，其中周維護(hù)包括聯(lián)機(jī)系

2、統(tǒng)及中工作站軟件維護(hù)、數(shù)據(jù)庫整理備份、檢測器自檢、維護(hù)單向閥、溶劑砂芯濾頭、進(jìn)樣器、電機(jī)泵檢查維護(hù)、溶劑瓶清洗等；日維護(hù)包括環(huán)境溫度、環(huán)境濕度、色譜柱溫度、壓力流速、進(jìn)樣口是否潔凈、進(jìn)液處的砂芯過濾頭是否潔凈、流動相交換時是否有沉淀；色譜法的常用基本術(shù)語基線：在色譜操作條件下，沒有被測組分通過鑒定器時，記錄器所記錄的檢測器噪聲隨時間變化圖線稱為基線.死時間，保留時間及校正保留時間：從進(jìn)樣到惰性氣體峰由現(xiàn)極大值的時間稱為死時間，以td表示.從進(jìn)樣到由現(xiàn)色譜峰最高值所需的時間稱保留時間，以tr表示.保留時間與死時間之差稱校正保留時間.以Vd表示.死體積，保留體積與校正保留體積：死時間與載氣平均流速

3、的乘積稱為死體積，以Vd表示，載氣平均流速以Fc表示,Vd=tdxFc.保留時間與載氣平均流速的乘積稱保留體積，以Vr表示,Vr=trxFc峰面積：流由曲線(色譜峰)與基線構(gòu)成之面積稱峰面積，用A表示.拖尾因子：是反映峰對稱性的指標(biāo)，計算公式：拖尾因子T=2d1(其中為5%峰高處的峰寬，di為峰頂點(diǎn)至峰前沿之間的距離)。峰高與半峰寬：由色譜峰的濃度極大點(diǎn)向時間座標(biāo)引垂線與基線相交點(diǎn)間的高度稱為峰高，一般以h表示.色譜峰高一半處的寬為半峰寬，一般以x1/2表示；色譜檢測的特性(1)靈敏度高；(2)線性范圍寬；(3)分離度與柱效、選擇因子、容量因子、分析時間的關(guān)系：(4)分離度與柱效的平方根成正比

4、，選擇因子一定時，增加柱效；(5)分配系數(shù)與分配比都是與組分及固定相的熱力學(xué)性質(zhì)有關(guān)的常數(shù)，隨分離柱溫度、柱壓的改變而變化：一般通過改變固定相和流動相的性質(zhì)和組成或降低柱溫，可增大選擇因子；(6)增大選擇因子的最有效方法是選擇合適的固定液。對于液相色譜，改變流動相的組成，可以有效控制k;2儀器的操作規(guī)程日立液相設(shè)備L-2000/2400操作規(guī)程2.1.1 使用環(huán)境環(huán)境溫度：4C55C；相對濕度：小于95%RH。2.1.2 使用前準(zhǔn)備檢查所用溶液(如流動相，乙睛等)是否足夠。檢查線路是否連接正常。2.1.3 設(shè)備操作方法具體操作如下：(1)依次開啟泵開關(guān)，檢測器開關(guān)，自動進(jìn)樣器開關(guān)，柱溫箱開關(guān)；

5、(2)打開軟件，點(diǎn)擊“i”按鈕，由現(xiàn)聯(lián)機(jī)界面，點(diǎn)擊“l(fā)iNtialize”他?.明按鈕，當(dāng)文本框由現(xiàn)文字時，表示聯(lián)機(jī)成功;(3)檢查所用方法是否符合要求。如不符合，進(jìn)行設(shè)置；(4)開泵。檢測具體操作如下：(1)建立所需樣品盒；(2)點(diǎn)擊檢測按鈕，選擇剛建立的樣品盒；(3)首先進(jìn)行走基線；(4)當(dāng)基線走平時，點(diǎn)擊系列樣品檢測按鈕，進(jìn)行標(biāo)樣，樣品檢測；(5)當(dāng)標(biāo)樣檢測結(jié)果由來時，打開結(jié)果窗口，選擇所需標(biāo)樣結(jié)果，點(diǎn)擊“Recalculate'ri:'k?lkjuleit進(jìn)行重新計算，然后點(diǎn)擊“Calibrationk?li'brei?n進(jìn)行定標(biāo);(6)當(dāng)樣品結(jié)果由來時，打開結(jié)

6、果窗口，選擇所需樣品結(jié)果，點(diǎn)擊“Recalculate”'ri:'k?lkjuleit進(jìn)行重新計算，然后點(diǎn)擊“ModifyReport"'m?difai,?ri'p?:t,，由現(xiàn)結(jié)果報告，即可查看樣品具體結(jié)果。2.1.4 更換流動相具體操作如下：(1)當(dāng)流動相快不夠時或異常時，及時更換流動相；(2)先把泵關(guān)閉，將流動相入口放入新流動相中；(3)將泵閥逆時針旋轉(zhuǎn)，進(jìn)行排氣。大約3分鐘后，關(guān)閉排氣功能；(4)排氣完畢后，將泵閥順時針旋轉(zhuǎn)擰緊，開泵；(5)走基線，當(dāng)基線走平時，開始做標(biāo)樣，做樣。2.1.5 關(guān)機(jī)具體操作如下：(1)先把泵關(guān)閉，將流動相入口更換

7、為超純水；(2)將泵閥逆時針旋轉(zhuǎn)，進(jìn)行排氣。大約3分鐘后，關(guān)閉排氣功能；(3)排氣完畢后，將泵閥順時針旋轉(zhuǎn)擰緊，開泵；(4)用超純水沖洗管路大約20分鐘；(5)把泵關(guān)閉，將超純水更換為100%甲醇或100%乙睛；(6)將泵閥逆時針旋轉(zhuǎn)，進(jìn)行排氣。大約3分鐘后，關(guān)閉排氣功能;(7)排氣完畢后，將泵閥順時針旋轉(zhuǎn)擰緊，開泵；(8)用100%甲醇或100%乙睛沖洗管路大約30分鐘；(9)關(guān)泵，關(guān)液相軟件，關(guān)泵開關(guān)，檢測器開關(guān)，自動進(jìn)樣器開關(guān)，柱溫箱開關(guān)。2.1.6 維護(hù)保養(yǎng)、注意事項(1)進(jìn)行旬維護(hù)檢查工作，主要檢查事項：軟件是否正常、溫度、清洗、進(jìn)樣器、泵單元；(2)每次測量前進(jìn)行標(biāo)樣檢測，斜率達(dá)到

8、要求才能檢測樣品，測完樣品及時清理。(3)按要求進(jìn)行每天2個小時以上的清洗。Waters高效液相色譜-2695/24892.3.4 開機(jī)自檢具體操作如下：(1)打開Alliance?'lai?ns2695和2489的電源開關(guān)至ON(1)的位置，儀器開始進(jìn)行自檢；(2)儀器將進(jìn)行大約5分鐘的自檢過程，待儀器自我測試完畢后，由現(xiàn)以下畫面，畫面上方的狀態(tài)顯示區(qū)會由現(xiàn)“Idle”'aidl狀態(tài)，表示開機(jī)測試正常。2.3.5 流動相有機(jī)溶劑要求用色譜純(進(jìn)口名牌最好)，水或緩沖鹽溶液要用超純水(電阻率：18.2MQ),每48小時制備新鮮的水相流動相，尤其是100%含水流動相使用時間不超過

9、兩天。6根管子都在液面以下。溶劑的位置必須高于溶劑混合閥(GradientProportioningValve)。'greidi?ntpr?'p?:?ni?v?lv清洗柱塞密封墊(SealWash)si:lw?的溶液：含5%10%甲醇的超純水。洗針液(NeedleWash)'ni:d?lw?：50%甲醇：50%水(該比例僅適用于反相試驗)。注：以上溶劑或溶液均需用以m的膜過濾并超聲脫氣1分鐘，用潔凈的玻璃容器盛放，避免污染，同時玻璃容器應(yīng)用超純水來清洗而不能用自來水。2.3.6 灌注柱塞密封清洗清洗操作步驟：(1)回到Menu'menju:畫面，選擇Diag;(

10、2)確定SealWashsi:lw?的管路放在正確的位置；(3)按PrimeSealWashpraimsi:lw?,再按Start,直到清洗溶劑流由泵桿密封圈沖洗廢液管，按Halt;h?:lt(4)按Close。注意：密封圈清洗(Sealwash)si:lw?溶齊L在反相液相色譜中可使用Water/MeOHmethylalcohol甲醇=90/10或Water/Acetonitrile?sit?u'naitril乙月青=95/5(根據(jù)實際需要使用不同溶齊1J)。2.3.7 灌注針頭清洗操作步驟：回到Mainmein的畫面，選擇Diag,選擇PrimepraimNdlWash。設(shè)定值為3

11、0秒，若想要多清洗幾次時，請按StartAgain。清洗溶劑：50%的甲醇溶液注意：若上述清洗溶劑無法避免進(jìn)樣時的交叉污染，使用較強(qiáng)的溶劑系統(tǒng)來進(jìn)行清洗操作。2.3.8 打開真空脫氣機(jī)如液相儀管路干，可進(jìn)行使用，如管路不干則按照以下步驟進(jìn)行操作：按“Menu/Status”'ste計?s鍵，進(jìn)入Status(1)畫面；利用方向鍵將光標(biāo)移至“Degasser”di：g?s?位置，按Enter;利用上下鍵選擇模式為ON。注意：在開啟除氣裝置時，要確認(rèn)所有溶劑管路都充滿溶劑；若沒有溶劑時請執(zhí)行溶劑的DryPrimedraipraim操作。2.3.9 執(zhí)行干灌注確定流動相溶劑的管子放在正確的位

12、置，檢測器(Detectordi'tekt?)廢液管及定量環(huán)(SampleLooplu:p)的廢液管是否放置于適當(dāng)?shù)膹U液容器中。搖動溶劑瓶內(nèi)的過濾器(SolventFilter)'s?lv?nt'filt?,防止氣泡附著在過濾器的外表面。將空的針筒插入抽液閥(Prime/Ventvalue)中，以逆時針的方向旋轉(zhuǎn)3圈。按“Menu/Status”'steit?s鍵，進(jìn)入Status(1)畫面，按“DirectFunction”di'rekt'f?k?n功能鍵，選擇DryPrime,按Enter。按下面使用的溶劑開啟閥門(例如:OpenA),然后將

13、針筒向外拉，抽由510mL溶劑并完全抽由溶劑管子內(nèi)的氣泡，完成后關(guān)閉Prime/Vent閥門。在“Enteraduration”dju'rei?n中輸入3分鐘，按“Continue鍵，泵即以min的流速進(jìn)行清洗(Purge)?？芍貜?fù)上兩個步驟，將所要使用的流動相溶劑DryPrime。2.3.10 執(zhí)行濕灌注按“Menu/Status”鍵，進(jìn)入Status(1)畫面，利用方向鍵將光標(biāo)移至“Compositionk?mp?'zi?n字段，將欲WetPrime的溶劑輸入100%o按“DirectFunction”di'rekt'f?k?n功能鍵,選擇WetPrime按

14、Enter。WetPrime的原設(shè)定值，一般為FlowRate:min,Time:,然后按下“OK”鍵，泵即開始進(jìn)行WetPrime操作。重復(fù)上述的步驟直到所有溶劑WetPrime進(jìn)行完畢。2.3.11 設(shè)定流動相平衡色譜柱按“Menu/Status”鍵，進(jìn)入Status(1)畫面，利用方向鍵將光標(biāo)移至“Composition”k?mp?'zi?n字段，利用儀器面板右側(cè)的數(shù)字鍵設(shè)置試驗要求的溶劑組成比例，此時會在原溶劑比例表的下方由現(xiàn)新編輯溶劑比例表(NewComposition)。設(shè)定好新的溶劑組成比例后，按“ChangeComp”t?eind?k?mp功能鍵(改變?nèi)軇┙M成比例cha

15、ngecomposition),此設(shè)定的溶劑組成比例即為當(dāng)前的比例。利用方向鍵將光標(biāo)移至“Flow”fl?u字段，利用儀器面板右側(cè)的數(shù)字鍵設(shè)定流速，此時儀器即設(shè)定的溶劑組成比例和流速來平衡色譜柱。特別提示：對于常規(guī)的反相色譜試驗至少要用30倍柱體積來平衡，而對于離子對色譜的平衡可能需要多達(dá)500柱體積的流動相來平衡。2.3.12 沖洗進(jìn)樣器溶劑管理系統(tǒng)的前處理(Primethesolventmanagementsystem)要求如下：(1)改變?nèi)軇?2)發(fā)現(xiàn)注射針頭內(nèi)有氣泡；(3)每天開機(jī)的時候。沖洗進(jìn)樣器執(zhí)行步驟：(1)按“Menu/Status”鍵，進(jìn)入Status(1)畫面，在設(shè)定溶劑

16、的畫面中設(shè)定適當(dāng)?shù)牧魉倥c溶劑比例；(2)按“DirectFunction”di'rekt'f?k?n鍵，選擇PurgeInjectorp?:d?in'd?ekt?,按Enter;(3)輸入SampleLoop體積清洗的倍數(shù)(原定值為6倍)，按Enter;(4)壓縮測試(CompressionCheck)請先不需要測試，設(shè)定完成后按OK。2.3.13 放入樣品盤打開計算機(jī)，運(yùn)行Empowerim'pau?軟件，選擇存放數(shù)據(jù)文件的Project,運(yùn)行RunSamples;按DevelopMethodsdi'vel?p'meo?d按鈕，建立方法；按Mo

17、nitor'm?nit?按鈕，觀察基線，待基線平穩(wěn)，可準(zhǔn)備進(jìn)樣。2.3.14 關(guān)機(jī)首先關(guān)閉檢測器電源；在2695溶劑槽中換上適當(dāng)?shù)那逑慈軇?，清洗系統(tǒng)約60分鐘(針對離子對試驗，建議50%乙睛：50%水1mL/min流速沖洗色譜柱2小時以上)；按2695面板Diag鍵，選擇PrimeSealWash,清洗泵頭約1分鐘；再選擇PrimeNdlWash,清洗進(jìn)樣針12次；按Menu/Status鍵進(jìn)入手動控制模式，按DirectFunctiondi'rekt'f?k?n鍵，選擇PurgeInjectorp?:d?in'd?ekt?,沖洗進(jìn)樣器(針對離子對試驗，建議設(shè)定

18、50%乙睛：50%水的溶劑來沖洗進(jìn)樣器)；降低流速至0,待系統(tǒng)壓力回零后，關(guān)閉2695電源，關(guān)閉計算機(jī)及顯示器電源。島津LC-20AT液相色譜儀操作規(guī)程2.3.1準(zhǔn)備工作在開機(jī)之前，根據(jù)所做樣品的方法要求，準(zhǔn)備好所用流動相,標(biāo)樣及樣品。流動相抽濾后超聲脫氣15分鐘，標(biāo)樣和樣品膜過濾。打開LC-20AX2SETS,CTO-10ASvp,SPD-M20A（或RF-10AXL）電源，待自檢通過。打開SCL-10Avp電源，檢查開機(jī)屏幕應(yīng)顯示各單元，如果某單元沒有顯示，則不能控制該單元，需按同鍵取消屏幕Fixed標(biāo)志即可顯示并控制該單元。否則檢查通訊設(shè)置。打開計算機(jī)電源或重新啟動計算機(jī)，待正常進(jìn)入WI

19、NXP操作系統(tǒng)。排空操作：打開LC-20AT泵排空閥（逆時針180度以上），按Purge鍵，泵開始排空運(yùn)行。檢查流動相入口Teflon管路沒有氣泡后，再按Purge鍵停止排空。壓力調(diào)零：如果purge時，壓力不為零，需要進(jìn)行壓力調(diào)零，按后關(guān)緊排空閥（順時針旋緊）。在計算機(jī)中雙擊LCSOLUTION圖標(biāo).進(jìn)入工作站。再雙擊Operation6Analysis14進(jìn)入實時分析窗口（根據(jù)不同的檢測器選擇）。在開機(jī)畫面中，UserID選中Admin,不需輸入Password，點(diǎn)擊Ok（可聽到蜂鳴一聲），在下面操作中A6B表示在A菜單下選擇B,以此類推。選中口表示在口中打，號。在左側(cè)助手欄給由了引導(dǎo)順序

20、操作的圖標(biāo)，自上而下順序執(zhí)行即可（可以跳過執(zhí)行）：(1)Systemconfiguration系統(tǒng)配置(第一次安裝或更換檢測器時配置，通常跳過不操作)；(2)SystemCheck編輯儀器檢查參數(shù)：并且1RUN|運(yùn)行檢查。通常不操作(跳過)；(3)點(diǎn)擊Dataacquisition進(jìn)入采集數(shù)據(jù)編輯方法界面點(diǎn)擊InstrumentParameter進(jìn)入儀器參數(shù)設(shè)置界面:選中Normal(通用簡單)或Advanced(高級詳細(xì))項，分別設(shè)定Pumps泵參數(shù),Oven柱箱參數(shù),Detecter檢測器參數(shù),Controller系統(tǒng)控制器參數(shù)，TimeProgram時間程序參數(shù)等。儀器配置不同，控制單元

21、項的數(shù)目多少不同；Pumps泵參數(shù):Mode控制方式，F(xiàn)low流速，B,C,DConc各項濃度，PMax最大壓力；Oven柱箱參數(shù):Oven設(shè)定溫度，TMax最大保護(hù)溫度；Detecter檢測器參數(shù)：Cell設(shè)定池溫。Wavelength設(shè)定波長；Controller系統(tǒng)控制器參數(shù);Dataacquisition詵中AcquisitionTime后，設(shè)置分析時間，等等；LCTimeProg時間程序參數(shù):編輯泵梯度洗脫程序，也可以控制柱箱，檢測器等等；(4)點(diǎn)擊Method6DataAnalysisParameter編輯積分參數(shù):設(shè)置Width峰寬，Slope斜率，MinArea最小峰面積等等。

22、新建方法推薦使缺省值，待分析完樣品后再設(shè)置此項參數(shù)，得到優(yōu)化的色譜數(shù)據(jù)結(jié)果后，將參數(shù)保存在當(dāng)前方法中；(5)保存方法：點(diǎn)擊File6SaveMethodas如圖:起文件名*保存p,該方法即作為當(dāng)前運(yùn)行的方法(6)下載方法：點(diǎn)擊DownLoad鍵，向儀器傳送參數(shù)。3.1.1 運(yùn)行方法點(diǎn)擊如圖圖標(biāo)(InstrumentOn/Off系統(tǒng)開/關(guān))系統(tǒng)開始運(yùn)行，檢查各單元參數(shù)應(yīng)與方法設(shè)定一致。等待系統(tǒng)平衡。一般情況下，由于流動相不同，交換平衡時間不定?？梢杂^察Detecter檢測器吸收變化，如果吸收值穩(wěn)定不變，即認(rèn)為接近平衡，可以調(diào)零等待，確認(rèn)不變后，準(zhǔn)備進(jìn)樣分析?？梢酝ㄟ^改變衰減或予覽基線觀察基線變化

23、，待基線平穩(wěn)(初始化顯示時與橫軸平行)，準(zhǔn)備進(jìn)樣操作。1.3 進(jìn)樣分析如下：(1)單針進(jìn)樣分析：如圖點(diǎn)擊SingleStart圖標(biāo):由現(xiàn)如下采樣對話框；(2)編輯樣品參數(shù)：SampleID樣品信息、MethodName文件名，DataPath數(shù)據(jù)存儲路徑，DataName數(shù)據(jù)文件名，樣品瓶號(無),Tray#架號(無),Injection進(jìn)樣量等;(3)點(diǎn)擊區(qū)后，開始進(jìn)樣操作(重復(fù)單針進(jìn)樣，重復(fù)執(zhí)行第驟即可支);(4)每個樣到時間分析結(jié)束，根據(jù)方法中的積分參數(shù)，所有色譜數(shù)據(jù)會自動進(jìn)行積分處理。1.3 報告予覽和打印。點(diǎn)擊Top返回上級引導(dǎo)操作欄。點(diǎn)擊PostRunAnalysis數(shù)據(jù)后處理界面

24、：點(diǎn)擊report進(jìn)入報告界面：點(diǎn)擊reportformat入格式界面：調(diào)入報告格式文件也可以自己編輯報告格式，然后點(diǎn)擊方法Vial進(jìn)入進(jìn)Data打開數(shù)據(jù)文件，將左側(cè)數(shù)據(jù)文件拖入右側(cè)報告欄即可。關(guān)于報告格式，可以通過內(nèi)容選擇圖標(biāo)，在報告中確定位置后，添加即可。右鍵功能很強(qiáng)大，用戶可以參考說明書靈活使用。選擇快捷圖標(biāo)的預(yù)覽或打印圖標(biāo)執(zhí)行報告預(yù)覽或打印。1.3 關(guān)機(jī)步驟如下：(1)更換洗液清洗流路系統(tǒng)(如用緩沖液，先用水清洗1小時，再用有機(jī)溶劑清洗30分鐘以上)，最后用有機(jī)溶劑封存；(2)清洗結(jié)束后，停止系統(tǒng)運(yùn)行，在LCSOLUTION工作站中，按Instrumenton/off鍵即停止所有單元工

25、作；(3)退由LCSOLUTION(可聽到蜂鳴一聲),再完全退由；(4)關(guān)系統(tǒng)控制器SCL-10Avp電源開關(guān)；(5)關(guān)主機(jī)SPD-M20A(或RF-10AXL)檢測器，LC-20AT泵，CTO-10ASvp柱箱電源開關(guān)。1.3 清洗流路系統(tǒng)要求如果使用緩沖液，先用水更換緩沖液，清洗1小時，然后更換甲醇清洗40分鐘；如果使用有機(jī)溶劑(水)，直接更換甲醇清洗40分鐘即可。安捷倫高效液相色譜操作規(guī)程1.3 開機(jī)打開計算機(jī)，進(jìn)入WindowsXP(或Windows2000)畫面，并運(yùn)行BootpServer程序。打開1100/1200LC各模塊電源。待各模塊自檢完成后，雙擊Instrument1On

26、line圖標(biāo)，化學(xué)工作站自動與1100LC/1200LC。從“View”菜單中選擇“MethodandRuncontrol”畫面，單擊"View"菜單中的"ShowTopToolbar:"Showstatustoolbar",“Systemdiagram“JSamplingdiagram"使其命令前有標(biāo)志，來調(diào)用所需的界面。把流動相放入溶劑瓶中。打開Purge閥。單擊Pump圖標(biāo)，由現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單，單擊Setuppump選項,進(jìn)入泵編輯畫面。設(shè)Flow:5ml/min,單擊OK。單擊Pump圖標(biāo)，由現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單，單擊Pumpcont

27、rol選項,選中On,單擊OK,則系統(tǒng)開始Purge,直到管線內(nèi)（由溶劑瓶到泵入口）無氣泡為止，切換通道繼續(xù)Purge,直到所有要用通道無氣泡為止。單擊Pump圖標(biāo)，由現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單，單擊PumpControl選項,選中Off,單擊Ok關(guān)泵，關(guān)閉Purgevalve。單擊Pump圖標(biāo)，由現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單，單擊Setuppump選項,進(jìn)入Pump編輯畫面，設(shè)Flow:min。單擊泵下面的瓶圖標(biāo)，輸入溶劑的實際體積和瓶體積，也可輸入停泵的體積，單擊Ok。1.3 關(guān)機(jī)關(guān)機(jī)前，用100%的水沖洗系統(tǒng)20分鐘，然后用有機(jī)溶劑沖洗系統(tǒng)10分鐘（如ACN）,然后關(guān)泵（適于反相色譜柱，正相色譜柱用適當(dāng)?shù)娜軇_洗

28、）。退由化學(xué)工作站，及其它窗口，關(guān)閉計算機(jī)（用shutdown關(guān)）。關(guān)掉Agilent1100/1200電源開關(guān)2.5C8柱修復(fù)操作規(guī)程8 目的為節(jié)約檢測成本，同時統(tǒng)一操作方法，特制定本作業(yè)指導(dǎo)書。8 適用范圍本標(biāo)準(zhǔn)適用于愛杰爾、天津蘭博生產(chǎn)的C8柱修復(fù)方法（其它廠家可以嘗試使用）。C8柱使用一段時間后，會由現(xiàn)柱壓高、峰變形問題,大部分的原因為C8柱污染，通過對污染C8柱柱頭過濾網(wǎng)進(jìn)行超聲清洗，然后再生，解決問題。8 工具、試劑2個扳手，1把鈍剪刀。乙睛（色譜純）、異丙醇（色譜純）。8 修復(fù)過程（1）將故障C昭柱頭處擰開用2個扳手將C8柱兩柱頭擰開，取下兩端柱頭。用鈍的剪刀夾住塑料封口，取下塑

29、料封口，過濾網(wǎng)就在封口處。觀察C8柱內(nèi)填料是否有污染，如有污染，用干凈的濾紙輕輕擦掉污染物。注意：只能擦去表面一層填料，不能太多，否則會損壞柱子圖2:C8ft內(nèi)部塑料封口，內(nèi)有過濾網(wǎng)(2)對兩端柱頭進(jìn)行超聲清洗(或者對另一支舊C8柱的后端柱頭進(jìn)行清洗，并代替此C8柱前端柱頭)準(zhǔn)備小燒杯，倒入10%乙睛，然后將第一步取由的兩端柱頭(包括過濾網(wǎng))放入燒杯，超聲半小時；然后將10%乙睛更換為100%乙睛超聲半小時；最后將100%乙睛更換為超純水，超聲半小時?；蛘邔⒁郧坝眠^的舊C8柱的后端柱頭卸下，進(jìn)行清洗，并代替此C8柱的前端柱頭。圖3:對端口，塑料封口，過濾網(wǎng)進(jìn)行超聲清洗(3)安裝柱子將過濾網(wǎng)放入

30、塑料封口處，安裝塑料封口，用扳手?jǐn)Q緊柱子。(4)連接柱子，進(jìn)行再生然后將C8柱裝到液相色譜儀，等基線走平后，進(jìn)標(biāo)品。觀察峰形、柱壓等是否正常，如果正常則可以不進(jìn)行此步驟，否則進(jìn)行再生：(1)用10%乙睛沖洗30分鐘，流速為min。(2)用100%乙睛沖洗2小時。流速為。(3)用100%異丙醇沖洗2小時。流速為。(4)用100%乙睛沖洗2小時。流速為。(5)用10%乙睛沖洗30分鐘，流速為min,然后換上流動相，然后走流動相，等基線走平后，進(jìn)標(biāo)品。(5)驗證修復(fù)效果驗證方法(1)觀察柱壓，柱壓正常。(2)觀察標(biāo)品由峰情況，峰形良好。(3)進(jìn)行回收率驗證，回收率達(dá)到85%-105%o通過以上方面，

31、說明修復(fù)成功，此C8柱可以繼續(xù)進(jìn)行使用。(6)注意事項拆裝C8柱注意事項清洗手，防止污染柱子內(nèi)部。拆裝柱子時，防止柱頭部螺紋變形。2.5.5連接C8柱與液相色譜儀注意事項連接C8柱入口與液相色譜儀，打開泵，使C8柱由口流由液體,沖5分鐘，連接C8柱與液相色譜儀檢測器端。防止有異物流入檢測池。3色譜檢測的項目和關(guān)鍵控制點(diǎn)樣品檢驗流程圖核實檢驗計劃樣品接收記錄樣品信平衡檢測器上機(jī)檢測樣、品汰要核實檢驗計劃wmw目目(2)樣品接收核實出具結(jié)果J再次核實1*字,經(jīng)相關(guān)檢驗人員對送胸和氯豺羊刑策哈膽麻w后在送撿串上簽檢驗人員即可進(jìn)行樣品的檢驗。(3)樣品確認(rèn)注意檢查樣品規(guī)格、型號、商標(biāo)、批次等級內(nèi)容是否

32、清楚，狀態(tài)是否完好、變質(zhì)、污染等。如發(fā)現(xiàn)有任何問題，要詢問送檢單位。(4)記錄樣品信息將樣品名稱、批次、送樣日期等信息完整的記錄到帶有編碼的原始記錄上，要盡可能的保證信息的完整性，和可追溯性。(4)樣品前處理按照相應(yīng)的檢驗方法進(jìn)行處理，并做好記錄。(5)上機(jī)檢測樣品待儀器平衡完畢后，裝滿洗瓶內(nèi)的清洗溶劑(清洗溶劑要當(dāng)天用當(dāng)天配置)，根據(jù)作業(yè)指導(dǎo)書或者國標(biāo)，走標(biāo)準(zhǔn)曲線或者單點(diǎn)，上機(jī)即可。(6)記錄檢驗結(jié)果儀器走完樣品后，根據(jù)峰的保留時間定性，峰面積定量，如實記錄檢驗結(jié)果于原始記錄中，原始記錄按方法要求進(jìn)行實際記錄檢測值。(7)核實由具結(jié)果對于外部樣品的檢測，記錄好檢驗結(jié)果后，核實無誤后即可由具檢

33、驗結(jié)果。(8)核實檢驗計劃對于內(nèi)部樣品的檢測，輸入結(jié)果前需再次核實檢驗計劃，保證沒有漏檢后方可輸入檢驗結(jié)果。(9)輸入unliab打開unliab系統(tǒng)，選擇正確的樣品類型和業(yè)務(wù)類型，創(chuàng)建樣品，創(chuàng)建完畢后如實填寫unliab系統(tǒng)中的信息卡，正確分配檢測項目，輸入結(jié)果。結(jié)果報由時，檢測結(jié)果在檢由限以下時，均報未檢由；檢測結(jié)果在檢由限以上時，報實測值。如檢驗處均使用程序輸單，則要求各崗位的輸單密碼不能外漏；結(jié)果輸入后不允許隨意改動，如需修改則上報直屬領(lǐng)導(dǎo)同意后則進(jìn)行修改，其他人員無權(quán)修改；所有過程檢驗結(jié)果均在由具結(jié)果的當(dāng)班下班前提交系統(tǒng)或輸入固定文件夾中；按照規(guī)定的程序進(jìn)入預(yù)定的表格，不允許輸入的內(nèi)

34、容和文件名稱不對應(yīng)、存在相同或能引起誤解的名稱，不能保證儲存的唯一性。檢驗報告儲存要求：如使用Unilab系統(tǒng)由具結(jié)果，由于起系統(tǒng)有自動保存功能，故不需要對其進(jìn)行下載保存，其他電子版檢驗報告要求每半年進(jìn)行備份刻盤一次O三聚匐胺檢測原理：試樣用三氯乙酸溶液-乙酸鉛提取，經(jīng)陽離子固相萃取柱凈化后，用高效液相色譜法測定，外標(biāo)法定量。三聚匐胺檢驗方法流程圖：接樣-稱量樣品-加%三氯乙酸50ml-加0%乙酸鉛2mlf超聲20min-離心10min(8000r/min)過混合型陽離子交換柱凈化氮吹-20%甲醇溶液定容1mlf過濾上機(jī)。稱量樣品：嚴(yán)格按照天平的使用規(guī)程操作即可。具體如下：天平使用前檢查：(1

35、)準(zhǔn)備使用天平時觀察周圍是否存在震動的情況，如果存在應(yīng)在震動結(jié)束后再稱取樣品。檢查天平的使用環(huán)境是否符合溫度1030C、濕度2585%的要求，水平泡是否處于中央位置。打開天平，待天平完成自檢顯示“0.0000”時，可以使用。(4)對于過冷、過熱和含有揮發(fā)性及腐蝕性的物體，不可放入天平內(nèi)稱量，被測物不得超過天平最大的負(fù)載。稱量將被測物放在稱盤中央，待顯示器左側(cè)邊的標(biāo)志熄滅后，該數(shù)字即為被稱物的質(zhì)量；如稱量需盛放物質(zhì)，先稱量容器，按TAR鍵，顯示為零即去皮，再置被稱物質(zhì)于容器中，這時顯示的是被稱物的凈重；每次稱量時都應(yīng)將天平門關(guān)閉，稱量樣品過程中，避免由現(xiàn)抽拉抽屜、人員走動、倚靠實驗臺等對結(jié)果有影

36、響的動作；稱量完畢后關(guān)閉天平開關(guān)，但不必斷掉電源；(5)稱樣時所使用的離心管等要編號與樣品一一對應(yīng)，并且記錄下樣品的質(zhì)量；加藥品加入藥品時注意要邊加邊搖，讓藥品與樣品充分接觸，使粉末狀樣品充分的溶解在藥品中。超聲處理：超聲樣品時執(zhí)行超聲波操作規(guī)程即可。具體如下：工作前準(zhǔn)備：檢查電源連接線是否有破損，電源插頭是否插入220V的三芯電源插座并連接牢固；(2)檢查清洗槽是否有異物；檢查排水閥門是否關(guān)閉；超聲處理：(1)樣品在超聲時要求超聲波清洗機(jī)中的液面一定要高于樣品的液面；時間控制符合要求；(3)樣品超聲處理完成后，關(guān)閉電源開關(guān)，將槽內(nèi)水放凈，并將機(jī)體擦洗干凈；斷開電源，讓機(jī)體自然散熱；離心樣品：

37、樣品離心時執(zhí)行離心機(jī)的操作規(guī)程即可。如下：檢查電源及數(shù)據(jù)線連接是否牢固，打開儀器電源，設(shè)定所需溫度；(2)待溫度達(dá)到設(shè)定溫度時，打開儀器上蓋，將需離心的樣品對稱放入離心機(jī)內(nèi)，關(guān)閉儀器上蓋，設(shè)定轉(zhuǎn)速，設(shè)定運(yùn)轉(zhuǎn)時間，點(diǎn)擊開始離心離心結(jié)束后將樣品取由，如暫時不使用，需將儀器上蓋蓋好，如長時間不使用，需將腔體內(nèi)冷凝水清理后，關(guān)閉儀器電源過混合型陽離子交換柱樣品離心時準(zhǔn)備好所需要的陽離子小柱和試管并一一編號。離心結(jié)束后活化陽離子小柱、上樣、淋洗等。整個萃取過程要求銜接緊密不可以使小柱干燥，并且每一種液體按要求控制流速在1ml/min左右；氮吹:執(zhí)行氮吹儀操作規(guī)程即可，具體如下：用前檢查檢查電源線路是否正

38、常；檢查氮?dú)膺B接管路是否正常；檢測氮吹針是否清潔，并進(jìn)行必要的清潔工作；使用連接電源，打開氮吹儀開關(guān)，調(diào)節(jié)溫度，準(zhǔn)備升溫；(2)將針頭放置好，調(diào)節(jié)氮?dú)饬髀窌惩?。將氮?dú)忾_關(guān)打開，使用調(diào)壓閥調(diào)節(jié)氮?dú)饬魉龠m合；待溫度和壓力達(dá)到檢驗要求，則放置樣品；調(diào)節(jié)針頭位置(距離液面1-2cm),使氮?dú)忾_始吹干樣品；(5)樣品吹干后，關(guān)閉氮?dú)狻ｊP(guān)閉氮吹儀開關(guān)，取下電源插頭；(6)取生樣品；注意事項(1)注意保持氮吹儀清潔，氮?dú)夤苈芬欢ㄒB接緊密；三聚匐胺要求氮吹的溫度是50±5(C),并且吹針要用甲醇擦拭干凈，防止樣品間交叉污染，氮?dú)饬髁恳砸好嬗休p微的波動即可，不可以吹的液面飛濺。并且所使用的試管是玻璃

39、的，在氮吹時小心不要發(fā)生強(qiáng)烈得磕碰，以免碰碎試管；濃縮完全的吹干后用所需的溶液1毫升定容，漩渦1分鐘，過相應(yīng)的或針頭過濾器（針頭過濾器分水系和有機(jī)系）緩慢地過濾樣品到已經(jīng)一一編號的進(jìn)樣瓶中準(zhǔn)備上機(jī)。上機(jī)儀器參考條件：流動相：離子對緩沖鹽：乙睛=90:10流速：min柱溫：40C檢測器：紫外檢測器。波長;240nm進(jìn)樣量：20ul備注：以上儀器條件是參考條件，在實際操作過程中可以根據(jù)樣品特性和儀器狀態(tài)做適當(dāng)調(diào)整；此方法的檢由限2mg/kg山梨酸、苯甲酸山梨酸、苯甲酸檢測原理：去除試樣中脂肪和蛋白質(zhì)，甲醇稀釋，過濾后，采用反相液相色譜法奮力測定。方法檢測流程圖：稱量樣品-加入0.1M氫氧化鈉溶液2

40、5ml-超聲水浴15minf調(diào)節(jié)PH到8f分別先后加入2ml亞鐵匐化鉀溶液和乙酸鋅溶液-劇烈振搖，靜止15minf用甲醇定容，靜止15min-過濾膜過濾取清液上機(jī)色譜參考條件：色譜柱：C18,250mm*,5um流動相：甲醇：磷酸鹽緩沖溶液=1:9流速：min檢測波長：227nm柱溫：室溫進(jìn)樣量：10ul山梨酸、苯甲酸檢由限1mg/kg安賽蜜、糖精鈉安賽蜜、糖精鈉檢測原理：樣品中安賽蜜、糖精鈉經(jīng)高效液相反相柱C18分離后，以保留時間定性，峰高或峰面積定量。方法流程圖：稱量樣品-加入氫氧化鈉溶液25ml-超聲15min-調(diào)節(jié)PH到8(用l的硫酸)-分別先后加入2ml亞鐵匐化鉀和乙酸鋅溶液-振搖靜

41、止15minf加入40ml甲醇定容到100ml-靜止15min-有機(jī)濾膜取清液過濾上機(jī)檢測。儀器參考條件：柱溫箱：30-40C紫外檢測器：230nm進(jìn)樣量：20ul和10ul色譜柱：C18或C8(250*,5um)流速：min備注：以上儀器條件是參考條件，在實際操作過程中可以根據(jù)樣品特性和儀器狀態(tài)做適當(dāng)調(diào)整。安賽蜜、糖精鈉的檢由限3mg/kg對羥基苯甲酸乙丙酯對羥基苯甲酸酯類檢測原理：試樣用甲醇超聲波提取，取上清液過濾，以高效液相色譜分離，二極管陣列檢測器檢測，外標(biāo)法定量。依據(jù)DB37/T1100-2008方法檢測流程圖：稱取樣品于25ml比色管-加入15ml甲醇-漩渦2minf超聲10minf用甲醇定容至25ml-靜止分層，取上清液經(jīng)有機(jī)濾膜過濾上機(jī)檢測。儀器條件：色譜柱：C18柱，250*流動相：甲醇：l乙酸鏤溶液=60:40流速：min柱溫：35C進(jìn)樣體積：10ul檢測波長掃描范圍：210nm-400nm,定量波長256nm。本方法檢由限為1mg/kg山梨酸、苯甲酸、安賽蜜、糖精鈉、對羥基苯甲酸乙丙酯的前處理很相似，注意事項統(tǒng)一為：超聲時液面應(yīng)高于樣品的液面。亞鐵匐化鉀和乙酸鋅的位置不能調(diào)換。用力振搖。食品中